酶消化法分离培养家兔血管平滑肌细胞

目的探讨胶原酶分离并培养家兔血管平滑肌细胞的方法。方法取家兔腹主动脉，0．2％胶原酶Ⅰ消化分离血管平滑肌细胞并进行培养，相差显微镜观察培养细胞的形态，免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白（α-actin）的表达。透射电镜观察血管平滑肌超微结构。结果相差显微镜下细胞呈长梭形，未见明显异型细胞，α-actin胞浆染色阳性细胞数占总细胞数的99％以上。电镜显示VSMC内肌丝丰富，线粒体、高尔基复合体等细胞器较少，VSMC呈现分化的收缩表型。结论胶原酶可消化分离培养血管平滑肌细胞，且有成活细胞数多、传代周期短的特点，可用于血管平滑肌表型研究。     

酶消化法分离培养大鼠血管平滑肌细胞方法的改良

目的 改良酶消化法并建立一种简单方便且高效的血管平滑肌细胞原代培养方法.方法 在无菌条件下分离大鼠胸主动脉,0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离血管平滑肌细胞并进行培养.用倒置相差显微镜观察血管平滑肌细胞的生物学特性,用免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白(α-actin)的表达.结果 相差显微镜下细胞早现"谷和峰"的生长特...     

血管平滑肌细胞的培养及鉴定

目的探讨以简便、高效的方法获取血管平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料.方法采用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,综合运用自然纯化、机械刮除、差异贴壁法进行细胞纯化,并应用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定.结果90%的组织块接种存活,5代的平滑肌细胞纯度达98%以上.镜下培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论本法简便、可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

大鼠腹主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的 探讨一种简单、经济获取腹主动脉血管平滑肌细胞的方法,为相关研究提供实验材料.方法 应用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,运用自然纯化法进行细胞纯化,并使用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学观察以及免疫组化鉴定.结果 90%的组织块接种存活,培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫荧光化学技术检测显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论 本法简便可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

胎儿脐动脉血管平滑肌细胞贴块培养方法的改进

目的 探讨胎儿脐动脉血管平滑肌细胞的培养方法.方法 取无菌新鲜健康孕妇胎儿脐动脉,采用组织贴块法培养血管平滑肌细胞,并用α-actin肌动蛋白免疫组化方法对培养的细胞进行鉴定.结果 运用此方法成功地培养出胎儿脐动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型的"峰-谷"样生长特性,用抗平滑肌α-肌动蛋白(α-actin)的单克隆抗体做免疫组化检测,低倍镜下可见细胞普遍呈阳性反应,高倍镜下可见α-actin肌动蛋白在胞浆内均匀分布.结论 此方法取材容易,操作简单,费用低廉,为人动脉血管平滑肌细胞的培养提供了一种实用、可靠的方法.     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞胶原酶解法培养与鉴定

目的 探讨复合胶原酶解离大鼠胸主动脉的原代细胞培养方法 及其生长特性.方法 0.2%Ⅰ型胶原酶和0.2%Ⅱ型胶原酶解离大鼠胸主动脉平滑肌,用相差显微镜观察其生长情况,免疫组化鉴定平滑肌细胞的纯度.结果 24h内细胞贴壁生长,1周左右细胞可传代,传代后细胞呈典型的"峰-谷"样生长,第3代细胞用α-actin染色鉴定平滑肌细胞,其纯度为96%.结论 复合胶原酶解离法原代细胞培养是一种简单、周期短、纯化速度快的方法 ;可作为一种可靠的细胞模型.     

人脐动脉平滑肌细胞体外培养

目的 建立人脐动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法.方法 运用植块贴壁法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的体外原代和传代培养.倒置相差显微镜和免疫荧光染色方法对培养细胞进行鉴定.结果 原代和传代培养的细胞生长良好,光镜下细胞呈长梭形"峰-谷"样生长,具有典型的平滑肌细胞特征.经传代培养至第5代,细胞生长特性未见异常改变;经考马斯亮兰R250及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色检测,证实为平滑肌细胞.结论 植块贴壁法可成功进行人脐动脉血管平滑肌细胞的体外培养,传代后细胞生物学特征稳定,为慢性肾病并发心血管疾病的机制研究奠定了实验基础.     

胶原酶消化法培养大鼠远端肺静脉平滑肌细胞

目的：探索大鼠发病机制远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）的原代培养方法,为体外研究肺血管疾病提供实验材料.方法：采用显微操作和Ⅰ型胶原酶消化法原代培养大鼠远端PVSMC,对培养的细胞进行形态学观察、平滑肌α-actin免疫荧光染色鉴定,并用激光扫描共聚焦显微镜计算纯度.结果：镜下培养的细胞呈典型的＂峰-谷＂状生长,平滑肌细胞特异的平滑肌α-actin蛋白阳性表达,细胞纯度达98.5%.结论：用胶原酶消化法能够原代培养大鼠远端PVSMC,所获细胞数量多、纯度高.     

人脐动脉平滑肌细胞体外培养

目的建立人脐动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法。方法运用植块贴壁法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的体外原代和传代培养。倒置相差显微镜和免疫荧光染色方法对培养细胞进行鉴定。结果原代和传代培养的细胞生长良好,光镜下细胞呈长梭形"峰-谷"样生长,具有典型的平滑肌细胞特征。经传代培养至第5代,细胞生长特性未见异常改变;经考马斯亮兰R250及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色检测,证实为平滑肌细胞。结论植块贴壁法可成功进行人脐动脉血管平滑肌细胞的体外培养,传代后细胞生物学特征稳定,为慢性肾病并发心血管疾病的机制研究奠定了实验基础。     

组织贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的探讨以原代培养的方法获得活力稳定、高度纯化的大鼠血管平滑肌细胞的体外模型,并为相关研究提供所需的试验材料。方法采用组织贴块法进行细胞原代培养,胰酶消化传代,液氮冻存,并应用倒置相差显微镜和SP法免疫组化染色对细胞进行鉴定。结果85％的组织块接种存活,传代后90％以上的平滑肌细胞重新贴壁生长,冻存后细胞再行1～2次传代后可恢复增生活力。显微镜下细胞呈典型的“谷峰状”生长,SP法免疫组化染色显示胞质内“平滑肌肌动蛋白表达阳性。结论组织块贴壁法简便易行,短期内可获大量符合后续试验要求的血管平滑肌细胞。     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

血管内皮和平滑肌细胞联合培养构建组织工程化血管的方法

目的：探讨组织工程血管种子细胞原代培养、传代扩增、鉴定的方法，为组织工程血管的构建提供理想的种子细胞。方法：无菌条件下取正常产妇分娩的脐带动静脉，ROSS法（即组织贴块法）原代培养混合血管细胞。倒置相差显微镜、免疫组化法对细胞进行鉴定。结果：倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞，呈现内皮样细胞、平滑肌样细胞混合生长的特征。免疫组化法检测示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白呈阳性反应。细胞经3次～5次传代，数量可增殖达到8×10^6—10×10^6。结论：使用组织贴块法原代培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞混合体，细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程血管种子细胞所需的数量。     

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。     

大鼠血管平滑肌细胞的培养和鉴定

目的:建立一种方便快捷的培养大量大鼠血管平滑肌细胞的方法,为心血管疾病的体外实验研究提供实验材料。方法:采用改良的组织块贴壁法进行原代培养,差异贴壁法纯化细胞,常规胰酶消化法传代,使用倒置相差显微镜进行形态学观察,通过检测平滑肌肌动蛋白对细胞进行免疫组化鉴定。结果:培养4代的平滑肌细胞纯度达96%以上。镜下可见培养细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫组化染色显示胞质内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论:本研究所介绍的组织贴块培养法较为成熟,可为心血管疾病病因、机制的研究和防治提供一个理想的实验材料。     

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的培养及鉴定

目的：培养、鉴定自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞,了解生长特性,为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料。方法;采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化染色做鉴定,台盼蓝染色进行活力检测,绘制生长曲线、MTT法测定VSMC细胞的成活率、生长、增殖特征。结果：细胞生长曲线近似“S”形,VSMC传代周期为7-10d,呈典型“峰一谷”状生长,MTT法显示细胞生长第7～9天光密度值变化较明显,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达,第2代阳性结果强于4代。结论：正确的利用组织块可以简单、经济、高效地培养出VSCM,为VscM的治疗提供了理想的细胞模型。随传代过程细胞生物学特性发生改变。     

蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛细胞模型的建立

目的 建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的细胞模型。方法 ①基底动脉平滑肌细胞的培养与鉴定。取兔基底动脉中层，应用组织贴块法培养平滑肌细胞，用光学相差显微镜、免疫细胞化学染色鉴定。②蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛细胞模型的建立。培养的平滑肌细胞加入OxyHb分别孵育24h和72h两组，应用电镜测定平滑肌细胞的长度和超微结构改变。结果 ①培养的动脉平滑肌细胞的鉴定：在相差倒置光学显微镜下观察，传代细胞呈单层及多层重叠成长，为典型的峰谷状。抗α-actin抗体免疫细胞化学染色显示，95％培养的细胞染色阳性。②成功建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的细胞模型：24h组与正常组比较平滑肌细胞平均长度缩短了27．67％，72h组与正常组比较平滑肌细胞平均长度缩短了65．26％。结论 OxyHb对基底动脉平滑肌细胞有收缩作用。细胞模型的建立为在细胞水平探讨蛛网膜下腔出血引起脑血管痉挛的发病机制提供了条件。     

SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养及鉴定

目的:研究SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞(RASMC)的培养方法及其生物学特性.方法:运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养,并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定.结果:组织块贴壁法成功培养出SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰-谷"样生长,HE染色细胞呈梭形,胞浆丰富,核大而圆或椭圆,免疫组化S-P法检测a-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(a-SMActin)呈强阳性表达.传代纯化,细胞生长特性未见异常改变.结论:组织块贴壁法培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞生长稳定,培养和纯化可同步进行,简单,方便.     

原代肠系膜动脉平滑肌细胞的分离培养

取大鼠肠系膜动脉,用I型胶原酶消化,并进行体外培养,倒置相差显微镜观察ASMC 生长状态及特点;免疫组织化学进行细胞鉴定。大鼠肠系膜平滑肌细胞呈典型“峰-谷”样生长,该原代培养细胞对平滑肌特异性肌动蛋白表达阳性。传代细胞生长稳定,可为研究小血管平滑肌细胞特性提供一个较理想的模型。     

组织块贴壁法行SD大鼠肺内动脉段平滑肌细胞的原代培养及其鉴定

目的研究采用组织块贴壁法进行SD大鼠肺内动脉段平滑肌细胞（PASMCs）原代培养的方法特点及其生物学特性。方法将SD大鼠消毒后剖开胸腹腔,无菌下取出心肺组织,然后分离出肺血管段,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）和免疫荧光法进行细胞鉴定。结果组织块贴壁法培养的SD大鼠PASMCs为典型的＂峰-谷＂样生长状态,细胞的胞核较大,免疫组织化学法和免疫荧光法检测α-actin均为强阳性表达,免疫荧光法检测传至三代以后的细胞纯度可达98%以上,传代细胞生长未见明显异常改变。结论在不使用显微技术情况下,用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到稳定生长、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞。     

组织块贴壁法原代培养人脐血管平滑肌细胞的改良

目的提高人脐血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)体外培养的成功率。方法以传统的平滑肌细胞贴壁培养法为基础,选择人脐血管为材料,对培养基配置,组织块的大小和接种间距,培养液的pH等多个重要环节进行改进;采用倒置相差显微镜和α-actin免疫组化染色,对VSMCs进行鉴定。结果光镜下见培养细胞呈典型的"峰、谷"样结构特征;α-actin免疫组化染色显示98%的细胞含有肌动蛋白,证实为VSMCs。结论此培养方法能提高人脐血管平滑肌细胞体外培养的成功率,为心血管疾病发病机制的体外研究,提供了一种实用而充足的细胞材料。