实时荧光定量PCR检测鼻咽癌组织中PTCH-1和SMO基因的表达

目的:检测Hedgehog信号通路基因PTCH-1和SMO在鼻咽癌(NPC)组织中的表达及其生物学意义。方法:利用实时荧光定量PCR分别检测32例鼻咽癌组织及32例鼻咽炎组织中PTCH-1和SMO基因的表达情况。根据Livak(2-△△Ct)法进行相对定量表达分析,以鼻咽炎组织为对照,计算鼻咽癌组织中PTCH-1和SMO表达水平。结果:在所检测的全部鼻咽癌组织和鼻咽炎组织中PTCH-1和SMO都有表达。与鼻咽炎组织相比,有75%(24/32)鼻咽癌组织的PTCH-1基因表达水平下调,有68.8%(22/32)鼻咽癌组织的SMO表达水平上调,差异均具有统计学意义(P0.05)。此外,有18.7%(6/32)鼻咽癌组织PTCH-1基因表达水平上调,有15.6%(5/32)鼻咽癌组织SMO基因表达水平下调,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:在鼻咽癌中SMO基因普遍具有较高的表达水平,PTCH-1基因的表达水平则相对较低,而SMO基因表达水平的上调及PTCH-1基因表达水平的下调,可引起Hedgehog信号通路在鼻咽癌中的异常激活,Hedgehog信号通路的异常激活可能与鼻咽癌的发生发展过程相关。     

鼻咽癌中SOX2基因的表达研究

目的:研究干细胞表面标志物SOX2基因在鼻咽癌中的表达,探讨对鼻咽癌诊断及治疗的潜在意义。方法:应用PCR及荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测33例鼻咽癌和21例鼻咽炎组织中SOX2基因的表达。以鼻咽炎组作为参照,对两组荧光定量PCR数值△Ct差异进行t检验,应用Li-vak(2-△△Ct)法进行相对定量分析,计算鼻咽癌中SOX2基因的表达水平。结果:78.8%(26/33)鼻咽癌和38.1%(8/21)鼻咽炎组织中存在SOX2基因的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌中57.6%(19/33)的SOX2基因表达水平比炎症组高,差异具有统计学意义(P<0.05),21.2%(7/33)鼻咽癌组织中SOX2基因表达水平比对照组低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:鼻咽癌组中SOX2基因处于一个较高的表达水平,提示SOX2基因在鼻咽癌中出现了异常表达,是鼻咽癌肿瘤干细胞存在的一个间接证据,为从肿瘤干细胞水平上的诊断及治疗提供一个潜在的靶点。     

电针上调脊髓损伤后大鼠c-fos mRNA及其蛋白的表达

目的:探讨电针对大鼠脊髓损伤后c-fos mRNA及蛋白表达的影响.方法:将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,采用改良Allen氏重物坠落法制成脊髓损伤模型.分别在1、2、3、5和7d处死动物,使用实时荧光定量PCR技术检测c-fos mRNA表达;使用免疫组织化学显色结合图像定量分析方法检测c-fos蛋白表达.结果:实时荧光定量PCR结果显示,模型组c-fos mRNA表达呈现升高趋势,电针能够促进这种趋势,在术后1d和3d与模型组比较,差异具有统计学意义.免疫组织化学结合图像分析结果显示,模型组c-fos蛋白表达升高趋势较为明显,电针促进这种趋势,且在术后2d与模型组比较,差异具有统计学意义.结论:电针能够促进脊髓损伤后大鼠脊髓损伤部cfos mRNA及蛋白的表达.     

胃癌组织中Snai2 mRNA的表达及意义

目的 检测Snai2 mRNA在正常胃黏膜及胃癌组织中的差异表达并探讨其意义.方法 新鲜胃癌组织30例, TRIzol法抽提总RNA,逆转录后Real-time荧光定量PCR检测Snai2 mRNA的表达;制备mRNA探针,在包含有100例胃癌和20例正常胃黏膜组织的芯片上进行Snai2 mRNA原位杂交,并对结果进行统计分析.结果 Real-time PCR显示在不同分化的胃癌组织中表达量不同,随分化程度降低,Snai2 mRNA表达量增加(P<0.05);组织芯片原位杂交结果表明Snai2 mRNA在癌组织中的阳性率(54.2%)高于正常胃组织(27.8%),其差异有统计学意义(P<0.05),在不同分化的胃癌组织中Snai2 mRNA的表达也随分化程度的降低,Snai2 mRNA的阳性率逐渐增加,但差异无统计学意义(P>0.05) .结论 Snai2可作为一个在分子水平上确定胃癌恶性程度和疾病进展及预后的生物学标志.     

Survivin基因mRNA和蛋白在鼻咽癌中的表达

目的 观察survivin基因mRNA及蛋白在鼻咽癌的表达及其与临床的关系.方法 采用原位杂交和免疫组织化学技术,分别检测survivin基因及蛋白的表达情况.结果 在64例鼻咽癌中,survivin基因mRNA阳性表达42例(65.6%),其中高表达30例(46.9%);在有详尽诊疗资料的22例鼻咽癌中,Ⅲ+Ⅳ期阳性表达率为66.7%,高于Ⅰ+Ⅱ期的50.0%.Survivin蛋白阳性表达46例(71.9%),其中高表达38例(59.4%);Ⅲ+Ⅳ期阳性表达率为61.1%,高于Ⅰ+Ⅱ期的50.0%.Survivin基因表达与鼻咽癌患者的年龄、性别无相关性(P＞0.05).30例慢性鼻咽炎患者鼻咽部组织survivin基因mRNA及蛋白阳性表达分别为10例(33.3%)及7例(23.3%),均低于鼻咽癌组,差异均有统计学意义(γ2=12.04和γ2=19.57,均P＜0.01).64例鼻咽癌中survivin基因mRNA及蛋白共同表达阳性者36例(56.2%),经相关检验它们的表达呈正相关(关联系数(4)=0.43).结论 Survivin基因表达可能在鼻咽癌发生、发展过程中起一定作用,检测survivin基因mRNA和蛋白在鼻咽癌中的表达对鼻咽癌的诊断、临床分期和预后有参考的价值.     

草鱼出血病灭活疫苗上调草鱼脾细胞主要免疫分子的表达

目的探讨草鱼出血病灭活疫苗对草鱼脾脏中Ig M、主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)、1型干扰素(IFN1)、补体3(C3)、白细胞介素1β(IL-1β)、内凝集素(intelectin)相关基因表达的影响。方法用草鱼肾细胞系(CIK)培养草鱼呼肠孤病毒(GCRV),并制备草鱼出血病灭活疫苗,用生理盐水稀释成50倍和100倍,包括未稀释组及生理盐水对照共4组。分别腹腔免疫注射健康草鱼,各组分别于免疫后0、6、12、24、72 h,取脾脏并抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上述6种免疫相关基因mRNA表达。结果与生理盐水对照组相比,免疫注射不同剂量的草鱼出血病灭活疫苗均能刺激草鱼脾脏中6种主要免疫分子不同程度的表达上调,表明疫苗刺激草鱼机体启动了非特异性和特异性免疫应答。在3个疫苗免疫组中,intelectin、MHCⅠ、IL-1β、C3基因的相对表达量都随着时间的推移出现先表达上调,后表达下调;基因IFN1的相对表达量在免疫后6 h达到峰值,之后下降至正常水平;Ig M的相对表达量在所检测时间内呈逐渐上调的趋势。结论草鱼出血病灭活疫苗均能诱导草鱼脾脏中免疫相关分子基因的表达上调。     

抑制素α在雄性大鼠不同组织的表达分析

目的:了解抑制素α(inhibin α)在雄性大鼠各种组织中的定位及表达情况.方法:成年SD雄性大鼠,水合氯醛麻醉后取睾丸、附睾、肾、肾上腺及肝组织,采用免疫组织化学、免疫印迹法和荧光定量PCR方法检测抑制素α在大鼠各组织中的定位及mRNA的表达水平.结果:抑制素α在大鼠睾丸、附睾、肾、肾上腺组织中有表达,在肝组织中未...     

结肠肿瘤中wisp-1的表达及意义

目的探讨wisp-1在原发性结肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化EnVision两步法检测wisp-1蛋白在138例结肠癌组织(48例含癌旁组织)、37例结肠腺瘤组织及66例结肠正常黏膜组织中的表达;应用实时荧光定量PCR检测wisp-1基因在37例新鲜原发性结肠肿瘤标本及对照组37例正常结肠中的表达;分析wisp-1蛋白、基因表达与患者临床病理特征的关系。结果 wisp-1蛋白在正常结肠、结肠腺瘤、癌旁组织及结肠癌中阳性率分别为53.0%、67.6%、75.0%、76.1%,其在结肠癌及癌旁组织中表达高于正常结肠(P<0.05);wisp-1蛋白表达与淋巴结转移及浸润深度有关(P<0.05);wisp-1基因在结肠肿瘤中平均表达是正常结肠中的1.349倍(P>0.05)。结论 wisp-1蛋白异常可能在结肠癌的发生过程中起重要作用,而其基因在结肠癌中的作用尚需进一步研究。     

Apelin和APJ在绒毛及胎盘组织中的表达及意义

目的探讨血管活性肽Apelin及其受体APJ在早期妊娠绒毛和晚期妊娠胎盘组织中的表达和定位。方法分别取10例妊娠7-9w妇女（早孕组）的绒毛组织和15例妊娠37-41w妇女的胎盘组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（FO-RT-PCR）及免疫组织化学染色分析法检测两组孕妇胎盘Apelin mRNA及其蛋白的表达情况,并用高清晰度彩色图文分析系统（HPIAS-1000）对其进行定量分析。结果FQ-RT-PCR结果显示,足月妊娠胎盘Apelin mRNA显著高于早孕绒毛组织（P〈0.05）。免疫组化及高清晰度彩色图文分析系统结果显示,Apelin-36和APJ蛋白在早孕绒毛组织和足月妊娠胎盘组织中均有表达,二者在早孕绒毛组织中的表达部位主要位于绒毛内滋养细胞：在足月妊娠胎盘组织中,主要表达于胎盘合体滋养细胞及血管内皮细胞Apelin在足月妊娠胎盘组织中的表达强度要高于早孕绒毛组织,有极显著性差异（P〈0.01）,而APJ在早孕绒毛组织和足月妊娠胎盘组织中的表达强度无明显差异（P〉0.05）。结论Apelin在晚孕胎盘组织中表达增强,Apelin/APJ可能在子宫-胎盘血管的发育及功能调控过程中发挥重要作用。     

子宫颈癌中miR-153和Survivin的表达及其临床意义

目的探讨miR-153和Survivin在子宫颈癌组织中的表达及其对子宫颈癌的临床意义。方法收集50例子宫颈癌和40例正常子宫颈组织,采用RT-PCR法和免疫组化SP法检测miR-153和Survivin在子宫颈癌和正常子宫颈组织中的表达,分析两者表达与子宫颈癌临床病理特征的关系及对患者预后的意义。结果miR-153在子宫颈癌组织中的相对表达量低于正常子宫颈组织,Survivin在子宫颈癌组织中的相对表达量高于正常子宫颈组织,差异均有统计学意义(t=16.333,t=6.407,P<0.01)。通过散点图及相关性分析,在子宫颈癌组织中miR-153和Survivin相对表达量呈负相关,差异有统计学意义(P<0.01);miR-153、Survivin表达与患者年龄、肿瘤大小、TNM分期均无关(P>0.05),与淋巴结转移明显相关(χ^2=6.455,χ^2=5.937,P<0.05)。通过散点图及相关性分析,淋巴结转移患者的淋巴结受侵数目与miR-153表达量呈负相关,与Survivin表达量呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.01)。预后生存分析发现,miR-153高表达患者生存率高于低表达患者,Survivin高表达患者生存率低于低表达患者,差异均有统计学意义(χ^2=19.390,χ^2=27.921,P<0.01)。结论miR-153在子宫颈癌组织中低表达,与Survivin在子宫颈癌组织中表达水平呈负相关,可能与子宫颈癌的增殖、侵袭转移有关。     

鼻咽癌组织中c-IAP2的表达及其临床意义

目的 探究细胞凋亡抑制蛋白2(cellular inhibitor of apoptosis protein 2,c-IAP2)在鼻咽癌组织中的表达以及临床意义.方法 回顾性分析95例鼻咽癌患者的肿瘤组织和40例正常患者的鼻咽组织及临床预后资料,分别利用RT-PCR、Western印迹以及免疫组织化学染色检测上述组织中...     

早期鼻咽癌癌细胞核的DNA含量及其分布型式

采用Leitz—MPV Ⅲ型显微镜光度计检测75例临床Ⅰ期鼻咽癌癌细胞核的DNA含量,并分析其分布型式。结果显示:早期鼻咽癌癌细胞核DNA的分布按其主峰所在可分为五种型式。癌细胞核的DNA指数、单位面积DNA指数、2.5～5.0cDNA细胞数和>5.0cDNA细胞数均随着Ⅱ型、Ⅲ和Ⅳ型而逐步增加;而Ⅱ+Ⅲ型的各个相应数值恰好位于Ⅱ型和Ⅲ型之间,NP型则位于Ⅲ型与Ⅳ型之间。上述结果说明,鼻咽癌发生的早期,自觉症状出现不久,绝大多数病例中癌细胞的间变性(多形性和不典型性)程度并不高。因此,早期治疗非常必要。     

人鼻咽粘膜上皮及鼻咽癌PNA受体的观察

采用辣根过氧化物酶标记的花生凝集素(PNA),对68例人鼻咽粘膜上皮和鼻咽癌的石蜡切片进行染色。结果表明,鼻咽癌细胞中PNA受体的分布及含量与鼻咽粘膜上皮相比显著不同,提示鼻咽癌细胞具有不完整的糖蛋白合成。     

鼻咽癌组织中淋巴细胞亚群分布的观察与分析

应用4种单克隆抗体和ABC技术观察22例鼻咽癌组织中B(Leu-10~+)、T(Leu-5b~+)、Th(Leu-3a~+)、Ts/c(Leu-2b~+)淋巴细胞亚群的分布特点。结果发现,各种淋巴细胞亚群在鼻咽癌实质中的分布数量显著少于间质。多数鼻咽癌病例(19/22)T细胞数量多于B细胞,Ts细胞少于Th细胞。与慢性鼻咽炎比较,鼻咽癌中的T、B、Th细胞都明显减少,提示鼻咽癌病人局部的细胞免疫与体液免疫功能都下降。     

鼻咽癌病人心理状况及心理护理

目的了解鼻咽癌患者的心理状况并进行针对性护理。方法应用SCL-90症状自评量表，对125例鼻咽癌患者进行心理测试，并与国内常模进行比较。结果调查对象SCL-90的躯体化、人际关系敏感、抑郁、焦虑、敌对性、恐怖等6个因子分均值高于国内常模，经t检验，P〈0．01，有显著性差异，说明测试对象存在着严重的心理障碍。结论及时采用合理的心理护理，可以减轻病人的心理障碍，提高依从性及生活质量。     

CCR1在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的 研究趋化因子受体1 (CC chemokine receptor 1,CCR1)在鼻咽癌中的表达及其临床意义.方法 运用免疫组化染色法及荧光定量PCR方法检测71例鼻咽癌组织及71例癌旁组织中CCR1的表达水平,分析CCR1表达与鼻咽癌患者临床病理特征之间的关系.结果 免疫组化结果显示,CCR1在鼻咽癌组织中的阳性率为77.5％(55/71),在癌旁组织中的阳性率为21.1％ (15/71),鼻咽癌组织中CCR1表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05);荧光定量PCR检测结果显示,在鼻咽癌组织中CCR1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.05).CCR1的表达与鼻咽癌患者的年龄、性别无显著相关性,而与患者的临床分期、T分期、分化程度、淋巴结转移呈正相关关系.结论 CCR1在鼻咽癌的发生发展中可能起到癌基因的作用,CCR1表达水平可作为判断鼻咽癌临床预后的预测指标.     

鼻咽癌调强放射治疗剂量学研究

目的：分析初治鼻咽癌调强放射治疗（IMRT）各级靶区和周围正常组织器官的剂量学特点，方法：2006年9月至2007年3月住院的40例初诊并接受IMRT的鼻咽癌患者进入本研究。肿瘤靶体积分为鼻咽入体肿瘤体积（GTVnx）、颈部大体肿瘤体积（GTVnx）、临床靶体积1（CTV1）、临床靶体积2（CTV2）。各处方剂量分别为PTVnx68Gy-74Gy，PTVnd 62Gy-70Gy，PTV160Gy-64Gy，PTV254Gy。鼻咽原发灶和上颈淋巴引流区采用IMRT，下颈及锁骨上淋巴区常规单前野照射。对各级肿瘤靶区以及周围正常器官受量情况进行研究。结果：PTVnx和PTVnd的Dmin、Dmax、Dmean、D95分别为60．9Gy、81．2Gy、76．7Gy、71．2Gy和57．2Gy、78．2Gy、73．2Gy、66．5Gy。晶体、视神经、视交叉、垂体、颞颌关节的最大剂量分别为6．7Gy、43．8Gy、45．6Gy、47．4Gy、57．2Gy。1cm^3脊髓受量（D1cc）为40．8Gy，3％脑干体积受量（B）为51．4Gy，10％颞叶体积受量（D10）为50．4Gy，50％腮腺体积受量（D50）为32-3Gy。结论：IMRT可以满足各级肿瘤靶区以及周围正常组织器官的剂量限制要求。     

鼻咽癌EMT相关基因的筛选及生物信息学分析

目的利用生物信息学方法挖掘鼻咽癌上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）发生的潜在分子机制。方法从公共基因芯片数据库GEO（gene expression omnibus）中寻找并下载鼻咽癌的相关基因芯片数据,并使用Genclip软件对下载的数据进行分析,寻找鼻咽癌公共基因芯片数据中与EMT相关的基因,并用生物信息学方法对筛选出来的基因作进一步分析。结果在公共的鼻咽癌芯片数据中找到35个与EMT相关的差异表达基因,这些基因功能大致与细胞组分、细胞粘附、通信、信号转导、分化、运动、迁移以及细胞表面受体相关的信号转导等有关,这些功能往往都被认为与肿瘤的侵袭和转移有关。结论利用生物信息学的方法能有效分析基因芯片数据并获取生物内在信息。鼻咽癌EMT是由于多种基因表达改变所致,这为确定鼻咽癌早期转移诊断标志与预后的预示开辟了新的思路。     

Reversing Effect of Sorcin in the Drug Resistance of Human Nasopharyngeal Carcinoma

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is one of the most common cancers originating in the nasopharynx, and chemoresistance is an essential aspect of NPC chemotherapy failure. Sorcin has been implicated in multidrug resistance (MDR) of many types of human tumor. However, the effect and mechanism of Sorcin in MDR of human NPC is not fully clear. In this report, we silenced Sorcin in human NPC CNE2/DDP cells, and explored the role of Sorcin in MDR reversal. The results showed an increased cytotoxicity of cisplatin and intracellular accumulation of Rhodamine‐123 and glutathione depletion in Sorcin silencing CNE2/DDP cells. We also found a decreased messenger RNA and protein expression of multidrug resistance gene (MDR1), multidrug resistance‐associated protein (MRP1), excision repair cross‐complementing gene 1 (ERCC1), glutathione S‐transferase‐π (GST‐n), RhoE, Bcl‐2, and Survivin in Sorcin silencing CNE2/DDP cells. The increased expression of PTEN and decreased expression of p‐Akt and NF‐κB suggested that the key cellular signaling pathways were triggered by Sorcin silencing. We concluded that Sorcin silencing would contribute to establish a potent target point for MDR reversal. Anat Rec, 297:215–221, 2014. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

Alisol A Inhibited the Proliferation,Migration, and Invasion of Nasopharyngeal Carcinoma Cells by Inhibiting the Hippo Signaling Pathway

PurposeAlisol A is a bioactive triterpenoid isolated from the Rhizoma Alismatis. Previous studies have shown that alisol A has anticancer potential. In this study, we explored the effect of alisol A on the growth of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells.Materials and MethodsMTT assay, colony formation assay, flow cytometry, transwell assay, wound healing assay, and western blotting were used to assess cell viability, proliferation, cell cycle, migration, invasion, and protein expression, respectively, in vitro. AutoDock Vina and Discovery Studio software were used for molecular docking.ResultsAlisol A inhibited the viability, proliferation, migration, and invasion of NPC cells. The molecular docking simulation assay confirmed that alisol A bound to YAP protein. In addition, alisol A promoted the phosphorylation of YAP and suppressed the expression of YAP in NPC cells.ConclusionAlisol A inhibited the proliferation, migration, and invasion of NPC cells by inhibiting the Hippo signaling pathway. Alisol A may be a candidate drug for NPC.