胰腺癌中Legumain的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨Legumain(LGMN)在胰腺癌组织和细胞中的表达、意义及其下调对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和迁移的影响。方法采用免疫组化SP法检测LGMN蛋白在67例胰腺癌组织及61例癌旁组织中的表达;分析LGMN表达与胰腺癌临床病理特征的关系。采用RT-PCR和Western blot法检测胰腺细胞系中LGMN的表达。通过慢病毒感染下调AsPC-1细胞中LGMN的表达,以未干预的细胞作为空白对照组,转染空白载体细胞为阴性对照组,LGMN敲低细胞为实验组;采用CCK-8法、Transwell实验、Western blot法检测下调LGMN对细胞增殖、迁移以及凋亡相关蛋白的影响。结果与癌旁组织相比,胰腺癌组织中LGMN高表达率更高,差异有统计学意义(P0.01);LGMN表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小等无关(P0.05)。AsPC-1细胞中LGMN mRNA及蛋白表达量均显著高于胰腺正常上皮细胞HPNE,差异有统计学意义(P0.01);转染慢病毒后,与对照组相比,实验组的吸光度值、细胞迁移数量、BCL-2蛋白表达、BCL-2/Bax的比值降低(P0.05),Bax升高差异不明显(P0.05)。结论 LGMN在胰腺癌中呈高表达,体外敲低LGMN后能够抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并通过BCL-2/Bax激活凋亡通路诱导细胞凋亡。     

抗原负载的DC诱导CIK对MDA-MB-231细胞的杀伤活性研究

探讨乳腺癌相关抗原负载后树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对MDA-MB-231乳腺癌细胞株的杀伤效应。采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),常规法诱导DC、CIK细胞;流式细胞技术分析测定细胞表型;用反复冻融法制备MDA-MB-231细胞的相关抗原,并测定抗原浓度;MTT法分别测定在四个不同效靶比时CIK、DC+CIK和抗原负载的DC+CIK三组效应细胞对MDA-MB-231乳腺癌细胞的杀伤活性。结果:CIK细胞分别与DC和Ag-DC共培养后,可见CD3+CD56+双阳性表达细胞较培养前显著增加(P<0.05);将负载肿瘤相关抗原的DC与CIK共培养后,杀瘤活性明显提高(P<0.05)。提示,抗原负载的DC与CIK细胞共同孵育培养后,在相同效靶比时,对MDA-MB-231乳腺癌细胞杀伤效应与CIK细胞和DC-CIK两组效应细胞相比有显著提高,表明抗原负载后可提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,为乳腺癌临床生物免疫治疗提供实验室基础。     

KDR反义寡核苷酸对人血管内皮细胞的作用

VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中起重要作用。我们用KDR特异性反义寡核苷酸作用于人血管内皮细胞，以阻断VEGF的自分泌作用通路，观察对细胞增殖的影响、细胞超微结构的变化及检测细胞DNA含量，测定细胞分泌VEGF的能力，并检测作用后KDR mRNA和KDR蛋白的水平。结果发现未经处理的人血管内皮细胞能分泌一定量的VEGF，KDR ASODN能抑制人血管内皮细胞内KDR基因的表达，并显著抑制细胞的增殖，在一定剂量下还可诱导凋亡。结果说明KDR ASODN能显著抑制血管内皮细胞的增殖，VEGF受体KDR在人血管内皮细胞的增殖和凋亡的凋控中起重要作用。     

Notch信号途径在血管形成和内皮细胞中的作用

Notch信号途径除了可以直接调控免疫细胞的发生和功能外,还可以通过血管内皮细胞影响免疫应答。血管形成(angiogenesis)是成年个体血管生长最重要的方式,不仅参与组织的发育与再生,还参与多种疾病如肿瘤的发生和进展。血管形成最主要的调控信号是血管内皮生长因子及其受体组成的信号途径。近年来的研究表明,进化上高度保守的Notch信号途径也是血管形成的重要调控信号途径。Notch信号途径可参与血管形成中的多个步骤,如顶端细胞的分化、内皮细胞的增殖、成熟血管结构的形成等。此外,Notch信号途径还参与血管形成相关疾病的发生和进展。尤为引人注目的是,近来发现Notch信号途径是肿瘤新生血管的重要调控信号,提示深入揭示Notch信号在血管形成中的作用和机制极有可能为开发新生血管靶向治疗提供靶点。     

肿瘤坏死因子对体外培养的血管内皮细胞的作用

在体外研究了肿瘤坏死因子对人脐静脉血管内皮细胞的作用。在体外培养的ＨＶＥＣ中加入人重组的ＴＮＦａ，终浓度为４００Ｕ／ｍｌ，培养７２小时后取贴壁细胞及培养液进行研究。结果发现，与对照组相比，ＴＮＦ组细胞有如下变化：１、光镜观察可见ＮＴＦ组细胞明显拉长，电镜观察发现细胞表面微绒毛减少，胞质中次级溶酶体增多，线粒体肿胀，变性，髓样小体出现。２．ＴＮＦ对ＨＶＥＣ的增殖有抑制作用。３．细胞表面纤维连接蛋白的     

GM-CSF对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及VEGF的作用

目的： 研究炎性因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及血管内皮生长因子（VEGF）的作用，为探讨GM-CSF和VEGF与动脉粥样硬化斑块内血管新生及斑块稳定性之间的关系提供实验基础。方法： 在 Matrigel上诱导人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）形成管腔结构，从而建立稳定的血管形成的体外培养体系，然后施加实验因素。分别检测rhGM-CSF的浓度效应和时间效应，及加入VEGF165的作用。然后各实验组用CD34免疫细胞化学染色，光学显微镜下计数各组管腔数。最后用统计学方法进行分析。结果： 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。rhGM-CSF作用后，培养体系的管腔数逐渐增多，呈剂量及时间依赖效应；加入VEGF165后，管腔数显著增多。结论： 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。GM-CSF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成，并在一定范围内呈剂量及时间依赖效应。VEGF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成。     

血管内皮细胞生长因子和血管生成与胃癌发展的关系

目的探讨血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）和血管生成与胃癌发展的关系。方法应用免疫组织化学和原位分子杂交技术,检测５６例人胃癌组织ＶＥＧＦ蛋白表达和微血管密度（ＭＶＤ）及部分胃癌ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达,分析ＶＥＧＦ和ＭＶＤ、及其与胃癌组织学分型、浸润深度、生长方式、淋巴结转移、远处转移和预后的关系。结果ＶＥＧＦ阳性者ＭＶＤ值显著高于阴性者（Ｐ＜００１）,ＶＥＧＦ表达和ＭＶＤ与胃癌浸润深度（Ｐ＜００１）、淋巴结转移（Ｐ＜００５）和远处转移（Ｐ＜０．０５）密切相关,而与组织学分型和生长方式无关（Ｐ＞００５）;ＶＥＧＦ表达阳性或ＭＶＤ≥４３的胃癌患者５年生存率较低;ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达与ＶＥＧＦ蛋白表达具有一致性,但其分布不同。结论ＶＥＧＦ与胃癌的血管生成密切相关,对胃癌的生长和浸润转移有促进作用,ＶＥＧＦ和ＭＶＤ可作为反映胃癌生物学行为的指标之一     

低氧时肺癌细胞侵润和迁移特性的变化及分子基础

目的:探讨低氧对肺癌细胞侵润、迁移特性的影响及其机制。方法:将肺癌细胞株置常氧(空气、5%CO₂)、低氧(5%O₂、5%CO₂、90%N₂)、无氧(95%N₂、5%CO₂)的不同氧环境中培养48 h后,用划痕法测定各组细胞的迁移能力,用羊膜内皮细胞模型测定各组细胞的侵润能力。同时将处理的细胞接种于裸鼠背部皮下,观察其生长情况及转移特点。同时分析上皮钙粘附素、β1-整合素的表达量。结果:低氧组细胞迁移能力、侵润能力显著高于常氧组。无氧组成瘤率和肺转移率显著低于常氧组和低氧组。低氧组上皮钙粘附素表达显著低于常氧组而β1-整合素表达量显著高于常氧组,无氧组两者均显著低于常氧组。结论:适度低氧可以下调肺癌细胞上皮钙粘附素表达,增加β1-整合素表达,增强癌细胞迁移力和侵润力。但是严重低氧使癌细胞粘附分子表达下降,生长增殖能力、迁移力和侵润力下降。     

TRAIL对多种肿瘤细胞的杀伤作用

目的： 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）作用下多种肿瘤细胞的生长抑制效应及凋亡诱导情况。方法： 利用大肠杆菌基因工程菌表达非融合rhsTRAIL，进行目的蛋白的分离纯化，得到rhsTRAIL样品，纯度为97%。通过倒置显微镜下观察、MTT法、流式细胞仪法检测其对细胞的生长抑制和诱导凋亡情况。结果： 一定浓度的TRAIL 可有效抑制LS174-T细胞、MCF-7细胞、GLC细胞、7402细胞、Jurkut T细胞生长，其生长抑制率具剂量依赖性，且各细胞对TRAIL敏感性不同，其中Jurkat T细胞最为敏感。用2 mg/L TRAIL作用Jurkat T细胞0-72 h，6 h后细胞即发生明显凋亡，其细胞凋亡率具时间依赖性。结论： 所制备的TRAIL可抑制多种肿瘤细胞生长，并诱导Jurkat T细胞凋亡。     

重组人钙调素对人脐静脉内皮细胞增殖作用的影响

本文探讨外源性重组人钙调素(recombinant human calmodulin,rhCaM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响。采用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化rhCaM。将HUVEC接种于96孔培养板,加入不同浓度rhCaM,用MTT比色法检测rhCaM对HUEVC细胞增殖作用的影响。结果表明rhCaM在0.04～0.4μg/ml浓度范围内可促进HUEVC的增殖,促增殖作用随细胞培养密度的增加而减弱,也与培养基中新生小牛血清的含量密切相关。故rhCaM对HUEVC增殖具有促进作用。     

链球菌组蛋白样蛋白对人脐静脉血管内皮细胞产生TNF-α的影响

研究链球菌HlpA对HUVEC产生TNF-α的作用。用1929成纤维细胞的细胞毒实验检测TNF-α活性。链球菌HlpA(0-80μg/ml)在体外以剂量和时间依赖方式促进HUVEC过量产生TNF-α(P<0.05)。LTA和HlpA的混合物对TNF-α的产生呈协同增强作用(P<0.05);抗HlpA和肝素则起抑制作用。     

Investigation of Interleukin 2 Receptors on Human Endothelial Cells

Abstract

We have demonstrated that both recombinant and purified IL-2 exert a direct effect on quiescent human microvascular endothelial cells in vitro, causing the cells to enter the cell cycle and proliferate (Hicks et al., 1989). In this study we have identified IL-2 receptors (R) on both human umbilical vein (HUVEC) and neonatal foreskin (HCEC) endothelial cells. The techniques used to identify the receptors included proliferation studies, flow cytometry and immunofluorescence. Results indicate that both HUVEC and HCEC possess low numbers of receptors since both cell types proliferate in response to IL-2. The number of receptors on the cell surface vary according to passage number and culture conditions. Immunofluorescent studies show discrete areas of staining on the cell membrane. These combined results suggest that human vascular endothelial cells possess IL-2R.     

Endothelial Cells and Human Cerebral Small Vessel Disease

Brain endothelial cells have unique properties in terms of barrier function, local molecular signaling, regulation of local cerebral blood flow (CBF) and interactions with other members of the neurovascular unit. In cerebral small vessel disease (arteriolosclerosis; SVD), the endothelial cells in small arteries survive, even when mural pathology is advanced and myocytes are severely depleted. Here, we review aspects of altered endothelial functions that have been implicated in SVD: local CBF dysregulation, endothelial activation and blood–brain barrier (BBB) dysfunction. Reduced CBF is reported in the diffuse white matter lesions that are a neuroradiological signature of SVD. This may reflect an underlying deficit in local CBF regulation (possibly via the nitric oxide/cGMP signaling pathway). While many laboratories have observed an association of symptomatic SVD with serum markers of endothelial activation, it is apparent that the origin of these circulating markers need not be brain endothelium. Our own neuropathology studies did not confirm local endothelial activation in small vessels exhibiting SVD. Local BBB failure has been proposed as a cause of SVD and associated parenchymal lesions. Some groups find that computational analyses of magnetic resonance imaging (MRI) scans, following systemic injection of a gadolinium‐based contrast agent, suggest that extravasation into brain parenchyma is heightened in people with SVD. Our recent histochemical studies of donated brain tissue, using immunolabeling for large plasma proteins [fibrinogen, immunoglobulin G (IgG)], do not support an association of SVD with recent plasma protein extravasation. It is possible that a trigger leakage episode, or a size‐selective loosening of the BBB, participates in SVD pathology.     

Distinct Cytokine Release Profiles from Human Endothelial and THP-1 Macrophage-like Cells Exposed to Different Amphotericin B Formulations

Amphotericin B(AmB) formulations, Fungizone, and Amphotec caused substantially greater proinflammatory cytokine release than AmBisome (L-AMB) and Abelcet in TPA differentiated THP-1 macrophages as determined by antibody based protein arrays. Lipopolysaccharide but not AmB induced significant pro-inflammatory cytokines in human endothelial cells.     

Effects of C5a and FMLP on Interleukin-8 Production and Proliferation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Interleukin-8 (IL-8), C5a and N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP) are chemotactic peptides with predominant effects on leukocytes during inflammation. With emphasis on C5a we studied the regulation of the production of IL-8 by human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) in vitro. Primary HUVEC cultures were incubated with IL-1, TNF, C5a and fMLP for 24 h and 48 h prior to measurement of IL-8 in supernatants of the cells by an enzyme immunoassay. Whereas IL-1 and TNF significantly increased the levels of IL-8, C5a decreased the IL-8 production after 48 h. In addition, the ability of IL-1, TNF, C5a, fMLP and IL-8 to induce cell proliferation was compared by means of a ³H-thymidine incorporation assay. In contrast with IL-1 and TNF, both C5a and fMLP increased cell proliferation of HUVEC. This increase occurred with increasing concentrations of C5a contrary to IL-8, which showed increased cell proliferation at low, but not high IL-8 concentrations.     

静注用免疫球蛋白对血管内皮细胞的体外作用

本文观察到静脉注射用免疫球蛋白(IVIg)体外抑制脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖.其中IVIg分子的Fc和F(ab’)_ 2片段都能发挥作用,并且抑制是可逆的.IVIg对于HUVEC几乎没有细胞毒作用.IVIg对VCAM-1、ICAM-l mRNA的表达没有明显影响,但是IVIg对于由TNFa或IL-lβ增强的VCAM-1、ICAM-1表达呈明显的下调作用.     

泰素抑制内皮细胞管道组装功能的机理研究

目的体外实验研究显示低浓度泰素具有抑制血管内皮细胞组装形成管道的能力。本研究探索泰素这种作用的机理。方法体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HumanUmbilicalVeinEn-dothelialCell,HUVEC)加入低浓度泰素,观察HUVEC的细胞形态,荧光染色检测HUVEC细胞内actin的表达情况。在体外管道形成试验中检测抗TLR-4(Tolllikereceptor-4)抗体对泰素抑制HUVEC管道组装能力的拮抗作用。结果实验结果发现低浓度泰素可使体外培养的HUVEC形态向间质细胞转化。荧光染色发现泰素可抑制HUVEC细胞actin表达。而对其他细胞无类似作用。采用TLR-4抗体可拮抗泰素抑制HUVEC管道形成的作用。结论低浓度泰素通过TLR-4抑制HUVEC细胞内actin的表达,使内皮细胞形态向间质细胞转化,从而抑制内皮细胞组装血管的能力。泰素的这种作用具有血管内皮细胞特异性。     

低浓度泰素抑制血管内皮细胞管道形成的实验研究

目的 体外实验研究低浓度泰素（人工半合成紫杉醇Pacitaxel）抑制血管内皮细胞组装形成管道的能力。方法 体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell，HUVEC）在含生长因子的胶原（Matrigcl）上能自行组装成管道结构，在细胞培养液中加入低浓度泰素，观察其抑制HUVEC组装管道的能力．计算管道总长度，与对照组相比较。结果发现泰素浓度在0．5—50μg/ml时，几乎完全抑制了HUVEC的管道形成。当泰素浓度降低到1、2、5和10ng／ml时，HUVEC形成的管道总长度分别为对照组的57％、51％、34％和27％。结论 ng／ml级的低浓度泰素在体外可抑制HUVEC约50％-70％的血管形成能力，而μg／ml级浓度泰素几乎可完全抑制HUVEC的血管形成能力。