人心肌肌钙蛋白Ⅰ胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法．用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cThI胶体金免疫层析检测试纸条。并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5ng／mL～1μg／mL;灵敏度质量浓度为5ng／mL：特异性：与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应：与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96．4％,阴性符合率为100．0％。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要．     

胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒感染的方法。方法通过对乙型流感病毒核蛋白单克隆抗体进行胶体金标记,成功研制了乙型流感病毒免疫层析检测试纸条。结果该试纸条操作简单,肉眼于10～15 min内判定结果,对乙型流感病毒具有高度特异性,与甲型H1N1、H3N2亚型流感病毒等其他重要呼吸道病毒无交叉反应。试纸条在室温保存12个月、2～8℃保存18个月,其特异性和灵敏度无明显变化。对从内蒙自治区医院收集的流感样症状病人的702份鼻咽部分泌物进行检测,与美国Quidel公司同类产品的符合率为95%。结论建立的乙型流感病毒免疫层析检测方法具有简便、快速、特异、敏感和稳定等特点,对乙型流感病毒感染疾病的临床检测与早期诊断具有重要意义。     

基于CCD的胶体金免疫层析检测设备的设计

研制开发了一套用于细胞毒素相关基因A定量检测的胶体金免疫层析试纸条检测设备。该设备由硬件部分和软件系统两部分组成。硬件系统主要用于胶体金免疫层析试纸条图像的采集,而软件系统则实现了人机的交互。检测设备利用CCD(电荷耦合器件)图像传感器件采集试纸条图像,并传输至PC模块。然后,软件系统利用算法对其进行数据分析和结果诊断。软件系统主要采用了基于HSI色彩空间的移动k-均值图像分割算法,该算法实现了胶体金免疫层析试纸条图像的有效分割,完成了定量检测。本研究用10个不同浓度的胶体金免疫层析试纸条进行检测,绘制出定量曲线。还分别检测了50个阴性和50个阳性的细胞毒素相关基因A实验样品,检测结果显示特异性和灵敏度均为100%,证明了该设备的可靠性。     

柯萨奇病毒IgM抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制

目的建立一种快速检测柯萨奇病毒IgM抗体的胶体金免疫层析试纸条，并优化制备中各关键步骤的实验条件。方法以柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金溶液，标记羊抗人IgM，制备免疫胶体金复合物，组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。结果用柠檬酸还原法制备的20nm胶体金溶液呈亮红色。胶体金标记羊抗人IgM最低稳定量是1μg/ml，最适稳定量为1．5μg/ml。最适pH为8．2。血清标本检测结果与进口ELISA试剂盒比较差异无统计学意义。结论胶体金免疫层析试纸条制备质量不但与抗原抗体的质量、层析材料的选择、胶体金的制备与标记等因素密切相关，而且缓冲系统、辅助添加剂的选择与优化也非常重要。     

早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌损伤的胶体金免疫层析法（GICA）。方法制备胶体金标记抗Myosin多肽抗体，抗Myosin单克隆抗体，结合垫和样品垫的处理，组装免疫层析试纸条。检测患者血清中Myosin，进行敏感性和特异性评定。结果测试条灵敏度可达5ng／mL。检测30例急性心肌梗塞（AMI）患者血清Myosin水平，并与Roche肌钙蛋白胶体金免疫层析试剂条比较，符合率达84.2％。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速、可用于急性心肌损伤的早期诊断。     

检测鼠疫耶尔森菌LcrV抗体的上转换发光技术免疫层析试纸条的制备及应用

目的　本研究旨在制备一种用于检测鼠疫耶尔森菌LcrV抗体的上转换发光技术(UPT)免疫层析试纸条.方法　通过在试纸条分析膜检测带处固定抗原,质控带处固定抗体,结合垫位置半固定将上转换发光(UCP)颗粒标记的抗原,制备出了双抗原夹心模式的LcrV抗体检测UPT免疫层析试纸条.对制备成型后的试纸条进行了线性和灵敏度、准确性、及热稳定性4个方面的性能评价.最后用此试纸条检测了40份自然感染鼠疫的兔和人血清标本,并将结果与ELISA检测结果进行了比较.结果　试纸灵敏度达0.97 mg/L,对所测17份猴血清标本的检测准确度为100％,在37℃的稳定存放期为10d.试纸对40份实际血清标本的检测结果与ELISA检测结果一致.结论　试纸有良好的灵敏度和线性检测能力.     

霍乱弧菌O1胶体金免疫层析快速检测法的建立

目的建立一种快速、简易的检测霍乱弧菌O1群的胶体金免疫层析法(GICA)。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测霍乱弧菌O1群,对该法进行敏感性、特异性和稳定性分析。与细菌培养法对比检测208份临床标本。结果该法能在10分钟内完成检测;该试纸条仅与霍乱弧菌O1群阳性样品发生特异性反应;检测霍乱弧菌O1群的最低检出浓度为1×105cfu/mL;与细菌培养法对比检测208份临床标本,特异性和灵敏度均达100%。结论新建立的霍乱弧菌O1群胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。     

EB病毒衣壳抗原IgA抗体胶体金快速检测法的建立及应用

目的建立了一种快速检测人血清中EB病毒衣壳抗原(VCA)IgA抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法预先将EB病毒衣壳抗原(EB-VCA)包被在硝酸纤维素膜上,将鼠抗人IgA抗体免疫金固化在金标垫上。检测时,样本通过层析作用向上流动,样本中的IgA抗体首先被胶体金标记的鼠抗人IgA抗体捕获,其中的EB-VCAIgA抗体再与包被在硝酸纤维素膜上的EB-VCA特异性结合,最后形成包被固相上的EB-VCA与EB-VCAIgA抗体及胶体金标记鼠抗人IgA抗体的三元复合物,通过检测线胶体金沉淀颜色的变化来定性判定样本中是否存在EB-VCAIgA抗体。结果采用自制的GICA试纸条进行了1028份临床标本的盲法检测,并与酶联免疫吸附试验的EB-VCAIgA抗体诊断试剂盒进行比对,结果表明两种试剂检测的总符合率达到94.56%,阳性符合率为93.40%,阴性符合率为95.17%,Kappa值为0.873,两种诊断试剂具备一致的诊断价值。结论用于检测血清中的EB-VCAIgA抗体的GICA试纸条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、稳定性好、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

呼吸道合胞病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测效能评价

目的评估呼吸道合胞病毒(RSV)荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性等检测效能。方法以培养的RSV和其他呼吸道病原体以及280例具有上呼吸道感染症状的患者作为标本来源。分别anjiang采用RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条和胶体金快速检测试纸条检测同一份标本,分析两种检测试纸条的检测效能。结果荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条;对甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道腺病毒和肺炎支原体无特异性反应。结论 RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条在检测性能上高于胶体金快速检测试纸条。     

胶体金免疫层析法检测血清癌胚抗原

建立一种快速、简易的检测血清中癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗CEA单克隆抗体4A3。将单克隆抗体3B5划线包被于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试纸条。血清中CEA与试纸条上胶体金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的包被抗体结合形成肉眼可见的红色线条。用GICA与ELISA试剂盒对比检测了637份血清标本，其灵敏度为96．69％，特异性为99．38％，两法符合率为98．74％。GICA检测血清中的CEA特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

免疫层析法快速测定鸡肉和鸡蛋中磺胺类药物残留

目的：用免疫层析试纸条法快速测定鸡蛋及鸡肉中磺胺类药物残留。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记抗磺胺类药物母核结构单克隆抗体,磺胺类药物竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。结果：该方法可以在15分钟内完成对磺胺类药物的半定量残留检测,检测磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）的灵敏度为10ng/ml,肉眼判定检测限为20ng/ml,样品中回收率在85%～95.6%之间;检测磺胺嘧啶（SDZ）的灵敏度为10ng/ml,肉眼判定检测限为40ng/ml,样品中的回收率在44.8%～60.9%之间。用本方法与高效液相色谱法（HPLC）对来自动物试验的鸡肉和鸡蛋样品进行对比检测,具有较高的符合率。结论：该方法灵敏度高,检测快速、准确,无需特殊仪器设备,可作为磺胺类药物残留的快速筛选方法。     

基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究

为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和羊抗鼠Ig G作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度。采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法。以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性。结果显示,成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体。胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和10μg/mL,最适pH分别需要加入16和12μL体积的0.2 mol/L K_2CO_3,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合。对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/mL,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性。本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础。     

检测Asia I型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。     

RIA与GICA测定尿HCG的结果比较

目的：对胶体金免疫层析试验与放射免疫分析随机尿HCG的结果进行比较分析。方法：采用胶体金免疫层析测定试条和放射免疫分析法对148例育龄妇妇随机尿HCG进行测定。结果：胶体金免疫层析试条对随机尿HCG的灵敏度为120．0mIU/ml，检测范围在120－427570mIU/ml，当尿HCG浓度大于427570mIU/ml时，该试条出现带现象，放射免疫分析法的灵敏度为25mIU/ml，没有带现象。结论：胶体金免疫层析试条具有操作简单、快速等优点，与放射免疫分析法相比，存在灵敏度低、带现象和不能定量等问题，在日常应用中应加以注意。     

抗人血红蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制

目的研制用胶体金免疫层析法定性检测人体粪便中血红蛋白(Hb)的试纸条。方法试纸条的玻璃纤维膜上包被胶体金标记的小鼠抗人Hb SPR-5单克隆抗体,硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)处分别包被小鼠抗人Hb SP-5单克隆抗体和山羊抗小鼠IgG,通过双抗体夹心技术和免疫层析作用,使阳性样本在T线和C线处均显色,而阴性样本只在C线显色。结果制备的试纸条对人Hb的检测下限为21 ng/mL,与鸡、兔、羊、猪、牛这5种动物血样不发生交叉反应。结论制备的检测试纸条能明显提高人体粪便潜血的检出率并避免假阳性结果。     

即时、定量黄曲霉毒素M1荧光淬灭免疫层析检测法建立和评价

目的 利用原创性荧光淬灭免疫层析技术进行黄曲霉毒素M1 (AFMl)快速、定量检测方法的探索.方法 对原创性AFM1检测试纸条从灵敏度、重复性与准确性方面进行性能验证,同酶联免疫吸附法原理的AFM1检测试剂进行比对研究.结果 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条最低检测下限为0.075ng/mL,批内变异系数≤7.3％,回收率为65.8％ ～94.1％.AFM1荧光淬灭免疫层析检测试纸条与酶联免疫法检测试剂具有良好的相关性(R2=0.9659).结论 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条可灵敏、准确、定量检测牛乳中的AFM1.     

抗霍乱弧菌O139群单克隆抗体的制备及初步鉴定

制备抗霍乱弧菌(V. cholerae)O139群特异性单克隆抗体(MAbs),进而制备检测霍乱弧菌O139群的胶体金免疫层析试纸条.福尔马林灭活的霍乱弧菌O139群免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立分泌抗霍乱弧菌O139群MAbs的杂交瘤细胞株.对配对较好的4株MAbs用ELISA法测定MAbs免疫球蛋白类及亚类,用ELISA法和凝集法鉴定MAbs的特异性.结果表明4株MAbs免疫球蛋白均为小鼠IgM;这些MAbs均与霍乱弧菌O139群菌株发生凝集反应,与霍乱弧菌O1群、大肠杆菌、出血性大肠杆菌O157∶H7、副溶血弧菌、麦氏弧菌、河弧菌、结肠炎耶尔森氏菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及甲型、乙型、丙型副伤寒杆菌不发生凝集反应.4株MAbs具有较高的特异性,有可能用于制备检测霍乱弧菌O139群的检测试剂.     

用自制单克隆抗体建立检测NGAL 的胶体金方法

目的:通过免疫、融合、纯化获得了抗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的特异性单克隆抗体,并建立了胶体金试纸条的检测。方法:本研究筛选得到5株抗NGAL的单克隆抗体,通过配对测试,1B4和2C6能用于双抗夹心胶体金试纸条的制备。以重组hr NGAL为检测对象,对本试纸条的灵敏度、重复性、稳定性进行了全面评价。结果:本试纸条的灵敏度为5 ng/ml,重复性和稳定性良好,对临床样本的检测与临床结果一致。结论:本研究建立的NGAL免疫胶体金检测方法,灵敏度高,检测时间短,成本低,为普及临床检测早期肾损伤具有重要意义。     

铜绿假单胞菌胶体金免疫层析法的研制和应用

为建立一种简单、快速、准确的铜绿假单胞菌检测方法,结合抗重组铜绿假单胞菌外膜蛋白单克隆抗体（mAb）、胶体金标记技术,采用双抗体夹心法,建立了检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析法,并对该方法的特异性、灵敏度和稳定性进行了评价,对临床痰标本进行了检测。结果显示,该胶体金免疫层析法能在3～15min内完成检测,方法的特异性高、稳定性强,检测灵敏度能达到105CFU/mL。与传统细菌培养方法相比,胶体金免疫层析法的相对灵敏度和特异性分别是80%和90.6%,两种方法的总符合率为86%。结论：利用抗铜绿假单胞菌单克隆抗体建立的胶体金免疫层析法,适合现场快速、特异检测铜绿假单胞菌。     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立

目的 制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法.方法 采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb.ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等.ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠lgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法.结果 经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功.经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL.mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8％外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应.制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL.结论 成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL.