溶血磷脂酸与血管平滑肌细胞表型转化

2003年人类基因组计划的完成开辟了人类遗传学、人类病理学等研究领域的新时代,然而近年来解析人类基因组意义过程中遇到一系列的难题使人们认识到DNA序列本身并不能解释所有关于遗传信息传递、人类疾病生物学基础等问题.随着研究的深入,人们逐渐认识到不仅蛋白编码序列,而且非编码序列、表观遗传机制等也是影响遗传信息传递、疾病发生等过程中的重要因素.     

胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h。采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖。结果 (12.5、25.0、50.0)mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22αmRNA水平及蛋白水平表达均降低(P0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平最低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P0.05)。与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P0.05)。50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加。结论胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化。     

细胞自噬促进血管平滑肌细胞向合成表型转化的作用与机制

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)具有两种不同表型,即分化表型(收缩表型)和去分化表型(合成表型).VSMCs来自中胚层,由低分化合成表型发育至高分化收缩表型.在成熟动脉,生理状态下的VSMCs处于分化静止状态,稳定在具有成年特性的收缩表型,主要维持血管的收缩功能[...     

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制.方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22a和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达.结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下凋,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调.而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达.结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用.其作用机制主要通过肾上腺索受体α1和β1来实现的.     

麝香保心丸对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的: 观察麝香保心丸(SXBXW)对血管平滑肌细胞表型转化的影响。方法: 以血管平滑肌细胞系RASMC P8为模型,设对照组,SXBXW 0.25、0.5、1.0和2.0 g/L组,经不同浓度的SXBXW作用后,用流式细胞术测定RASMC P8细胞的收缩型特异性分子标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)表达的变化。结果: 与对照组相比,经SXBXW处理后,α-SMA和SM-MHC的阴性细胞百分比降低,阳性细胞百分比增加。结论: SXBXW能促使血管平滑肌细胞的表型从合成型向收缩型转化。     

血管平滑肌细胞表型转变与糖尿病血管病变

血管平滑肌细胞按其形态、功能及细胞标志蛋白的不同可分为收缩型和合成型。血管平滑肌细胞受生化因子、细胞外基质成分、机械性刺激等多种因素的调节,其表型转变的分子机制主要与KLF4/Myo D/SRF轴相关。糖尿病的高血糖、胰岛素抵抗、脂类代谢紊乱、炎症反应可诱导血管平滑肌细胞表型转变,使其迁移、增殖能力增强,从而导致糖尿病血管病变。     

微小核糖核酸对血管平滑肌细胞表型转换影响的研究进展

血管平滑肌细胞(VSMC)作为血管中膜的主要构成细胞,其功能作用与其表型变化密切相关。合成表型具有增生及迁移能力,是各种心血管及周围血管病发生发展的主要病理基础,而收缩表型对维持血管弹性和收缩功能至关重要。较多微小核糖核酸(microRNAS,miRNAS)可通过相关途径和方式调控VSMC表型转换,从而在机体病理生理变化中发挥重要作用。本文综述涉及上述调节的miRNA研究的有关进展。     

同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响,以期为Hcy作为动脉粥样硬化(AS)独立危验因子的分子机制提供证据。方法:体外培养大鼠血管平滑肌细胞,用不同浓度的Hcy作用于细胞24h后:(1)MTT法测定细胞的增殖率;(2)流式细胞术检测细胞周期;(3)半定量RT-PCR法检测平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;(4)透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换特征。结果:Hcy可导致细胞增殖率增加;G0/G1期细胞逐渐减少,S期细胞逐渐增多;SM22α mRNA表达下调,Hcy浓度增至1000μmol/L时差异显著;透射电镜显示,高浓度Hcy作用后VSMCs胞浆中内质网、高尔基复合体明显增多、胞核大、染色质疏松。结论:Hcy促进VSMCs增殖的同时可促进其表型的转化。     

ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖

目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET—1对平滑肌细胞增殖的影响，^3H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G0期向S期的转变，G0／G1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。     

去甲肾上腺素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化和骨架蛋白表达的影响

目的研究去甲肾上腺素(NE)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化与骨架蛋白表达之间的关系,探讨神经因素对VSMC调控作用。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,分为血清对照组(control)、NE+血清培养组、血清饥饿组、NE+血清饥饿组。RT-PCR检测表型基因SM22 α mRNA的表达,免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果与血清培养相比,血清饥饿上调SM22 α表达水平,使F-actin的荧光强度明显增强;NE可降低SM22 α表达水平和使F-actin的荧光强度明显减低,细胞由长梭形转变为多角形或短梭形,细胞板状突起增多,可见细胞分裂。结论 NE对VSMCs表型转化和骨架蛋白形态和数量表达改变有重要作用,为研究神经因素在心血管疾病发生发展中的作用提供理论依据。     

Aortic Smooth Muscle Cells Express and Secrete Vascular Endothelial Growth Factor

Abstract

We examined whether cultured bovine aortic smooth muscle (ASM) cells express VEGF. RNA blot analysis of total cellular RNA derived from ASM cells demonstrates the expression of the VEGF gene. ASM cells release in the medium a VEGF-like endothelial cell mitogen which binds to heparin-sepharose and has an apparent molecular weight of 40-45 kDa as assessed by an HPLC gel filtration column. Consistent with VEGF, this mitogen does not stimulate the proliferation of ASM cells. Immunoblot analysis of the bioactive material with an antibody specific for VEGF demonstrates the presence of a major immunoreactive band with an apparent molecular mass of 23 kDa and a minor band with a molecular mass of -18 kDa, in reducing conditions. The major band has very similar apparent molecular weight as the 165 amino-acid species of human recombinant VEGF of folliculo-stellate cells derived VEGF. These data demonstrate the expression and synthesis of VEGF by cultured ASM cells and suggest that the 164 amino-acid species is the predominant molecular form of the growth factor secreted by such cells. VEGF released by ASM cells may play a paracrine role in the maintenance of the integrity of the endothelial lining or in the abnormal proliferation of the vasa vasorum which takes place in atherosclerosis.     

脱细胞血管组织基质的制备和平滑肌细胞的种植

目的组织工程血管的研制成功将为先天性心脏病外科提供一种新的理想的修补材料,本文研究血管脱细胞组织基质的制备,平滑肌细胞的体外培养和种植方法.方法取成年羊胸主动脉,用胰酶消化去除细胞成分,保存弹性蛋白和胶原蛋白,获得血管脱细胞组织基质,经点状注射法,种植体外培养的小牛平滑肌细胞.结果羊主动脉经脱细胞处理,得到的组织基质最大负载下降20%,最大伸长无显著改变;脱细胞组织基质的胶原蛋白含量与新鲜主动脉相似;基质的纤维结构完整,为网状或多孔状;种植的小牛平滑肌细胞生长良好.结论采用多步骤方法获得的血管脱细胞组织基质可用作为制备组织工程血管的支架,适宜于血管平滑肌细胞的生长.     

氟伐他汀调节SHR大鼠血管平滑肌细胞钙泵的表达对血管重构的影响及作用机制

目的探讨氟伐他汀（fluvastatin,Flu）对小牛血清（CS）干预的高血压大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及血管重构的影响并初步探讨其可能的机制。方法CS、Flu和甲羟戊酸（mevalonic acid,Meva）处理血管平滑肌细胞4d,将细胞分为SHR组、SHR＋20％CS组、SHR＋20％CS＋Flu组和SHR＋20％CS＋Flu＋Meva组,采用MTT检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力,体外管样实验、天狼星红染色以及免疫荧光的方法分别检测细胞的管样结构的生成能力、胶原纤维以及F-actin的表达,Western印迹检测PMCA、SERCA和LTCC的表达。结果Flu能够抑制CS促进的VSMCs增殖效应、迁移能力,管样结构生成,胶原蛋白表达,以及骨架蛋白的聚合,并下调VSMCs中PMCA的表达,上调SERCA和LTCC的表达,而Meva则对Flu的作用进行逆转。结论氟伐他汀对CS诱导的VSMCs增殖及血管重构产生抑制,该过程可能是通过调节钙泵的表达实现的,而Meva代谢途径可能在其中发挥了重要的作用。     

低氧诱导肺血管平滑肌细胞诱生型一氧化氮合酶基因表达

本研究采用原位杂交、免疫组织化学、酶组织化学染色方法从三个层次分别证明低氧诱导大鼠肺血管中膜平滑肌细胞一氧化氮合酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）的基因和蛋白表达，并使中膜平滑肌细胞具有ＮＯＳ活性；离体培养的肺动脉平滑肌细胞实验也证明低氧使肺动脉平滑肌细胞ＮＯＳ活性增加，ＮＯ生成增多。提示诱生型ＮＯＳ基因可能是一种低氧诱导基因，低氧诱导ＮＯＳ表达可能是细胞感受低氧的一种重要机制。     

雌二醇对培养的兔血管平滑肌细胞表现型转变及增生的直接影响

实验应用民镜形态定量，细胞增生试验及＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入试验，观察了１７－β雌二醇对体外培养的家兔主动脉平滑肌细胞表现型转变及对不同表现型ＳＭＣ增生的影响。结果显示，Ｅ２在体外可显著抑制收缩型ＳＭＥ向合成型ＳＭＣ转化，导致这些细胞推迟进入增殖高峰期。     

苯并卟啉衍生物单环酸A光动力作用对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨苯并卟啉衍生物单酸环A（BPD—MA）光动力作用对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：用不同浓度的光敏剂BPD-MA作用于体外培养的兔血管平滑肌细胞，经波长650nm半导体激光以能量密度1．2J／cm^2、2．4J／cm^2、4．8J／cm^2。照射，MTT法检测细胞增殖抑制率，用PCNA观察细胞增殖。结果：在1．2J／cm^2．2．4J／cm^2,4．8J／cm^2激光照射下，与空白对照组比较，BPD-MA光动力对平滑肌细胞有显著地抑制作用（P〈0．01），单纯激光组照射对平滑肌细胞的增殖无明显抑制作用（P〉0．05）。PCNA检测显示光动力作用抑制细胞增殖。结论：：BPD—MA光动力作用对血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用。     

培养的正常及动脉粥样硬化兔主动脉平滑肌细胞的超微结构比较研究

将正常及动脉粥样硬化兔主动脉病灶处平滑肌细胞进行体外培养,应用培养细胞的原位包埋技术及超微结构的定量分析,观察并比较了两者的超微结构。结果表明,动脉粥样硬化兔平滑肌细胞内肌丝成分显著较正常兔平滑肌细胞少,粗面内质网及线粒体较正常者丰富。本文对其意义进行了讨论。     

计算机图像处理系统用于血管平滑肌细胞形态定量分析

采用计算机图像分析法，定量测定家兔培养主动脉血管平滑肌细胞的形态学参数及其与ＤＮＡ合成指标的相关关系，并在此基础上，从细胞形态学角度探讨了中药制剂川芎嗪对ＶＳＭＣ增殖的影响，以评价计算机图像分析技术在细胞学研究中的作用，建立一种研究ＶＳＭＣ增殖水平的新方法。