产超广谱β-内酰胺酶和质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型检测

通过PCR基因测序分析两种酶的基因类型，用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式，并用纸片扩散试验和微量稀释法测定细菌对17种抗生素的敏感性，现报道如下。     

耐头孢噻肟肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶的携带率及耐药性

近年来,肠杆菌科细菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶的产生率和耐药性均呈逐年上升趋势,其主要原因是头孢噻肟(CTX)在临床大量应用,导致其耐药菌广泛传播。我们对从医院内感染标本中分离的2 77株耐CTX肠杆菌科细菌的产酶状况及耐药性作了分析,为临床用药提供资料。实验中所用的抗生素纸片主要包括头孢噻肟(CTX)、氨苄西林(AMP)、丁胺卡那(AMK)、哌拉西林/他唑巴坦(PIT)、氨苄西林/舒巴坦(APS)、头孢哌酮(CPX)、环丙沙星(CIP)、氨曲南(ATM)、头孢哌酮/舒巴坦(CPZ)、亚胺硫霉素(IPM )、头孢吡肟(FEP)、头孢西汀(FOX)、…     

新生儿NICU病房肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的了解深圳市宝安区龙华医院新生儿病房产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药情况,为合理治疗提供依据。方法对该院新生儿重症监护病房2006年1月-2007年12月收治的新生儿各类标本中分离所得169株肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,采用美国DADE Micro Scan Walkaway-40全自动微生物鉴定药敏测定系统进行药敏试验。结果肺炎克雷伯菌产ESBLs率由19%上升到32%,产ESBLs株耐药性显著高于非产ESBLs株;产ESBLs株仅对四代头孢菌素类、亚胺培南敏感。结论该院新生儿重症监护病房中产ESBLs的肺炎克雷伯菌逐年上升,应根据药敏结果结合临床合理使用抗生素;同时应采取有效措施控制产ESBLs肺炎克雷伯菌在新生儿重症监护病房感染。     

肺炎克雷伯菌AmpC酶检测及抗生素选择

目的 调查济宁市第一人民医院肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶表型及其对常用抗生素的耐药性,为临床用药提供依据。方法 收集2017年1月~7月济宁市第一人民医院临床分离的非重复肺炎克雷伯菌97株,应用头孢西丁纸片扩散法进行肺炎克雷伯菌AmpC酶表型初筛,对初筛阳性菌用多重PCR方法检测质粒介导AmpC酶基因,分析其耐药情况。结果 97株肺炎克雷伯菌中共筛选出40株对头孢西丁不敏感菌株,经多重PCR扩增,有7株AmpC酶阳性,检出率为7.22%（7/97）,均为DHA型。产质粒介导AmpC酶菌株仅对亚胺培南敏感（100.00%）。结论 济宁市第一人民医院产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌发生率相对较低,以DHA型基因为主,治疗应首选碳青霉烯类抗菌药物。     

ESBL阳性肺炎克雷伯菌所致肺炎临床特点和耐药性分析

目的 研究产超广谱β内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌的耐药特性及其所致肺炎的临床特点及临床危险因素,为预防ESBL阳性肺炎克雷伯菌所致肺炎的发生和临床治疗中抗生素的合理使用提供参考依据.方法 回顾性收集首都医科大学附属北京同仁医院93例(其中包括感染ESBL阳性肺炎克雷伯菌48例,非ESBL阳性肺炎克雷伯菌45例)住院患者的病历资料包括患者性别、年龄、治疗所用抗生素、住院时长、基础疾病以及侵入性操作6方面的信息,以及培养肺炎克雷伯菌的临床药敏结果.并对其危险因素进行单因素和多因素的分析.结果 ESBL阳性肺炎克雷伯菌菌株对阿米卡星的耐药率最低为41.6％,其次为复方新诺明和亚胺培南分别为56.3％和58.3％;对头孢菌素类药物(除头孢替坦外)耐药率为100％.临床治疗用药中单独用药最多见的是哌拉西林、美罗培南;联合用药最常见的是哌拉西林联合舒巴坦、美罗培南联合莫西沙星.感染ESBLs阳性肺炎克雷伯菌的肺炎患者,60岁以上占79.2％,平均住院天数为28.5 ±11.6天;死亡率为31％;合并高血压的有18例,合并糖尿病的有9例,合并脑梗的有3例,合并呼吸系统疾病的有10例;治疗过程中采用侵入性操作的有35例;感染ESBLs阴性肺炎克雷伯菌的肺炎患者,60岁以上33.4％,平均住住院天数为15.5 ±5.0天;死亡率6％;合并高血压的有18例,合并糖尿病的有9例,合并脑梗的有3例,合并呼吸系统疾病的有10例;治疗过程中采用侵入性操作的有16例.结论 住院时长(≥20天)、侵入性操作(包括气管插管、鼻导管吸氧、鼻饲等)、治疗过程中阿米卡星的使用,都是造成感染ESBL阳性肺炎克雷伯菌肺炎的临床感染危险因素(P＜0.05).在治疗感染ESBL阳性肺炎克雷伯菌的肺炎患者时应根据药敏结果调整临床用药.控制和预防感染ESBL阳性肺炎克雷伯菌的临床高危因素,可减少感染的可能性.     

肺炎克雷伯菌AmpC酶基因分型和随机扩增DNA多态性研究

目的了解我院肺炎克雷伯菌AmpC酶的基因分型及耐药情况,指导临床合理使用抗生素。方法采用K-B法初筛出可疑产AmpC酶的菌株,再用三维试验检测产AmpC酶的情况,用多重PCR进行基因分型、随机扩增DNA多态性技术进行同源性的分析。结果从临床260株肺炎克雷伯菌中初筛出57株可疑产AmpC酶的菌株,三维试验检测57株菌中AmpC酶阳性有51株,产AmpC酶的肺炎克雷伯菌大多数是DHA型占90%,只有很少一部分产MIX型占6%、FOX型占2%和ACC型占2%。通过15种药物对产AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性的分析,51株对亚胺培南的敏感性为98.0%,对头孢西丁耐药性为100%,对其他第三代头孢菌素的耐药性均超过70%。结论我院临床分离产AmpC酶的肺炎克雷伯菌主要基因型是DHA型,且呈多重耐药。     

北京发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌

目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时产超广谱β内酰胺酶(ESBL)及质粒型Ampc酶菌株的比率及其基因型。方法收集北京两家教学医院2001--2002年产ESBL且对头孢西叮耐药的59株大肠埃希菌和21株肺炎克雷伯菌，采用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点；接合试验证实酶基因有无可转移性，并用碱裂解法提取质粒；采用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction，MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。脉冲场凝胶电泳(pulsed field gelel ectrophoresis，PFGE)确定耐药菌株的亲缘关系。结果北京两家医院ESBL中质粒型AmCZ酶的发生率，大肠埃希菌分别为0和2％，肺炎克雷伯菌则分别为9．7％和17．1％。1株大肠埃希菌及9株肺炎克雷伯菌产生DHA-1型质粒AmpC酶，同时也产CTX-3型(6株)或CTX—M-14(1株)或SHV-12(3株)型ESBL。10株中，3株肺炎克雷伯菌可将头孢西叮耐药性传给受体菌。这10株菌均至少携带1个约33—36kb的大质粒，未发现质粒的传播。PFGE发现这10株菌来自不同的克隆株。结论北京地区发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX—M型ESBL的肺炎克雷伯菌，它们来自不同的克隆。     

大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌产AmpC酶的检测方法比较

目的：探讨适用于临床微生物常规检测产AmpC酶菌株的方法，为指导临床合理选用抗生素及监控产酶株的流行提供依据。方法：用Tris—EDTA纸片法和聚合酶连反应（PCR）2种试验检测AmpC酶并进行比较。结果：大肠埃希氏菌42株及肺炎克雷伯氏菌18株共60株中，Tris—EDTA纸片法检测出产AmpC酶30％（18株），PCR法为28％（17株）。Tris—EDTA纸片法与PCR法符合率（98．3％），敏感率为100％，特异性为97．8％。结论：Tris—EDTA纸片法简便实用。可作为产AmpC酶菌株的检测方法在基层临床微生物室应用。     

产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌医院感染肺炎临床危险因素的病例对照研究

目的探讨产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌医院感染肺炎的临床危险因素。方法用SPSS11.5软件进行统计,对101例肺炎克雷伯菌医院感染肺炎的临床危险因素进行病例对照研究。结果单因素分析发现住院时间大于20天、入住重症监护病房、气管插管或切开、留置导管、机械通气、头孢噻肟的使用是产ESBLs肺炎克雷伯菌医院感染肺炎的主要危险因素。多因素非条件logistic回归分析表明,头孢噻肟的使用是产ESBLs肺炎克雷伯菌医院感染肺炎的独立危险因素。结论合理使用头孢噻肟、采用替换性抗生素治疗策略是防止产ESBLs肺炎克雷伯菌感染肺炎流行的重要措施。     

肺炎克雷伯菌的耐药性及PFGE电泳核型

目的　探讨肺炎克雷伯菌耐药表型和基因组型之间的关系。方法　以双纸片协同试验 (DDST)筛选出产超广谱β 内酰胺酶肺炎克雷伯菌 (ESBL KP) ;用XbaⅠ酶对各试验菌株进行限制性酶切 ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分离酶切片段。结果　PFGE很好地显示出了种内菌株间的多态性 ;ESBL KP之间基因组型多态性较各敏感株之间明显 ,未发现特异性ESBL基因条带。结论　ESBL KP之PFGE核型与各敏感株相比有明显的多态性 ;PFGE不能定位ESBL基因。     

二家医院肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因研究

目的了解不同医院间肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因存在情况和耐药性。方法应用聚合酶链反应（PCR）法对耐药的肺炎克雷伯菌连续分离株进行AmpC酶DHA和ACT-1基因检测和分析。结果PCR结果显示A院44株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性4株（9．1％）；B院25株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性8株（32．0％），ACT-1基因二家均为阴性，二家医院DHA基因检出率有明显差别（P〈0．05）。结论质粒型AmpC酶基因可通过转化、接合等方式转移给其他同种或不同种菌，易于传播。二家医院DHA基因检出率有明显差别，并均己有流行的迹象。     

产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中整合子与多重耐药的研究

目的探讨整合子介导的耐药机制在产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用.方法5株产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离自2002年1月-2004年5月间我院呼吸科住院的患者,采用E-test试验条进行药敏试验、电转化试验,筛选、分离耐药质粒.PCR扩增Ⅰ型整合子基因盒插入序列,分子克隆和序列分析.结果所有产酶菌株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,5个产AmpC酶耐药质粒中,有4个检出整合酶序列,其中3个携带2种抗药性基因盒,包括氨基糖苷乙酰转移酶基因aacA4;氨基糖苷腺苷转移酶基因aadA5;二氢叶酸还原酶基因dfrA17;氯霉素外排蛋白编码基因cmL44.结论整合子介导的抗药性基因盒参与了产质粒AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药的形成,应引起高度重视.     

Molecular epidemiology of clinical isolates of ampc producing Klebsiella pneumoniae

Purpose: AmpC producing K. pneumoniae have been increasingly reported from India but epidemiological studies are lacking. In the present study, molecular epidemiology of extended-spectrum AmpC beta-lactamases (ESACs) producing clinical isolates of K. pneumoniae prevalent in our hospital was studied. Methods: Fifty-one non-repeat, consecutive, clinical isolates of K. pneumoniae producing AmpC enzymes, were subjected to whole cell protein profile analysis (SDS-PAGE) and ribotyping. The antimicrobial susceptibility was determined using standard disk diffusion technique. The isolates showing decreased susceptibility to cefoxitin (<18 mm) or cefotetan (<16 mm) were subjected to modified three-dimensional test for detection of AmpC enzyme. Results: Six different types of protein profiles were observed. Ribotyping could further discriminate between the strains that were clustered by protein fingerprinting. Twelve different ribo-patterns were identified. Ribotyping was found to have a better Discriminatory Index (0.98) than that of SDS-PAGE (0.78). Of the 26 isolates that showed decreased susceptibility to cefoxitin and/or cefotetan 13 isolates were found to harbour AmpC enzyme. Conclusions: The study demonstrated the usefulness of SDS-PAGE whole cell protein profile analysis and ribotyping to identify the clonality of the ESACs isolates, the latter having a higher discriminatory power. The presence of ESACs isolates in the community as well as in hospital settings emphasizes the need for regular monitoring of antimicrobial resistance.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药基因分析

目的 了解邢台地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的分子流行病学特点,为临床感染预防和治疗提供依据.方法 采用最小抑菌浓度(MIC)法检测产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药性,选取13种特异性引物采用聚合酶链反应(PCR)的方法检测产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因类型.结果 2013年1月至2014年3月从邢台人民医院分离出的125株非重复的产ESBLs肺炎克雷伯菌菌株,耐药基因以blaCTX-M的阳性率最高,为92.0％,blaSHV和blaTEM次之,为82.9％和73.2％.所有菌株均携带1种或1种以上的耐药基因.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药现象严重,耐药基因以blaCTX-M、blaSHV和blaTEM为主.医院应加强对ESBLs的监测,降低ESBLs的感染率以及耐药基因的突变,提高治疗感染的效率,防止医院感染的发生.     

Multidrug resistance mediated by co-carriage of extended-spectrum beta-lactamases,AmpC and New Delhi metallo-beta-lactamase-1 genes among carbapenem-resistant Enterobacteriaceae at five Indian medical centres

In this study, we evaluated the coexistence of extended-spectrum beta-lactamases (ESBL), AmpC and New Delhi metallo-beta-lactamase-1 (NDM-1) genes among carbapenem-resistant Enterobacteriaceae (CRE) recovered prospectively from patients at multiple sites. The study included 285 CRE strains from 2782 Gram-negative Bacilli collected from multiple centres during 2007–2010, of which 87 were characterised. Standard and reference laboratory methods were used for resistance determination. Detection of bla_NDM-1, bla_AmpC, bla_TEM, bla_SHV and bla_CTX-M was done by polymerase chain reaction. High levels of antimicrobial resistance observed among study isolates. Co-carriage of ESBLs, AmpC and NDM-1 was 26.3%. Nosocomial origin among the co-carriage isolates was 64.3%, with 9.2% associated mortality.     

Study of Klebsiella pneumoniae producing extendedspectrum β-lactamases against aminoglycosides

Klebsiella pneumoniae （ K. pneumoniae） is one of the main gmn-negative bacilli in clinical practice. Nosocomial infections caused by K. pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases （ESBLs） are very difficult to treat. This paper investigated the resistant characteristics of K. pneumoniae producing ESBLs and their aminoglycoside-modifying enzyme gene expressions including Nacetyltransferases and O-adenyltransferases. Bacteria identification and ESBLs confirmatory tests were performed by Phoenix^TM-100 system. And minimum inhibitory concentrations （MICs） of gentamicin, amikacin, kanamycin, tobranycin, netilmicin and neomycin in 53 K. pneumoniae isolates were detected by agar dilution. In addition, six aminoglycoside-modifying enzyme genes were amplified by polymerase chain reaction （PCR） and verified by DNA sequencer. It was found that imipenem and meropenem against 120 K. pneumoniae isolates produced powerful antimicrobial activities. The resistant rates of gentamicin and amikacin were 55.0% and 46.7%, respectively. Except neomycin, MIC50 and MIC90 of gentamicin, amikacin, kanamycin, tobramycin and netilmicin in 53 K. pneumoniae were all 〉 128 μg/ml, and the resistant rates were 83.0%, 52.3%, 75.5%, 81.1% and 69.8%, respectively. However, neomycin was only 39.6%. In addition, five modifying enzyme genes, including aac（3）-Ⅰ, aac（3）-Ⅱ, aac（6＇）-Ⅰb, ant（3＂）-Ⅰ, ant（2＂）-Ⅰ genes, were found in 53 isoaltes except aac （6＇）-Ⅱ, and their positive rates were 11.3%, 67.9%, 47.2%, 1.9% and 39.6%, respectively. It was also confirmed by nucleotide sequence analysis that the above resistant genes shared nearly 100% identities with GenBank published genes. The results obtained in the present study indicated that K. pneumoniae producing ESBLs strains are rapidly spreading in our hospital, and their resistance to aminoglycosides may be associated with aminoglycoside-modifying enzyme gene expressions.     

2499例肺炎克雷伯菌临床分布及耐药性分析

目的分析肺炎克雷伯菌耐药性趋势,指导临床合理用药。方法对医院2 499例临床送验标本分离出的肺炎克雷伯菌耐药性进行统计分析。结果标本来源以痰液、尿液和血液居前3位,分别占比52.78%、12.28%、10.04%。肺炎克雷伯菌对青霉素类、头孢类抗菌药物耐药率高于80%;对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南耐药率有增长趋势;对替甲环素和厄他培南均高度敏感。2 499例多重耐药的肺炎克雷伯菌检出率分别为24.45%,多重耐药的肺炎克雷伯菌检出率呈上升趋势。结论针对肺炎克雷伯菌耐药性变迁,及时采取抗菌药物预警指导,合理使用抗菌药物,有效控制繁殖耐药菌产生,降低耐药率。