日本血吸虫与卫氏并殖吸虫抗原的研究Ⅱ.EITB法在血吸虫病免疫诊断中的应用

<正> 血吸虫流行区常伴有肺吸虫流行,由于二者具有共同抗原,因此用免疫法诊断血吸虫病时,常由于患肺吸虫病而出现假阳性。已报道的交叉反应率为3～8.8形不等。近几年出现的EITB法具有敏感、特异性强的优点,国外有学者用此法分析曼氏血吸虫抗原,认为曼氏血吸虫抗原中31Kd的     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67)对血吸虫病的诊断价值。本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔。进行常规ELISA检测。结果对急,慢性血吸虫病患血清的检出率分别为100%和95%,与正常人血清,肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的变叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.7%,75.0%和90.09%。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

日本血吸虫与卫氏并殖吸虫抗原的研究Ⅰ.交叉反应组分的免疫学表现

<正> 在我国血吸虫流行地区常伴有肺吸虫共同流行。由于这两种吸虫的生物学特性非常相似,因此,在采用可溶性抗原进行免疫方法诊断血吸虫病时,往往由于肺吸虫感染者血清中抗体的干扰而出现假阳性反应。曾报道二者出现交叉反应的范围在3～8.8％不     

日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原诊断血吸虫病的初步探讨

用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)作探针，采用ELISA和ELIB检测血吸虫病人血清抗体，对急慢性血吸虫病人的控出率分别为100％和98．2％，未出现假阳性及交叉阳性反应；治疗后3、6和12个月血清抗体的阴转率分别为32．3％、50．9％和64％。其中抗82，73，67，52，42，38，32，31，28，26．21，18kDa分子的血清抗体消失较快。结果表明，SIEA在血吸虫病的诊断中具有较高的敏感性、特异性和潜在的疗效考核价值。     

一种对日本血吸虫病具有诊断潜力的单克隆抗体

感染小鼠淋巴结 B细胞与小鼠骨髓瘤 SP 2/0株融合,所获单克隆抗体 ⅢD10能与血吸虫抗原形成免疫沉淀,具有属特异性,免疫荧光定位于成虫肠管。免疫电泳提示,ⅢD10为抗循环阴极抗原单抗。应用于竞争 ELISA试验,显示很高的敏感性和特异性,检测 120例烘检阳性慢性血吸虫病患者,100％阳性,204例正常人仅1例在1:10时出现阳性,与6例肺吸虫病人无交叉反应。感染动物试验,感染前30只家兔均阴性,感染后4周全部出现阳性;治疗后8周抑制滴度逐渐下降。     

rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原（SjAWA）建立Immunogold-IgG-Dot-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较检测结果。结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的阳性检出率均为100%,特异性分别为97.67%和95.35%;SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病血清均存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。     

先天性感染日本血吸虫家兔攻击感染后血清抗体动态的观察

日本血吸虫抗原系统相对比较复杂，汤益等对先天性感染日本血吸虫仔兔于出生后第55天攻击感染，以ELISA法检测仔兔血清特异性针对可溶性虫卵抗原(SEA)抗体，结果仔兔对攻击性感染呈低反应状态。本研究采用ELISA法检测先天性感染仔兔攻击感染后血清针对日本血吸虫抗原(AWA)IgC、IgM抗体并观察其动态变化，同时重复SEA-ELISA法检测结果，进一步探讨日本血吸虫病先天性感染仔兔的体液免疫应答。     

2008年三峡库区流动人口血吸虫感染分析

目的探讨三峡库区流动人口血吸虫感染特征,为制定三峡库区血吸虫病防治对策和措施提供科学依据。方法采用流行病学调查和酶联免疫吸附试验（ELISA）在三峡库区调查流动人口的血吸虫感染情况。结果调查流动人口1416人,其中返乡人员792人,疫区来渝人员624人。返乡人员流动原因以外出务工为主,疫区来渝人员以经商为主;流动人口血清学阳性率为3．04％,其中返乡人员、疫区来渝人员分别为4．04％、1．76％;来自流行省、传播阻断省分别为3．60％、1．33％,来自非流行省未发现阳性。流动人员主要来自湖北、湖南、四川,分别占33．40％、17．44％、10．52％;血清阳性率以江西、江苏、湖北最高,均超过4％。多因素Logistic回归分析显示。流动人口来源、可疑感染地区与血清学感染差异有统计学意义（P〈0．01）;返乡人员血清学阳性率显著高于疫区来渝人员（x^2=9．00,P〈0．01）,来自血吸虫病流行区的阳性率高于其它地区（x^2=6．99,P〈0．01）。结论三峡库区流动人口存在血吸虫感染情况,主要来自血吸虫病流行省份,重点监测来自库区周边省份的流动人员。特别是返乡人员。     

一种新的血吸虫病诊断用皮试抗原的研究

<正> 对血吸虫成虫提取水溶性抗原(AWA)后的虫渣,用 BM 尿素为蛋白质裂解剂,进一步分离具有抗原性的结合蛋白成分(JWU),抗原得量可增加1.25倍。应用 JWU 制备皮内反应诊断用抗原,试验用浓度为1μg/ml,对1,395例血吸虫病人和健康人进行检测,同时用 AWA 作平行对照。对240例血吸虫病人检出率为97.5%,对680例健康人群的特异性为98.5%,经统计处理与 AWA 无显著差异。但 JWU 皮丘直径均值1.43cm 较 AWA 皮丘均值1.33cm 大。对58例肝吸虫病人未发现交叉反应,对36例肺吸虫病人的交叉反应为5.56%,低于 AWA 的8.33%。提取 JWU 并将其用于皮内反应试验,国内外尚未见报道。目前这种皮试抗原已批量生产,供应流行区现场用于普查血吸虫病过筛试验。     

rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值研究

目的研究rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原（SjAWA）Immunogold-Dipstick法检测慢性日本血吸虫病患者血清,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊性棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作为对照,比较两种抗原检测抗体效果的差异。结果该法检测慢性日本血吸虫病的敏感性和特异性分别为92.50%和97.67%,诊断该病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为97.37%、93.33%和95.18%,并且与其他疾病患者血清均无交叉反应。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。     

2005-2007年重庆市万州区血吸虫病及相关因素监测结果分析

目的了解三峡库区万州段血吸虫病及其潜在流行因素,为制定库区血吸虫病预防控制措施提供科学依据。方法根据《全国血吸虫病疫情监测方案》要求,在2005-2007年间选择重庆市万州区全国血吸虫病监测点区域内,开展血吸虫病疫情监测及血吸虫病潜在流行因素钉螺与家畜感染输入情况的监测。结果本地居民无血吸虫病例报告,居民血吸虫病血清抗体阳性检出率为0.78%,外出疫区返乡人员血清抗体阳性检出率为2.10%,疫区来万州人员血清抗体阳性检出率为1.97%。在万州段港口码头、船坞、沟壑、洲滩以及水生动植物的饲养繁殖场所开展钉螺输入调查,调查结果发现库区存在钉螺输入因素,但暂未发现有钉螺输入。库区117份牛血清IHA检测结果均为阴性。结论重庆三峡库区万州段存在着潜在血吸虫病输入传染源和血吸虫病流行的相关因素,三峡成库后的生态环境变化及居民生产生活习惯为血吸虫病的传播提供了有利条件,提示应重点加强监测与防控。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...     

全血快速检测日本血吸虫抗体免疫层析法的研制和初步评价

本研究采用抗人IgG单克隆抗体标记红色乳胶微球作为探针,以日本血吸虫虫卵可溶性抗原包被硝酸纤维素膜,运用免疫间接法原理,建立了全血快速检测血吸虫抗体乳胶免疫层析法（WB-DLIA）.以WB-DLIA和ELISA分别检测粪检血吸虫虫卵阳性病人标本,阳性符合率为94.40%（51/54）和96.30%（52/54）;检测正常人标本,阴性符合率分别为96.6%（252/261）和 95.40%（249/261）,两法之间无显著性差异（χ2分别为0.21和0.618,P＞0.05）,Youden指数分别为0.91和0.92;对并殖吸虫感染者全血检测的交叉反应率为43.8%（7/16）,其他寄生虫感染者全血检测的交叉反应率为0（0/29）.研究结果显示WB-DLIA与ELISA具有相似的敏感性和特异性,但前者无需分离血清和任何仪器,结果观察清晰,操作更加简便和快速,且易于保存运输,更加适于临床检测、基层推广和大规模现场筛查.     

三峡库区生态环境变化对血吸虫病流行的影响及防治对策研究

目的研究三峡成库后生态环境变化对血吸虫病流行的影响，为制定防治方案提供科学依据。方法在三峡库区中段和尾端江岸海拔160m和180m高度，模拟成库后灌溉区和淤积区类似条件，投放湖北肋壳钉螺和四川光壳钉螺，观察其生长繁殖1年的情况；用IHA抽样筛查来往于疫区流动人群中潜在的传染源．粪便检查血吸虫虫卵；了解耕牛等生畜引进情况；调查重庆市历史疫情报告和三峡医院、重庆医科大学附属第一医院诊断的血吸虫病病例；调查影响钉螺输入的因素。结果肋壳钉螺和光壳钉螺成活率仅少数月份在50％以下，多数月份在80％左右，各试验区发现钉螺交配数量较少，相对以3-6月为多，同时发现活幼螺；来往疫区流动人员血清抗体检查1075人，血吸虫抗体阳性率为1．77％，疫区返乡人员1030人，血清阳性率为1．07％；1989—2006年，发现有记载的输人性血吸虫病病例14例；血吸虫病区有大量造纸原料和花草树木进入库区。结论三峡成库后，生态环境发生变化，存在血吸虫病流行的潜在危险。     

单克隆抗体斑点试验检测血吸虫卵抗原

靶抗原为血吸虫卵糖蛋白的单克隆抗体SM21-3标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中虫卵抗原。12份感染兔血清全部呈阳性反应;12份正常兔血清呈阴性反应。8份感染 10 0条及8份感染10条尾蚴的治疗前兔血清呈阳性反应;治疗后1月,血清抗原水平有不同程度下降;治疗后3月,部分血清转为阴性,其余几份均呈弱阳性反应。检测血吸虫病人血清80份,阳性66份,阳性率为82.5％;检测正常人血清60份,未见阳性反应。上述结果表明本方法具有较好的敏感性与特异性,而且方法简单易行,肉眼观察结果,适于现场应用。     

日本血吸虫成虫抗原和虫卵抗原检测先天性感染仔兔血清抗体的动态变化

目的　观察仔兔血清抗体动态变化 ,探讨家兔日本血吸虫病垂直传播的体液免疫反应规律。方法　 5只怀孕晚期母兔分别人工感染 5 0 0条日本血吸虫尾蚴 只 ,仔兔出生后 4 3d起每隔 2周采血收集血清 ,至仔兔发育成熟 (约出生后113d)。分别运用日本血吸虫成虫抗原 (AWA)和可溶性虫卵抗原 (SEA) ,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体 ,观察动态变化。结果　仔兔先天性感染率为 6 0 % (12 2 0 ) ,其中 5只双性感染 ,7只单性感染。 2 0只仔兔 ,抗AWA IgG、抗AWA IgM抗体检测始终呈阴性 ;抗SEA IgG检测 ,5只双性感染仔兔有 4只于出生后 5 7d起陆续呈阳性 ,其余 16只始终为阴性 ;2 0只仔兔抗SEA IgM也始终呈阴性。结论　先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态 ,可能存在免疫耐受     

Use of recombinant calreticulin and cercarial transformation fluid (CTF) in the serodiagnosis of Schistosoma mansoni

Schistosomiasis is traditionally diagnosed by microscopic detection of ova in stool samples, but this method is labour intensive and its sensitivity is limited by low and variable egg secretion in many patients. An alternative is an ELISA using Schistosoma mansoni soluble egg antigen (SEA) to detect anti-schistosome antibody in patient samples. SEA is a good diagnostic marker in non-endemic regions but is of limited value in endemic regions, mainly because of its high cost and limited specificity. Here we assess seven novel antigens for the detection of S. mansoni antibody in an endemic region (the Northern Nile Delta). Using recombinant S. mansoni calreticulin (CRT) and fragments thereof, anti-CRT antibodies were detected in the majority of 97 patients sera. The diagnostic value of some of these antigens was, however, limited by the presence of cross-reacting antibody in the healthy controls, even those recruited in non-endemic areas. Cercarial transformation fluid (CTF), a supernatant that contains soluble material released by the cercariae upon transformation to the schistosomula, is cheaper and easier to produce than SEA. An ELISA using CTF as the detection antigen had a sensitivity of 89.7% and an estimated specificity of 100% when used in non-endemic regions, matching the performance of the established SEA ELISA. CTF was substantially more specific than SEA for diagnosis in the endemic region, and less susceptible than SEA to cross-reacting antibody in the sera of controls with other protozoan and metazoan infections.     

Study of the cross-reaction between rabbit anti-bovine serum albumin antibodies and equine serum albumin

Cross-reactions between bovine serum albumin and equine serum albumin were studied using heterologous soluble complexes and specifically purified cross-reacting antibody.

Experiments with soluble complexes showed that homologous antigen can displace heterologous antigen specifically bound to antibody but heterologous antigen cannot displace homologous antigen. On gel precipitation tests a specific precipitation resulted when heterologous soluble complex reacted with homologous antigen.

By using equine serum albumin conjugated to polyaminopolystyrene the cross-reacting antibodies from anti-bovine serum albumin imune sera could be isolated. These are divalent 7S, γ-globulin antibodies. A figure of cross-reaction was obtained when these purified antibodies were tested by double diffusion in agar with bovine and equine serum albumins.

The results obtained both with soluble complexes and with purified antibody support the view that cross-reacting antibody is more avid for the homologous than for the heterologous antigen.

     

An assay to measure antigen-specific immune complexes in food-allergy patients

An allergen- and isotype-specific assay to quantify the presence of serum immune complexes is described. This assay is based on a two-site recognition system so that only molecular complexes containing both antigen and antibody are counted. In this study affinity-purified antibodies to egg and milk whey were used on paper discs in conjunction with a soluble, labeled anti-immunoglobulin (IgE or IgG specific). To evaluate the assay, immune complexes were prepared in vitro by mixing antigen at different concentrations with serum from a patient with high levels of antibody. Complexes were detectable over a 5 log range of antigen concentration. The lower limit of sensitivity of the assay was estimated to be 5.8 ng of complexed IgE per milliliter of patient serum. To determine if the assay could detect natural in vivo-formed complexes, sera from patients with positive RAST scores to egg white or milk were selected for a preliminary study. Three of the nine egg white-positive sera and two of the nine milk-positive sera were found to contain significant levels of IgE immune complexes. The versatility and sensitivity of the assay should now make it feasible to design experiments to elucidate the role, if any, of circulating immune complexes in the etiology of food allergy.     

Cloning of the gene encoding a 50 kilodalton potential surface antigen of Schistosoma mansoni

A cDNA library was constructed from the mRNA of adult worms of Schistosoma mansoni, in the expression vector lambda gt11. This library was screened with a pool of sera raised against either soluble egg antigens or purified schistosomulum tegumental membranes. An antiserum raised against the fusion protein of one clone immunoprecipitated a 45 kDa polypeptide from the in vitro translation products of adult worm mRNA and recognised a 50 kDa antigen in homogenates of adult worms. This serum gave positive fluorescence of the surface of schistosomula in indirect immunofluorescence assays and was able to mediate killing of schistosomula by human eosinophils in vitro, suggesting that this clone contained part of a gene encoding a surface antigen.