应用CD4+CD25+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究

目的 应用供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应.方法 以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4 CD25 T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞及CD4 CD25 Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12).观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平.结果 FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4 CD25 Treg细胞纯度为65.22%.所分选之CD4 CD25 Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%.移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P＜0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生.     

寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平的表达

目的 研究寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg细胞)水平的表达,探讨CD4+CD25+Treg细胞在寻常型银屑病发病机制中的作用.方法 对寻常型银屑病患者分期并进行Pasi评分,采用流式细胞术检测银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达.结果 银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞占T细胞淋巴细胞的比例表达,寻常型明显低于正常对照组(P<0.05);其中进行期明显低于静止期和正常对照组(P<0.05);CD4+CD25+Treg细胞占T淋巴细胞的比例与Pasi及病程评分无相关关系(P>0.05).结论 寻常型银屑病的发病与外周血CD4+CD25+Treg细胞数目的减少有关,CD4+CD25+Treg细胞占T淋巴细胞的比例与Pasi评分及病程无相关关系.     

供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞对肾移植大鼠免疫状态的影响

目的 研究供体抗原特异性CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)对肾移植后大鼠免疫状态的影响.方法 常规分离Lewis和F344大鼠脾脏淋巴细胞,然后将Lewis大鼠淋巴细胞负载F344大鼠抗原,然后从负载抗原后的Lewis大鼠淋巴细胞悬液中用MACS磁珠分选法分离纯化供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞,并用流式检测分选Treg细胞纯度以及RT-PCR检测分选细胞的Foxp3基因表达.以F344、Lewis大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植动物模型,将供体抗原特异性Treg细胞经尾静脉注射入受者体内(治疗组,n=8),选取未注射组为对照组(n=8).于术前1d,术后15d检测移植后4组大鼠血清IL-10、IgG,并于术后15d MTT法检测受体脾细胞对供体抗原刺激的反应.结果 所分选之CD4 CD25 Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%,并检测到Foxp3表达.移植前治疗组和对照组大鼠血清中均无法检测到IL-10浓度.术后15d治疗组血清IL-10与对照组比较,明显增高(P＜0.01).对照组在术后15d血清IgG浓度已经显著升高,较术前差异有统计学意义(P＜0.05).而治疗组术后15d血清IgG浓度与术前相比有所降低,与术前相比差异无统计学意义(P》0.05),但与对照组相比较均差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组对供体脾细胞的刺激反应也明显低于Ⅰ组(P＜0.01).结论 供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞能显著促进体内IL-10的产生以及抑制免疫球蛋白IgG的产生,并且可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应.     

磁激活分选法双重分离大鼠外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞

目的:应用磁激活细胞分选(MASC)技术从卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出大量高纯度CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg),以研究其在支气管哮喘中的作用。方法:从OVA免疫耐受大鼠外周血中分离出PBMCs,应用MASC技术阴性分选CD4+T细胞,再阳性分选出CD4+CD25+Treg;流式细胞仪检测。结果:分选前的CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的11.07%,CD4+T细胞占总数的21.88%;CD4阴性分选后,CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的10.95%,CD4+T细胞占总数的89.28%;CD25阳性分选后,CD4+T细胞超过总数的95%,而CD4+CD25+Treg细胞占总数的90.92%,CD4+CD25+Treg细胞纯度大于90%。结论:应用MASC技术成功从OVA免疫耐受大鼠的PBMCs中分选出了高纯度的CD4+CD25+Treg细胞。     

正常妊娠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞和雌二醇水平变化的研究

目的 探讨外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和雌二醇水平在正常妊娠整个过程中的变化.方法 采用三色荧光标记流式细胞术检测正常非妊娠健康女性(对照组),早早孕组、早孕组、中孕组、晚孕组各35例妇女外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率;采用电化学发光酶免分析技术分别检测以上各对象外周血雌二醇水平.结果 对照组和早早孕组外周血雌二醇水平明显低于早孕组、中孕组、晚孕组(P＜0.05),并且随孕周增大而升高(P＜0.05);对照组和早早孕组外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率明显低于早孕组、中孕组、晚孕组(P＜0.05),并且随孕周增大而升高(P＜0.05),晚孕组略低于中孕组,但无统计学意义(P＞0.05).结论 正常妊娠过程孕8周左右之后CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和雌二醇水平均呈现明显升高,并且随孕周增大而升高,正常的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和外周血雌二醇水平在维持正常妊娠过程中发挥重要作用.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在HBV宫内感染者血液中的表达及意义。方法:流式细胞技术检测157例乙肝大三阳但肝功能正常孕产妇外周血、其分娩新生儿脐血、HBV宫内感染婴幼儿外周血中CD4+CD25+Treg表达水平。结果:HBV宫内感染产妇外周血及新生儿脐血中CD4+CD25+Treg的百分数较未感染组高(P<0.05);HBV持续感染者CD4+CD25+Treg比例较感染转阴组高(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg抑制体内HBV清除,宫内感染与其表达上调有关。     

牙周炎发生时外周血中CD4~+CD25~+T细胞表达的变化研究

目的:探讨CD4+CD25+Treg在牙周炎发生时的免疫调节作用。方法:选择35只成年SPF级Wistar大鼠,丝线结扎加高糖饮食建立大鼠牙周炎发生的动物模型,获得类似牙周炎自然病程的连续组织标本,病理切片确定病损,分别获取第4、8、12、16周的大鼠外周血,术前未结扎组对照。以流式细胞仪检测不同时段外周血中CD4+CD25+Treg的比例变化。结果:建立了Wistar大鼠牙周炎发生的动物模型,病理切片确定了牙周病损的存在。结果显示伴随牙周炎发生的牙槽骨的吸收逐渐增多。流式细胞仪结果显示结扎后第4、8、12、16周外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例为7.70%、9.12%、9.74%、10.31%,与术前比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:外周血中CD4+CD25+Treg自牙周炎发生早期逐渐升高,牙周炎发生发展规律一致,从而证实CD4+CD25+Treg细胞参与介导了牙周炎发生的免疫调控。     

FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞细胞增殖及功能的影响

目的探讨FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)比例及功能的影响。方法选择43例胃癌术后化疗患者,于化疗前1天、化疗结束后第5天采集外周血。采用流式细胞法检测外周血Treg细胞的比例;RT-PCR法检测外周血Treg细胞FoxP-3 mRNA表达水平;将分选的Treg细胞和CD4+CD25-T细胞按单纯Treg细胞组、1∶1混合细胞组,单纯CD4+CD25-T细胞组培养,3H-TdR掺入法检测Treg细胞体外抑制CD4+CD25-T细胞增殖的能力。结果 43例胃癌患者化疗前1天外周血Treg细胞占CD4+T细胞的比例为17.63%±6.31%,化疗后降至13.79%±4.82%(P<0.01);化疗后FoxP-3表达水平较化疗前显著下降(P<0.01);化疗后Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的增殖抑制率由化疗前的54.64%±5.15%下降至24.63%±2.34%(P<0.01)。结论 FOLFOX化疗方案可减少胃癌患者外周血Treg细胞数量,下调其表面标志物FoxP3基因的表达水平,减弱Treg细胞的免疫抑制功能,有利于诱生抗肿瘤免疫效应。     

CD4+CD25+Treg细胞在复发性自然流产中的作用及意义

目的 探讨复发性自然流产患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达特点及其相关临床意义。方法 选取2015年3月至2017年7月在我院妇产科就诊的复发性自然流产妇女100例作为复发性自然流产组(RSA组),另选择同期在我院妇产科就诊的正常妊娠产妇50例作为对照组(正常妊娠组)。采用流式细胞术检测两组外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,并对两组结果进行比较分析。结果 复发性自然流产组CD4+CD25+Treg细胞表达水平为(5.06±1.35)%,显著低于正常妊娠组的(10.43±2.59)%(P0.05)。结论 复发性自然流产患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平较正常孕产妇显著降低,提示CD4+CD25+Treg细胞参与了复发性自然流产的发生、发展过程。通过检测CD4+CD25+Treg细胞表达水平变化可为复发性自然流产的发病机制提供新的思路,为临床诊疗提供更多的治疗方法。     

CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在成人免疫性血小板减少症中的意义

目的 :探讨CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)在成人免疫性血小板减少症(ITP)发病及发展中的意义。方法 :采集26例成人ITP患者和20例正常对照者外周血标本,应用流式细胞术检测正常对照组及ITP患者治疗前后的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的比例,并将正常对照组与ITP组及ITP组治疗前后的Treg细胞进行比较。结果 :ITP组(治疗前)较对照组CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞下降,差异有统计学意义(P<0.05);ITP组经治疗后18例有效,8例无效,有效组治疗后CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞明显上调(P<0.05);治疗无效组治疗后Treg细胞的比值较前无明显统计学意义(P>0.05)。结论 :ITP的发病可能与CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的比例下调相关,治疗有效后Treg细胞的失调会得到改善,改善Treg细胞的功能并增加其数量可能是一个新的治疗方法。     

三氯乙烯对大鼠外周血淋巴细胞CD3＋CD4＋CD8＋的影响

目的探讨三氯乙烯（TCE）对大鼠外周血淋巴细胞CD3＋CD4＋CD8＋的影响。方法采用豚鼠最大值法（GPMT）。将大鼠随机分为3组,分别为阴性对照组、阳性对照组、TCE实验组,用皮内注射的方式分别注射橄榄油、2,4-二硝基氯苯（DNCB）、三氯乙烯（TCE）,实验结束后收集大鼠外周血液,用流式细胞仪检测淋巴细胞CD3＋CD4＋CD8＋比例。结果TCE实验组和阳性对照组大鼠外周血淋巴细胞CD3＋比例高于阴性对照组;阳性对照组CD4＋、CD4＋／CD8＋高于阴性对照组,CD8＋低于对照组,存在显著性差异（P〈0．05）;TCE实验组CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋与阴性对照组比较无统计学差异。结论三氯乙烯经皮染毒对大鼠外周血淋巴细胞亚型比例有一定影响,可能与三氯乙烯的致敏作用存在一定关系。     

中药浴治疗对特应性皮炎患儿的疗效及对外周CD4~＋ CD25~＋调节性T细胞的作用

目的探讨中药浴治疗特应性皮炎（AD）患儿的疗效及对外周血CD4＋ CD25＋调节性T（Treg）细胞的作用。方法采用症状和皮损计分系统评价中药浴的疗效,并用流式细胞术检测AD患儿（n=56）外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞的百分比。结果中药浴治疗4周后症状和皮损评分均较治疗前明显下降（P〈0.01）,取得较好的临床治愈率（80.4%）。同时外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞的百分比明显升高（P〈0.01）。结论采用中药浴治疗AD患儿取得较好的疗效,可增加患儿外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞的百分比,值得在临床上推广。     

乳腺癌患者外周血CD4~+CD25~+与CD8~+CD122~+调节性T细胞水平变化及临床意义

目的 探讨乳腺癌患者外周血中CD4+ CD25+ 与CD8+ CD122+ 调节性T细胞(Tregs)的分布情况及临床意义.方法 采用流式细胞仪测定65例乳腺癌患者外周血中的CD4+ CD25+ 与CD8+ CD122+ 调节性T细胞水平,结果与18例正常健康人(正常对照组)对比.结果 乳腺癌患者外周血中的CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞均显著高于对照组(P<0.01);且与乳腺癌的分期呈正相关.结论 乳腺癌患者外周血中具有免疫负调控功能的CD4+ CD25+ 与CD8+ CD122+ 调节性T细胞水平较高,可能与乳腺癌的病情及预后相关.     

脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能特征的比较

目的分离成人外周血、脐血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,并检测其功能,以了解脐血CD4^＋CD25^＋T细胞的特性。方法应用免疫磁珠分选法从健康成人外周血、脐血淋巴细胞中分离纯化CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞。应用流式细胞术检测分离纯度,胎盘蓝染色检测细胞存活率;RT-PCR技术检测CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞中Foxp3的mRNA的表达;体外增殖实验检测其对CD4＋CD25-T细胞的免疫抑制作用。结果 MACS分离的CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4＋CD25-T细胞纯度达（92.7±1.6）%、（90.3±1.2）%,细胞存活率达（95.3±2.1）%;体外经抗CD3、CD28单克隆抗体刺激培养的脐血及成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞同时得到扩增,而且高表达Foxp3;CD4^＋CD25^＋T细胞能有效的抑制效应T细胞的增殖,当效靶比为1︰1时,其抑制效应T细胞的作用最强,成人外周血抑制率为（81.36±1.61）%、脐血抑制率为（90.74±2.43）%。结论脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,与成人外周血相比,培养后的脐血CD4^＋CD25^＋T细胞比成人外周血有更强的免疫抑制功能。     

CD4+CD25+CD127low 调节T细胞在非霍奇金淋巴瘤中的表达

目的 研究CD4+CD25+CDl27low调节T细胞(Tregs)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)外周血中的表达,初步探讨Tregs的表达与NHL常用预后相关因素的关系. 方法 选择58例NHL患者,流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+CDl27lowTregs百分比,分析NHL组与健康对照组,初发组与化疗后组Tregs比例有无差异,并将Tregs比例与年龄、性别、临床分期、病理类型、LDH、IPI和β2-微球蛋白等常规预后指标进行相关性分析. 结果 ①B细胞NHL(B-NHL)组CD4+CD25+CD127low.Tregs的百分比为(3.89 ±2.49)%,明显高于健康对照组(P=0.003);②B-NHL组中,侵袭性淋巴瘤(DLBCL,MCL)组与非侵袭性淋巴瘤组(FL和边缘区淋巴瘤等)Tregs表达差异具有统计学意义(P=0.002);T细胞NHL(T-NHL)组中,高度侵袭性淋巴瘤组(T-LBL和NK/TCL组)与侵袭性淋巴瘤组(ALCL和PTLL组)Tregs表达差异具有统计学意义(P=0.006);③B-NHL中,初发组Tregs的百分比为(5.73 ±2.77)%,明显高于健康对照组(P=0.004)和化疗后组[(2.63±1.33)%,P=0.034],化疗后组与健康对照组相比无统计学意义;④B-NHL初发组患者Tregs比例与患者国际预后指数、β2-微球蛋白和乳酸脱氢酶之间具有相关性(P值分别为0.003,0.003和0.038),但与年龄、性别、PS状态、临床分期、病理类型之间相关性不具有统计学意义. 结论 B-NHL患者尤其初发组患者外周血Tregs比例明显升高,检测其水平对于判断NHL的预后可能有一定的临床价值.     

恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8~＋CD28~＋、CD8~＋CD28~-及CD4~＋CD25~＋的表达及意义

目的探讨恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋的表达及意义。方法 60例恶性肿瘤患者均经手术、内窥镜、骨髓穿刺等病理学及细胞形态学检查证实,其中Ⅰ～Ⅱ期20例,Ⅲ～Ⅳ期40例。所有患者经放化疗、免疫治疗或最佳支持治疗等,其中有效组（完全缓解＋部分缓解＋疾病稳定）40例,无效组（疾病进展）20例。另收集同期体检健康者20例作对照组。采用流式细胞术检测对60例患者分别在治疗前、后以及对照组监外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋。结果治疗前Ⅰ～Ⅱ期恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋水平与Ⅲ～Ⅳ期差异均有统计学意义（〈0.05）,但与对照组差异无统计学意义（〉0.05）;经过治疗后,有效组外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋趋于正常,与对照组差异无统计学意义（〉0.05）,无效组仍与对照组差异有统计学意义（〈0.05）。结论恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋不同临床分期及不同治疗效果表达不同,恶性肿瘤患者尤其晚期患者有免疫功能异常,治疗有效后免疫功能恢复正常。     

梅毒患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的检测

目的探讨梅毒患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞的比例及其临床意义。方法应用流式细胞分析仪检测42例梅毒患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例,并与30名正常人群的检测结果相对照。结果梅毒患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞比例[（8.94±6.72）%]较正常人对照组[（5.36±4.51）%]显著增高,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）,但其与快速血浆反应素试验（RPR）滴度无相关性（P﹥0.05）。结论梅毒患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例较高,它们对梅毒患者具有免疫抑制功能。     

原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析

目的研究原发性肝癌(HCC)病人外周血CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子的表达.方法用流式细胞仪对20例原发性肝癌病人的CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子(即CD8+CD28+和CD8+CD28)的表达进行检测.结果HCC病人CD8+细胞百分率升高,CD8+CD28+细胞百分率降低,CD8+CD28细胞百分率升高,与对照组相比具有显著性差异.CD8+CD28+、CD8+CD28-细胞百分率与CD8+T细胞百分率的相关性研究表明,CD8+CD28-细胞数与CD8+T细胞数之间呈正相关.结论HCC病人CD8+细胞升高,CD8+细胞上CD28分子的表达是异常的,即CD8+CD28-细胞数升高,CD8+CD28+细胞数降低;CD8+T细胞的升高是CD8+CD28-细胞亚群升高的结果.     

自身免疫性溶血性贫血患者CD4~+CD25~+调节性T细胞的研究

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞与自身免疫性溶血性贫血发病的关系。方法应用流式细胞术检测自身免疫性溶血性贫血初发病患者及正常对照者的外周血CD4+CD25+调节性T细胞。结果自身免疫性溶血性贫血初发病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例及CD4+CD25+调节性T细胞在总CD4+T细胞中所占比例均明显低于正常对照组。结论自身免疫性溶血性贫血患者CD4+CD25+调节性T细胞的降低致细胞免疫功能受损,可能是自身免疫性溶血性贫血发病的一个重要因素。     

HCV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的研究HCV感染者在病程各阶段外周血T淋巴细胞亚群的变化。方法流式细胞仪检测丙型肝炎患者CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞,并将其分为急性期组,慢性期组检测CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD28^-T淋巴细胞。结果丙型肝炎患者CD4^＋T细胞降低,CD8^＋T细胞升高,CD4^＋／CD8^＋降低,与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。急性期组CD4^＋CD25^＋与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）,但CD4^＋／CD28^-T细胞显著高于对照组（P〈0．05）、慢性期组CD4^＋CD25^＋T细胞显著增高,而CD4^＋CD28^-T细胞显著低于对照组（P〈0．05）。结论丙型肝炎患者CD4^＋／CD8^＋明显降低,机体免疫状态紊乱,在各病程阶段CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD28^-T细胞比率明显变化,说明此淋巴细胞亚群与丙型肝炎的发病及发展有密切关系。