饮水型氟中毒大鼠模型脊髓神经细胞凋亡初步探讨

目的 研究饮水型氟中毒对脊髓神经细胞的作用机制,特别是与神经细胞凋亡的关系.方法 60只Wistar大鼠随机分为两组,实验组喂以预配的高浓度氟化钠水建立饮水型氟中毒大鼠模型,采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组化半光氨酸蛋白酶(Caspase-3)测定评价饮水型氟中毒大鼠模型脊髓神经细胞的凋亡情况.结果 TUNEL结果显示,饮水型氟中毒大鼠模型脊髓中可见明显的细胞核棕染的凋亡神经细胞,Caspase-3检测,实验组相比对照组呈现过表达.结论 饮水型氟中毒大鼠模型的脊髓神经细胞有凋亡倾向,Caspase-3的参与和过表达可能是饮水型氟中毒导致神经细胞发生凋亡而致脊髓损伤的原因之一.     

大鼠急性脊髓损伤后白细胞介素-1β表达及其与神经细胞凋亡的关系

目的探讨脊髓损伤(SCI)后白细胞介素(IL)1β表达的变化及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen’s法建立大鼠急性SCI模型,用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学染色检测SCI后IL1β表达,用原位末端标记法(TUNEL)检测SCI后神经细胞凋亡。结果对照组IL1βmRNA为4.87±0.49,SCI后早期IL1βmRNA明显升高,于伤后6h达高峰为6.95±0.95,两组间差异有统计学意义(P<0.01);免疫组织化学染色也显示伤后6hIL1β染色强度明显增加。TUNEL染色显示,对照组大鼠脊髓组织TUNEL阳性细胞极少(1.82±0.64),伤后6h有少许凋亡细胞出现,24hTUNEL阳性细胞增多最明显(32.38±4.75)。IL1β表达升高与TUNEL阳性细胞增多有明显的关系。结论SCI后IL1β表达升高,它可能参与了诱导神经细胞凋亡。     

燃煤型氟中毒大鼠诱导型一氧化氮合酶蛋白表达、血清睾酮与生精细胞凋亡的相关性研究

目的:研究燃煤型氟中毒大鼠睾丸组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达、血清睾酮(T)与生精细胞凋亡的相互关系,探索燃煤型氟中毒对睾丸生殖功能损伤的机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、低氟组、中氟组、高氟组。各染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,建立雄性大鼠燃煤型氟中毒模型。分别于染毒4和6个月后以股动脉放血法处死大鼠,各时间点每组处死大鼠5只。采用RIA法测定大鼠血清T水平;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、iNOS活性;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);免疫组织化学染色SP法观察iNOS蛋白表达的变化。结果:成功建立雄性大鼠氟中毒模型。大鼠血清T水平在4和6个月时低氟组[(28.37±0.19)nmol/L、(14.68±0.36)nmol/L]、中氟组[(25.85±0.23)nmol/L、(9.08±0.31)nmol/L]、高氟组[(23.63±0.29)nmol/L、(4.89±0.54)nmol/L]较对照组[(29.77±0.43)nmol/L、(29.97±0.36)nmol/L]均降低(P0.05或P0.01),且各染氟组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。睾丸生精细胞AI在4和6个月时低氟组(8.83±1.64、10.40±2.70)、中氟组(17.24±3.96、22.20±3.96)、高氟组(44.21±7.85、49.60±4.77)较对照组(0.46±0.11、0.54±0.11)升高(P均0.01),且各染氟组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。睾丸组织iNOS蛋白表达的OD值在4和6个月时低氟组(0.073 3±0.008 5、0.108 4±0.012 6)、中氟组(0.142 5±0.027 2、0.207 7±0.020 4)、高氟组(0.527 5±0.079 1、0.717 3±0.065 6)较对照组(0.001 3±0.000 2、0.001 6±0.000 1)增加(P0.05或0.01),且各染氟组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。iNOS蛋白表达量与生精细胞AI呈正相关(r=0.962,P0.01);血清T水平与生精细胞AI呈负相关(r=-0.744,P0.01)。结论:血清T水平改变和睾丸组织iNOS蛋白表达调控改变可能参与燃煤型氟中毒对睾丸生殖功能损害的过程。     

大鼠慢性颈髓损伤后颈髓中IL-1β的表达及其与神经细胞凋亡的关系

目的:观察白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)在慢性颈髓损伤大鼠颈脊髓中的表达及其与神经细胞凋亡的关系。方法:4月龄SD大鼠随机分为3组:A组(模型组),破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型,造模后立即腹腔注射生理盐水10μl,以后每周注射一次;B组(药物干预组),建立模型后立即腹腔注射IL-1受体阻滞剂(IL-1Ra,1mg/μl)10μl,以后每周注射一次;C组(对照组),切开颈椎后方皮肤后即缝合。分别饲养3、5个月后,腹腔麻醉取C4～C6脊髓。免疫组化法测定颈脊髓IL-1β的表达,TUNEL法测定颈脊髓神经细胞凋亡情况,Western Blot及定量RT-PCR分别测定caspase-3的蛋白表达及mRNA含量。结果:相同时间点颈脊髓IL-1β的表达A、B、C三组间均有显著性差异(P<0.05),A、B组同组间不同时间点比较也有显著性差异(P<0.05)。5个月时A、B、C三组神经细胞凋亡数分别为32.38±4.75个、16.56±3.89个、1.82±0.64个,三组间比较有统计学差异(P<0.01)。颈脊髓caspase-3的蛋白表达随着时间延长表达增强,使用IL-1Ra后,其表达明显减弱(P<0.05)。caspase-3 mRNA含量(拷贝数取对数)3个月时A组为8.46±0.32,B组为8.30±0.26,C组为7.95±0.36;5个月时A组为8.92±0.85,B组为8.50±0.78;C组为8.05±0.46,相同时间点各组间比较有统计学差异(P<0.01)。结论:IL-1β在大鼠慢性颈脊髓损伤的脊髓组织中有异常表达,其可能通过激活caspase-3基因参与诱导细胞凋亡。     

颈椎病大鼠颈脊髓神经细胞凋亡的研究

目的 研究Caspase-3在颈椎病大鼠颈脊髓的表达及神经细胞凋亡的研究.方法 将4月龄SD大鼠96只,破坏颈椎后柱稳定性后分别饲养3、5个月,用斜板试验评价运动功能;HE染色观察颈椎间盘组织的形态学变化;免疫组织化学染色及Western Blot测定颈脊髓Caspase-3的表达;TUNEL法检测颈脊髓神经细胞凋亡情况,与对照组比较,并作经统计学处理.结果 斜板试验评价运动功能,3月对照组与模型组斜板角度为75.4±3.8及46.4±6.5,5月对照组与模型组斜板角度为74.9±4.0及45.1±7.2;颈椎间盘C4-5、C5-6退变程度Miyanmoto分级评分结果,3月对照组与模型组分别为1.32±0.39及2.10±0.58,5月对照组与模型组分别为1.39±0.69及3.98±0.84.经斜板试验及组织学观察,模型组与对照组间均有统计学意义,P＜0.01.颈椎病大鼠颈脊髓Caspase-3的阳性细胞数3月对照组与模型组分别为2.01±1.36及13.23±3.21,5月对照组与模型组分别为3.26±3.02及26.32±4.01;Western Blot法测定颈脊髓不同组间Caspase-3的蛋白表达,用图象处理系统ECL对条带进行扫描,测定其区带的感光密度,并进行处理.3、5月模型组间有统计学意义,P＜0.05.3月对照、3月模型、5月对照、5月模型的凋亡指数分别为:4.20±1.56;16.53±2.01;6.32±2.32;29.56±4.25.对照组间无统计学差异(P＞0.05),模型组间及模型组与对照组间均有统计学意义(P＜0.05).结论 破坏大鼠颈椎后柱稳定可成功建立颈椎病模型.Caspase-3被认为是细胞凋亡过程中的关键酶之一,Caspase-3介导了慢性脊髓损伤后的细胞凋亡,并随颈椎退变程度增强而表达增强.     

Idiopathic chronic hypertrophic pachymeningitis causing thoracic cord compression

Chronic idiopathic pachymeningitis is a rare cause of compressive myelopathy, especially of the thoracic spinal cord. The hypertrophic dura causes symptoms either by pressure on the spinal cord or by vascular compromise. The authors report the diagnostic dilemmas in a 48-year-old lady who presented with progressive spastic paraparesis of 4 months duration. MRI showed an extradural hypointense band, surrounding and flattening the thoracic cord in the anteroposterior direction, extending from C7 to T11. Neither the CT scan nor the myelogram provided any clue to the diagnosis. A T1-T10 laminectomy was performed. The dura was hypertrophied and found compressing the cord. The posterior dura was excised and the spinal cord was decompressed. The histopathology showed hypertrophic pachymeningitis. The patient improved neurologically. She was started empirically on anti-tubercular chemotherapy, though she was serologically negative for all known causes of pachymeningitis.     

胸段硬膜外阻滞对冠状动脉结扎大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 观察罗哌卡因胸段硬膜外阻滞对冠状动脉结扎大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,随机均分为生理盐水胸段硬膜外注射+结扎冠状动脉(A)组,罗哌卡因胸段硬膜外注射+结扎冠状动脉(B)组、假手术(C)组,分别在结扎操作后3、6 h检测心肌细胞凋亡指数(AI)和Caspase-3活性.结果 A、R组结扎冠状动脉后3、6 h AI、Caspase-3活性较C组明显升高(P<0.01),且A组高于R组(P<0.05).结论 罗哌卡因胸段硬膜外阻滞可减轻急性缺血诱发的大鼠心肌细胞凋亡.     

Compensatory locomotor adjustments of rats with cervical or thoracic spinal cord hemisections

The accurate measurement of behavioral compensation after CNS trauma, such as spinal cord injury, is important when assessing the functional effects of injury and treatment in animal models. We investigated the locomotor abilities of rats with unilateral thoracic or cervical spinal cord injuries using a locomotor rating (BBB) scale, reflex tests, and quantitative kinetic measurements. The BBB rating scale indicated that thoracic spinal hemisected (TH) rats had more severely affected hindlimbs compared to cervical spinal hemisected (CH) and sham-operated animals. Kinetic measurements revealed that CH and TH animals moved with different ground reaction force patterns, which nevertheless shared some similarities with each other and with the gait patterns of rats with different unilateral CNS lesions. Uninjured rats typically had an equal distribution of their body weight over the forelimbs and hind limbs, and used their forelimbs predominantly for braking while using their hind limbs mostly for propulsion. CH rats bore more weight on their hind limbs than their forelimbs, while TH animals bore more weight on their forelimbs than their hind limbs. Neither CH nor TH rats used the forelimb ipsilateral to the spinal hemisection for net braking or propulsion. The hindlimb contralateral to the hemisection was placed on the ground prematurely during the stride cycle for both CH and TH animals. The altered kinetics of the locomotor pattern in hemisected animals resulted in changes in the oscillations of total body potential and kinetic energies. These two forms of energy oscillate synchronously in intact locomoting rats, but were asynchronous during parts of the stride cycle in spinal hemisected animals. We conclude that rats develop a general compensatory response for unilateral CNS lesions, which may help stabilize the animal during locomotion.     

体外冲击波对大鼠胸段脊髓影响的初步研究

目的:初步探讨体外冲击波(ESW)对大鼠胸段脊髓的影响.方法:雄性SD大鼠126只,随机分为4组,直接冲击组(A组,48只),不做椎板切除手术,直接进行冲击波冲击,冲击参数:发射电压10kV,冲击能量0.250mJ/mm2冲击频率60次/min,冲击次数1000次;手术后冲击组(B组,48只),切除T7～T10椎板,皮肤愈合后行冲击波处理,参数同A组;手术后不冲击组(C组,24只),切除T7～T10椎板,不行冲击波处理;正常对照组(D组,6只),不进行任何处理.A、B、C组义分为处理后4h、8h、24h、72h共4个时间点,D组不分时间点.A、B、C组处理前、后及D组行BBB评分,并经灌注后取T7～T10脊髓标本,切片行HE染色观察脊髓损伤情况,用免疫组化方法观察脊髓C-fos蛋白的表达.结果:A组和B组大鼠处理后8h、24h、72h时BBB评分均有下降,以8h最低,分别为16.8±0.8分和14.5±1.0分,处理后各时间点两组间均有显著性差异(P<0.01),A组和B组8h、24h、72h时BBB评分均明显低于C组和D组(P<0.01),但C组和D组之间无显著性差异(P0.05).A组和B组HE染色均可见脊髓出血、水肿,神经元变性坏死,且B组较A组损伤程度重;组及D组未见明显脊髓损伤表现.B组脊髓中C-fos蛋白表达最强,其次为A组,均以24h表达最强,平均光密度值分别为0.396±0.008和0.293±0.013,两组比较有显著性差异(P<0.01);组及D组表达均不明显,与A组和B组比较有显著性差异(P<0.01),C组和D组之间无显著性差异(P0.05).结论:发射电压10kV、冲击能量0.250mJ/mm2的ESW可造成大鼠胸段脊髓一定程度的损伤,冲击时椎板可起到一定保护脊髓的作用.     

电针对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及相关功能的影响

目的:探讨电针对大鼠急性脊髓损伤后膀胱功能改善的影响及作用机制。方法:取健康成年雄性SPF级SD大鼠60只,体重220～250 g,适应性饲养1周后,将大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组、模型组、电针组和电针对照组,各15只。假手术组不予任何刺激,模型组、电针组和电针对照组大鼠采用改良Allens法制作脊髓损伤中度损伤SD大鼠模型,模型组不予治疗,电针组给予秩边与水道穴电针治疗,电针对照组给予秩边与水道穴旁开0.5寸电针治疗,频率 2/100 Hz,电流 1 mA,刺激15 min,电针左右隔次交替,每日1次,共7次;分别于术后1、7 d观察大鼠残余尿量、排尿量的变化;术后7 d处死大鼠取伤段脊髓观察各组大鼠凋亡情况,检测Bcl-2、Bax、Bad含量的变化。结果:造模后3组大鼠均出现不同程度的膀胱功能障碍。术后7 d,电针组、电针对照组残余尿量较术后1 d明显降低(P <0.001),且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.01);电针组、电针对照组较模型组在术后7 d排尿量增加,且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.001); TUNEL发现电针可以抑制脊髓神经细胞的凋亡,电针组、电针对照组与模型组相比在术后7 d脊髓神经细胞凋亡率显着增加(P <0.01,P <0.05),且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.05);与模型组相比,电针组、电针对照组Bax、Bad的阳性表达率降低(P <0.01,P <0.05),而Bcl-2的阳性表达率升高(P <0.01);且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.05).结论:电针能明显促进急性脊髓损伤的修复,其机制可能为通过增加Bcl-2、抑制Bax、Bad的表达,从而抑制脊髓神经元细胞的凋亡发生作用的。