昆明山海棠提取物预防急性移植物抗宿主病的实验研究

目的观察昆明山海棠（THH）提取物在急性移植物抗宿主病（aGVHD）中的作用及其可能的作用机制。方法建立aGVHD模型,BALB/c受鼠清髓性预处理后分别用生理盐水、环孢素A（CsA）、THH及CsA＋THH混合物灌胃。观察移植后受鼠aGVHD、生存时间、CD4^＋/CD8^＋比率、CD4^＋CD25^＋T细胞比率及脾细胞Foxp3 mRNA水平。结果生理盐水组出现典型aGVHD,20天内全部死亡。其余3组aGVHD临床、病理表现及生存时间均改善,组间无差异;CD4^＋/CD8^＋比率、受鼠CD4^＋CD25^＋T细胞比率及脾Foxp3 mRNA表达较生理盐水组升高,以联用组明显。结论THH可减轻小鼠aGVHD,延长其生存时间。机制可能与增加CD4^＋CD25^＋T细胞比率,上调Foxp3 mRNA表达,调节CD4^＋/CD8^＋比率有关。THH和小剂量CsA联合有协同作用。     

树突状细胞亚群比例对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的 探讨树突状细胞(Dendridc cell，DC)亚群比例对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响。方法用主要组织相容性抗原(MHc)完全不合的近交系小鼠建立小鼠allo-BMT的模型，随机分为三组，分别在移植前、后和不对供鼠使用重组小鼠粒系集落刺激因子rmG-CSF，移植后均采用环孢素A(CsA) 甲氨蝶呤(MTX)方案预防aGVHD，观察三组小鼠移植前后外周血中DC亚群的比例及变化以及aGVHD的情况。结果 移植前后使用rhG-CSF均可以使DC亚群发生改变。使DC2的比例增加，移植前使用更明显；处理组移植小鼠aGVHD严重程度明显比不使用rmG-CSF组弱。移植前使用aGVHD表现最轻。结论 移植前后使用rmG-CSF可以使小鼠DC亚群比例发生改变，使DC2比例增高，并可使减轻移植小鼠aGVHD的症状。     

移植物与受体T细胞的平衡对移植物抗宿主病影响的实验研究

目的　建立大鼠异基因骨髓移植模型,受体大鼠按不同的移植物与受体T细胞比例回输供体大鼠骨髓细胞。研究该比例对移植物抗宿主病(GVHD) 的发生及其程度的影响。方法　Wistar大鼠为供鼠,SD大鼠为受鼠,受鼠经全身照射(TBI)+环磷酰胺(CTX)预处理后,分别按不同的移植物与受体T细胞比例(1∶1、2∶1、4∶1)回输供体大鼠骨髓细胞。观察移植后各组受体大鼠生存期及GVHD反应。结果　受体大鼠按4∶1的移植物与受体T细胞比例回输供体大鼠骨髓细胞时,GVHD较严重,而当该比例控制在1∶1 和2∶1时,GVHD程度明显减轻(P<0.05)。结论　移植时将移植物与受体T细胞比例控制在一定范围内,使移植物与受体T细胞保持平衡,既有利于移植物的植入,又可减轻GVHD及其他移植相关并发症的发生。     

昆明山海棠对小鼠免疫功能的影响

选用昆明山海棠乙醇提取物ＴＨ５ ９０和ＴＨ５ ９５对小鼠灌胃，以观察ＴＨ５ ９０和ＴＨ５ ９５对小鼠免疫功能的影响，通过碳粒廓清试验，血清溶血素测定及迟发超敏反应提示，上述两种昆明山海棠提取物对小鼠非特异性免疫、特异性体液免疫和细胞免疫功能均无明显抑制。     

小鼠慢性移植物抗宿主病荷瘤模型的建立

目的 通过供鼠淋巴细胞输注诱导小鼠慢性GVHD,并在此基础上荷瘤建立慢性GVHD的GVL模型,为研究慢性GVHD和GVL作用奠定基础.方法 以雄性BALB/c(H-2d)为供鼠,雌性CB6F1(BALB/c×C57BL/6 F1,H-2d/b)为受鼠,通过尾静脉输注8×107/个脾细胞诱导小鼠慢性移植物抗宿主病,在输注25天后,受鼠随机分组,通过尾静脉或腹腔或皮下方式接种P815肿瘤细胞,构建慢性GVHD荷瘤模型,用于研究慢性GVHD的同时研究GVT作用.结果 3种荷瘤方式均可形成荷瘤.尾静脉方式可形成小鼠白血病模型,符合人类疾病特点,成功构建慢性GVDH荷瘤的GVL模型.结论 成功建立小鼠慢性移植物抗宿主病荷瘤模型.     

单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病模型的建立及移植物抗宿主病靶器官T细胞受体克隆检测

目的:建立单倍型骨髓移植小鼠模型,观察单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病(GVHD)靶器官的组织病理表现及器官特异性T细胞受体克隆表达.方法:建立单倍型异基因移植小鼠GVHD模型,进行移植前后GVHD靶器官的病理分析,同时应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、结肠、肾脏等组织移植前、后T细胞受体β链可变区(TCRBV)20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达和CDR3克隆的性质.结果:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14 d临床开始出现典型的GVHD表现.移植后24 d受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞,而肾脏等非GVHD靶器官中浸润的淋巴细胞为多克隆的T细胞增生.结论:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14 d出现典型的GVHD表现,GVHD靶器官出现的T细胞单克隆及寡克隆增生可能与GVHD的发生相关.     

移植物抗宿主病的细胞治疗

异基因造血干细胞移植是目前治疗血液系统恶性疾病的有效方法.以前认为其成功机制在于移植前后的化疗或放疗对肿瘤细胞的杀伤作用.目前一致认为,供体T细胞可以诱导杀死恶性细胞,即移植物抗白血病反应(GVL),是异基因造血干细胞移植成功治疗血液系统恶性疾病的关键所在.但是,供体淋巴细胞在杀死受体恶性细胞的同时,可以识别受体细胞表面的主要组织相容性抗原和次要组织相容性抗原,损害受体正常组织,即移植物抗宿主病(GVHD).GVHD是导致异基因造血干细胞移植患者发病和病死的主要原因,成为阻碍移植成功的关键因素.     

昆明山海棠对实验性肾炎的干预作用及机制

目的探讨昆明山海棠治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型的有效性及作用机制。方法应用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清（ATS）复制大鼠M5PGN模型，将实验大鼠分为对照组（A组）、模型组（B组）、昆明山海棠治疗组（C组）、泼尼松治疗组（D组）、昆明山海棠与泼尼松联合治疗组（E组），分别于第1、2及4周测定肝肾功能，并采用免疫组织化学、RT—PCR技术及计算机图像分析系统，观察各组肝肾功能变化、系膜区TGF—β1蛋白及肾皮质mRNA表达以及Smad3 mRNA表达的变化。结果各组在观察期间均无明显肝肾功能不良。模型组系膜区TGF—β1 蛋白表达及肾皮质TGF-β1，Smad3 mRNA表达增高，3个治疗组TGF—β1 蛋白表达及肾皮质TGF—β1和Smad3 mRNA表达均较模型组显著降低（均P〈O．01），以联合治疗组降低最明显。结论昆明山海棠可能是通过抑制TGF—B。的表达，改善肾小球系膜的增殖，达到减少蛋白尿，延缓肾功能的进展。其作用机制可能通过TGF—β1／Smads通路。昆明山海棠与泼尼松有协同作用，两种药物合用治疗效果更明显，且不增加肝肾损害的发生。     

HPLC法测定昆明山海棠中雷公藤酯甲含量

目的建立高效液相色谱法测定昆明山海棠药材中雷公藤酯甲含量的方法.方法采用反相C18柱,以乙腈-水（80：20）为流动相,205nm为检测波长,测定雷公藤酯甲的含量.结果雷公藤酯甲在0.42～10.5μg/mL范围内线性良好,r=0.9995,平均回收率94.3%,RSD为2.87%.结论本方法灵敏、准确、重现性好.     

昆明山海棠总生物碱诱发HL-60细胞凋亡的观察

目的 观察昆明山海棠（TH）总生物碱诱导白血病细胞凋亡的发生情况。方法 应用台盼蓝染色法,荧光双重染色法,DNA电泳结合流式细胞仪对HL-6O细胞的凋亡进行观测。结果 HL-60细胞在TH总生物碱作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变、DNA梯状带及亚G1峰,且动态变化过程较为一致。结论 TH总生物碱具有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,总生物碱是TH诱导凋亡的有效成份之一。     

昆明山海棠根与茎抗炎镇痛作用的比较研究

目的 比较昆明山海棠(THH)根与茎的抗炎、镇痛作用.方法 采用大鼠佐剂性关节炎模型、小鼠乙酸扭体法、小鼠热板法比较昆明山海棠根、茎提取液的抗炎、镇痛作用.结果 昆明山海棠根、茎均能显著降低大鼠佐剂性关节炎模型的足趾肿胀度;能显著减少乙酸所致的小鼠扭体次数,其镇痛百分率与给药剂量呈量效关系;能显著提高热板法小鼠的痛阈值/痛阈值提高率.结论 昆明山海棠根、茎均具有抗炎、镇痛作用,两者的药效没有显著差别.     

计算机辅助分析昆明山海棠对大鼠精子的影响

【目的】应用计算机辅助精子分析（CASA）系统观察昆明山海棠对大鼠精子的毒性作用。【方法】选用18只成熟雄性sD大鼠随机分为2组,每组9只：正常对照组喂服生理盐水10mL&#183;kg^-1&#183;d^-1,中药组喂服昆明山海棠水煎液7．5g&#183;kg^-1&#183;d^-1。连续喂服60d后,采用Klinefelter扩散法收集大鼠附睾尾精子,采用CASA系统观察精子计数、密度、形态、活动力。【结果】与正常对照组比较,中药组大鼠附睾的精子计数和密度显著下降（P〈0．01）,检测视频下可见大量畸形精子,精子活动力下降为零。【结论】昆明山海棠水煎液对大鼠精子具有一定的直接毒性效应。     

昆明山海棠碱通过Fas受体介导途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株凋亡

目的 探讨Fas、caspase-8在昆明山海棠碱(THH碱)对Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡诱导中的变化，以进一步研究THH碱诱导凋亡的分子机制。方法 采用Annexin—Ⅴ标记和流式细胞术检测细胞的凋亡发生率，采用western blotting分析FasL、caspase-7、caspase-8、Bid等蛋白表达的变化。结果 THH碱能有效诱导Jurkat细胞凋亡；在其凋亡过程中，FasL逐渐表达增强、caspase-7、caspase-8、Bid剪切激活，并呈时间依赖性。结论 THH碱通过Fas受体—配体介导激活caspase-8，caspase-8再激活caspase-7和Bid等网络途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

分光光度法测定黑曼和昆明山海棠碱A片中生物碱的含量

本文报道黑曼和昆明山海棠碱A片中生物碱的分光光度法测定。当黑曼的部位相同时,秋季采集的样品中生物碱含量较春季采的高;当采集季节相同时,黑曼根较茎中的生物碱含量为高。对昆明山海棠碱A片中雷公滕次碱的质量和百分含量均进行了测定。标准曲线的相关系数接近于1。测定的变异系数为0.55％。本法较灵敏而且方便。     

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究昆明山海棠总生物碱(total alkaloids of tripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测THHta对HCT116细胞增殖的抑制作用;用倒置及荧光显微镜观察THHta作用后HCT116细胞形态的变化;流式细胞术检测THHta对HCT116细胞周期及凋亡的影响,Western bolt检测凋亡相关caspase-3及PARP蛋白表达.结果 THHLa能显著抑制HCT116细胞增殖,抑制率与剂量和时间呈依赖关系.THHta作用HCT116细胞48、72 h的IC_(50)值小于20 μg/ml.THHta(10μg/ml)能诱导HCT116细胞G_0/G_1期比例增加及细胞凋亡,caspase-3活化及PARP蛋白剪切显著增强.结论 THHta能显著抑制HCT116细胞增殖,并可诱导HCT116细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡.     

紫外分光光度法和荧光法测定昆明山海藤碱A片中雷公藤次碱的含量

本文报道用紫外分光光度法和荧光法定量测定昆明山海棠碱A片中雷公藤次碱的方法,分析了片剂中碱的含量。雷公藤次碱的每一条标准曲线的相关系数均极接近于1。在270nm处紫外分光光度法的最低检测浓度为18.0μg/ml;荧光法为0.60μg/ml。此二法均极方便、灵敏并适于快速分析。