孕妇血浆中胎儿DNA检测在产前诊断中的应用

目的 探讨孕妇血浆中提取胎儿游离DNA,鉴别胎儿性别以诊断胎儿遗传性疾病的方法。方法 选择妊娠7-38周,B超确诊为单胎,经绒毛和羊水细胞染色体检测,确诊为妊娠男性胎儿的正常孕妇16例,妊娠女性胎儿的正常孕妇8例;X性连锁遗传病（假性肥大性肌营养不良,血友病,色盲,无汗性外胚层发育不良症）家族史行产前诊断者4例,用酚提取法,纯化孕妇血浆中胎儿DNA,然后用巢式聚合酶链反应（PCR）技术测定男性胎儿睾丸决定因子（SRY）。结果 16例妊娠男性胎儿孕妇血浆中,胎儿游离DNA第1次巢式PCR测定,检出SRY基因扩增片段10例,第1次检出率为62.5%;经第2次巢式PCR测定。另6例全部检出SRY基因扩增片段,累计检出率为100%,妊娠女性胎儿的8例孕妇血浆中,均未检出SRY基因扩增片段,4例X性连锁遗传病家族史者均检出SRY基因扩增片段。结论 从孕妇血浆中提取胎儿游离DNA行胎儿性别诊断是一种快速,简便,准确的产前诊断方法。     

孕妇血浆中胎儿游离DNA检测在唐氏综合征产前诊断中的应用

唐氏综合征又称先天愚型或21三体综合征,是新生儿最常见的先天性染色体病,其发病率约为1/600～1/800,高龄产妇多发.新生儿出生后多智力低下,给社会和家庭带来了极大的负担,本研究采用实时定量PCR技术,测定正常孕妇及妊娠唐氏综合征患儿的孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的变化,旨在寻找一种非创伤性、快捷、经济的产前筛查唐氏综合征的新指标.     

孕妇血浆和血清中胎儿DNA在产前诊断中的应用

长久以来许多学者致力于研究利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行非创伤性产前诊断 ,虽然取得了一些重要进展 ,但母血中的胎儿细胞数量稀少 ,富集效率不高且价格昂贵 ,成为常规应用的主要障碍。母体血浆中存在较高浓度胎儿DNA的发现 ,为非创伤性产前诊断开辟了一个新途径。一、孕妇血浆和血清中的胎儿DNA肿瘤患者的血浆和血清中癌源性DNA的发现[1 ,2 ] ,激发了研究人员将血浆用于分子分析的兴趣。由于胎盘的滋养层和恶性肿瘤细胞的生物学行为类似 ,均有侵入性和致癌基因表达 ,故一些研究人员把胎盘喻为“假恶性物”[3] 。这就提示 :癌症患者…     

孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及应用研究

从1997年首次在孕妇外周血中发现胎儿DNA以来,众多学者致力于将其应用于无创性的产前诊断。荧光定量PCR实现了胎儿游离DNA浓度的检测,目前研究发现,正常孕妇血浆胎儿DNA浓度稳定于某一水平,有望成为产前诊断和孕期检测的一项新指标。有学者认为,子痫前期母循环中胎儿DNA可有异常增高,而且子痫前期的孕妇在有临床症状前,孕妇血浆胎儿DNA水平异常增高,这与较多胎儿DNA释放到母血中,和肝肾功能异常导致胎儿DNA在母血中清除紊乱有关。此外许多妊娠合并症和并发症都伴有母外周血DNA水平的异常增高,例如:性连锁疾病、Rh血型不合、父系遗传性疾病、染色体非整倍体胎儿、早产等。现就孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及临床应用作一综述。     

利用孕妇血浆游离胎儿DNA产前诊断胎儿RhD血型的研究

目的探讨无损伤性产前诊断胎儿RhD血型的方法。方法西安交通大学第二医院1999年2月至2001年12月，以妊娠14～40周的单胎孕妇为对象，其中RhD阴性孕妇8例，RhD阳性孕妇12例，利用PCR技术对孕妇血浆中游离胎儿DNA进行RhD基因第10外显子的特异性扩增，扩增片段长度为186bp，另外以等位基因RhCE基因为内对照，扩增片段长度为136bp，结果能同时扩增出186bp和136bp两条带，判断所妊娠胎儿血型为RhD阳性；扩增出136bp一条带，判断所妊娠胎儿血型为RhD阴性。8例RhD阴性孕妇中，5例扩增出136bp一条特异性片段，3例同时扩增出136bp和186bp两爷特异性片段；12例RhD阳性孕妇血浆标本，均同时扩增出136bp和186bp两条特异性片段，所有RhD-PCR扩增结果均得到脐血血清学检测结果的证实。结论利用孕妇血浆中游离胎儿DNA对胎儿RhD血型进行诊断，是一种简便、快速、特异性较高的产前诊断方法，值得临床推广应用、     

孕妇外周血中胎儿细胞的分选富集及其在无创伤性产前诊断中的应用

20世纪90年代以来，随着单克隆抗体技术、流式细胞计数技术以及聚合酶链反应(polymerase chain reaction，WR)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术的发展，已使从孕妇外周血中分离、纯化胎儿细胞，并进行无创伤性产前诊断成为可能，但目前对这一问题还存在不少争论。我们复习了国内外有关文献，对这方面的进展综述如下。     

母血清及血浆中胎儿游离DNA的研究进展

发现母血浆及血清中胎儿游离DNA，为无创性产前诊断技术开辟新途径。利用母血中有男胎睾丸确定基因(SRY)特异性序列确定胎儿DNA存在。用PCR技术扩增SRY的单拷贝序列(DYSl4)，确定性别敏感性60％～100％。利用实时定量PCR技术测定母血清和血浆中胎儿DNA浓度，妊娠7周母血清中可确定胎儿DNA，随妊娠周增加胎儿DNA量也增高。另证明非整倍体核型胎儿在母血浆中的DNA浓度高于正常核型胎儿，母血浆中定量测定胎儿游离DNA技术可能成为筛查染色体非整倍体核型胎儿的一种手段。     

孕妇外周血富集分离胎儿细胞进行产前诊断

１９６９年,Ｗａｌｋｎｏｗｓｋａ首次报道在母血循环中可能存在胎儿细胞,随后一些学者相继证实了这一发现,但由于其含量极其稀少故很难用于产前诊断。到了１９９０年,随着分子生物学和细胞生物学等技术的完善,使得从母血循环中检测、分离胎儿细胞并用于产前遗传学诊...     

孕妇外周血胎儿有核红细胞在产前诊断中的作用

目前对遗传性疾病的产前诊断有数种方法。根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等，虽然诊断精确度较高，但可导致流产等并发症，只能在高危孕妇中实施；后者的优点是既能行产前诊断又无危险性，适用于低风险的孕妇大群体筛选，尽早发现和杜绝异常胎儿，达到优生目的。许多学者致力于利用胎儿细胞进行产前诊断。利用孕妇外周血的胎儿细胞进行产前基因诊断三个关键性技术为：(1)证实母血中存在胎儿细胞和DNA。(2)建立可靠稳定的方法分离胎儿细胞和DNA。(3)应用灵敏性、特异性强的技术以微量胎儿细胞和DNA为模板诊断遗传性疾病。这是最具潜力的非侵入性产前诊断方法之一。     

孕妇外周血中胎儿细胞分选法在产前诊断中应用的研究进展

在母体外周血循环中，胎儿有核红细胞是最理想的研究指标，其相应的单克隆抗体中，以血型糖蛋白Ａ（ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎＡ，ＧＰＡ）特异性最强。目前常用的分选胎儿细胞方法有流式细胞技术、磁性分离法、抗体结合柱法、显微操作分离法、细胞培养等，前两者已广泛使用。通过多聚酶链反应，荧光原位杂交技术可将所得胎儿细胞进行性别预测及染色体异常的产前诊断     

运用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型

目的:探讨利用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型的可行性。方法:用酚/氯仿法从39例O型血孕妇(孕36~40+3周)且孕男性胎儿的血浆中提取胎儿DNA,巢式PCR扩增血浆中的SRY基因证实胎儿DNA存在,再用特异性序列-聚合酶链反应(SSP-PCR)检测胎儿ABO血型。用常规血清学方法测母体及新生儿血型。结果:10例孕A型血胎儿的孕妇血浆中扩增出A基因8例,6例孕B型血胎儿的孕妇血浆中扩增出B基因6例,23例孕O型血胎儿扩增出O基因而无A或B基因21例,准确性和敏感性分别为89.7%(35/39)和87.5%(14/16)。结论:利用孕妇外周血中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型可行,对诊断和预防新生儿ABO血型不合性溶血病的发生具有积极意义。     

胎儿游离RNA在产前诊断中的研究进展

传统产前诊断依靠有创性操作,具有潜在风险。目前无创性产前诊断方法集中于从母体血液中分离胎儿细胞或从血清或血浆中提取胎儿游离DNA,二者在临床的应用尚存不足。近年,妊娠妇女血循环中游离胎儿RNA的发现和应用,是无创性产前诊断领域的突破。已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,在母体血循环中比较稳定,易于检测。同时,由于其无需依赖于胎儿性别或是父源性多态性位点,临床应用领域优于胎儿游离DNA;结合对分子标记物的定量检测方法更适用于产前诊断领域,并已取得初步成果。预测其具有很好的应用前景。     

子痫前期孕妇外周血中游离胎儿DNA含量变化

目的探讨正常妊娠不同孕周及子痫前期孕妇外周血中游离胎儿DNA含量的变化。方法对2009年8月至2010年9月西安交通大学第二附属医院外周血样本90例(包括健康未孕10例,正常妊娠40例,子痫前期40例),应用甲基特异性PCR的原理及荧光定量PCR的方法,相对定量法检测u-maspin基因的含量。结果 (1)10例健康未孕样本未检出u-maspin基因;(2)40例正常妊娠样本有34例检出u-maspin基因,各孕期u-maspin基因检出量差异具有统计学意义(P<0.05),u-maspin基因的含量中孕是早孕的4.43倍,晚孕是早孕的5.13倍;(3)40例子痫前期样本均检出u-maspin基因,u-maspin基因的含量子痫前期轻度是正常晚孕的2.39倍,子痫前期重度是正常晚孕的5.78倍。结论孕妇外周血中游离胎儿DNA的含量随着妊娠进展而增加,能够反映子痫前期患病的严重程度。     

胎儿游离RNA在产前诊断中的研究进展

传统产前诊断依靠有创性操作,具有潜在风险。目前无创性产前诊断方法集中于从母体血液中分离胎儿细胞或从血清或血浆中提取胎儿游离DNA,二者在临床的应用尚存不足。近年,妊娠妇女血循环中游离胎儿RNA的发现和应用,是无创性产前诊断领域的突破。已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,在母体血循环中比较稳定,易于检测。同时,由于其无需依赖于胎儿性别或是父源性多态性位点,临床应用领域优于胎儿游离DNA;结合对分子标记物的定量检测方法更适用于产前诊断领域,并已取得初步成果。预测其具有很好的应用前景。     

用孕妇外周血胎儿细胞进行产前诊断研究进展

目前对遗传性疾病的产前诊断有数种方法。根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等,虽然诊断精确度较高,但易导致流产等并发症,只能在高危孕妇中实施;后者的优点是既能行产前诊断又无危险性,适用于低风险的孕妇大群体筛选,尽早发现和杜绝异常胎儿,达到优生目的。利用孕妇外周血的胎儿细胞进行产前基因诊断即是最具潜力的非侵入性产前诊断方法之一,近年来研究十分活跃,临床医师应注意这一领域的进展。一、孕妇外周血胎儿细胞的类…     

从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行产前诊断的研究进展

孕妇外周血中存在的微量的胎儿细胞是进行非创伤性产前诊断最理想的样本来源之一。目前常用的分选胎儿细胞方法有流式细胞术、磁激活细胞分离法等 ,其中单细胞分离法的建立是一个新的途径。利用分析胎儿细胞的遗传信息 ,可以进行遗传病的产前诊断 ,如诊断多种染色体病和基因病等     

细胞游离胎儿DNA产前诊断胎儿非整倍体异常

细胞游离胎儿DNA(cffDNA)已被成功在妊娠妇女血循环中检测到。与母体血循环中胎儿细胞不同,cffDNA最早可在妊娠4周检测出,并能在产后迅速消失。cffDNA可能源于胎盘部位的滋养细胞等并通过凋亡机制释放进入母体血循环中。通过检测cffDNA可产前诊断胎儿非整倍体异常,但因其在妊娠妇女血中含量较少,检测具有挑战性。目前已有多种新检测方法用于非整倍体异常的产前诊断,尚需不断完善。     

细胞游离胎儿DNA产前诊断胎儿非整倍体异常

细胞游离胎儿DNA（cffDNA）已被成功在妊娠妇女血循环中检测到。与母体血循环中胎儿细胞不同,cffDNA最早可在妊娠4周检测出,并能在产后迅速消失。cffDNA可能源于胎盘部位的滋养细胞等并通过凋亡机制释放进入母体血循环中。通过检测cffDNA可产前诊断胎儿非整倍体异常,但因其在妊娠妇女血中含量较少,检测具有挑战性。目前已有多种新检测方法用于非整倍体异常的产前诊断,尚需不断完善。     

孕妇外周血中胎儿细胞的分离、纯化及在无创性产前诊断中的应用

目前,获取胎儿细胞进行产前诊断的方法主要有羊膜腔穿刺、绒毛采取和脐静脉穿刺。这些手段对于胎儿有一定的风险性,有导致流产发生的可能。而从孕妇外周血中分离、纯化胎儿细胞用于产前诊断,则属无创性手段,不仅取材方便,易于为孕妇所接受,且风险小,不会对胎儿造成...