环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2（COX-2）基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法（1）以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象：分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48h后用半定量RT-PCR和Westernbolt分别检测COX-2mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。（2）以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Westernboh检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果（1）与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μ1的siRNA组凋亡率明显增高。（2）lμlCOX-2siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组（P〈0．05）。（3）与阴性转染组相比,10IxlCOX-2siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

吡格列酮对炎性因子所致胰岛细胞凋亡的保护作用

目的：探讨Ppar-γ激动剂吡格列酮（PGZ）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用，初步研究其作用机制。方法：Western—blotting检测NIT-1细胞的Ppar-γ受体蛋白表达；联合IL-1β及IFN-γ作用于体外培养的胰岛细胞株NIT-1，建立胰岛细胞炎症模型，观察（IL-1β＋IFN-γ）与PGZ预孵育NIT-1细胞的凋亡；MTT法、流式细胞术检测细胞生长抑制率及凋亡率，比色法检测凋亡细胞caspase-3比活性。结果：NIT-1细胞表达Ppat-γ蛋白；（IL—1β＋IFN-γ）组作用24h对NIT-1细胞生长抑制率、凋亡率、caspase-3比活性分别为49．8％、28．0％、3．5，对照组3项指标分别为0％、4．3％、1，两组比较均有十分显著差异（P〈0．01）；PGZ组3项指标分别为2．7％、7．1％、1.3，与对照组比较，均无明显差异（P〉0．05）；（PGZ＋IL-1β＋IFN-γ）组的3项指标分别为18．6％、14．8％、1．5，与（IL-1β＋IFN-γ）组比较均有差异（P〈0．05），与对照组比较分别为P〉0．05，P〈0．05，P〈0．05。结论：NIT-1细胞表达Ppar-γ受体蛋白；联合IL—1β及IFN-γ明显诱导NIT-1细胞凋亡，PGZ显著抑制IL-1β及IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡，其机制与降低caspase-3活性有关。     

生物钟基因Bmal1通过氧化应激信号通路调节胰岛茁细胞凋亡的研究

目的探讨生物钟基因brainandmuscleArnt-likeprotein-1（Bmal1）对胰岛β细胞凋亡的调节作用。方法实验分为正常对照组（含5.5mmol/L葡萄糖,NC组）、高糖组（含33.3mmol/L葡萄糖）、正常糖浓度+无关RNA转染组（含5.5mmol/L葡萄糖,NC+siRNA组）、正常糖浓度+Bmal1基因沉默组（NC+Bmal1-/-组）、高糖+无关RNA转染组（含33.3mmol/L葡萄糖,高糖+siRNA组）、高糖+Bmal1基因沉默组（高糖+Bmal1-/-组）。NC组不加干预因素。采用RNA干扰技术沉默大鼠胰岛茁细胞瘤株（INS-1）Bmal1基因,应用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测活性氧（ROS）含量,ATP检测试剂盒测定三磷酸腺苷（ATP）含量,实时荧光定量PCR检测Bmal1、去乙酰化酶sirtuin1（Sirt1）mRNA表达情况。结果与NC+siRNA组比较,NC+Bmal1-/-组ATP含量下降,ROS水平增加,Sirt1mRNA表达下降（均P＜0.01）。与NC组比较,高糖组ATP下降,ROS增加,Sirt1mRNA表达下降（均P＜0.01）,细胞凋亡增加（P＜0.05）。与高糖+siRNA组比较,高糖+Bmal1-/-组ATP下降,ROS增加,细胞凋亡增加（均P＜0.01）,Sirt1mRNA表达有下降趋势,但无统计学差异（P＞0.05）。结论Bmal1可通过调节氧化应激信号通路影响胰岛茁细胞功能和凋亡。     

y-氨基丁酸对炎性因子致胰岛细胞凋亡的保护作用

【目的】探讨1-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid,GABA）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用,初步研究其作用机制。【方法】将胶原酶v：通过总胆管灌注到大鼠内,分离纯化大鼠胰岛细胞,并通过DTZ染色鉴定胰岛纯度。将新鲜分离的胰岛分为3组：正常对照组、通过白介素-1B（IL-1B）-y干扰素（IFN-7）建立胰岛细胞炎症模型（IL-1β＋IFN-1诱导组）、GABA干预组（GABA＋IL-1β＋IFN-1）。观察（IL-1β＋IFN-1）与GABA预孵育胰岛细胞的凋亡;二醋酸酯荧光素,碘化丙啶染色、流式细胞术及糖刺激实验检测胰岛细胞活性。凋亡率和功能,免疫荧光检测凋亡细胞Caspase-3蛋白表达。【结果】（IL-18＋IFN-7）组作用24h对胰岛细胞活性、凋亡率和糖刺激指数分别为20％、（32．7±5.3）％和（1．62±0．13）,对照组3项指标分别为90％、（5．5±2．8）％和（2．37±0．11）,两组比较差异显著（P〈0．01）;（GABA＋IL-1β＋IFN-y）组3项指标分别为70％、（18．0±6．3）％和（1．97±0．12）,与（IL-1β＋IFN-1）组比较,均有明显差异（P〈0．01）。（IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显增加,而（GABA＋IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显受到抑制。【结论】联合IL-1β及IFN-y明显诱导胰岛细胞凋亡,GABA显著抑制IL-1β及IFN-1诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与降低Caspase-3蛋白的表达有关。     

左旋精氨酸/一氧化氮通路对小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的研究左旋精氨酸／一氧化氮通路对胰岛β细胞凋亡的影响，初步探讨一氧化氮（NO）诱导胰岛β细胞凋亡的作用。方法体外培养的NIT-1小鼠胰岛β细胞，用不同浓度的L-精氨酸（L-arg）处理，6h后采用Griess化学显色法检测细胞培养液内的NO水平，Annexin-V／PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡。而后联合应用hemoglobin处理细胞，分为3组：对照组；L-arg组；L-arg＋hemoglobin组；6h后检测NO的水平和细胞的凋亡，并用Western Blot检测P53蛋白的表达。结果与对照组比较，L-arg 4mg／mL处理组的NO水平最高（P〈0．05），细胞凋亡最明显（P〈0．05）；hemoglobin干预后，NO水平和细胞凋亡率均较L-arg单独处理组明显降低（P〈0．05），与正常对照组之间差异没有显著性（P〉0．05）；Western Blot提示L—arg组的P53蛋白的表达水平明显高于对照组和hemoglobin处理组（P〈0．05）。结论L-arg／NO通路可诱导NIT-1小鼠胰岛β细胞凋亡，并呈现一定程度的剂量依赖性；NO可能通过P53的活化诱导NIT-1胰岛细胞凋亡。     

厄贝沙坦对高糖诱导胰岛NIT-1细胞Caspase-3 mRNA表达及凋亡的影响

目的：观察厄贝沙坦对高糖诱导胰岛 NIT-1细胞Caspase-3 mRNA 表达及凋亡的影响。方法将对数生长期胰岛NIT-1细胞分为空白对照组（A组）,高糖组（25 mmol／L）（B组）,高糖加厄贝沙坦（0．1 mmol／L）组（C组）,厄贝沙坦（0．1 mmol／L）培养24 h后加高糖培养组（D组）,各组细胞分别培养48 h。通过Hochest 33342荧光染色观察各组细胞形态,反转录聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测各组细胞Caspase-3 mRNA的表达。结果 Hochset 33342荧光染色结果：A组细胞呈均匀弥漫性蓝光着色,B组细胞呈不均匀强蓝光着色,可见细胞核浓缩和细胞碎片,C组和D组大部分细胞着色与A组细胞一致,少数呈不均匀强荧光蓝色减少。 RT-PCR结果：B组Caspase-3 mRNA表达量高于A、C、D组（P＜0．05）,A、C 、D组间比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。结论高糖可诱导胰岛 NIT-1细胞凋亡;厄贝沙坦可降低Caspase-3 mRNA表达量,减少细胞凋亡,在体外,对高糖诱导胰岛NIT-1细胞可能具有一定的保护作用。     

SiRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅对胶质瘤细胞U87增殖的影响

目的：探讨小分子干扰RNA（siRNA）靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅（FAP-α）表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响。方法：实验分为空白对照组（Blank组）、阴性对照组（NC组）和siRNA组,通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87,使用Westernblot法检测FAP-α基因的蛋白水平,同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化,使用Real-timePCR法检测FAP-α和增殖核抗原（PCNA）的mRNA水平,CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力。结果：①转染48h后,siRNA组细胞FAP-α mRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组,差异有统计学意义（P〈0．01）,siRNA组较Nc组caspase-3蛋白表达增加（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达明显降低（P〈0．01）,siRNA组较NC组PCNAmRNA表达明显下降（P〈0．01）。②转染后48、72和96hsiRNA组U87细胞吸光度值低于NC组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：应用siRNA沉默FAP-α基因的表达,可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖,诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

软脂酸对美吡哒和高糖刺激大鼠胰岛β细胞功能抑制作用的研究

目的 观察软脂酸对美吡哒和高糖刺激的大鼠胰岛细胞β细胞功能的影响。方法 以0、0．25、0．5、1．0mmol/L软脂酸原代培养SD大鼠胰岛细胞,在24h、72h、120h测定上清胰岛素、葡萄糖浓度及细胞内胰岛素。结果 在不同培养时间不合软脂酸组上清中胰岛素、葡萄糖及细胞内胰岛素含量差别无统计学意义（P〉0．05）;而含软脂酸组随软脂酸浓度增加和培养时间延长,胰岛素分泌量、葡萄糖利用量和细胞内胰岛素含量逐渐减少（P〈0．05）。结论 在体外软脂酸抑制了美吡哒和高糖刺激的大鼠胰岛β细胞功能,这种抑制作用与胰岛细胞本身胰岛素抵抗相关。     

糖痛方对施万细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3、caspase-9表达的影响

目的 探讨中药糖痛方对高糖诱导的施万细胞凋亡的影响.方法 将原代培养的施万细胞共分为对照组、高糖组、高糖加川芎嚷组、高糖加黄芪多糖组、高糖加川芎嗪和黄芪多糖混合组、高糖加糖痛方含药血清组,各组干预细胞48h后用流式细胞仪检测细胞Annexin V/PI标记的细胞凋亡率、用Western blot法和PCR法检测caspase-3、caspase-9及Bcl-2表达.结果 糖痛方组细胞凋亡率与高糖组相比显著降低（P＜0.05）;糖痛方组细胞caspase-3、caspase-9蛋白及mRNA表达与高糖组相比显著降低（P＜0.05）,Bcl-2蛋白及mRNA表达与高糖组相比显著升高（P＜0.05）.结论 中药糖痛方对神经细胞的损伤修复作用可能是通过提高Bcl-2、下调caspase-9和caspase-3的活性表达从而抑制施万细胞的凋亡来实现的.     

葡萄糖对胰岛β细胞CD36表达的影响

目的：观察不同浓度的葡萄糖对胰岛β细胞脂质含量以及脂肪酸转位酶（CD36）表达的影响。方法：分别以5、10、15、20、253、0 mmol/L葡萄糖孵育胰岛β细胞24 h后,测定细胞内甘油三脂（TG）含量及CD36基因表达。结果：（1）在高糖环境下,细胞内TG含量呈浓度依赖性增加。（2）高糖对CD36的基因表达亦有明显的浓度依赖性。结论：高糖对胰岛β细胞CD36表达的影响可能在脂质异位沉积和脂毒性中有着重要的意义。     

皮下注射胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的：观察皮下注射胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病（non-obese diabetic,NOD）鼠胰岛炎、B细胞凋亡和糖尿病的影响,并探讨其诱导免疫耐受的机制。方法：60只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组（n=34）和磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）对照组（n=28）,分别于4周、12周、20周、28周皮下注射中效胰岛素优泌林N（Humulin N）6U（60μL）＋不完全弗氏佐剂（incomplete Freund＇s adjuvant,IFA）60μL,对照组予PBS（60μL）＋IFA（60μL）。于12周龄观察胰岛炎和胰岛B细胞凋亡;检测胰岛Fas和FasL的表达;测定血清IL-4和IFN-γ浓度,以及胰岛内I-Aβ^x7,IL-1β,IFN-γ,Fas,IL-4 mRNA的表达水平。结果：NOD鼠皮下注射胰岛素加IFA组30周龄和52周龄时发病率仅为21．4％和28．6％,而皮下PBS加IFA组为71．4％和85．7％（P〈0．05）。胰岛素组胰岛炎积分比对照组低,但差异无统计学意义（P〉0．05）。胰岛素组胰岛Fas抗原表达和B细胞凋亡率均比PBS对照组低（均P〈0．05）。胰岛素组胰岛内I-Aβ^x7,IFN-γ,IL-1β,FasmRNA表达较PBS对照组低（均P〈0．05）,而IL-4mRNA表达较对照组高（P〈0．05）;胰岛素组血清IL-4比PBS组高,IFN-γ比PBS组低（均P〈0．05）。结论：皮下注射胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生,但不能阻断胰岛炎的进展。皮下注射胰岛素能诱导调节性T细胞产生,使全身和胰岛局部T细胞由,Th1向Th2转型,从而抑制Fas介导的B细胞凋亡而预防糖尿病。     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响

目的探讨渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响及其作用机制。方法高糖培养小鼠胰岛β细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化叉头转录因子1（p-FoxO1）表达水平,确定高糖诱导细胞FoxO1磷酸化最佳时间。小鼠胰岛β细胞根据培养条件分为4组：（1）常规糖浓度组：用含25mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;（2）高张浓度组：用含25mmol/L葡萄糖浓度和35mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养;（3）高糖浓度组：用含60mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;（4）高糖浓度+渥曼青霉素干预组：用含60mmol/L葡萄糖浓度和50nmol/L渥曼青霉素的DMEM培养液培养。培养12h后采用蛋白质印迹法检测各组小鼠胰岛β细胞p-FoxO1、FoxO1蛋白表达水平;培养72h后采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组小鼠胰岛β细胞神经元素3（ngn3）、胰岛十二指肠同源盒-1（PDX1）蛋白和mRNA表达水平。结果在一定时间范围内,高糖能刺激FoxO1蛋白磷酸化;高糖培养小鼠胰岛β细胞后细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均增加,PDX1蛋白和mRNA表达水平均减少。渥曼青霉素同步干预后,FoxO1磷酸化减少,细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均减少,PDX1蛋白和mRNA表达水平均增加。结论渥曼青霉素能抑制高糖诱导的小鼠胰岛β细胞去分化,渥曼青霉素可能通过抑制FoxO1的磷酸化而产生该抑制作用的。     

过氧化氢酶对高糖诱导NIT-1胰岛β细胞Pax6基因表达下降的影响

 【目的】探讨过氧化氢酶（eatalase）对高糖诱导的NIT-1胰岛B细胞成对同源异形盒转录因子6（Pax6）基因表达下降的影响。【方法】体外培养NIT-1胰岛B细胞24h，分4个处理组：低糖组（NG），低糖＋过氧化氢酶组（NG＋C），高糖组（FIG），高糖＋过氧化氢酶组（HG＋C），用2，7二氯氢化荧光素二酯（H2DCF-DA）染色检测活性氧簇（ROS）的水平，RT-PCR半定量检测Pax6 mRNA表达。【结果】HG组ROS水平（1．10±0．24）明显高于NG组（0．95±0．26），P〈0．05；FIG＋C组ROS水平（0．94±0．26）低于HG组，P〈0．05；HG组Pax6 mRNA表达（0．64±0．09）低于NG组（0．93±0．12），P〈0．05；HG±C组Pax6 mRNA表达（0．74±0．11）高于HG组，但差异无统计学意义，P〉0．05。【结论】高糖可使NIT-1胰岛β细胞内ROS产生增加，胰岛β细胞特异性转录因子Pax6基因表达下降，给予ROS的抗氧化剂过氧化氢酶后，Pax6基因表达有所恢复，但差异无统计学意义。     

桑白皮含药血清抑制高脂高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的分子机制

目的观察桑白皮含药血清对高脂高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的抑制效应,探讨桑白皮治疗糖尿病的分子机制。方法制备桑白皮药物血清并干预胰岛β细胞,分为正常组、高脂高糖组、药物血清组;MTT法检测细胞活性,western blot检测各组细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达水平,FCM流式细胞术检测细胞凋亡率。结果根据细胞活性检测选择10倍药物血清细胞。FCM流式细胞术结果显示:与正常组比较,高脂高糖组细胞凋亡率高(0.05);与高脂高糖组比较,药物血清组细胞凋亡率明显降低(0.05)。蛋白免疫印迹结果显示:与正常组比较,高脂高糖组Bcl-2表达减少而Bax表达增加;与高脂高糖组比较,Bcl-2表达增加而Bax表达减少(0.05)。结论桑白皮药物血清可抑制高脂高糖诱导的胰岛β细胞凋亡,其抑制作用是通过调节Bax和Bcl-2表达实现的。     

α-硫辛酸对高糖培养施万细胞线粒体凋亡通路的影响

目的 探讨α-硫辛酸（alpha lipoic acid,ALA）对高糖培养施万细胞氧化应激损伤及线粒体凋亡通路的影响。方法 原代培养并纯化后的大鼠施万细胞为研究对象,分为正常组（5.6mmol/L葡萄糖培养基）、高糖组（50mmol/L葡萄糖培养基）、渗透压对照组（5.6mmol/L葡萄糖培养基+44.4mmol/L甘露醇）,以及高糖内分别加入不同浓度ALA （50、100、200μmol/L）组。流式细胞术检测施万细胞活性氧（ROS）及线粒体膜电位水平,Tunnel法检测施万细胞凋亡率,Western blot法检测bcl-2、bax、cyto C、cleaved-caspase-3及cleaved-caspase-9的表达。结果 与正常组比较,高糖组施万细胞内ROS水平明显增高（P<0.01）,线粒体膜电位下降,bcl-2蛋白表达降低（P <0.01）,bax蛋白的表达增加（P <0.01）,cyto C从线粒体到胞质的释放增加,caspase-9、caspase-3的活化水平增高,细胞凋亡率明显增高（P<0.01）。ALA降低高糖所致的施万细胞内ROS水平的增高（P<0.01）,提高了线粒体膜电位（P<0.01）,上调bcl-2蛋白的表达（P<0.01）,下调bax蛋白的表达（P <0.01）,减少了cyto C从线粒体到胞质的释放（P<0.01,P< 0.05）,降低了caspase-9及caspase-3的活化（P<0.01）,从而抑制了施万细胞凋亡。结论 ALA可以抑制高糖所致的施万细胞氧化应激损伤及线粒体凋亡通路的激活。     

特异性下调GRP78基因表达对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默葡萄糖调节蛋白78（GRP78）基因对人卵巢癌细胞耐药性的影响,阐明GRP78基因沉默逆转肿瘤细胞耐药性的生物学机制。方法：构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3/DDP细胞;RT-PCR和Western blotting法检测GRP78基因的蛋白的表达;Western blotting法检测caspase-4和caspase-3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：转染GRP78 siRNA重组质粒的SKOV3/DDP细胞GRP78基因和蛋白表达较转染空质粒组明显降低(P<0.05);加用顺铂后,转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组较未转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组caspase-4和caspase-3表达明显增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增加(P<0.05)。结论：抑制GRP78基因表达能通过上调caspase-4和caspase-3表达及增加顺铂诱导的SKOV3/DDP细胞凋亡率,降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

目的：观察沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡和周期及增值的影响．方法：采用siRNA-3转染人恶性黑素瘤LiBr细胞后分别应用TUNEL法和AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用免疫荧光细胞化学技术检测siRNA对凋亡效应蛋白Caspase-3表达的影响及应用MTY法检测siRNA对细胞增殖的作用．结果：siRNA．3转染LiBr细胞72h可诱导细胞凋亡（P〈0．05）和引起细胞G0／G1期阻滞（P〈0．05）;可下调Caspase-3蛋白表达（P〈0．05）及抑制细胞增殖（P〈0．05）．结论：Livin可做为应用RNA干扰技术探索恶性黑素瘤基因治疗的潜在靶基因．     

小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail 1表达的抑制作用

目的：观察小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail1表达的抑制作用及意义。方法：将原代培养肾小管上皮细胞分为5组,（1）对照组（含糖5.5 mmol/L）;（2）高糖组（含糖25 mmol/L）;（3）Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6 h后更换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（4）Control siRNA处理组,转染Control siRNA作为阴性对照,6 h后换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（5）高渗组（含甘露醇19.5 mmol/L）。72 h后收集细胞,用Western blot检测Snail 1、Vimentin蛋白表达,用半定量RT-PCR检测Snail 1、Vimentin、成纤维细胞特异性蛋白-1（FSP-1）和纤维连接蛋白（FN）的mRNA表达。结果：肾小管上皮细胞转染Snail1 siRNA后,与高糖组比较Snail1mRNA和蛋白表达分别下降62%和68%（P〈0.01）;与高糖组比较,Snail1 siRNA处理组Vimentin、FSP-1、FN蛋白和（或）mRNA表达显著下调（P〈0.01）。结论：（1）小干扰RNA能显著抑制高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail1表达;（2）Snail1参与了高糖作用下肾小管上皮细胞病理改变,并在细胞外基质的沉积中起重要作用。     

波动性高糖对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的：对比研究波动性与稳定性高糖对肾小球系膜细胞（GMC）氧化应激的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株，分正常糖对照组（5．5mmol／L，NG）、稳定高糖组（25mmol／L。HG）、波动性高糖组（5．5mmol／L或25mmol／L，每24h交替，IHG），培养GMC6d，分别以二氢二氯荧光素（DCFH—DA）标记细胞，通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄（DCF）的荧光强度而测得细胞内ROS水平，比色法检测细胞上清液中的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果：与NG组相比，HG组与IHG组细胞内DCF平均荧光强度均显著升高（均P〈0．01），总SOD活力均下降（均P〈0．01），GSH含量均下降（P〈0．05，P〈0．01），MDA均升高（P〈0．05，P〈0．01）。与HG组相比，IHG组细胞内DCF平均荧光强度显著升高（P〈0．01），总SOD活力下降（P〈0．01），GSH含量下降（P〈0．01），MDA升高（P〈0．05）。结论：波动性高糖较稳定性高糖可能对GMC有更强的氧化损伤效应。