间期荧光原位杂交技术在慢性淋巴细胞白血病检测中的应用

目的 探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）基因组的异常情况及其临床意义.方法 对17例初诊CLL患者进行常规细胞遗传学（CC）检测,同时应用着丝粒探针CSP12（12p11.1-12q11.1）和序列特异性探针D13s25（13q14.3）、ATM（11q22.3）、RBI（13q14）、p53（17p13.1）进行间期荧光原位杂交（I-FISH）.比较I-FISH与CC敏感性的差异.结果 CC检测18.75%有核型异常（3/16）,1例未见核分裂相;I-FISH检测70.6%患者有基因异常（12/17）,p53缺失11.8%（2/17）、ATM缺失5.6%（1/17）、13q-47.1%（8/17）,其中包括RB1缺失23.5%（4/17）、D13S25缺失29.4%（5/17）,12-三体29.4%（5/17）,复杂基因组异常11.8%（2/17）.核型异常与性别、年龄、乳酸脱氢酶（LDH）、β2微球蛋白（β2-MG）及Binet分期无相关性.结论 I-FISH是检测CLL患者基因组异常的有效手段,与CC方法相比可明显提高CLL基因组异常的检出率.     

慢性淋巴细胞白血病间期荧光原位杂交检测染色体异常及临床分析

本研究旨在了解慢性淋巴细胞白血病(CLL)常见染色体异常情况及其与临床指标和疗效的关系。以4种序列特异性探针P53、D13S25、ATM、RB1和1种着丝粒探针CSP12,采用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)对10例正常对照者骨髓建立各探针的检测阈值,然后对9例染色体核型分析阴性/无分裂相的CLL患者进行检测,检测结果大于阈值为阳性,小于阈值为阴性。结果表明:用p53与D13S25检测7例患者结果均呈阳性,ATM探针检测5例患者结果呈阳性,用RB1与CSP12探针检测4例患者结果呈阳性。9例患者I-FISH检测结果均显示有遗传学异常。检测显示,ATM缺失与患者血红蛋白水平有显著相关性,ATM缺失阳性的患者更易出现全身广泛淋巴结肿大。结论:I-FISH技术适用于CLL患者的细胞遗传学分析,提高了CLL的染色体异常检出率。但I-FISH检测的细胞遗传学异常是否是CLL患者的重要预后因素,尚需扩大样本量的研究和长期随访观察。     

多重荧光原位杂交检测慢性淋巴细胞白血病复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交（M-FISH）技术检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）复杂核型异常（CCA）的价值。方法应用M—FISH技术对6例常规细胞遗传学（CE）显示CCA的CLL进行研究。结果M-FISH检测仅有1例检出了CFA克隆；1例检出非复杂核型的异常克隆及1个CCA细胞；1例检出3个不同的染色体变异细胞。其余3例M—FISH未检出异常核型分裂象。6例CLL的核型分析中共发现平衡易位10种；非平衡易位9种，其中der（14）t（16；14；9）是既往文献未报道的易位。结论对伴有（CCA的CLL以M—FISH技术可以发现和纠正CC漏检及误检的染色体异常。单个细胞核型异常在CLL中多见，     

荧光原位杂交技术在慢性淋巴细胞白血病检测中的应用评估

本研究探讨与评估应用间期荧光原位杂交技术(FISH)检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)遗传学异常的价值。应用间期FISH技术检测32例初诊CLL患者的del(13q14.3)、del(11q22.3)、del(17p13.1)、del(13q14)和12号染色体三体,同时对免疫表型不典型的10例初诊患者检测IGH/CCND1融合基因。结果表明,在32例病例组中FISH检测出26例(81.3%)基因异常,包括D13S25缺失14例,RB1缺失11例,12号染色体三体9例,P53缺失6例,ATM缺失4例;涉及1种基因异常的12例,其中12号染色体三体7例,D13S25缺失3例,P53缺失1例,ATM缺失1例;涉及2种基因异常的11例,其中D13S25/RB1缺失的7例,另4例均包含P53缺失;涉及3种以上基因异常的病例3例;10例免疫表型表达CD5+CD23-的初诊患者中2例IGH/CCND1(+)。结论:应用间期FISH技术检测CLL基因组的异常,可大大提高异常染色体的检出率,各基因异常有其不同的特点;IGH/CCND1融合基因的检测在CLL诊断中有重要意义。     

应用荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病的基因组异常

目的 探讨应用组合荧光原位杂交(panel fluorescence in situ hybridization,panel FISH)技术对慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukaemia,CLL)基因组异常检测的价值.方法 分别应用序列探针D13S25(13q14.3)、RB1、p53、ATM(11q23)和着丝粒探针12号(CSP12)等5种荧光素标记的DNA探针,对17例CLL患者进行FISH检测,并和常规细胞遗传学检测结果进行比较.结果 17例CLL患者中,常规细胞遗传学检测出1例(1/17)有染色体异常,为49,XX,+3,+8,+18;组合FISH检测出10例(10/17)有染色体异常,包括D13S25缺失4例、ATM缺失2例、p53缺失1例、D13S25合并RB1同时缺失2例、多种异常1例.FISH检测的总检出率高于常规细胞遗传学检测.结论 组合FISH技术是检测CLL患者染色体基因组异常的有效手段,与常规细胞遗传学方法相结合则可明显提高CLL染色体异常的检出率.     

多重荧光原位杂交检测慢性淋巴细胞白血病复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交(M-FISH)技术检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)复杂核型异常(CCA)的价值。方法应用M-FISH技术对6例常规细胞遗传学(CC)显示CCA的CLL进行研究。结果M-FISH检测仅有1例检出了CCA克隆;1例检出非复杂核型的异常克隆及1个CCA细胞;1例检出3个不同的染色体变异细胞。其余3例M-FISH未检出异常核型分裂象。6例CLL的核型分析中共发现平衡易位10种;非平衡易位9种,其中der(14)t(16;14;9)是既往文献未报道的易位。结论对伴有CCA的CLL以M-FISH技术可以发现和纠正CC漏检及误检的染色体异常。单个细胞核型异常在CLL中多见。     

CpG-寡核苷酸免疫刺激法在慢性淋巴细胞白血病遗传学研究中的应用

目的:探索CpG-寡核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)免疫刺激法在慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)细胞染色体培养中的价值,对比国内外相关研究的差异,进一步提高CLL核型培养成功率及异常核型检出率。方法:收集82例CLL患者的骨髓标本,分别应用植物血凝素(PHA)、CpG-寡核苷酸联合白介素-2(CpG-ODN DSP30+IL-2)刺激培养72 h后收获细胞,制备染色体,进行常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)分析。同时应用D13S25、Rb1、ATM、p53和CSP12探针进行间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,iFISH)检测。比较2种细胞刺激剂进行染色体培养及iFISH检测结果的差异性。结果:PHA与CpG-ODN DSP30+IL-22种免疫刺激法核型培养成功率(可分析分裂相t≥20个)分别为90.2%(74例)和68.3%(56例),异常核型检出率分别为13.5%(10例)和46.4%(26例)。PHA组核型培养成功率显著高于CpG-ODN DSP30+IL-2组(P=0.01),而CpG-ODN DSP30+IL-2组异常核型检出率显著高于PHA组(P=0.003)。iFISH异常核型检出率(74.4%,61例)显著高于CpG-ODN DSP30+IL-2组(P=0.000)。iFISH检测能验证CC分析检出的异常。结论:应用CpG-ODN DSP30+IL-2免疫刺激法培养CLL细胞,可提高异常核型检出率,特别是能检出提示预后差的各种易位。     

慢性B淋巴细胞白血病的荧光原位杂交研究

运用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术，检测了３１例慢性Ｂ淋巴细胞白血病（Ｂ－ＣＬＬ）中第１２号染色体三体（＋１２）畸变，７例（２２．６％）患者有＋１２，其中６例已经细胞遗传学检查发现有＋１２。在３例患者的外周血和淋巴结的淋巴细胞中，运用ＦＩＳＨ技术均检测到＋１２，而细胞遗传学检查仅在其淋巴结中发现有＋１２。表明ＦＩＳＨ在检测染色体畸变中比细胞遗传学方法敏感。＋１２是Ｂ－ＣＬＬ常见的特异性染色体畸变，淋巴结应做为Ｂ－ＣＬＬ进行染色体分析的首选材料。     

荧光原位杂交和常规细胞遗传学在慢性粒细胞白血病研究中的应用

目的：应用荧光原位杂交（FISH）和染色体核型分析技术,探讨慢性粒细胞白血病（CML）细胞遗传学特点与临床预后的相关性。方法：采用骨髓细胞直接法和（或）短期培养法制备染色体标本,采用热变性姬姆萨显带技术（RHG）进行染色体核型分析。荧光染色体原位杂交技术检测40例CML患者的BCR／ABL融合基因。回顾分析282例CML的临床及细胞遗传学资料。结果：常规细胞遗传学（CC）分析表明,282例患者中268例Ph染色体阳性,占95．04％;14例Ph染色体阴性,占4．96％。其中250例Ph阳性细胞为100％,占90．32％。12例Ph阳性细胞为30％～99％,占4．48％,核型显示正常与Ph嵌合状态。6例核型为复杂变异异位,占2．24％。41倒除Ph染色体外,还出现额外染色体异常,占15．30％,分别为双Ph,＋8,＋22,-Y,i（17q）等,其中28例为加速或急变患者,占68．29％。应用FISH技术检测,BCR／ABL融合基因阳性34例（舍14例Ph染色体阴性中的8例）,占85％;BCR／ABL阴性6例,占15％。结论：在常规细胞遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高染色体异常的检出率及准确率。细胞遗传学对于CML的正确诊断、指导临床治疗、判断预后具有重要价值。     

间期荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病ATM基因缺失

目的探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）中ATM基因缺失及其与其他染色体异常及临床分期的相关性。方法运用间期荧光原位杂交技术（I-FISH）和Spectrum OrangeTM标记的位于11q22.3的序列特异性DNA探针ATM对50例初诊CLL患者的染色体标本进行了ATM缺失的检测，同时检测del（13q14）、dd（17p13，1）和免疫球蛋白重链基因重排。临床分期按照Binet分期方法。结果50例患者中有6例（12％）ATM缺失；其中4例伴有其它染色体异常。20例BinetA期患者中，3例（15％）存在异常；10例Binet B期患者中，2例（20％）存在异常；13例Binet C期患者中，1例（7．7％）存在异常。ATM缺失在Binet A、B及C期中无统计学差异（P〉0．05）。结论I-FISH与常规染色体分析技术相比是一种快速、准确及敏感的方法，对我国CLL患者的预后预测价值有待进一步的深入研究。     

间期荧光原位杂交技术检测骨髓增生异常综合征患者的染色体异常

本研究探讨间期荧光原位杂交（FISH）技术在检测骨髓增生异常综合症（MDS）患者染色体异常中的价值。采用常规细胞遗传学（CC）和间期FISH技术对80例MDS患者和20例正常对照者的骨髓细胞进行分析,比较两种方法检测MDS患者异常克隆的阳性率。结果表明：80例MDS患者经FISH技术检出染色体异常43倒（53．8％）,明显高于CC的异常核型检出率17例（21．3％）,两者比较有统计学意义（P〈0．05）;在世界卫生组织（WHO）各亚型中,FISH异常检出率高于CC,其中难治性贫血（RA）和难治性贫血伴多系病态造血（RCMD）两组患者阳性率结果差异具有显著性;在国际预后积分系统（IPSS）各评分等级中,FISH阳性率也明显高于CC,其中中危组患者差异具有统计学意义。结论：FISH技术敏感性优于CC,可以检测出CC分析失败及正常的染色体异常克隆,提高异常染色体的检出率,这一点主要体现在IPSS中的中危组患者;在WHO各亚型中,RA和RCMD组患者从FISH技术中获益较大。     

双色荧光原位杂交技术检测浆细胞白血病13号染色体缺失

为了解浆细胞白血病（PCL）中13号染色体缺失情况及其与临床特征的相关性，运用双色荧光原位杂交（FISH）技术及位于13q14和13q31的序列特异性DNA探针，对21例初发PCL患者的间期细胞进行13号染色体缺失的检测。结果显示，21例PCL中13例（61．9％）具有del（13q14）异常，其阳性细胞率在52％-98％之间；12例（57．4％）有del（13q31）异常，其阳性细胞率在50％-98％之间。13例del（13q14）异常患者中，12例伴有del（13q31），仅1例阴性。结论：PCL中13号染色体缺失发生率较高，大部分PCL患者13号染色体缺失片段可能涉及由13q14到13q31的整个区间。FISH技术是一种在分析PCL13号染色体缺失异常方面较为快速、准确和敏感的方法。     

30例慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常的FISH检测的意义

为探讨间期荧光原位杂交（FISH）在检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）＋12、del（13q14）、p53基因缺失、atm基因缺失情况中的意义,采用组合探针（CEP12、LSI D13S319、LSI p53、LSI atm）对30例CLL患者进行FISH检测,分析分子遗传学异常与患者外周血淋巴细胞绝对计数、Binet分期、血清乳酸脱氢酶（LDH）和B：微球蛋白（β2-MG）水平、ZAP-70和CD38表达之间的相关性。结果发现,30例CLL患者中,19例（63．3％）存在1种及1种以上细胞遗传学异常,7例（23．3％）同时检测出2种及2种以上的异常,其中最常见为del（13q14）（43．3％）,其他依次为＋12（23．3％）,atm基因缺失（13．3％）,p53基因缺失（10．0％）。各分子遗传学异常与性别、年龄、Binet分期、外周血淋巴细胞绝对计数、血清LDH和β2-MG水平、ZAP-70表达水平无明显相关性（p〉0．05）,在CD38高表达组中,atm基因缺失的发生率均明显高于CD38低表达组,且差异有统计学意义（p=0．035）。结论：FISH是一种检测CLL患者分子遗传异常快速、准确及敏感的方法,其在CLL患者中的预后预测价值有待进一步的深入研究。     

间期荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征20q-染色体异常

为了探讨间期荧光原位杂交(FISH)技术在检测骨髓增生异常综合征(MDS)20号染色体长臂部分缺失异常中的价值，应用绿色荧光素SpectrumGreen直接标记的酵母人工染色体(YAC)克隆912C3(跨越20号染色体长臂q12断裂点)作为探针，对52例MDS患和5名正常对照的骨髓细胞进行单色间期FISH检测，每例分析200—300个细胞，以1个绿色荧光杂交信号＞7．16％作为阳性标准，并与常规细胞遗传学(conventional cytogenetics，CC)检测结果相比较。结果显示，52例MDS患中FISH检测7例(13．5％)为阳性，CC检测其中4例为阳性，3例为阴性。结论：YAlC912C3为探针的间期FISH技术是检测MDS患20q-染色体异常的有效方法，是CC检测的一个重要补充。     

双色双融合荧光原位杂交探针检测慢性髓系白血病Bcr／Ab1基因重排的研究

本研究探讨双色双融合荧光原位杂交技术（DC-DF-FISH）在慢性髓系白血病（CML）中的应用价值,应用常规R-显带技术、DC-DF-FISH、RT—PCR技术检测41例CML患者的染色体核型及bcr／abl融合基因。结果表明,对于初诊CML的18例患者,R-显带显示Ph染色体阳性检出率为94．4％（17／18）,DC—DF—FISH阳性检出率也为94．4％（17／18）,对于治疗后CML的18例患者,R-显带显示14例有可分析分裂相,其中有ll例存在Ph染色体,阳性检出率为78．6％（11／14）;而用DC—DF—FISH检测治疗后患者的阳性率为94．4％（17／18）;移植后的5例患者R-显带均未检出Ph染色体,而FISH检测出1例bcr／abl基因阳性,RT-PCR证实了FISH的检测结论,但在移植患者中,RT-PCR无阳性发现。结论：双色双融合荧光原位杂交技术具有高度的准确性、可靠性,是检测CML患者bcr／abl基因重排的可靠方法,适用于CML的诊断、疗效判定及微小残留病灶的检测。     

多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常

本研究建立多色荧光原位杂交（M—FISH）技术平台，探讨其在检测急性淋巴细胞白血病（ALL）复杂核型异常中的应用。联合应用常规细胞遗传学方法和M—FISH技术分析了5例伴有复杂核型异常的ALL患者。结果表明：M—FISH证实了原有的异常t（9；22）、t（1；19）和t（y；1），同时还发现了新的异常der（1）（1：：3：：7）、der（6）t（6；9）（q？；p13）、der（1）t（1；11）、der（12）t（1；12）、der（3）t（3；5）、der（2）t（2；16）、der（9）（9：：18：：7）和der（7）（9：：18：：7），并且纠正了原有的错误分析，其中der（9）（9：：18：：7）及der（7）（9：：18：：7）为世界上首例报道。结论：M—FISH在检测ALL复杂核型中的应用前景广阔，是进行精确染色体核型分析所不可缺少的先进手段。     

RB1和D13S319探针检测慢性淋巴细胞白血病13q14缺失

目的 研究慢性淋巴细胞白血病(CLL)13q14缺失的情况.方法 运用位于13q14的序列特异性DNA探针RB1、D13S319和间期荧光原位杂交(I-FISH)技术对39例初发的CLL患者进行染色体13q14的检测.结果 B-CLL中16例(41.0%)有13q14缺失,阳性细胞率为23.0%～89.0%,其中RB1单独缺失0例,D13S319单独缺失13例(33.3%),RB1、D13S319同时缺失3例(7.7%).结论 CLL患者13q14缺失以D13S319为主,荧光原位杂交技术是研究慢性淋巴细胞白血病13q14缺失快速而可靠的方法.