超广谱β内酰胺酶分子流行病学研究

目的：了解杭州市2000－2001年产超广谱β内酰胺酶（ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离率和各基因型的流行情况。方法：收集本市5家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共198株，采用酶抑制剂增强纸片扩散法检出产ESBLs菌并测定对头孢噻肟，头孢他啶的最低抑菌浓度；等电点测定及PCR扩增对产ESBLs初步分型；PCR扩增阳性产物测序，序列分析进一步明确基因型，结果；杭州市大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs分离率为25．76％，SHV型，TEM型，CTX－M型分别占产ESBLs菌的17．65％，84．31％，基因型分布为：SHV－11，12，TEM－1，CTX－M－3，13，14及CTXM－3－like型。结论：CTX－M型ESBLs是本市产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中最主要基因型。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的基因分型

目的 :分析我院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的主要基因型。 方法 :用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌 ,用Etest检测其最低抑菌浓度 (MIC) ,分别用TEM、SHV和CTX M通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 :大部分产ESBLs菌株体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感 ,PCR扩增结果显示TEM、SHV和CTX M的阳性率分别为 6 8%、39%和 83% ,序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM 1基因 ,CTX M扩增产物均属于CTX M 3基因 ,而SHV扩增产物则分别属于SHV 12、SHV 11或SHV 1基因。结论 :CTX M 3和SHV 12是我院产ESBLs菌株的主要基因型 ;尚未发现TEM起源ESBLs。     

社区及院内感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药及耐消毒剂基因分析

目的了解本地区社区获得性和医院内感染大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率，分析和研究其耐药基因和耐消毒剂基因的携带情况。方法收集从临床标本分离的大肠埃希菌95株，经ESBLs确证试验将其中38株阳性菌株分为医院与社区获得性感染2组，用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因TEM、SHV、CTX-M-1以及耐消毒剂基因qacE△1-sull。结果社区获得性大肠埃希菌ESBLs的检出率为30％，医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率为55％。17株社区获得性感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％，CTX-M-1的检出率为35％，SHV的检出率为6％，耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为53％。21株医院内感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％，CTX-M-1的检出率为43％，SHV的检出率为14％，耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为62％。结论本地区医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率明显高于社区获得性感染大肠埃希菌ESBLs的检出率。社区获得性和医院内感染ESBLs大肠埃希菌耐药基因均以TEM型为主，耐消毒剂基因的携带率2组没有组间差异。     

重症监护病房泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因分析

目的了解重症监护病房（ICU）泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型。方法收集2006年2月至8月从ICU中段尿培养中分离的20株产ESBLs的大肠埃希菌进行6种β-内酰胺酶基因的检测。结果20株菌中检出TEM基因11株（55％），CTX-M-1基因10株（50％），CTX-M-9基因3株（15％），SHV基因2株（10％），OXA-1基因1株（5％），OXA-10基因未检出。结论我院ICU泌尿系感染大肠埃希菌产ESBLs基因主要是TEM和CTX-M-1基因，其次为CTX-M-9和SHV基因，OXA-1基因阳性率低，而OXA-10基因未检出。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药特征及基因分型

目的了解山东中医药大学附属医院分离的大肠埃希菌中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株的耐药特征及CTX-M型、TEM型、SHV型基因流行状况。方法采用双纸片法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M酶、TEM酶、SHV酶基因型DNA序列分析确认TEM及SHV基因亚型,K-B法进行药敏试验。结果 83株大肠埃希菌中45株ESBLs表型确证试验阳性,检出率为54.2%,PCR扩增结果显示83株大肠埃希菌中CTX-M型基因扩增阳性44株(53.0%),TEM型阳性32株(38.6%),SHV型阳性1株(1.2%),TEM型和SHV型测序结果分别为TEM-1亚型和SHV-1亚型。产ESBLs大肠埃希菌,除对亚胺培南、美罗培南未见耐药外,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦和头孢西丁耐药性较低,耐药率分别为13.3%、17.8%和31.1%,产ESBLs大肠埃希菌,除了对头孢菌素、单环β内酰胺类抗生素具有很高耐药性外,对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、环丙沙星和庆大霉素具有较高耐药性,耐药率均高于60%。结论该院产ESBLs大肠埃希菌基因型以CTX-M型为主。产ESBLs大肠埃希菌呈现多重耐药趋势。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β—内酰胺酶基因分型的初步研究

[目的]超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是一种新的β-内酰胺酶(BIA)，主要产生于大肠埃希菌和克雷伯菌属，能水解三代头孢菌素和单环酰酶类，并被BIA抑制剂所抑制，ESBLs的产生和播散给临床感染的治疗带来极大挑战，质粒介导的。ESBLs已发现110多种，根据亚型编码基因同源性不同分为TEM、SHV和非TEM非SHV三类，其中以TEM和SHV型最多见，多由经典TEM-1、TEM-2和SHV-1发生点突变而来，编码基因中数个位点，各地区流行的ESBLs亚型各不相同，我们对江西南昌地区2001．9—2002．5临床分离的34株表型为产。ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌分别用TEM、SHV和CTX—M型。ESBLs特定引物进行PCR扩增电泳分析。[方法]细菌质粒DNA提取与PCR扩增：采用碱裂解法提取质粒DNA行PCR扩增引物，按有关文献进行，设大肠埃希菌ATCC25922标准产酶大肠埃希菌(TEM-10、TEM-12、TEM-29和SHV-1、SHV-7、CTX—M—3)为对照，DNA电泳分析：按有关文献进行，采用1％琼脂糖凝胶电泳，电泳1～2h后，在紫外投射下观察。[结果]34株产ESBLs的菌株经质粒DNA提取，行电泳分析显示菌株均存在阳性条带，再用三种特定引物分别行质粒DNA耐药基因PCR扩增，结果TEM型引物内扩增阳性为26株，CTX—M型引物扩增阳性4株，而SHV型引物则无1例出现阳性，另4株使用三种引物行PCR扩增得未到阳性结果。文献报道，大肠埃希菌产ESBLs的亚型以TEM型为主，肺炎克雷伯菌则以。TEM、SHV型兼有，我们认为未发现SHV型可能与本次分离到的实验菌株以大肠埃希菌为主有关。有4株用三种引物扩增耐药基因未能获得阳性结果，可能还存在其他亚型的ESBLs耐药基因，也不捧除这4株是表型确证法检测中出现的假阳性株。[结论]本研究未能对扩增耐药基因作进一步基因测序研究，因此，不能确定耐药基因亚型的具体型号和深入分析。     

产ESBLs尿路感染大肠埃希菌的耐药基因型分析

目的了解尿路感染大肠埃希菌产超广谱B-内酰胺酶（ESBLs）株的耐药情况和主要基因型。方法纸片扩散法（K-B）检测细菌对抗菌药物的敏感性;用表型确证试验确定11名床尿液标本中产ESBLs的大肠埃希菌。应用聚合酶链反应（PCR）扩增菌株的CTx_M、TEM和sHV型ESBLs基因,并对PCR产物经凝胶电泳后进行初步分析。结果大部分产酶菌株对美罗培南、亚胺培南、头孢西丁等耐药性较低,而对氨苄青霉素、哌拉西林和头孢噻肟等耐药性较高。在72株ESBLs阳性菌株中,cTx—M型所占比例为48．6％,TEM型占87．5％,SHV型占0．0％,同时含有CTX-M和TEM两种基因型的占47．2％。结论尿路感染大肠埃希菌产ESBLs株的耐药情况较为严重,CTx-M和TEM是其主要基因型。应加强监控,防止产酶菌株的播散。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究

目的：了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法：用SHV型β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应(PCR)检测；编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析；对产SHV型β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测。结果：58株产ESBLs大肠埃希菌中，只有3株细菌产生SHV型β内酰胺酶(5．2％)，其中1株产生SHV—11(非ESBLs)，另2株产生SHV—12(ESBLs)；3株产SHV型β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。结论：临床分离产ESBLs大肠埃希菌中，SHV型β内酰胺酶的基因型为SHV—11和SHV—12，SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型β内酰胺酶菌株间克隆传播。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的 了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型和基因型分布情况.方法 对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增分析,选部分产物测序.结果 88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs（35.2%）菌株.产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%.PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型（90.3%）,其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型.结论 我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见.     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性分析

目的研究我院住院患儿分离产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的基因型及其相关耐药性分析。方法收集2004年10月-2005年10月我院住院患儿呼吸道分离产ESBLs大肠埃希菌75株，肺炎克雷伯菌45株，PCR限制性片段长度多态性（RFLP）分析及PCR产物克隆测序等方法明确ESBLs基因型，并结合体外抗生素敏感试验研究基因分型与细菌对不同头孢菌素及氨曲南的敏感性的关系。结果上述120株细菌中112株（93．3％）产CTX—M型p内酰胺酶；未能扩增出SHV型、TEM型ESBL基因。CTX—M型基因亚型主要为CTX—M9簇中的CTX—M-14型（78、6％），其次为CTX—M-1簇中的CTX—M-3型（19．6％），仅有1．8％为CTX—M-8型；携带CTX-M-1簇的菌株对头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦、阿莫西林-克拉维酸、头孢吡肟及氨曲南的耐药率均明显高于CTX—M-9型。结论CTX—M基因型为武汉地区儿童分离大肠埃希菌以及肺炎克雷伯菌中最常见的ESBLs，CTX—M-14为最常见基因型，其次为CTX—M-3型；CTX—M-9簇及CTX-M-1簇对头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮-舒巴坦和氨曲南的水解能力差异明显。     

95株致泌尿道感染大肠埃希菌耐药性及耐药基因表型分析

目的了解广东医科大学附属医院泌尿系感染患者大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶型(ESBLs)基因型特征和临床耐药情况。方法收集2015年1~10月该院住院或门诊患者的泌尿系感染患者尿液标本中分离培养获得的大肠埃希菌菌株,双纸片协同试验确定产ESBLs大肠埃希菌,PCR扩增技术进行基因分型。结果 95株大肠埃希菌以CTX-M-14型46例最多;TEM型32例;SHV型30例;CTX-M-1型26例;OXA-1型7例;OXA-2型4例;OXA-10型3例。ESBLs阴性菌株TEM型仅5例阳性,其余基因型别为阴性。ESBLs阳性株对多种抗菌药物的耐药率(碳青霉烯类除外)明显高于ESBLs阴性株,而CTX-M-14、CTX-M-1、TEM、SHV四种基因型别大肠埃希菌对18种抗菌药物的耐药性之间差异无统计学意义(P0.05)。结论广东医科大学附属医院泌尿系感染患者产ESBLs大肠埃希菌以CTXM型为主,对常用抗菌药物耐药率高于ESBLs阴性菌株。不同基因型别产ESBLs大肠埃希菌对抗菌药物耐药率没有明显差异。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的 了解本院超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因在大肠埃希菌中的分布类型及对常用抗菌药物耐药情况,为临床合理用药提供依据.方法 用确证法对54株产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌进行确证,用PCR的方法扩增ESBLs基因片段,用K-B纸片扩散法检测对抗菌药物的敏感性.结果 125株大肠埃希菌中,ESBLs阳性率为43.2%.对青霉素类和第一、二代头孢菌素的耐药率为100%,对头孢噻肟、头孢哌酮和头孢曲松的耐药率在95%以上,对头孢他啶的耐药率为31.5%;对环丙沙星和复方新诺明的耐药率分别为79.6%和83.3%;对β-内酰胺类/酶抑制剂复合制剂仍保持较高的敏感性;未发现耐亚胺培南菌株.含耐药基因型CTX-M 型49株、TEM型33株、SHV型1株,同时含有两种基因型达29株.结论 产ESBLs大肠埃希菌对18种抗菌药物的耐药情况明显高于非产ESBLs大肠埃希菌.基因型主要为CTX-M,其次为TEM,同时含有两种基因型达29株.明确产ESBLs病原菌的基因型及耐药性对临床抗感染治疗及感染控制有较大意义.     

医院获得性尿路感染大肠埃希菌ESBLs基因型与耐药性分析

目的了解医院获得性尿路感染大肠埃希菌(HA-UPEC)的耐药与超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型特征,指导尿路感染的临床用药与控制医院感染。方法收集住院患者尿路感染分离的168株大肠埃希菌,应用PCR扩增检测ESBLs主要基因型,分析这些菌株对常见16种抗菌药物的耐药特征。结果 168株HA-UPEC对复方磺胺甲噁唑、氨苄青霉素、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢曲松、环丙沙星的耐药率高达70%以上。16种常见抗菌药物中,头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、丁胺卡那与亚胺培南的耐药率较低。与non-ESBLs大肠埃希菌相比,产ESBLs的大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类、氟喹诺酮类的耐药率高。根据药敏谱,168株HAUPEC分为5个大组(A~E组),产ESBLs的大肠埃希菌主要分布在A、B、C组。CTX-M是主要的基因型(109株),其次是TEM(48株);59株产大于或等于2种ESBLs,3株未检测到ESBLs。耐药性聚类分组与ESBLs基因型关系分析发现,TEM在D组的分布率最高,为65.2%;SHV在C组未检测到,SHV在A组与B组间的分布不同;CTX-M在4个组的分布差异无统计学意义(P0.05),OXA在B组未检测到,OXA在A组与B组间的分布不同。结论产ESBLs大肠埃希菌的耐药情况比较严重,4种ESBLs基因型在不同组别的分布差异可能是产ESBLs的HA-UPEC耐药不同的原因之一,TEM基因型较敏感,CTX-M与SHV基因型较耐药;临床上应严格合理使用抗菌药物,及时掌握HA-UPEC ESBLs基因型与耐药性的变化,有利于减少多重耐药尿路感染大肠埃希菌的出现。     

佳木斯地区大肠埃希菌和阴沟肠杆菌质粒介导头孢菌素酶、超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的 了解佳木斯地区临床分离的大肠埃希菌和阴沟肠杆菌中质粒介导头孢菌素酶(AmpC酶)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)流行情况及主要的基因型别.方法 127株临床分离无重复大肠埃希菌81株与阴沟肠杆菌46株,采用酶提取物三维实验检测产AmpC酶和ESBLs菌株,聚合酶链反应(PCR)扩增质粒型AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型.结果 46株阴沟肠杆菌中,单产AmpC酶者、单产ESBLs者、高产AmpC酶并产ESBLs者分别占21.7％、28.3％、6.5％;81株大肠埃希菌中,单产AmpC酶者、单产ESBLs者、高产AmpC酶并产ESBLs者分别占19.8％、38.3％、9.9％.大肠埃希菌ESBLs基因型为TEM、SHV、CTX-M,质粒AmpC酶基因型为DHA.阴沟肠杆菌ESBLs基因型为TEM、SHV、CTX-M,质粒AmpC酶基因型为DHA.结论 CTX-M型和DHA-1型分别是本地区大肠埃希菌和阴沟肠杆菌ESBLs和质粒介导AmpC酶的主要流行基因型.     

大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型及毒力因子相关性研究

目的分析温州医科大学附属第一医院临床分离产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum BetaLactamase,ESBLs)大肠埃希菌耐药情况,研究大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的不同基因型与所含的毒力因子的关系。方法普通聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测不同标本来源大肠埃希菌的毒力因子papC、sfa/foc、afa/dra、iutA、aer、fimH、hly、cnf1、kpsMTII、fyuA;纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶,PCR方法检测ESBLs不同基因型的分布情况。结果产ESBLs大肠埃希菌株中,毒力因子iutA、fyuA的检出率较高,均50%;毒力因子fimH、aer的检出率为20%~40%,而毒力因子papC、sfa/foc、afa/dra和kpsMTII的检出率均较低20%;经χ2检验产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株的毒力因子分布率差异均无统计学意义(P0.5)。92株产ESBLs大肠埃希菌中,毒力因子papC在CTX-M-9群中的阳性率高于TEM群和CTX-M-1群,差异有统计学意义(P0.05);毒力因子aer在CTX-M-1群中的阳性率高于TEM群和CTX-M-9群,差异有统计学意义(P0.05)。结论各种毒力因子检出率与细菌是否产ESBLs无相关性。但ESBLs阳性菌株中不同的基因型与某些毒力因子的存在与否存在一定关系,毒力因子与产CTX-M酶大肠埃希菌耐药情况可能有关。     

医院感染铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究医院感染铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分布。方法用聚合酶链反应（PCR）对68株医院感染铜绿假单胞菌的SHV、TEM、CTX-M、OXA-10、VEB和PER等基因进行扩增和序列测定。结果68株医院感染铜绿假单胞菌中,检出26株产OXA-10群ESBLs,检出率为38．23％（26／68）;其中1株既产OXA-10群ESBLs又产TEM型广谱β-内酰胺酶;其余基因型未检出。经序列测定为OXA-10-like基因和TEM-1基因。结论医院感染铜绿假单胞菌所产的ESBLs主要为OXA-10群,且为多重耐药菌株。     

粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 调查粘质沙雷菌临床分离株β-内酰胺类耐药基因的携带情况,研究其对β-内酰胺类抗菌药物的耐药机制.方法 采用Vitek2-Compact全自动微生物系统对临床分离菌进行鉴定,检出粘质沙雷菌287株,同时进行药敏试验,选出多重耐药粘质沙雷菌135株;采用双纸片确证试验对所有287株粘质沙雷菌进行ESBLs检测、三维试验法检测AmpC酶,采用PCR法对135株多重耐药粘质沙雷菌进行β-内酰胺类抗菌药物相关基因SHV、TEM、OXA、PER、VEB、GES、IMP、VIM、FOX、CTX、KPC、DHA、MOX和oprD2检测.结果 粘质沙雷菌对氨苄西林、头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星以及哌拉西林等临床常用抗菌药物的耐药率较高,耐药率均大于60％,对亚胺培南、美罗培南、舒普深的耐药率较低,耐药率均小于10％.在287株粘质沙雷菌中,共有32株产ES-BLs,检出率为11.1％,产AmpC酶44株,检出率为15.3％,同时产ESBLs和AmpC酶细菌16株,占5.6％;PCR结果显示,在135株多重耐药的粘质沙雷菌中,检出含CTX-M基因菌株91株、TEM基因25株、SHV基因19株、DHA基因48株、KPC基因10株、MOX基因3株、OXA基因1株、oprD2基因7株.结论 本地区粘质沙雷菌多重耐药现象较为严重,其耐药基因型主要为CTX-M型和DHA基因型.