结核分枝杆菌快速培养和常规药敏试验在脊柱结核治疗中的应用

目的 探讨BACT/ALERT 3D系统快速培养和绝对浓度法药敏试验对指导脊柱结核个体化化疗的应用价值,分析研究脊柱结核耐药情况.方法 根据临床表现、影像学表现、病理检查,50例患者诊断为脊柱结核,并接受手术治疗.收集术中所取脓液、干酪样组织.低温避光保存,8 h内送检,常规处理后接种液体培养基,使用BACT/ALERT 3D系统进行分枝杆菌快速培养.培养阳性者接种PNB和TCH培养基进行菌种鉴定,并将细菌接种至含药改良罗氏培养基,按绝对浓度法进行11种常用一线和二线抗结核药物药敏试验.结果 50例标本培养阳性21例(42%),人型结核杆菌19例,牛型结核杆菌2例.结核杆菌培养和药敏试验平均耗时41 d(28～58 d).其中耐药11例(52.4%),异烟肼耐药4例(19.0%),利福平和乙胺丁醇各1例(4.8%),链霉素3例(14.3%),力克肺疾2例(9.5%),左氧氟沙星8例(38.1%).结论 结核分枝杆菌快速培养和常规药敏试验准确度高,费用低,可检测常用一线和二线药物的敏感性,适用于指导脊柱结核个体化化疗方案的制定.异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇或(和)链霉素联合用药方案对多数初治脊柱结核患者有效.     

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在脊柱结核检测中的应用

目的 探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert Mycobacterium tuberculosis/Ri-fampin,Xpert MTB/RIF)在不同类型脊柱结核组织标本检测中的作用.方法 收集127例脊柱结核患者的301份标本(脓液108份、干酪样标本94份、肉芽组织99份)进行细菌培养和Xpert MTB/RIF检测,计算阳性率.结果 127例中,培养阳性60例,阳性率47.24％;301份标本中培养阳性138份,阳性率45.85％.脓液标本和干酪样标本培养阳性率均高于肉芽组织(P<0.05).Xpert MTB/RIF检测脓液、干酪样标本和总标本阳性率高于细菌培养(P<0.05);60例细菌培养阳性的患者中,Xpert MTB/RIF法的敏感度为96.67％;利福平耐药27例,耐药率为45％,Xpert MTB/RIF检测利福平的敏感度为96.30％,特异性为94.29％;67例细菌培养阴性的患者中,36例Xpert MTB/RIF法检测阳性,敏感度为53.73％.结论 Xpert MTB/RIF在脊柱结核标本检验中有较高的敏感性,收集脊柱结核患者的各种标本尤其是脓液标本,使用Xpert MTB/RIF可方便、快速、准确地诊断结核感染和耐药,值得临床推广应用.     

脊柱结核脓液中结核分枝杆菌耐利福平基因检测的实验研究

目的:探讨脊柱结核脓液中结核分枝杆菌对利福平(RFP)的耐药机制;评价聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerasechainreactionsingle-strandconformationpolymorphism,PCR-SSCP)在脊柱结核检测耐RFP基因中的临床应用价值。方法:将脊柱结核病灶中的脓液经预处理后接种于改良罗氏培养基上,对所培养出的菌株应用PCR-SSCP进行检测。检测包括核心区域(耐药决定区域)在内的rpoB基因。结果:PCR-SSCP检测耐RFP菌株的灵敏度和特异性均为100%,与常规经典药物敏感试验无差异(P<0.05),但检测时间明显缩短,仅用2d。结论:rpoB基因突变是结核分枝杆菌对RFP耐药的重要机制,应用PCR-SSCP检测具有较高的灵敏性、特异性及快速性,是一种对脊柱结核耐RFP菌株快速检测的方法。     

分子线性探针技术在检测脊柱标本中结核分枝杆菌及其耐药性中的应用价值

目的 :评估分子线性探针技术(HAIN)应用于检测脊柱标本中的结核分枝杆菌(MTB)及其耐药性的临床价值。方法:回顾性分析首都医科大学附属北京胸科医院骨科2015年6月～2016年12月收治的脊柱感染的患者235例,其中男132例,女103例,年龄1～84岁,平均42.8±18.1岁,根据伽马干扰素释放试验、标本普通细菌培养和真菌培养结果进行分组,脊柱结核(结核组)219例,脊柱感染其他细菌或真菌(非结核组)16例,通过穿刺或手术获取脓液或组织标本(含肉芽组织、干酪样坏死物和骨质),然后在2h内采用HAIN技术和联合培养法对相同标本进行MTB检测,并进行抗结核药物的敏感性试验。比较两种方法检测MTB的敏感度和特异度,以及检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度和特异度。结果:HAIN和联合培养法检测MTB结果为阳性的分别有120例和104例。HAIN和联合培养法检测MTB的敏感度分别为54.8%和47.5%,特异度均为100%。HAIN在MTB培养阳性标本和培养阴性标本中的阳性率分别为63.5%、47.0%,两组的阳性率的差异有统计学意义(χ~2=6.006,P0.05)。HAIN检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度分别为87.5%、66.7%和85.7%,特异度分别为94.8%、86.0%和93.2%,一致性检验Kappa值分别为0.743(P0.001)、0.427(P0.001)和0.664(P0.001)。结论:HAIN在检测脊柱结核中的结核分枝杆菌及其利福平耐药和异烟肼耐药中展现出了高敏感度和特异度的技术特点,具有良好的临床应用前景。     

活动性关节结核不同病理材料PCR检测对比研究

[目的]评估活动性关节结核不同病理材料聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测结果,探索提高PCR检测阳性率的方法。[方法]2013年1月~2014年12月,对43例晚期活动性关节结核患者手术中获取脓液、干酪样组织及肉芽组织分别进行结核分枝杆菌(MTB)荧光定量PCR检测。男23例,女20例;年龄15~74岁,平均45.6岁。其中膝关节结核20例,髋关节结核15例,肩关节结核3例,踝关节结核3例,距下关节结核1例,骶髂关节结核1例。对3种不同病理材料PCR检测阳性率进行比较分析。[结果]肉芽组织74.42%(32/43)阳性率明显高于干酪样组织58.14%(25/43)和脓液37.21%(16/43),x2值12.181,3种病理材料MTB-PCR检测阳性率差异有统计学意义(P=0.002);3种病理材料联合行PCR检测阳性率88.37%(38/43)。[结论]活动性关节结核不同病理材料PCR检测阳性率有差异,多种病理材料联合检测可提高检测阳性率。     

Xpert MTB/RIF在脊柱结核诊断及利福平耐药检测中的应用价值

目的:探讨Xpert MTB/RIF技术在脊柱结核诊断及利福平耐药检测中的应用价值。方法:选取109例初步诊断为脊柱结核患者的脓液标本,分别行抗酸染色、BACTEC MGIT 960液体快速培养和Xpert MTB/RIF试验,对比3种检测结核分枝杆菌的敏感性及特异性的差异。对不同方法获取的脓液标本行Xpert MTB/RIF检测,评估脓液标本本身对Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌效能的影响。以BACTEC MGIT 960液体快速培养药敏试验结果为金标准,分析Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的效能。结果:抗酸染色、BACTEC MGIT 960液体快速培养及Xpert MTB/RIF检测的总体敏感性分别为25.92%、48.15%和77.78%。Xpert MTB/RIF检测开放手术、B超定位穿刺和穿刺活检取得脓液标本的敏感性分别为83.78%、76.47%和44.68%。以BACTEC MGIT 960液体快速培养药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感性和特异度分别为80%(4/5)和90.70%(39/43)。结论:Xpert MTB/RIF试验对脊柱结核具有较高的诊断价值,同时能对利福平耐药菌株进行检测,脓液标本中结核分枝杆菌含量对Xpert MTB/RIF检测的敏感性影响较大。     

脊柱结核脓液中结核杆菌的复苏培养

目的：探讨结核杆菌复苏因子（rpf）对脊柱结核脓液中结核杆菌生长的影响。方法：由宁夏医学院第一附属医院骨科提供的临床诊断为脊柱结核的住院患者手术获取的脓液标本25份,氢氧化钠溶液常规处理后,每份标本分为低浓度培养组、高浓度培养组和对照组。高浓度和低浓度组各设6管,分别含高、低两种浓度的rpfA、B、C、D、E及各种复苏因子组合,每管中加入7ml7H9液体培养基,并加入处理后的标本和相应的rpf;对照组1管,不加rpf。37℃培养,分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物600nm处的吸光度（OD值）,同时于上述各时间点每管取10!l培养物涂7H11平板培养,取第30天培养物行抗酸染色检查,以证实培养物为结核杆菌。同时将处理后的脓液标本进行集菌法涂片抗酸染色和改良罗氏培养检测结核杆菌。结果：结核杆菌复苏培养阳性率（84%）显著高于涂片阳性率（60%）和改良罗氏培养阳性率（44%）（P〈0.05或0.01）。复苏培养低浓度各组与高浓度各组在培养第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于对照组（P〈0.05）;复苏培养同一组内第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于第6天（P〈0.01）,而第16天和第30天与第11天比较无显著性差异（P〉0.05）;对照组第11天、第16天和第30天培养物OD值与第6天比较均无显著性差异（P〉0.05）;同一时间、同一浓度时,5种复苏因子单独应用与联合应用之间两两比较,除高浓度rpfA、B在培养第30天时分别与同一浓度、同一时间的rpfC、D、E和组合组之间及rpfA与B之间比较有显著性差异（P〈0.05）外,其余均无显著性差异;同一种复苏培养,在同一时间高、低浓度比较,第30天时高浓度rpfA、B的OD值高于低浓度rpfA、B（P〈0.05）,低浓度rpfD高于高浓度rpfD（P〈0.05）,其余均无显著性差异。11例改良罗氏培养阳性和21例复苏培养阳性者的培养生长物抗酸染色检查均为抗酸杆菌,复苏培养生长物7H11平板培养第20d时可见淡黄色菜花状菌落,证实为结核杆菌。结论：结核杆菌复苏因子能有效促进脊柱结核脓液中结核杆菌的迅速生长,复苏培养法能提高脊柱结核脓液中结核杆菌的检出率。     

脊柱结核个体化药物治疗的临床效果观察

目的 探讨药敏试验指导下的脊柱结核个体化药物治疗的临床效果.方法 选择2005年8月至2010年1月诊治的132例脊柱结核手术患者进行结核分枝杆菌培养和药敏试验,随访超过12个月者62例纳入本研究,其中男性37例,女性25例;年龄4～67岁,平均33.6岁.患者均接受手术治疗,术中收集脓液、干酪样组织,常规处理后接种培养液,使用BACT/ALERT 3D细菌自动培养分析系统快速培养,培养阳性者采用改良罗氏培养液按绝对浓度法进行药敏试验,并根据结果制定抗结核化疗方案.术后1、3、6、9、12个月复查各1次,以后每6个月复查1次,观察临床表现及红细胞沉降率、X线片、三维CT、MRI的变化,分析局部及全身结核病转归、术区骨性融合等情况.结果 检测耗时28～58 d,平均42 d;培养阳性率45.2%(28/62).耐药率达24.2%,其中异烟肼12.9%、利福平4.8%、乙胺丁醇3.2%、链霉素9.7%、帕司烟肼6.4%、左氧氟沙星14.5%、利福喷汀1.6%.随访时间12～44个月,平均21个月.术后2周内切口愈合率98.4%(61/62).椎间植骨均获Ⅰ级骨性融合,融合时间8～12个月.结论 耐药结核形势严峻,药敏试验指导下的脊柱结核个体化药物治疗是减少复发、复治的关键.     

骨关节结核病灶中耐多药结核分枝杆菌对疗效的影响

目的回顾性探索骨关节结核病灶中耐多药结核分枝杆菌对骨关节结核病疗效的影响及其对策。方法1993至1999年,确诊为复治骨关节结核病250例,男143例,女107例;年龄2～72岁,平均25.44岁;病变在脊椎、髋、膝和其他小关节。穿刺或外科手术获得病灶中脓液、干酪样物或肉芽组织等为标本,以BACTECTB460检测仪进行结核菌培养和药敏试验,NAP试剂进行初级鉴定,NTM分离培养物进一步鉴定分枝杆菌菌种。结果250例标本中,分离培养阳性培养物48例。结核分枝杆菌46例,阳性率为18.4%。其中同时耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)中三种药的结核分枝杆菌4例,同时耐异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇11例,共15例(6%)。在15例中有8例此次手术后切口破溃形成窦道,依据药敏试验结果改变化疗方案治疗,并经前后2或3次再手术,7例治愈,1例因窦道继发感染而死亡。另2例为非结核分枝杆菌(NTM),1例鉴定为鸟胞内分枝杆菌复合群,另1例鉴定未有结果,但均为耐多药(INH、RFP、SM、EMB、KM、CS)的NTM,治疗效果差。结论骨关节结核病灶中发现耐多药结核分枝杆菌(6%)和非结核分枝杆菌的病例,疗效极差,此类病例的化疗方案应个体化,可能需要多次手术才能治愈。     

应用PCR-反向膜杂交技术对疑似关节结核患者行分枝杆菌菌种鉴定

[目的]探讨PCR-反向膜杂交技术鉴定疑似关节结核临床标本中分枝杆菌菌种的应用价值。[方法]应用PCR-反向膜杂交法和培养菌种鉴定法对35例疑似关节结核和35例非关节结核临床标本行分枝杆菌菌种鉴定,应用PCR-直接测序法验证PCR-反向膜杂交法阳性鉴定结果准确性。[结果]培养菌种鉴定法在疑似关节结核组培养鉴定出8例结核分枝杆菌,1例牛结核分枝杆菌,非关节结核组培养结果均为阴性;灵敏度25.7%,特异度100%。PCR-反向膜杂交法在疑似关节结核组鉴定出18例结核分枝杆菌复合群,1例戈登分枝杆菌,1例浅黄分枝杆菌,与PCR-直接测序结果一致;非关节结核组中1例结核分枝杆菌复合群阳性,PCR-直接测序未扩增出核苷酸序列;灵敏度57.1%,特异度97.1%。两种菌种鉴定法检测阳性率差异有统计学意义(x~2=11.28,P=0.01)。[结论]PCR-反向膜杂交技术可快速将疑似关节结核中分枝杆菌鉴定至种,指导诊断。     

AIDS and tuberculosis

The diagnostic and therapeutic implications of human immunodeficiency virus (HIV) infection and tuberculosis in South Africa, where tuberculosis remains a major health problem, are reviewed. Mycobacterium tuberculosis is a high-grade pathogen and is able to establish infection early in immunodeficiency. With HIV infection showing significant entry into the heterosexual population in the RSA, an increasing number of cases with both infections can be expected to occur. The radiological appearance in combined infection is variable, ranging from a formal cavitatory picture to the more common finding of diffuse pulmonary infiltration. Intrathoracic adenopathy is a more specific sign of tuberculosis in HIV infection, since it is not associated with persistent generalised lymphadenopathy and pulmonary opportunistic infections, such as Pneumocystis carinii pneumonia. Intercurrent pneumonic infections and other pulmonary manifestations of HIV disease render the interpretation of new infiltrates on chest radiography problematical. Tuberculin skin testing remains useful in HIV infection and should be performed in all HIV-infected patients. The value of tuberculosis serology still remains questionable. Standard antituberculosis drug regimens are effective, but maintenance treatment must be continued for life and should include isoniazid and rifampicin. BCG vaccination is recommended routinely at birth in infants with HIV infection and for asymptomatic HIV-infected individuals who have not previously been immunised.