华支睾吸虫感染对小鼠肝纤维化和DX5~+NKT细胞的影响

目的探讨华支睾吸虫感染对FVB和BALB/c小鼠肝纤维化及DX5+NKT细胞的影响。方法解剖麦穗鱼,分离获取华支睾吸虫囊蚴,分别灌胃感染FVB和BALB/c小鼠。无菌分离小鼠肝脏、脾脏并采集外周血,HE和Masson染色法检测两种小鼠肝脏病理变化和纤维化程度,流式细胞术检测外周血淋巴细胞中DX5+NKT细胞的比例。结果华支睾吸虫囊蚴感染4周后,FVB小鼠肝脏和脾脏均明显增大,肝纤维化程度较BALB/c小鼠严重。感染组BALB/c小鼠肝脏中DX5+NKT细胞比例为(5.40±0.40)%,外周血为(3.44±0.60)%,脾脏(2.27±0.20)%,与对照组相比差异均无统计学意义(P0.05),且在感染1、4、7周后均无明显变化。对照组FVB小鼠的DX5+NKT细胞在肝脏、脾脏和外周血中的水平相似,为1.5%左右。其中肝脏和外周血DX5+NKT细胞比例均显著低于对照组BALB/c小鼠(P0.05或P0.01),脾脏DX5+NKT细胞在两种小鼠间差异无统计学意义(P0.05)。感染4周后,FVB小鼠肝脏DX5+NKT细胞比例为(3.54±0.15)%,对照组为(1.53±0.19)%,差异有统计学意义(P0.01)。结论 BALB/c和FVB小鼠感染华支睾吸虫后DX5+NKT细胞表现出不同的变化和分布,提示其可能在FVB小鼠肝纤维化中发挥作用。     

华支睾吸虫感染小鼠肝脏中TLR2 mRNA动态表达的初步研究

目的观察华支睾吸虫感染小鼠肝脏中TLR2 mRNA的动态表达。方法建立华支睾吸虫感染小鼠模型,在感染不同时间点(1、2、4、7、14、28、568、4 d)取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应检测肝脏TLR2 mRNA的表达,同时行HE染色观察感染小鼠各时间点肝脏病理学变化。结果与未感染对照组相比,感染组自感染后第7 d起TLR2 mRNA表达升高(P<0.05),至第28 d达到高峰,之后开始下降,至第56 d仍高于未感染对照组(P<0.05),第84 d下降至未感染对照组相近水平。病理学观察发现,感染小鼠肝脏于第4 d始,汇管区轻度炎症反应;第7 d,炎症反应加重,或见嗜酸性脓肿;第14 d,嗜酸性脓肿增多,纤维组织增生,周围小胆管增生;第28 d,胆管壁增厚,周围炎性渗出明显;第56 d,胆管上皮不同程度增生,增生的上皮呈腺样结构;第84 d,胆管周围炎性细胞减少,纤维增多,管壁增厚。结论 TLR2 mRNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,推测TLR2可能参与调控华支睾吸虫感染引发的Th1/Th2免疫应答和病理改变。     

感染弓形虫小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞的变化

目的 观察小鼠感染刚地弓形虫后脾脏CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的动态变化。 方法 将28只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组，其中3组每鼠腹腔接种弓形虫速殖子悬液200 μl（含弓形虫速殖子5×10⁴个/ml），对照组腹腔接种灭菌PBS 200 μl。分别于弓形虫感染后第2、4和6天取脾，制成单个核细胞，用实时荧光定量PCR检测脾CD4⁺ T细胞Foxp3基因表达水平，流式细胞仪检测脾CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例，并对CD4⁺CD25⁺调节性T细胞和CD4⁺ T细胞进行绝对计数。 结果 感染后第4和6天，小鼠脾脏CD4⁺ T细胞Foxp3 mRNA相对表达水平分别为 1.89±0.23和1.79±0.24， 均显著高于正常水平（1.00±0.12）（P＜0.01）；CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例从感染后第2天（15.07%±2.73%）开始上调（P＜0.05），至感染后第4 和6天分别为24.29%±3.19%和19.80%±2.66%，均明显高于正常水平（11.58%±2.04%） （P＜0.01）；脾脏CD4⁺ T细胞占脾细胞的比例及其绝对数量均从感染后第2 天开始降低，至感染后第6 天分别降至5.49%±1.71%和（1.71±0.44）×10⁶ （P＜0.01）。 结论 弓形虫感染导致小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例上调，而脾脏CD4⁺ T细胞的显著减少是促成比例上调的主要原因。     

不同途径感染华支睾吸虫的初步观察

华支睾吸虫的基本生活史表明，人或动物受染的正常途径系经口食入囊蚴所致。此外，有文献报道还可经血管、腹腔等途径感染［１，２］。为了探讨不同途径的感染效果，我们分别以经口、经皮下、经腹腔３种方式感染适宜终宿主大鼠，进行了初步观察。材料与方法１华支睾吸虫囊...     

衰老对小鼠脾CD4~+CD25~+T细胞的影响

目的 比较年轻鼠和老年鼠脾CD4~+CD25~+T细胞的数量及功能变化.方法 采用流式细胞分析法,检测脾CD4~+CD25~+ T细胞比例及其Foxp3和GITR表达;通过3H-TdR掺入测定脾CD4~+CD25~+T细胞的功能.结果 老年鼠脾CD4~+CD25~+T细胞的百分数明显增加,但是其抑制功能明显降低,并且表面GITR表达降低.结论 随着年龄的增加,小鼠脾CD4~+CD25~+T细胞抑制功能降低.     

华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。     

慢性HBV感染患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及其临床意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞与慢性HBV感染后不同临床转归和临床特点的相关性。方法在26例慢性乙型肝炎(CHB)患者、15例无症状HBsAg携带者(ASC)和11例肝炎肝硬化(LC)患者和16例正常对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平。结果CHB组和ASC组的CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分率分别为4.40±2.76%和4.43±2.10%,均高于正常对照组(2.70±0.97%),差异显著(P0.01);CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平与HBVDNA水平无相关性(r=0.018,P0.05);在HBeAg阳性与阴性组患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达也无明显的差异(P0.05)。结论慢性HBV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,可能与HBV感染的慢性化有关。     

CD4~+T细胞与血吸虫感染的保护性免疫

血吸虫病仍是一个严重的世界性公共卫生问题,据WHO最近估计,全世界仍有6亿人口处于感染血吸虫的危险环境中,其中约2亿人受感染,每年死于血吸虫病者超过10万人,造成巨大的社会经济损失.虽然全球范围内,血吸虫病防治已持续数十年,全面控制血吸虫病传播的前景仍不容乐观.血吸虫病疫苗的研制与发展已被置于防治研究的重要地位.近年来,许多研究均集中于抗血吸虫感染的获得性免疫应答机制和寻找可能诱导保护免疫的相关寄生虫抗原分子等基础研究.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在寄生虫感染中的作用研究

近年来调节性T细胞（Treg）的发现和成功分离,使人们对免疫应答的机制有了进一步的认识。调节性T细胞具有免疫负向调控作用,参与维持机体的免疫稳定,根据其表面标记、细胞因子分泌和发挥作用的方式,     

感染华支睾吸虫经治疗后豚鼠T淋巴细胞亚群的变化

感染华支睾吸虫经治疗后豚鼠Ｔ淋巴细胞亚群的变化徐州医学院寄生虫学教研室刘宜升，杜文平徐州医学院传染病学教研室陈明华支睾吸虫的感染可明显影响宿主的细胞免疫功能，表现为抑制性Ｔ细胞（Ｔ８细胞）数量增加，辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ细胞）数量减少，Ｔｈ／Ｔｓ比值倒置...     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在约氏疟原虫感染小鼠应答早期中的作用

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在约氏疟原虫感染早期的作用及意义。方法用约氏疟原虫(致死型)感染DBA/2和BALB/c小鼠,计数红细胞感染率;在感染后第0d、3d、4d、5d和6d提取脾细胞应为,流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFNγ、IL10和TGFβ1水平。结果DBA/2小鼠的IFNγ水平在感染后第3d迅速升高后缓慢下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数仅在感染后第5d出现有意义的升高(P<0.05),而IL10水平和CD4+T细胞数量都无明显改变。BALB/c小鼠的IFNγ水平在感染后第3d出现有意义的升高后迅速下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数在感染后第3d开始明显升高,于感染后第5d出现下降(P<0.05),而IL10水平自感染后第3～6d持续维持高水平(P<0.05),CD4+T细胞数量于感染后第6天明显下降(P<0.05)。结论CD4+CD25+调节性T细胞在致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠早期可能通过抑制性细胞因子IL10发挥免疫抑制作用。     

CD8~+ T细胞在CD4~+ T细胞耗竭小鼠卡氏肺孢子虫肺炎的致病作用

[目的 ]验证参与卡氏肺孢子虫致病过程中 ,宿主炎性反应及其对肺功能的影响。 [方法 ]:将小鼠CD4+ T细胞耗竭或将小鼠CD4+ 和CD8+ T细胞都耗竭后 ,经气管接种卡氏肺孢子虫。观察在CD8+ T细胞缺如或存在的情况下 ,小鼠呼吸机能的改变和肺炎的程度。 [结果 ]耗竭CD4+ 和CD8+ T细胞后 ,小鼠虽发生PCP ,但呼吸频率无明显加快 ,肺组织损伤程度也较轻。相反 ,仅耗竭CD4+ T细胞保留CD8+ T细胞的小鼠的呼吸频率明显加快 ,肺内炎性细胞反应和肺组织损伤程度均较重。支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的CD8+ T细胞和嗜中性白细胞的数量明显增多。 [结论 ]PCP的致病过程中 ,宿主的炎性细胞反应对肺功能有直接损伤作用 ,其中CD8+ T细胞似起主要作用。     

结核病人外周血CD_4~+T细胞TLR2的表达

目的研究结核患者与正常人Toll样受体TLR2的表达情况。方法选取肺结核(PTB)患者39例,结核性胸膜炎(TP)患者22例为研究组,38例健康者为对照组。通过流式细胞仪分析TLR2在结核病人中的活化的CD_4~+TT细胞和静息CD_4~+TT中及健康者中的表达,用实时定量PCR检测健康者和结核病人中的TLR2 mRNA的相对含量。结果在活化的CD_4~+TT细胞中TLR2阳性CD_4~+TCD+8T细胞,较静息CD_4~+TT细胞表达较高,TLR2在结核病人中的活化的CD_4~+TT细胞和静息CD_4~+TT中的表达量都明显高于健康者(P0.001,P0.05);在结核病人中TLR2 mRNA相对含量要明显高于健康者(P0.01)。结论对TLR2的测定对于结核病的诊断有一定指导意义,可作为于结核的诊断的辅助手段。     

豚鼠感染华支睾吸虫后T淋巴细胞亚群的动态变化

用酸性α醋酸萘酯酶(ANAE)染色法,动态观察人工感染华支睾吸虫豚鼠外周血T淋巴细胞及其亚群的变化。结果表明,淋巴细胞、T淋巴细胞和抑制性T细胞(TS)的数量平行变化,在前3wk略有升高,在第5、6wk和第12wk形成2次高峰,其中Ts细胞数的增长幅度相对较大。辅助性T细胞(Ts)从第5wk起呈下降趋势,Th/Ts比值随感染时间的延长逐渐降低。表明豚鼠感染华支睾吸虫后,免疫功能受到抑制。     

多房棘球蚴感染小鼠脾CD4~+T细胞亚群及其功能耗竭的变化

目的研究不同数量多房棘球蚴感染对小鼠脾CD4~+T细胞亚群及其免疫功能的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组15只,分别为假手术组、低数量感染组(50个原头节)、中数量感染组(500个原头节)和高数量感染组(2 000个原头节)。小鼠麻醉后经肝门静脉部位穿刺,注射不同数量原头节,假手术组注射等量生理盐水。于感染后2、 12和24周各组分别取5只小鼠,取脾组织研磨分离淋巴细胞。流式细胞术检测各组小鼠脾CD4~+T细胞记忆表型、不同亚群比例、免疫抑制性分子淋巴细胞活化蛋白3 (LAG3)表达。采用GraphPad Prism 6.0软件进行作图和统计学分析。结果感染后2周,低数量和中数量感染组小鼠脾CD4~+IFN-γ~+T细胞比例分别为(7.54±1.44)%、(7.58±3.17)%,高于假手术组的(3.52±1.03)%(P 0.05);CD4~+TNF-α~+T细胞比例分别为(39.34±4.19)%、(39.53±10.74)%,高于假手术组(22.62±1.50)%(P 0.01)。感染后12周,低数量和中数量感染组小鼠脾CD4~+IFN-γ~+T细胞比例分别为(16.52±0.77)%、(22.98±4.32)%,高于假手术组(16.88±2.49)%(P 0.05); CD4~+TNF-α~+T细胞比例分别为(27.26±2.12)%、(28.36±5.24)%,高于假手术组(19.72±3.87)%(P 0.05); CD4~+IL17A~+T细胞比例分别为(10.70±1.81)%、(11.52±2.68)%,高于假手术组(5.40±1.32)%(P 0.01);同时,低数量和中数量感染组小鼠脾CD4~+IL-4~+T细胞比例分别为(2.87±0.84)%、(3.50±0.77)%,高于假手术组(1.75±0.83)%(P 0.01); CD4~+IL-10~+T细胞比例分别为(4.63±0.78)、(7.09±2.42)%,高于假手术组(3.03±0.79)%(P 0.01)。感染后24周,中数量、高数量感染组小鼠脾CD4~+IFN-γ~+T、 CD4~+TNF-α~+T、 CD4~+IL-4~+T、 CD4~+IL-10~+T和CD4~+IL17A~+T细胞的比例均高于假手术组(P 0.05),且高数量组小鼠脾Treg细胞的比例高于假手术组(P 0.01),各感染组小鼠脾效应记忆性CD4~+T细胞比例高于假手术组;各感染组小鼠脾CD4~+LAG3~+T细胞比例分别为(16.45±4.89)%、(14.54±4.96)%、(14.62±2.43)%,高于假手术组(8.43±3.46)%(P 0.05)。感染后24周,高数量组小鼠脾CD4~+T细胞中分泌IFN-γ和TNF-α的LAG3阳性群细胞比例分别为(1.67±0.66)%、(0.69±0.27)%,低于阴性群的(5.11±1.81)%、(31.7±12.1)%(P 0.01)。结论低、中数量多房棘球蚴感染后,小鼠可能利用T1型和T17型免疫应答优势对虫体起到杀伤和清除;而高数量感染诱导脾T1/T2型和T17/Treg型免疫应答失衡,以及CD4~+T细胞上调LAG3分子表达,导致功能耗竭,造成棘球蚴慢性寄生。     

华支睾吸虫不同发育阶段miRNA表达谱分析北大核心CSCD

目的检测华支睾吸虫不同发育阶段微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱,分析其生物学特征,探索其在华支睾吸虫发育过程中的潜在作用。方法使用高通量测序技术系统分析华支睾吸虫虫卵、嚢蚴和成虫3个不同发育阶段miRNA的表达情况,鉴定阶段特异性的miRNA,并经RT-qPCR对测序结果进行分析和验证。结果本研究在成虫中总共鉴定出53个已知miRNAs,虫卵55个已知miRNAs,嚢蚴53个已知miRNAs,其中在3个阶段中均表达的已知miRNAs有52个,只有1个已知miRNA(new_miR-006)仅在虫卵中表达。成虫、虫卵、嚢蚴3个阶段分别预测出99、92、108个新miRNAs,其中在3个阶段均表达的新miRNAs有66个。成虫,虫卵、嚢蚴3个阶段特异性表达的miRNAs分别是7、10、26个。随机选择10个miRNAs进行RT-qPCR验证,均与测序结果相一致。结论华支睾吸虫成虫、虫卵和嚢蚴miRNA表达谱不同,均存在期特异性表达的miRNAs,这些miRNAs可能在华支睾吸虫的不同发育阶段发挥调节作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与1型糖尿病

1型糖尿病（T1DM）为儿童及青少年最常见的内分泌疾病,近年来全球患病率以每年3％增长,预计2010年发病率较1980年增加40％。1型糖尿病其确切机制还未明确,目前普遍接受的是由T淋巴细胞介导的胰岛β细胞特异性自身免疫病。     

感染鸭乙型肝炎病毒鸭外周血CD4~+和CD8~+T淋巴细胞水平变化

目的了解实验感染鸭乙型肝炎I型病毒(DHBV)的实验鸭外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞数变化及意义。方法采用经外周静脉注射含DHBV血清制备感染鸭,应用流式细胞仪检测感染DHBV实验鸭外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞数。结果在感染DHBV 7日后,实验鸭血清HBs Ag、鸭HBe Ag和抗-鸭HBc均阳性,说明感染成功,感染动物肝功能损害明显,血清ALT、AST水平急剧升高,与健康对照组比,差异显著(P0.01);感染动物外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞分别为(38.41±9.59)%和(23.80±6.44)%,均显著高于对照组[分别为(23.06±12.30)%和(17.65±10.83)%,P0.01]。结论当HBV侵入机体时就会激发细胞免疫反应,大量的CD4+T和CD8+T细胞被释放入血,参与病毒清除和肝损伤过程。     

心肌梗死患者CD4~+CD25~+Foxp3~+ T细胞检测及意义

目的探讨心肌梗死患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的水平及意义。方法采用流式细胞分析法,检测20例急性心肌梗死患者(AMI组)、21例陈旧性心肌梗死患者(OMI组)和36例健康体检者(对照组)外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平。结果 AMI组、OMI组的CD4+CD25+T细胞/CD4+T细胞比例分别为(7.20±1.96)%和(7.55±1.77)%均低于对照组的(8.81±1.50)%(P0.05);CD4+CD25+Foxp3+T细胞/CD4+T细胞比例AMI组为(1.42±0.38)%和OMI组为(1.46±0.55)%均比对照组(1.75±0.58)%低(P0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞比例降低可能打破了外周免疫耐受,参与了心肌梗死患者动脉粥样硬化的发生发展。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在丙型肝炎发病中的作用

CD4+CD25+调节性T细胞是一具有免疫调节作用的细胞群,急性感染期HCV的清除与具有活力的特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞的免疫反应有关。本文主要就CD4+CD25+调节性T细胞的一般特性及其在丙型肝炎发病机制中的研究进展作一综述。