针刺对痴呆小鼠线粒体mPTP相关蛋白的调整

[目的]观察"三焦针法"对线粒体通透性转换孔(mPTP)孔开放相关蛋白亲环蛋白D(CypD)、线粒体Aβ(Aβ)的调控作用,探讨"三焦针法"治疗阿尔茨海默病(AD)的机制。[方法]选取快速老化小鼠SAMP8为模型,采用Western blot等方法,观察小鼠皮质、海马线粒体Aβ、CypD含量的变化,以及"三焦针法"对其的影响。[结果]SAMR1正常组小鼠皮质与海马线粒体中Aβ42、CypD表达较低,SAMP8对照组小鼠皮质海马线粒体中Aβ42、CypD表达上调,针刺组小鼠皮质与海马线粒体中Aβ42、CypD表达,相对于SAMP8对照组下调或有下调趋势。[结论]"三焦针法"具有调整SAMP8鼠神经元线粒体皮质、海马Aβ42、CypD含量的作用。     

针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的]研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法]选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果]R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论]三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

“三焦针法”对SAMP10鼠海马CA1区神经元可塑性影响的性别对照研究

目的:对"三焦"针法延缓脑衰老的效应作出正确评价;观察"三焦"针法对SAMP10鼠海马CA1神经元可塑性影响的性别差异;方法:以快速老化模型小白鼠SAMP10为脑衰老动物模型,观察分析"三焦"针法对该雌雄鼠甲苯胺蓝染色后海马CA1区神经元数量及形态的影响。结果:针刺组神经元功能和形态好于P10组小鼠,趋向正常SAMR1小鼠水平,在神经细胞数量和细胞体积等方面有所改善。在平均尼氏体总面积、平均尼氏体积分光度、神经元丢失率、增长率等方面针刺组雄鼠与雌鼠存在差异(P0.05)。结论:"三焦"针法可以减少或延迟SAMP10小鼠神经元的丢失,减少神经元的死亡,改善神经元的可塑性,针法的干预作用存在性别差异。     

快速老化小鼠脑组织Aβ、CypD单核苷酸多态性及“三焦针法”对其作用的研究

[目的]研究快速老化小鼠SAMP8和同品系正常小鼠SAMR1海马、皮质神经元中淀粉样多肽蛋白(Aβ)、亲环蛋白D(CypD)差异表达是否与其基因CDS区DNA序列单核苷酸多态性(SNP)有关,以及"三焦针法"对Aβ、CypD基因CDS区DNA序列是否有干预作用。[方法]选取快速老化小鼠SAMP8为模型,采用PCR扩增、SNP一代测序等法比对小鼠皮质、海马组织中Aβ基因CDS区引物设计位点(17个)以及CypD基因CDS区引物设计位点(6个)的DNA序列,并观察"三焦针法"对Aβ、CypD基因CDS区DNA序列是否有干预作用。[结果]SAMR1正常对照组、SAMP8对照组小鼠皮质、海马Aβ和CypD基因CDS区引物设计位点DNA序列均未发生SNP,针刺组小鼠皮质、海马Aβ和CypD基因CDS区引物设计位点DNA序列未发生变化。[结论]Aβ、CypD mRNA及蛋白差异表达与其基因CDS区DNA序列SNP无关,"三焦针法"对Aβ、CypD基因CDS区DNA序列无干预作用,并推测AD的发生与Aβ、CypD基因CDS区DNA序列SNP无关,"三焦针法"并非通过改变Aβ、CypD基因CDS区DNA序列的途径实现对Aβ、CypD mRNA及蛋白含量的调节作用。     

针刺疗法对老年痴呆小鼠脑内p53蛋白表达的影响

目的 观察益气调血,扶本培元针刺法对老年痴呆小鼠脑内p53蛋白表达的影响。方法 选取SAMP8小鼠,分为SAMP8对照组、针刺组、非穴组,并设同源SAMR1对照组。针刺组采用益气调血,扶本培元针法,针刺膻中、中脘、气海、血海（双）、足三里（双）;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。采用Western blot法测定小鼠皮质和海马内p53蛋白表达;HE染色法观察各组小鼠海马CA1区、颞叶、枕叶神经元细胞病理形态;免疫组化法测定皮质p53阳性细胞表达情况。结果 SAMP8皮质内p53蛋白呈较高表达的状态,针刺治疗后明显下调,与SAMP8对照组差异明显（P<0.05）,与SAMR1对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）;非穴刺激对p53蛋白表达无显著影响。海马组织内,各组p53蛋白表达差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 益气调血,扶本培元针刺法能下调小鼠脑内p53蛋白表达,改善脑细胞病理形态,从而提高老年痴呆小鼠的学习记忆能力,改善其认知功能,且具有腧穴特异性。     

基于RhoA/ROCK通路探讨三焦针法对老年痴呆小鼠学习记忆及突触可塑性的影响

目的:观察三焦针法对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马小G蛋白鸟苷三磷酸酶亚家族蛋白RhoA/Rho激酶(ROCK)通路的调控作用,探讨其改善AD小鼠学习记忆的机制。方法:取SAMP8老年痴呆小鼠40只,用随机数字表法分为老年痴呆模型组(模型组)、三焦针法针刺组(针刺组)、非穴位针刺组(非穴组)、法舒地尔组,每组10只,另取SAMR正常衰老小鼠10只,作为正常衰老组。针刺组选取"膻中""中脘""气海"及双侧"血海""足三里"进行针刺干预,非穴组取左右肋下固定非经非穴点各一个进行针刺干预,法舒地尔组经腹腔注射法舒地尔溶液(25 mg/kg),各组小鼠均在分组后第2天开始干预,连续28 d, 1次/d。末次干预后用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;HE染色法观察小鼠海马组织的病理变化;FD快速高尔基染色试剂盒检测小鼠海马CA1区神经元树突棘数目;ELISA法检测小鼠海马组织β-淀粉样蛋白42(Aβ42)与磷酸化Tau蛋白(p-tau)含量;Western blot法检测小鼠海马组织RhoA、ROCK、F-肌动蛋白(F-actin)、磷酸化切丝蛋白cofilin(p-cofilin)相对...     

针刺对SAMP8鼠升血作用的研究

目的观察"三焦针法"对快速老化痴呆模型SAMP8鼠红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板等的影响,探讨"三焦针法"的升血作用及意义。方法选取8月龄快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,随机分为对照组(P8组)、针刺组和非经非穴组;同源正常老化的SAMR1鼠作为正常老化对照组(R1组)。针刺组运用韩景献教授"三焦针法",R1组和P8组不予针刺。15 d后取血测定小鼠各血球计数,分析针刺对SAMP8鼠血细胞数的影响。结果快速老化SAMP8鼠血细胞数低于正常老化SAMR1鼠,予针刺治疗后,SAMP8鼠血细胞数增加,其中白细胞、红细胞、血小板等均有不同程度升高,血红蛋白、淋巴细胞、单核细胞显著上升(P<0.05或P<0.01)。结论 "三焦针法"可以促进血细胞增加,提高升血能力,可运用于防治贫血。     

以生物信息学工具探讨“三焦”针法治疗老年性痴呆的细胞生物学机制

目的:观察"三焦"针法对快速老化痴呆小鼠(SAMP8)痴呆状况的影响,探讨"三焦"针法治疗老年性痴呆的细胞生物学机制。方法:将7月龄SAMP8随机分为对照组、穴位组和非穴组,每组20只。穴位组取"膻中""中脘""气海""血海""足三里"穴针刺治疗,每穴针刺30s,每周针刺6d,连续4周。以Morris水迷宫隐蔽平台实验、空间探索实验检测SAMP8学习记忆能力的变化;提取小鼠海马组织,以基因芯片方法获得针刺相关的差异表达基因,再通过生物信息数据库工具分析差异表达基因的信息,利用等重同位素定量蛋白质组学技术(iTRAQ)和免疫荧光技术观察海马神经细胞及突触形态验证基因芯片分析结果。结果:与对照组和非穴组相比,穴位组小鼠第4、5天的逃避潜伏期显著缩短,停留在原象限平台的时间显著增加(P0.05)。与非穴组比较,穴位组上调差异基因的细胞定位主要集中于神经元突起、细胞骨架。穴位组286个表达上调的蛋白中,与神经突起、细胞骨架相关的蛋白组分共有47个,多于非穴组的11个。免疫荧光结果显示,与对照组和非穴组比较,穴位组海马组织神经元突起结构更完整、更密集。穴位组神经元突起高亮区高度显著大于非穴组和对照组(P0.05)。结论:调节神经元突起和细胞骨架相关基因和蛋白表达及相关功能,可能是"三焦"针法治疗老年性痴呆的细胞学机制之一。     

“原络通经”针法对SAMP8小鼠病理形态学及NMDAR表达的影响

目的：观察“原络通经”针法对SAMP8小鼠海马CA-1区病理形态学及NMDAR表达的影响,探讨“原络通经”针法治疗阿尔茨海默病(AD)的潜在作用机制。方法：将30只SAMP8雄性8月龄小鼠随机分为SAMP8空白对照组、SAMP8+“原络通经”针法治疗组以及SAMP8+百会穴针刺组,将10只SAMR1小鼠作为SAMR1正常对照组。其中SAMP8+“原络通经”针法治疗组选择丰隆穴、太白穴、关元穴及百会穴针刺,SAMP8+百会穴针刺组选择百会穴针刺。SAMP8+“原络通经”针法治疗组以及SAMP8+百会穴针刺组均针刺1次/d,共干预30 d,每7 d休息1次。比较4组小鼠的学习记忆能力、海马CA-1区病理损伤程度以及NMDAR表达水平。结果：HE染色结果提示,SAMP8对照组出现核皱缩及空泡,相比于SAMP8对照组,SAMP8+“原络通经”针法治疗组和SAMP8+百会穴针刺组在干预后改善明显,未见严重的病理损伤。Western Blot检测结果提示,相比于SAMP8对照组,SAMP8+“原络通经”针法治疗组和SAMP8+百会穴针刺组的NMDAR表达水平显著降低。结论：“原络通经”针法可以改善...     

针刺抑制p53mRNA过表达并改善SAMP8小鼠的认知能力

[目的]探讨针刺延缓脑衰老的机制。[方法]将快速老化痴呆小鼠(SAMP8)及其正常同源对照小鼠(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8对照组、SAMP8针刺组和SAMP8非穴组。针刺组给予"益气调血,扶本培元"针法治疗;非穴组针刺双胁下两个固定非穴位点;其余两组给予等量的捉抓刺激;每天1次,持续15 d。采用Morris水迷宫测定动物的学习记忆能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定海马p53mRNA表达。[结果]与SAMR1对照组相比,SAMP8各组的学习能力及记忆保持能力出现明显损伤,表现为思维僵化、学习过程减慢;其海马p53mRNA表达明显升高。针刺明显改善SAMP8的认知能力,并降低海马p53mRNA表达,甚至低于正常组。[结论]SAMP8的认知损害与p53基因表达异常有关,针刺通过调节p53mRNA表达延缓SAMP8脑衰老的进程,是针刺改善衰老后认知能力下降的原因之一。     

针刺调控NLRC5抑制NF-κB通路减轻SAMP8小鼠脑内神经炎症反应的研究

[目的]观察针刺调控NLRC5抑制核转录因子-κB(NF-κB)通路减轻SAMP8脑内神经炎症反应的作用.[方法]将7月龄雄性快速老化鼠SAMP8及其同源正常对照小鼠SAMR1分为SAMR1组、SAMP8组和SAMP8针刺组.针刺组予以针刺治疗,采用"调神益智"针法进行治疗,取穴为水沟、内关和三阴交;针刺每日1次,持续...     

ACⅠ和PLCβ1在SAMP8脑组织中的表达

目的:探索在不同月龄快速老化痴呆小鼠SAMP8皮质和海马中ACⅠ和PLCβ1的表达情况。方法:利用Western-blot方法检测ACⅠ和PLCβ1在8月龄和18月龄快速老化痴呆小鼠SAMP8的表达,并以正常老化小鼠SAMR1作为对照研究。结果:与同月龄SAMR1相比,ACⅠ和PLCβ1在8月龄小鼠SAMP8皮质和海马中的表达无明显异常(P>0.05),而到18月龄时,SAMP8皮质部位PLCβ1表达量低于SAMR1(P<0.05),海马部位ACⅠ的表达量低于SAMR1(P<0.05)。结论:ACⅠ和PLCβ1参与了AD的病理进程,前期能维持一种动态平衡,其失衡主要发生于AD后期。     

针刺调控Hsp84、Hsp86表达延缓快速老化痴呆小鼠SAMP8脑衰老作用的研究

目的探讨热休克蛋白(Hsp)84、Hsp86与快速老化痴呆小鼠SAMP8(senescence accelerated mouse prone 8)脑衰老的相关性及针刺的调控作用。方法取10只正常老化小鼠SAMR1(senescence accelerated mouse resistant 1)为正常对照组。另取30只SAMP8按照随机数字表法分为空白对照组、针刺组和非穴组,每组10只。针刺组给予"三焦"针法治疗,非穴组针刺双胁下两个固定非穴位点;其余两组给予等量的捉抓刺激;均每天1次,持续15天。评价动物神经肌肉协调性,检测海马氧化损伤及蛋白质羰基化水平;Real-time PCR和Western blot法检测海马及Neuro-2a细胞中Hsp84和Hsp86mRNA和蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,空白对照组紧绳实验成功率降低(P0.01),海马超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平下降(均P0.01),超氧阴离子和蛋白质羰基化水平升高(P0.01,P0.05),海马Hsp84、Hsp86mRNA和蛋白呈低表达(均P0.01);与空白对照组和非穴组比较,针刺组紧绳实验成功率提高(P0.05);海马SOD和GSH-Px水平上升(P0.05,P0.01),超氧阴离子和蛋白质羰基化水平降低(P0.01,P0.05);海马Hsp84、Hsp86mRNA和蛋白呈高表达(均P0.01)。Aβ25-35处理后的Neuro-2a细胞中Hsp84和Hsp86mRNA表达水平降低(均P0.01)。结论衰老后蛋白质氧化损伤增多及Hsp84和Hsp86表达下降是造成SAMP8脑内变性蛋白堆积和脑衰老的部分原因。针刺通过调控Hsp84和Hsp86表达延缓脑衰老。     

三焦针法对阿尔茨海默病模型小鼠学习和记忆功能及相关基因的影响

目的探讨三焦针法治疗阿尔茨海默病(AD)的可能作用机制。方法以SAMP8小鼠为AD动物模型。60只SAMP8小鼠随机分为对照组、针刺组和非穴组,每组20只。针刺组小鼠给予三焦针法干预,穴位选取"膻中""中脘""气海"及双侧"血海""足三里"。非穴组取双侧肋下固定非经非穴点,左右各1个。对照组进行与以上两组相同时间、程度的捉抓刺激。每天1次。干预1个月后连续5天每天采用Morris水迷宫隐蔽平台测试检测各组小鼠学习记忆能力,再提取各组小鼠海马组织的总RNA用于基因芯片检测。基因芯片检测数据导入LINCS项目下CREEDS网络在线分析工具进行模拟效应、反向效应模式的基因差异表达模式分析。提取各组小鼠海马组织,采用等重同位素多标签相对定量蛋白质组分分析(i TRAQ)法,以对照组海马蛋白质谱为背景,寻找针刺组与非穴组差异表达蛋白,并在DAVID在线生物信息学注释工具中检索相应蛋白生物学功能。结果针刺组小鼠第1-5天逃避潜伏期均较对照组和非穴组显著缩短(P 0. 05);反向效应模式分析结果显示,针刺组反向效应相关的疾病是亨廷顿舞蹈病和胎儿酒精发育失调疾病;单基因反向效应模式分析结果显示,与针刺组基因表达模式相反度最高排名前2的基因分别是Pde10a和Pink1;单基因模拟效应模式分析显示,针刺效应在基因表达水平与Wfs1和Psap基因过表达的效应相似;小分子药物模拟效应模式分析显示,针刺组在基因表达水平与小分子药物D型丝氨酸的表达特征最相似。对i TRAQ定量分析蛋白质组的注释,发现针刺上调了神经元突起以及线粒体相关蛋白的表达。结论三焦针法可明显改善SAMP8小鼠学习记忆能力,可能是通过触发一种包含调节神经元突触可塑性、激发神经元内质网细胞应激反应和神经保护、逆转神经退行性病变进程等多个功能模块的复杂反应模式实现。     

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8海马神经元凋亡相关蛋白影响的研究

目的观察地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8海马神经元凋亡相关蛋白的影响,探讨地黄饮子治疗AD的作用机制。方法以快速老化小鼠SAMP8为研究对象,依据"补肾益髓,化痰行瘀,开窍醒神"的原则,给予地黄饮子灌胃,1次/d,连续灌胃28 d。采用免疫组化法观察地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8小鼠海马组织凋亡相关蛋白bax、bcl-2及cyt-c的影响。结果与模型组比较,地黄饮子可降低快速老化小鼠bax、cyt-c的表达,提高bcl-2的表达。结论地黄饮子可改善SAMP8小鼠海马神经元的细胞凋亡情况。     

SAMP10鼠脑衰老相关基因HSP86、HSP84的表达及针刺影响的研究

目的：探讨针刺延缓衰老的作用机制。方法：采用快速老化小鼠SAMP10、SAMR1为模型，运用RT-PCR和地高辛标记的非放射性Northern blot技术，观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马HSP84、HSP86基因表达的变化。结果：SAMP10对照组小鼠热休克蛋白HSP84、HSP86在全脑、皮层、海马中的表达下调，针刺后表达上调并趋向于正常组。结论：SAMP10小鼠脑衰老与热休克蛋白HSP84、HSP86基因表达异常有关，针刺可以通过调节HSP84、HSP86基因表达增强细胞保护、抑制细胞凋亡、抵抗氧化应激，从而起到延缓衰老的作用。     

针刺对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的影响

目的:研究"益气调血,扶本培元"针法对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的影响。方法:选取SAMP8小鼠,分为SAMP8对照组、针刺组、非穴组,并设SAMR1对照组。针刺组采用"益气调血,扶本培元"针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果:"益气调血,扶本培元"针法能有效改善SAMP8小鼠的认知能力。     

针刺对SAMP8小鼠海马GLUT3、MCT2、MCT4表达的影响

目的:观察针刺对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马组织能量底物转运蛋白GLUT3、MCT2、MCT4表达的影响,探讨针刺促进学习记忆能力的能量底物转运机制。方法:13只SAMP8小鼠随机分为模型组和针刺组,7只同月龄SAMR1小鼠作为对照。针刺组选择"百会"穴、"涌泉"穴进行针刺,1次/天,5次1疗程,共治疗8个疗程。采用Morris水迷宫对学习记忆能力进行评价,Western Blot检测小鼠海马组织GLUT3、MCT2、MCT4蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期显著延长(P0. 01),穿越平台次数减少(P0. 05);与模型组相比,针刺组小鼠第1~2天逃避潜伏期改变无统计学差异(P0. 05),第3、4、5天逃避潜伏期缩短(P0. 05),穿越平台次数增加(P0. 05)。与对照组相比,模型组小鼠海马组织GLUT3、MCT2蛋白表达显著下降(P0. 01),MCT4蛋白表达下降(P0. 05);与模型组相比,针刺组小鼠海马组织GLUT3、MCT2蛋白表达显著升高(P0. 01),MCT4蛋白表达变化不具有统计学意义(P0. 05)。结论:针刺可以提升SAMP8小鼠学习记忆能力,对海马组织能量底物转运蛋白GLUT3、MCT2具有提高作用。     

针刺对快速老化小鼠SAMP10转录调节因子NF-E2、YB-1、LRG47的影响

目的:探讨针刺延缓衰老的机制。方法:采用快速老化小鼠(SAMP10)、正常老化小鼠(SAMR1)为模型,运用地高辛标记的非放射性Northernblot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马NF-E2、YB-1、LRG47基因表达的变化。结果:SAMP10对照组小鼠NF-E2、YB-1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论:SAMP10小鼠脑衰老与NF-E2、YB-1、LRG47基因表达异常有关,针刺可以通过调节NF-E2、YB-1、LRG47基因表达增强红细胞系统功能和细胞增殖,提高细胞抗菌免疫,从而起到延缓衰老的作用。     

基于“肾脑相济”理论的电针疗法对SAMP8小鼠海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3表达的影响

目的:研究以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法对阿尔茨海默病小鼠(SAMP8)海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的影响,探究以"肾脑相济"为治疗原则的电针疗法对阿尔茨海默病的治疗机制。方法:6只SAMR1小鼠作为对照组,18只SAMP8小鼠随机分为模型组,西药组及电针组。西药组采用美金刚灌胃,电针组采用电针刺激"百会""肾俞""太溪"。连续8周;运用免疫组化染色观察比较海马CA1区蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的形态学变化,Western Blot检测海马LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白表达水平。结果:免疫组化结果显示,模型组小鼠海马CA1区细胞质染色较深,呈棕褐色,与模型组相比,西药组,电针组大鼠海马CA1区细胞的细胞质染色较浅,细胞层细胞数量多,排列整齐,神经元结构完整,胞质染色均匀,清晰。Western Blot检测显示,与模型组相比,电针组和西药组LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白含量低于模型组(P0.05)。结论:以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法,能够通过降低阿尔茨海默病小鼠脑内海马CA1区神经元内线粒体自噬的发生,进而有助于神经元的再生与修复。