苯甲酸雌二醇预处理的去势大鼠致前后血清雌二醇和海马组织雌激素β受体的变化

目的:分析不同剂量苯甲酸雌二醇(EB)预处理的去势大鼠以海人藻酸(kainicacid,KA)致前后血清雌二醇(E2)和海马组织雌激素β受体(ERβ)的水平,探讨E2、ERβ与KA之间的相关性。方法:将去势大鼠随机分为对照组(O组)、不同剂量EB干预组(O E)、致组(O KA)和不同剂量EB预处理致组(O E KA)。分别利用电化学发光法与免疫印迹法检测E2浓度与海马组织ERβ表达水平的变化。结果:①除小剂量EB(25μg·kg-1)预处理的去势大鼠血清E2水平(88.8±3.23)pmol·L-1与O组(88.49±8.31)pmol·L-1差异无统计学意义外,其余剂量EB预处理(≥EB1mg·kg-1)的各组去势大鼠血清E2浓度均明显高于O组,且E2水平随EB的增加而增高,但不影响去势大鼠海马组织ERβ的表达。②癫发作的早期(癫发作后2h内)不仅降低了癫动物血清雌激素的水平,也降低了海马组织ERβ的表达,但这种降低与癫发作的轻重程度无关。结论:去势大鼠海马ERβ蛋白的表达水平主要与癫发作有关,雌激素对癫发作的影响可能并不体现在其对ERβ表达的影响。     

苯甲酸雌二醇预处理的去势大鼠致(癎)前后血清雌二醇和海马组织雌激素β受体的变化

目的:分析不同剂量苯甲酸雌二醇(EB)预处理的去势大鼠以海人藻酸(kainic acid,KA)致(癎)前后血清雌二醇(E2)和海马组织雌激素β受体(ER β)的水平,探讨E2、ER β与KA之间的相关性.方法:将去势大鼠随机分为对照组(O组)、不同剂量EB干预组(O+E)、致(癎)组(O+KA)和不同剂量EB预处理致(癎)组(O+E+KA).分别利用电化学发光法与免疫印迹法检测E2浓度与海马组织ERβ表达水平的变化.结果:①除小剂量EB(25 μg·kg-1)预处理的去势大鼠血清E2水平(88.8±3.23)pmol·L-1与O组(88.49±8.31)pmol·L-1差异无统计学意义外,其余剂量EB预处理(≥EB l mg·kg-1)的各组去势大鼠血清E2浓度均明显高于O组,且E2水平随EB的增加而增高,但不影响去势大鼠海马组织ER β的表达.②癫(癎)发作的早期(癫(癎)发作后2 h内)不仅降低了癫(癎)动物血清雌激素的水平,也降低了海马组织ER β的表达,但这种降低与癫(癎)发作的轻重程度无关.结论:去势大鼠海马ER β蛋白的表达水平主要与癫(癎)发作有关,雌激素对癫(癎)发作的影响可能并不体现在其对ER β表达的影响.     

雌激素影响海人酸杏仁核点燃大鼠癫痫发作机制的初步探讨

目的：探讨雌激素（E）和姜黄素（C）影响癫痫发作的机制。方法：用E和C单独及联用连续处理去势雌性大鼠5d,第6天以海人酸（KA）杏仁核点燃法制备癫痫大鼠模型,观察大鼠癫痫发作的行为学表现,用免疫组化方法检测海马组织c-Jun蛋白的表达。结果：E加C组（EC＋KA组）大鼠癫痫重度发作的严重程度较E组（E＋KA组）明显减轻（P〈0.05）。E＋KA组海马中c-Jun蛋白表达最多,C组（C＋KA组）及对照组（KA组）均表达较少且没有任何差异;EC＋KA组海马的CA1区c-Jun蛋白表达较E＋KA组明显减少（P〈0.05）。结论：C能一定程度上减轻E引起的癫痫发作加重,它可能通过抑制c-Jun/核转录因子激活蛋白-1（activate-protein1,AP-1）活性,使E作用的AP-1通路受阻,从而减轻了E的促神经元兴奋作用。     

雌激素对海人藻酸致大鼠皮层和海马雌激素β受体表达的影响

目的观察添加雌激素后海人藻酸(Kainicacid,KA)致癎大鼠皮层和海马的雌激素β受体(ER-β)的变化。方法用荧光免疫组化法。结果ER-β免疫阳性细胞广泛分布于大鼠的皮层、海马、下丘脑以及杏仁核区域,主要位于细胞核。单纯添力加雌激素(17-βestradiol,E2)组、海人藻酸致癎(KA)组、添加雌激素后海人藻酸致癎(E2加KA)组海马的ER—β免疫阳性细胞数较对照组(OIL组)明显减少(P<0．05),以DG(齿状回DentateGyrus)区的变化最明显；皮层(Conex)的ER—β免疫阳性细胞表达变化不显著。E2+KA组的ER—β免疫阳性细胞与KA组相比减少,(P<0．05)。结论大剂量雌激素下调ER—β免疫阳性细胞的表达,且此作用有区域性。添加雌激素后致癎,ER—β免疫阳性细胞下调更显著,雌激素可能是通过下调DG区ER—β的表达加重癫癎的发作。     

苯甲酸雌二醇对去势(癎)性发作大鼠海马基因表达的影响

目的 分析苯甲酸雌二醇（estradiol benzoate,EB）预处理的去势大鼠经红藻氨酸（kainic acid,KA）诱导痫性发作后海马基因表达的图谱,探讨雌激素对痫性发作大鼠海马的影响.方法 应用含有10 000个基因的cDNA芯片,检测EB干预对KA诱导的去势大鼠痫性发作后海马组织基因表达的影响.应用功能富集分析,筛选有统计学差异的基因功能群.结果 EB逆转了KA致痫后有显著差异表达的基因共392个,其中下调的基因258个（65.82%）,上调的基因134个（34.18%）.经功能富集分析,共筛选出8个主要功能群,其中下调的功能群5个（共21个基因）,主要涉及凋亡、抗凋亡与神经发生、长时程突触传递增强效应等;上调的功能群有3个（共4个基因）,涉及细胞膜受体相关的信号转导等. 结论 EB能逆转KA诱导的去势大鼠痫性发作后海马神经元的基因表达,且可能以促进神经元凋亡为主.     

雌激素对海人藻酸致癎大鼠皮层和海马雌激素β受体表达的影响

目的观察添加雌激素后海人藻酸(Kainic acid,KA)致癎大鼠皮层和海马的雌激素β受体(ER-β)的变化.方法用荧光免疫组化法.结果ER-β免疫阳性细胞广泛分布于大鼠的皮层、海马、下丘脑以及杏仁核区域,主要位于细胞核.单纯添加雌激素(17-βestradiol,E2)组、海人藻酸致癎(KA)组、添加雌激素后海人藻酸致癎(E2加KA)组海马的ER-β免疫阳性细胞数较对照组(OIL组)明显减少(P＜0.05),以DG(齿状回,Dentate Gyrus)区的变化最明显;皮层(Cortex)的ER-β免疫阳性细胞表达变化不显著.E2+KA组的ER-β免疫阳性细胞与KA组相比减少,(P＜0 05).结论大剂量雌激素下调ER-β免疫阳性细胞的表达,且此作用有区域性.添加雌激素后致癎,ER-β免疫阳性细胞下调更显著,雌激素可能是通过下调DG区ER-β的表达加重癫癎的发作.     

雌激素影响海人酸杏仁核点燃大鼠癫(癎)发作机制的初步探讨

目的:探讨雌激素(E)和姜黄素(C)影响癫发作的机制。方法:用E和C单独及联用连续处理去势雌性大鼠5d,第6天以海人酸(KA)杏仁核点燃法制备癫大鼠模型,观察大鼠癫发作的行为学表现,用免疫组化方法检测海马组织c-Jun蛋白的表达。结果:E加C组(EC KA组)大鼠癫重度发作的严重程度较E组(E KA组)明显减轻(P<0.05)。E KA组海马中c-Jun蛋白表达最多,C组(C KA组)及对照组(KA组)均表达较少且没有任何差异;EC KA组海马的CA1区c-Jun蛋白表达较E KA组明显减少(P<0.05)。结论:C能一定程度上减轻E引起的癫发作加重,它可能通过抑制c-Jun/核转录因子激活蛋白-1(activate-protein1,AP-1)活性,使E作用的AP-1通路受阻,从而减轻了E的促神经元兴奋作用。     

雌激素和姜黄素对海人酸杏仁核点燃大鼠行为学、脑电图及海马神经元损伤的影响

目的了解雌激素和姜黄素对海人酸(kainic acid,KA)杏仁核点燃大鼠癫痫发作的影响。方法给去势的雌性大鼠添加雌激素治疗,添加姜黄素治疗,或添加雌激素和姜黄素治疗,比较各组大鼠致痫后癫痫发作的行为学、脑电图和海马神经元损伤的变化。结果给雌激素治疗的大鼠重型发作(Racine 4/5级)评分最高,而雌激素加姜黄素治疗组评分最低(P<0.05)。脑电图的变化与行为学的改变基本一致。致痫后大鼠注射KA侧海马CA3区、CA4区可见到明显的细胞损伤,而该侧海马CA1区、齿状回区(DG)及对侧海马CA3区、CA1区及DG区神经元损害不明显。雌激素组大鼠双侧海马CA3区均出现加重的神经元损害,姜黄素组及雌激素加姜黄素组大鼠海马注射对侧CA3区存活神经元较雌激素组明显增加(P<0.01)。结论高水平的雌激素可以加重癫痫的发作,给姜黄素治疗可以减轻大鼠海马CA3区神经元损害。     

海人酸致痫大鼠海马IL-1β、TNF-α仪的表达

目的立体定向手术建立海人酸（KA）颞叶癫痫大鼠模型，检测海马内IL-1β、TNF-α蛋白及其mRNA的表达。方法大鼠随机分为空白对照组、生理盐水对照组和模型组。模型组大鼠-侧海马CA3区注射KA（生理盐水组注射生理盐水），观察其行为学特征，HE染色和Nissl染色以及电镜观察其病理学改变，免疫组化法检测大鼠海马内IL-1β、TNF-α蛋白的表达，原位杂交法检测TNF-α mRNA的动态表达。结果大鼠注射KA后出现湿狗样抖动、头面部肌阵挛、肢体阵挛及全面强直阵挛发作等，病理结果显示海马神经元变性、缺失及胶质细胞增生，模型组IL-1β在致痫后3、6h表达水平明显增加并于12h达高峰，之后逐渐下降，7d后与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；TNF-α蛋白与mRNA表达时程基本一致，3h出现，12h达高峰，而后逐渐下降，7d后回归至对照组表达水平，15、30d又高于对照组（P％0.05）。结论（1）大鼠-侧海马注射KA是人类颞叶癫痫理想的动物模型；（2）内源性IL-1β、TNF-α参与了癫痫发病机制。     

胶质细胞源性神经营养因子在大鼠急性痫性发作中的表达

目的动态观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）蛋白在红藻氨酸（KA）诱导的大鼠急性痫性发作中的表达水平,探讨GDNF在急性癫痫发作中的作用。方法成年SD大鼠随机分为NS对照组和KA处理组。急性痫性发作经单侧海马内注入KA(0.6μg/0.3μl)诱导。两组大鼠分别在注射后第3、6、24h和第4、7d,采用免疫细胞化学方法检测GDNF蛋白在海马中的表达水平。结果NS组海马GDNF表达极微量,各时间点均在基线水平。KA组在注射后3hGDNF少量增高,6h达高峰,并持续至第4d,均高于各时间点NS组（P<0.05）,至第7d回复正常水平（P>0.05）。双侧GDNF表达在各时间点无显著差异。结论单侧海马内注射KA诱导的大鼠急性痫性发作可导致双侧海马齿状回和门区GDNF蛋白表达增高,GDNF可能参与拮抗KA神经兴奋性毒性作用,对海马齿状回颗粒细胞起保护效应。     

小剂量3-NPA对KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸（3-NPA）预处理对红藻氨酸（KA）致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达的影响.方法大鼠腹腔注射20 mg/kg 3-NPA（4 mg/mL）或生理盐水后24 h制作大鼠癫痫模型及对照模型,7 d后分别用原位末端标记（TUNEL）法、免疫组织化学方法观察小剂量3-NPA预处理对KA致痫大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响. 结果3-NPA预处理组较对照组CA1区神经细胞凋亡减少,p53蛋白表达减弱. 结论小剂量3-NPA预处理可以对KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达有抑制作用,3-NPA预处理可能对KA致痫大鼠海马细胞凋亡具有一定保护作用.     

癫(癇)大鼠血清、海马组织中神经元特异性烯醇化酶和S-100β蛋白的变化及其临床意义

目的 探讨红藻氨酸（KA）诱导癫痫大鼠血清及海马组织中神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S-100β蛋白（S-100β）的变化及其临床意义。方法 180只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平（CBZ）组，后两组再按癫痫发作后1h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组。以放射免疫法（RIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别测定大鼠血清和海马匀浆液中NSE和S-100β的变化。结果 癫痫发作72h内，血清和海马匀浆液中NSE和S-100β的含量是一个动态变化过程，且呈同步变化的趋势，在12h时均达到峰值。在4～48h时，KA组和CBZ组的二者含量均明显高于对照组（P〈0．05～0．01）。结论 癫痫发作后NSE和S-100β的含量升高，二者可作为癫痫发作后脑组织损伤的一个参考指标。     

海人酸诱导颞叶癫癎大鼠海马中GAP-43和NCAM的表达变化以及托吡酯的干预作用

目的研究海人酸（KA）对大鼠海马中生长相关蛋白-43（GAP-43）和神经细胞粘附分子（NCAM）表达的影响，以及托吡酯（TPM）对其的干预作用。方法将48只大鼠随机分成生理盐水（NS）组、4mgKA组、10mgKA组和10mgKA＋TPM组（n=12），建立KA诱导颞叶癫癎大鼠模型和TPM干预模型，观察大鼠行为学改变，并通过RT-PCR和WesternBlot的方法测定各组大鼠海马中GAP-43及NCAM的mRNA和蛋白表达水平。结果大鼠建模成功；4mgKA组、10mgKA组大鼠GAP-43及NCAM的mRNA和蛋白表达水平明显高于NS组（P〈0．01），且10mgKA组高于4nagKA组（P〈0．01）；10mgKA＋TPM组大鼠的GAP-43和NCAM表达明显低于10mgKA组（P〈0．01）。结论KA能够诱导致癎大鼠海马GAP-43和NCAM表达上调，且与KA剂量有关，而TPM能够抑制KA诱导的GAP-43和NCAM的表达上调。     

致痫后雌性大鼠血清及海马雌二醇和孕烯醇酮水平的动态变化

目的 观察致病后雌性大鼠血清及海马雌二醇(E2)和孕烯醇酮(PREG)水平的动态变化,研究海马E2水平与癫痫发作严重程度的关系. 方法 选择动情期雌性大鼠制备海人藻酸(KA)经杏仁核点燃的癫痫模型,观察大鼠癫痫发作的行为学表现.应用放射免疫法和酶联免疫吸附分析分别检测癫痫发作后0、1、2、3、4、5、6、12和24 h的大鼠以及经杏仁核注射生理盐水后相应时间的大鼠血清及海马组织E2和PREG水平.对检测结果进行统计学分析. 结果 杏仁核注入KA后5～10min大鼠均出现痫样发作,3 h达峰值,随后呈下降趋势.致痫后的大鼠血清E2水平无明显变化,但海马E2水平在癫痫发作后1 h开始上升,4 h达峰值,随后呈下降趋势,12 h恢复至对照水平,1～12 h相邻时间点E2水平差异均有统计学意义(P,0.05).此外,随着大鼠的癫痫发作程度的加重,海马E2水平逐渐升高,进行相关性检验后发现.海乌E2水平与癫痫发作严重程度呈正相关(R~2=0.646,P<0.05).致痫前及致痫后24 h内不同时间点各组大鼠海马的PREG水平没有明显变化. 结论 癫痫发作后大鼠海马E2水平的动态变化与癫痫发作程度相关.癫痫发作可以诱导大鼠海马局部E2的合成.     

海人酸致痫大鼠海马IL-1β、TNF-α的表达

目的 立体定向手术建立海人酸(KA)颞叶癫痫大鼠模型,检测海马内IL-1β、TNF-α蛋白及其mRNA的表达.方法 大鼠随机分为空白对照组、生理盐水对照组和模型组.模型组大鼠一侧海马CA3区注射KA (生理盐水组注射生理盐水),观察其行为学特征,HE染色和Nissl染色以及电镜观察其病理学改变,免疫组化法检测大鼠海马内IL-1β、TNF-α蛋白的表达,原位杂交法检测TNF-α mRNA的动态表达.结果 大鼠注射KA后出现湿狗样抖动、头面部肌阵挛、肢体阵挛及全面强直阵挛发作等,病理结果显示海马神经元变性、缺失及胶质细胞增生,模型组IL-1β在致痫后3 、6 h表达水平明显增加并于12 h达高峰,之后逐渐下降,7 d后与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);TNF-α蛋白与mRNA表达时程基本一致,3 h出现,12 h达高峰,而后逐渐下降,7 d后回归至对照组表达水平,15 、30 d又高于对照组(P＜0.05).结论 (1)大鼠一侧海马注射KA是人类颞叶癫痫理想的动物模型;(2)内源性IL-1β、TNF-α参与了癫痫发病机制.     

辛伐他汀抑制海人酸模型大鼠癫痫发作

目的 研究辛伐他汀(Sim)抑制海人酸(KA)诱导的大鼠抽搐发作向颞叶癫痫(TLE)发展的长期影响.方法 将大鼠分为健康对照组、盐水治疗癫痫组、Sim治疗癫痫组.KA诱导癫痫半小时后,Sim灌胃.(1)大鼠抽搐后3d评估了细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平变化.(2)在4-6个月观察海马胶质细胞增生、神经元死亡、苔状纤维发芽(MFS)和大鼠癫痫发作情况.结果 Sim降低了TNF-α、IL-1β水平,减轻了胶质细胞增生和神经元死亡,并抑制了海马MFS和癫痫发作.结论 Sim具有抑制KA诱导的大鼠急性抽搐发作向TLE发展的效能.     

托吡酯对癫痫大鼠认知功能及海马组织中NCAM的mRNA表达影响

目的研究托吡酯（TPM）对癫痫大鼠认知功能的影响以及使用TPM后大鼠海马组织中神经细胞粘附分子（NCAM）的mRNA表达变化。方法将大鼠随机分成生理盐水（NS）组、癫痫（EP）组、癫痫＋托吡酯治疗1周（TPM1周）组和癫痫＋托吡酯治疗4周（TPM4周）组,建立匹罗卡品诱导癫痫大鼠模型和TPM干预模型,观察大鼠的行为学改变,通过Morris水迷宫实验测试大鼠的学习记忆能力,并通过Real—TimePCR检测大鼠海马组织中NCAM的mRNA表达水平。结果EP组大鼠的逃避潜伏期大于NS组,原平台象限游泳时间百分比小于NS组,海马NCAM的mRNA表达水平高于NS组（P〈0．01）;TPM1周组和TPM4周组大鼠的逃避潜伏期大于EP组,原平台象限游泳时间百分比小于EP组,海马NCAM的mRNA表达水平低于EP组（P〈0.01）;TPM4周组大鼠的逃避潜伏期大于TPM1周组,原平台象限游泳时间百分比小于TPM1周组,海马NCAM的mRNA表达水平低于TPMI周组（P〈0.05）。结论大鼠产生癫痫持续状态后认知功能明显下降,海马NCAM的mRNA表达上调;使用大剂量TPM短期治疗后其认知功能进一步下降,海马NCAM的mRNA表达受抑,且下降与受抑程度与TPM的持续使用时间有关。     

托吡酯对颞叶癫痫大鼠海马神经细胞粘附分子表达的影响

目的观察托吡酯对红藻氨酸(KA)诱导颞叶癫痫大鼠海马突触重建标记物神经细胞粘附分子(NCAM)表达的影响,进一步探讨托吡酯的抗痫作用机制。方法采用免疫组织化学染色观察KA诱导癫痫大鼠及托吡酯给药大鼠海马神经细胞粘附分子表达水平,并对两组NCAM表达进行比较。结果KA组NCAM表达水平各时间点平均NCAM阳性密度OD率均明显高于N S组和KA TPM组(P<0.01)。结论本研究提示托吡酯可能通过抑制突触重建的形成,减少痫性放电,从而控制癫痫发作。     

雌激素受体β对阿尔茨海默病大鼠海马内炎症反应及淀粉样β蛋白的沉积的影响

目的研究雌激素受体β(ERβ)对阿尔茨海默病大鼠海马内炎症反应及淀粉样β蛋白沉积的影响,并探讨其可能的机制。方法β淀粉样蛋白脑室内注射建立阿尔茨海默病大鼠模型,并将模型分为对照组、ERβ组和shRNA组。对照组不做任何处理,ERβ组和shRNA组大鼠分别通过脑室内注射载有雌激素受体β基因或shRNA的慢病毒质粒。通过Morris水迷宫检测各组大鼠行为学,Western blot检测各组大鼠脑组织内Akt及β淀粉样蛋白表达水平,qRT-PCR检测TNF-α和IL-1βmRNA表达,并通过免疫荧光染色检测Aβ的表达。结果ERβ组大鼠记忆能力明显高于对照组和shRNA组大鼠(P<0.05),ERβ组大鼠海马内Akt含量明显高于对照组和shRNA组大鼠(P<0.05),并且ERβ组大鼠海马内IL-1和TNF-αmRNA以及β淀粉样蛋白含量明显低于对照组和shRNA组大鼠(P<0.05)。结论过表达ERβ在不依赖雌激素的情况下可减轻AD大鼠海马内炎症反应和β淀粉样蛋白的沉积,改善AD大鼠行为学的变化,其神经保护作用可能是通过激活Akt途径实现。     

电点燃癫痫大鼠海马白细胞介素-6的表达

目的通过测定杏仁核电点燃癫痫大鼠海马白细胞介素-6（IL-6）表达情况,探讨IL-6变化规律及其作用。方法把双极电极插入大鼠左侧杏仁基底外侧核,给予慢性电刺激使大鼠达到点燃状态,观察其发作过程并记录脑电图。采用半定量RT—PCR法检测电点燃大鼠海马IL-6mRNA表达并设药物治疗组对照观察。结果大鼠平均经（13．50&#177;3．99）次刺激达到点燃状态,记录到的后发放时程在21450119720ms之间。电点燃大鼠海马IL-6mRNA表达升高。结论癫痫大鼠海马IL-6mRNA表达升高,可能参与了点燃过程。