AMPK激动剂AICAR抑制糖氧剥夺损伤后星形胶质细胞的炎性反应及对神经元损伤的保护作用

目的:探讨AMPK激动剂AICAR对糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤后原代星形胶质细胞炎性反应的影响及对损伤神经元的保护作用。方法:通过构建原代培养星形胶质细胞和神经元的OGD模型,在正常培养的原代星形胶质细胞中加入对照溶剂和AICAR（0.5 mmol/L）,后给予OGD处理,在复氧第12小时通过ELISA检测促炎因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β的表达变化,通过Western blotting方法检测磷酸化p38的蛋白表达;再将上述对照组和AICAR组OGD处理后的星形胶质细胞培养液,加入OGD损伤后的原代培养神经元中,通过LDH检测及免疫荧光双标方法,检测AICAR对缺糖缺氧损伤神经元的保护作用。结果:在原代培养神经元及星形胶质细胞OGD损伤模型中,与对照组比较,AICAR组显著地降低了OGD损伤后星形胶质细胞分泌的促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β（P<0.01）,抑制p38磷酸化,且明显降低了缺糖缺氧造成的神经元损伤（P<0.01）,促进损伤的神经突起修复。结论:AICAR抑制OGD损伤后星形胶质细胞炎性因子的释放,对OGD损伤神经元具有保护作用。     

脑力智宝对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

用ＮａＣＮ加缺糖造成的ＰＣ１２细胞缺血性损伤模型,研究脑力智宝含药血清对细胞的保护作用。并对所取含药血清时不同的给药次数,采血时间和含药血清加入量等实验方法进行了探讨。结果表明,单次给药后０．５、１．２、３ｈ所采集的含药血清不具有细胞保护作用,而两次给药（间隔２ｈ）后１ｈ,２ｈ的含药血清具有明显的保护作用。每日两次给经连续３．５ｄ（７次给药）各时间点的含药血清均有明显的细胞保护作用。血清加入量以５     

缺氧和梭曼单一或复合作用对PC12细胞的细胞毒效应

目的：缺氧与梭曼中毒能引起不可逆性脑损伤认识已久，然而，缺氧与梭曼中毒复合对脑的作用所少甚少，本研究应用ＰＣ１２细胞损伤模型，探讨缺氧和梭曼单一或复合作用对神经瘤细胞的损伤，方法：培养的ＰＣ１２细胞暴露于含不同氧是分比的空气及含不同浓度梭曼的培养液，测定细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放及细胞存活率的变化，用以指标细胞毒效应的量效，时效关系，用ｔ检验及双因素方差分析判别统计差别显著性及缺氧，梭曼双因素     

RT-PCR方法检测非神经元、类神经元、神经元细胞系中淀粉样前体蛋白基因表达

目的与方法：根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物，提取总ＲＮＡ，利用ＲＴＰＣＲ方法检测非神经、类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果：利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ７细胞中ＡＰＰ基因的表达，但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ７细胞，类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ基因的表达。结论：利用特异设计的人ＡＰＰ基因引物及ＲＴＰＣＲ方法可以检测类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达     

补肾壮骨方剂含药血清调控牙周膜干细胞增殖分化的效能研究

目的：探讨补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用。方法采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同剂量的补肾壮骨方剂含药血清处理细胞,通过四唑盐（ MTT）比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测补肾壮骨方剂含药血清对细胞体外增殖分化的影响。结果体外实验补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖有明显促进作用,且能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达。结论补肾壮骨方剂含药血清促进牙周膜细胞的增殖活性,可明显促进牙周膜细胞骨向分化。     

RT—PCR方法检测非神经元,类神经元,神经元细胞系中淀粉样前 …

目的与方法 根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｏｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ,ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物,提取总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测非神经,类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果 利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ－７细胞中,ＡＰＰ基因的表达,但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ－７细胞类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞,ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ     

N-硬脂酰酪氨酸对缺氧缺糖诱导神经元凋亡的影响

摘 要：目的 探讨 N-硬脂酰酪氨酸（NsTyr）对缺氧缺糖（OGD）诱导大鼠皮层神经元损伤的影响及作用机制。方法 采用 MTT 法及 Hoechst 33342染色检测 NsTyr 对 OGD 诱导神经元损伤及凋亡的影响;通过免疫印迹法探讨 NsTyr 抗 OGD 诱导神经元凋亡的分子机制,并使用丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的特异性阻断剂 SB203580、SP600125和 U0126考察其抗凋亡的信号转导通路。结果 NsTyr 对 OGD 造成的皮层神经元损伤有剂量相关的保护作用,促进细胞存活,减少细胞凋亡;NsTyr 通过上调 Bcl-2表达、下调 Bax 表达、保持 Bcl-2/Bax 的平衡,实现抗 OGD 损伤的作用,该作用通过 ERK 和 p38信号通路介导。结论 NsTyr 可通过 ERK 和 p38信号通路调节凋亡基因的表达,抑制 OGD 引起的神经元凋亡。     

Adv-CT1转染对神经元的作用

目的观察重组腺病毒心肌营养素1（recombinant adenovirus cardiotrophin-1,Adv-CT1）对谷氨酸（glutamate,Glu）诱导损伤神经元的保护作用。方法分离、培养新生Wistar大鼠神经元细胞,将细胞分为单纯谷氨酸损伤组、Adv-CT1转染组及正常对照组;利用台盼蓝染色技术检测神经元细胞存活率;采用TUNEL原位细胞凋亡检测技术检测神经元细胞凋亡率。结果谷氨酸损伤第1、2及3天,单纯谷氨酸损伤组细胞存活率（77.4%、72.7%、67.0%）较Adv-CT1转染组（84.8%、78.5%、74.0%）明显降低（P〈0.05）;单纯谷氨酸损伤组细胞凋亡率（2.7%、5.5%、6.8%）较Adv-CT1转染组（1.5%、2.0%、3.2%）明显增高（P〈0.05）。结论 CT1转染可减少谷氨酸损伤诱导的神经元细胞凋亡发生,促进损伤神经元细胞存活,对损伤的神经元细胞具有保护作用。     

PTEN表达下调对神经元胞内游离钙离子和神经元凋亡的研究

目的：探讨神经元缺血缺氧损伤再灌后，下调PTEN在阻断Ca^2＋内流及凋亡调控方面的保护机制。方法：建立神经元缺糖缺氧（oxygen-glucose deprivation，OGD）损伤模型，转染shRNAspten-GFP质粒，用Western blotting检测PTEN水平，Fura 2-AM法测定胞内Ca^2＋浓度，流式细胞术和AO／EB检测神经元凋亡。结果：与正常组相比OGD后细胞凋亡率和胞内Ca^2＋浓度显著升高（P〈0．05）；与对照组相比经shRNAspten干预后胞内Ca^2＋浓度和细胞凋亡率明显降低（P〈0．05）。结论：shRNAspten-GFP能成功转染到神经元中，PTEN表达下调可阻断Ca^2＋内流并对缺糖缺氧诱导的细胞凋亡有拮抗作用，从而达到神经元保护的目的。     

IL-12联合小剂量IL-2对人外周血单个核细胞增殖及杀瘤活性的影响

目的：探讨ＩＬ－１２与ＩＬ－２ 的最佳剂量配伍,以充分发挥两种细胞因子的抗肿瘤作用,从而减少使用剂量和降低毒副作用。方法：静止的或用小剂量ＩＬ－２ 激活的人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,以含不同浓度ＩＬ－１２ 和（或）ＩＬ－２ 的培养液培养后,分别用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＬＤＨ释放法测定ＰＢＭＣ的增殖作用及杀瘤活性。结果：①５～５０ ＩＵ／ｍ ｌＩＬ－１２ 单独不能诱导ＰＢＭＣ增殖,但能与小剂量（１０ ＩＵ／ｍ ｌ）ＩＬ－２ 协同而促进ＰＢＭＣ的增殖,且能延长增殖作用时间。②经ＩＬ－１２ 作用后,ＰＢＭＣ对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞及ＮＫ抵抗的Ｒａｊｉ细胞均产生明显的杀伤活性。激活的ＰＢＭＣ经ＩＬ－１２ 和ＩＬ－２ 各１０ ＩＵ／ｍ ｌ联合培养后,对Ｋ５６２ 细胞和Ｒａｊｉ细胞的杀伤率达最大值,分别为７２．０±４．２％ 和６５．４±５．８％ ,显示出明显的协同作用。结论：人ＰＢＭＣ在体外经１０ ＩＵ／ｍ ｌＩＬ－２激活后,再加入ＩＬ－１２ 和ＩＬ－２各１０ ＩＵ／ｍ ｌ共同刺激,能使ＰＢＭＣ发挥强而持久的增殖效应及最大杀瘤活性     

维生素E,普罗布考对溶血卵磷脂引起的脑微血管细胞损伤和增殖的…

目的：研究维生素Ｅ（ＶＥ）、普罗布考（ＰＲＢ）对溶血卵磷脂（ＬＰＣ）引起的脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）损伤的保护作用和脑微血管平滑肌细胞（ＢＣＭＳＭＣ）增殖的抑制作用。方法：以乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放及结晶紫染色法分别测定ＢＣＭＥＣ损伤和ＢＣＭＳＭＣ的增殖。结果：ＶＥ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３６．８±１．０）％～（１６．２±２．９）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（３７．６±７．０）％～（６１．３±０．６）％。ＰＲＢ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３４．２±３．３）％～（１９．１±２．４）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（４０．９±２．４）％～（４７．０±３．７）％。结论：ＶＥ和ＰＲＢ对ＬＰＣ引起的ＢＣＭＥＣ损伤有保护作用，对ＢＣＭＳＭＣ增殖有抑制作用。     

丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3的影响

目的观察丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3蛋白表达的影响。方法制备丹参滴注液含药血清,以含药血清干预原代培养缺氧海马神经元,MTT法检测神经元增殖活力,免疫荧光法检测神经元Caspase 3蛋白的表达。结果缺氧组海马神经元增殖活力低于正常组（P<0.05）,神经元Caspase 3蛋白表达高于正常组（P<0.05）,丹参滴注液含药血清能减少缺氧组海马神经元caspase 3蛋白表达,改善细胞增殖活力（P<0.05）。结论丹参滴注液含药血清能明显抑制缺氧海马神经元Caspase 3表达,促进缺氧神经元增殖,起到神经保护作用。     

左归降糖解郁方对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症（DD）细胞模型海马神经元损伤的保护作用。方法建立DD细胞模型,并采用左归降糖解郁方含药血浆进行干预,阳性对照组采用二甲双胍合氟西汀含药血浆。药物干预24 h,NSE鉴定神经细胞,MTT测定细胞存活率,TUNEL染色测定凋亡小体,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法检测海马神经元细胞葡萄糖消耗情况。结果 NSE法鉴定海马神经元细胞纯度达93%以上;左归降糖解郁方组在第24、48、72 h细胞存活率分别为80.5%、78.7%、73.2%,与模型组比较差异具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,且其海马神经元细胞存活率在72 h时增加较二甲双胍合氟西汀组更明显（P〈0.05）;TUNEL染色显示左归降糖解郁方含药血浆组免疫阳性细胞数明显减少,凋亡率为13.2%;左归降糖解郁方可明显消耗培养基中葡萄糖浓度,从12 h开始与模型组相比差异均有显著性统计学意义（P〈0.01）。结论左归降糖解郁方对DD细胞模型海马神经元细胞具有保护作用。     

香萱解郁方对血清剥夺诱导HT22细胞损伤模型的神经保护作用

探讨香萱解郁方含药血清对血清剥夺致小鼠海马神经元HT22细胞损伤模型的影响。方法 采用血清剥夺培养HT22细胞建立神经损伤体外模型,实验分为对照组、模型组和中药组［中药组A（含药血清15%浓度）、中药组B（含药血清20%浓度）］,各组血清剥夺12 h后,通过CCK8法检测各组细胞活力,确定15%浓度含药血清干预后细胞的存活率最高,设定为后续实验中药组的药物浓度。免疫荧光染色法检测神经元特异性微管蛋白（β-Tubulin Ⅲ）在各组中的表达,蛋白质免疫印迹法及qPCR法检测脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白及其mRNA在各组中的表达。结果 在加药后培养12 h,中药组的细胞活力明显高于对照组与模型组（P＜0.001）。培养24 h,模型组细胞活力较对照组明显下降（P＜0.001）,中药组较模型组明显提高（P＜0.001）。培养36 h,模型组细胞活力较对照组显著下降（P＜0.001）,中药组较模型组明显提高（P＜0.001）。模型组BDNF蛋白含量及 BDNF mRNA表达量较对照组显著降低（P＜0.05,P＜0.001）,模型组少数神经元长出突起;中药组BDNF蛋白含量及BDNF mRNA表达量较模型组显著增加（P＜0.05）,中药组HT22细胞轴突突起长度和分支增加,β-Tubulin Ⅲ阳性表达明显增多。结论 香萱解郁方含药血清对血清剥夺诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有神经保护作用,可能与促进BDNF蛋白表达有关     

缺血样条件和血清对培养神经细胞存活的影响

观察缺血样条件和血清对培养神经细胞存活的影响。方法：将培养１２ｄ的新生大鼠皮层神经细胞分主６组；（１）单纯缺血样条件组，神经细胞暴露于９４％Ｎ２／６％ＣＯ２混合气和无糖平衡盐液的环境１ｈ；（２）正常血清组；神经细胞暴露于正常大鼠血清１ｈ；（３）去补体血清组；神经细胞暴露于用蛇毒因子去除补体（Ｃ３，Ｃ５）的大鼠血清１ｈ；（４）缺血样条件加正常血清线，（５）缺血性条件加去补体血清组；（６）对照组，仅更     

人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的：研究人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的影响,为其临床应用提供理论依据。方法：体外原代培养的SD大鼠海马神经元经Aβ淀粉样蛋白损伤建立细胞模型,实验分为正常对照组、Aβ淀粉样蛋白诱导损伤对照组(损伤对照组)、Rb1低剂量组（10 mg/L）、Rb1中剂量组（50 mg/L）及Rb1高剂量组（100 mg/L）,应用MTT法检测海马神经元生长增殖活力,TUNEL法检测神经元凋亡情况,化学发光法检测海马神经元内caspase-3活性。结果：MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组和Rb1低、中及高剂量组神经元生存率均有不同程度的下降(P<0.05),损伤对照组下降最明显;与损伤对照组比较,Rb1中、高剂量组神经元生存率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。TUNEL法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组、Rb1低、中剂量组的阳性神经元数量明显增加,其中损伤对照组增加最明显;损伤对照组与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。损伤对照组caspase-3活性与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导性神经元损伤具有保护作用,并通过调控细胞凋亡实现。     

丹参酮对原代大鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察缺氧缺糖对大鼠海马神经元细胞的影响及丹参酮的保护作用。方法取体外培养12天的海马神经元细胞随机分为正常对照组、缺氧缺糖组、丹参酮20μmol／L组、丹参酮40μmol／L组、丹参酮80μmol／L组（后3组缺氧缺糖前24h,加入丹参酮预处理）。缺氧缺糖组、各浓度丹参酮组在缺氧缺糖环境中培养2、4、24及36h后,收集其各个时间点的培养液,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果缺氧缺糖后,缺氧缺糖组各个时间点LDH渗出量明显高于正常对照组,经丹参酮预处理的神经元损伤有不同程度的减轻,各个时间点LDH渗出量明显低于对应的缺氧缺糖组。结论缺氧缺糖可引起海马神经元损伤,丹参酮对海马神经元细胞损伤具有保护作用。     

下瘀血汤抑制肝癌细胞生长的研究*

目的：研究下瘀血汤对肝癌HepG2细胞生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法：选取对数期生长阶段的HepG2细胞,分别加入不含药血清、10%含药血清、20%含药血清,通过CCK-8法检测下瘀血汤含药血清对Hep-G2细胞的增殖影响;通过流式细胞仪（FCM）检测下瘀血汤含药血清对Hep-G2细胞的凋亡和周期的影响;通过PCR及Western-blot检测下瘀血汤含药血清对核仁纺锤体相关蛋白1（nucleolar spindle-associated pretein 1,NuSAP1）的抑制作用。结果：通过CCK-8实验,发现10%、20%含药血清在48小时（P<0.05）及72小时（P<0.01）均能够明显抑制HepG2细胞的增殖;细胞周期实验发现,10%及20%含药血清能够抑制HepG2细胞的增殖,使细胞阻滞于S期及G2期,差异具有统计学意义（P<0.05）,且具有浓度依赖的特点（P<0.05）;流式细胞技术检测凋亡结果显示不同浓度含药血清均能够促进HepG2细胞的凋亡,并且具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。通过PCR及Western-blot实验发现,10%及20%含药血清均能够抑制NuSAP1 mRNA及蛋白水平的表达,并随着含药血清的浓度增加,这一作用更为明显,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：下瘀血汤含药血清可能通过抑制Nusap1表达来抑制Hep-G2细胞的增殖及周期,促进其凋亡,下瘀血汤有望成为治疗肝细胞肝癌的有效中药。     

丹参酮ⅡA对海马细胞缺氧缺糖损伤的保护作用及

目的 初步探讨丹参酮主要成分丹参酮ⅡA (TSA)对海马细胞缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法 离体脑缺血模型采用化学方法制作的大鼠脑皮质/海马神经元氧糖剥夺模型（oxygen-glucose deprivation, OGD）。观察TSA（1、2、5、10μmol/L）以及经典钙通道阻断剂尼莫地平(nimodipine）对OGD诱导的神经元损伤的影响;运用生化方法检测TSA对氧化/抗氧化指标MDA、SOD、GPX的影响; 运用HPLC方法检测TSA对胞外谷氨酸水平的影响;结果 1. TSA可减轻OGD引起的神经元损伤及LDH、NO释放;2. TSA可减少MDA的生成, 增加SOD、GPX活性; 3. TSA可抑制OGD引起的胞外谷氨酸浓度的异常升高。结论 TSA可减轻OGD 引起的神经元损伤,其抗损伤的机制可能涉及以下两个方面：减轻自由基损伤;减少谷氨酸的释放, 从而抑制谷氨酸的兴奋毒性。     

NOV对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的：探讨NOV基因和蛋白对大鼠神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法：NOV基因重组质粒转染COS－7细胞和NSCs，收集COS－7细胞和NOV基因修饰COS－7细胞的条件培养液（简称COS－CM和NOV－CM），作用于培养的NSCs，^3H-TdR掺入检测NSCs的增殖，免疫细胞化学和流式细胞仪检测NSCs的分化。结果：①NOV－CM能明显促进NSCs对^3H-TdR的摄入，说明NOV－CM能明显促进细胞的增殖，另外NOV－CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系；②免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示，NOV－CM促进NSCs向神经元方向分化；③NOV基因修饰NSCs分化时，神经元的比例增高。结论：NOV可能具有促进NSCs增殖和分化的作用。