磷脂对高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响

为了研究卵磷脂和鞘磷脂对高密度脂蛋白３介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响,测定了细胞内胆固醇含量、磷脂含量及游离胆固醇－胆固醇酯平衡的变化。结果发现,各组细胞内胆固醇含量从７９．７５μｇ／皿变为４２．７９、３７．１６、３１．５３μｇ／皿;高密度脂蛋白３组和卵磷脂组中卵脂磷含量分别为１３．９５和１６．２８μｇ／皿;高密度脂蛋白和鞘磷脂组中鞘磷脂磷含量分别为５．０３％和７．０１μｇ／皿,细胞与ＢＳ     

脂联素对泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达及细胞内胆固醇含量的影响

目的通过研究脂联素对细胞内胆固醇外流的影响以及三磷酸腺苷结合盒转运子A1的功能变化,探讨其抗动脉粥样硬化作用的可能机制。方法以THP-1来源的泡沫细胞模型为研究对象,用脂联素进行体外干预;采用逆转录聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验和高效液相色谱等方法测定干预前后三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达和细胞内胆固醇含量的变化。结果脂联素在体外上调泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1mRNA和蛋白的表达,与载脂蛋白A1联合作用还能进一步增加细胞内胆固醇的流出。脂联素单独作用促进细胞内胆固醇酯转化为游离胆固醇。结论脂联素上调泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达,并促进其介导的细胞内游离胆固醇的外流;脂联素还能促进细胞内胆固醇酯的水解。     

白细胞介素34对巨噬细胞泡沫化过程中细胞内胆固醇水平的影响

目的 探讨白细胞介素34(IL-34)对小鼠巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中细胞内胆固醇水平的影响及其可能的分子机制。方法 采用小鼠巨噬细胞系RAW 246.7,并分为对照组(PBS)、处理组[氧化型低密度脂蛋白(oxLDL 40μg/ml)]、低剂量组(oxLDL+IL-34 20ng/ml)、高剂量组(oxLDL+IL-34 50ng/ml),不同条件诱导培养24h,油红O染色观察泡沫细胞形成情况,比色法检测细胞内总胆固醇、胆固醇酯及游离胆固醇水平,RT-PCR和Western blot检测胆固醇酰基转移酶(ACAT-1)、中性胆固醇水解酶(nCEH)mRNA及蛋白表达。结果 处理组与低剂量组细胞内总胆固醇、胆固醇酯水平无明显差异(P0.05);与处理组比较,高剂量组细胞内红染脂滴增多,细胞内总胆固醇[(0.23±0.04)μg/μl vs(0.14±0.02)μg/μl,P0.05)]、胆固醇酯水平明显增多[(0.12±0.02)μg/μl vs(0.06±0.05)μg/μl,P0.05)],ACAT-1蛋白及mRNA表达上调(1.03±0.12 vs 0.43±0.07,P0.05),nCEH蛋白和mRNA无明显变化(P0.05)。结论 高剂量IL-34能增加巨噬细胞内胆固醇酯含量蓄积,其作用机制可能是通过上调ACAT-1促进细胞内游离胆固醇的酯化实现。     

肝脏疾病与卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)

在正常情况下,人的血浆游离胆固醇和胆固醇酯比值比较恒定,约为1:3。虽然血浆总胆固醇值经常发生变化,但这一比值基本不变。早在三十多年前,人们就注意到肝脏疾病时血浆胆固醇酯往往降低,当时认为与肝脏合成胆固醇酯减少有关。但近年研究证明胆固醇的酯化反应主要是通过血浆卵磷脂胆固醇酰基转移酶(Lecithin-cholesterol acyl transferase,简称LCAT)催化下进行的。此酶由肝脏合成后释放入血,在血浆中由高密度脂蛋白中载脂蛋白A激活。在此酶催化下,血浆游离胆固醇3′位的羟基接受卵磷脂β位上的脂酰基,生成酯键而分别转化为胆固醇酯和溶血卵磷脂(附图)。由于卵磷脂β位上结合的脂酰基多为     

成纤维细胞生长因子21通过诱导自噬促进泡沫细胞胆固醇流出

目的探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)促进泡沫细胞胆固醇流出的机制。方法在建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的基础上,以不同浓度(0、50、100、200、400μg/L)FGF21处理泡沫细胞24 h,以200μg/L FGF21处理泡沫细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),Western blot、激光共聚焦检测LC3,MDC染色分析自噬小体,HPLC、油红O染色测定细胞内胆固醇蓄积,液体闪烁计数分析胆固醇流出。结果 200、400μg/L的FGF21,以及200μg/L的FGF21作用24 h和48 h,泡沫细胞总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)水平均显著降低,而其胆固醇流出显著增强。机制研究发现,FGF21可诱导泡沫细胞自噬体形成,且微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3-Ⅰ)至微管相关蛋白Ⅱ轻链3(LC3-Ⅱ)转化率显著增加,但自噬相关基因5(ATG5)siRNA或3-甲基腺嘌呤(3-MA)或巴弗洛霉素A1(BafA1)干预自噬后,FGF21对TC、FC和CE的降低作用减弱,同时胆固醇流出减少,泡沫细胞脂质蓄积加重。结论 FGF21通过上调自噬促进泡沫细胞胆固醇流出。     

高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出

为了研究高密度脂蛋白３介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的机理,用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白３,阻断其与细胞表面受体的结合,观察细胞内胆固醇流出。用异硫氰酸荧光素酯标记高密度脂蛋白３,示踪其在细胞内的代谢。结果发现牛血清白蛋白（对照组）介导２．８７％细胞内胆固醇流出,高密度脂蛋白３和Ｎ－乙酰咪唑－高密度脂蛋白３组分别为４０．６８％和８．６９％。异硫氰酸荧光素酯－高密度脂蛋白３与细胞在３７℃共育３ｈ     

丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响

目的　观察丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响,并探讨其机制。方法　160　nmol/L　PMA孵育THP-1巨噬细胞24　h后,细胞分为三组：对照组、ox-LDL组（100　mg/L）和丹红组（100　mg/L　ox-LDL+30　mL/L丹红注射液）。高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,Western　blot检测细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）和肝X受体α（LXRα）的蛋白表达,定量　PCR　检测细胞ABCA1和LXRα的mRNA　表达。结果　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,显著降低细胞总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量,增加载脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ）介导的胆固醇流出,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和LXRα的表达。结论　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,可能与其促进LXRα-ABCA1途径介导的胆固醇流出有关。     

氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及可能机制

研究氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响 ,并探讨其与组织蛋白酶活性之间的关系。用 10 0mg/L的乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞胞浆和溶酶体中胆固醇的含量以及溶酶体中组织蛋白酶的活性。结果发现 ,乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白均可引起细胞胆固醇含量增加 (分别为 2 2 .2± 0 .4 μg和 2 2 .5 5± 0 .15 μg比对照组的 7.0± 0 .4 μg ,P <0 .0 1) ,但蓄积部位和形式完全不同 ,前者蓄积部位主要在胞浆并以胆固醇酯为主 (胞浆与溶酶体分别为 18.9± 0 .4 μg和3.3± 0 .2 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 0 .73± 0 .0 5 μg和 18.1± 0 .4 μg) ,后者主要在溶酶体并以游离胆固醇为主 (胞浆与溶酶体分别为 3.6 5± 0 .14 μg和 18.90± 0 .15 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 14 .13± 0 .14 μg和 4 .77±0 .33μg) ;前者不引起溶酶体组织蛋白酶的活性改变和蛋白含量增加 (组织蛋白酶L和D分别为 99.5± 3.4和 2 8.0± 2 .4 ,对照组分别为 10 2 .3± 8.2和 2 7.3± 1.6 ,P >0 .0 5 ;蛋白含量为 8.8± 0 .4 μg ,对照组为 9.0± 0 .3μg,P >0 .0 5 ) ;后者则造成溶酶体组织蛋白酶活性的明显降低和蛋白蓄积 (组织     

2型糖尿病患者高密度脂蛋白亚型分子组分的变化

目的 研究2型糖尿病患者高密度脂蛋白亚型分子构成成分含量、代谢关键酶活性变化及与血糖等指标的相关关系.方法 26例新发2型糖尿病患者与25例健康对照者留取血浆检测血糖、胰岛素和血脂谱.以改良一步沉淀法分离高密度脂蛋白3并检测其组分含量,并计算高密度脂蛋白2的主要组分含量.以荧光酶法测定胆固醇酯转运蛋白和磷脂转运蛋白活性.结果 (1)2型糖尿病组血高密度脂蛋白胆固醇与对照组无显著差异(P=0.579).(2)2型糖尿病组与对照组的胆固醇酯转运蛋白和磷脂转运蛋白活性均无明显差异.(3)2型糖尿病组高密度脂蛋白3以下组分含量较对照组明显减少(均P＜0.01):胆固醇为0.60±0.17 mmol/L比0.75±0.22mmol/L,磷脂为1.14±0.19 mmol/L比1.29±0.22 mmol/L,游离胆固醇为0.021±0.012 mmol/L比0.033±0.012mmoL/L,胆固醇酯为0.97±0.28 mmol/L比1.19±0.36 mmol/L.其中游离胆固醇和胆固醇酯含量与餐后血糖、糖化血红蛋白、胰岛素抵抗指数呈显著负相关(P＜0.05).(4)2型糖尿病组高密度脂蛋白2的载脂蛋白AI含量较对照组显著降低(604.8±233.3 mg/L比755.4±198.0 mg/L,P＜0.05),并与胰岛素抵抗指数、餐后血糖、血甘油三酯呈显著负相关(P＜0.05).结论 2型糖尿病患者高密度脂蛋白3和高密度脂蛋白2颗粒主要组分含量明显减少,并与血糖水平及胰岛素抵抗程度相关.     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.