天然及氧化型脂蛋白(a)与巨噬细胞表面结合

为探讨脂蛋白 (a)及氧化型脂蛋白 (a)在巨噬细胞上的结合和降解途径 ,将生物素标记的脂蛋白与小鼠腹腔巨噬细胞进行结合和竞争性结合试验。结果发现 ,脂蛋白 (a)能以一定的亲和力、可饱和性地与巨噬细胞表面结合 ;低密度脂蛋白对其结合无明显抑制作用 ,而氧化型低密度脂蛋白、氧化型脂蛋白 (a)均能不同程度地抑制这种结合。脂蛋白 (a)经氧化修饰后 ,与巨噬细胞的结合量显著增加。脂蛋白 (a)、低密度脂蛋白不能有效竞争氧化型脂蛋白 (a)的结合 ,而氧化型脂蛋白 (a)和氧化型低密度脂蛋白为有效的竞争性抑制剂。提示脂蛋白 (a)主要经清道夫受体与巨噬细胞表面结合 ;氧化型脂蛋白 (a)除经清道夫受体介导外 ,可能还通过其它特异性受体与巨噬细胞表面结合。     

血浆脂蛋白(a)对巨噬细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白的影响

目的　研究血浆脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]对巨噬细胞结合 ,摄入及降解乙酰化低密度脂蛋白 (acetylatedlowdensitylipoprotein ,Ac LDL) ,清道夫受体 A (scavengerreceptor A ,ScR A)和ScR B的影响。方法　利用人类单核细胞株 (THP 1细胞 )源的巨噬细胞培养 ,受体摄取配体及Northern印迹方法 ,观察Lp(a)对巨噬细胞受体摄取Ac LDL以及对巨噬细胞ScR A和ScR BmRNA表达的影响。结果　THP 1细胞源的巨噬细胞对Ac LDL的结合量随Lp(a)浓度 (0 ,10 ,2 5 ,5 0及 10 0 μg/ml)的增加而增加 ,而天然LDL对此无影响。与对照组比较 [Lp(a)非投用组 ],投用 5 0μg/mlLp(a)时 ,巨噬细胞对Ac LDL结合量 (binding)增加 2 6 9.2 5 %(P <0 .0 1) ,对Ac LDL的摄入量 (uptake)增加5 9.46 %(P <0 .0 1) ,对Ac LDL的降解量 (degradation)增加 5 5 .77%(P<0 .0 1) ,且巨噬细胞ScR AmRNA表达明显增强 ,与对照组 [Lp(a)非投用组 ]比较增强 43.5 6 %,而Lp(a)并不影响ScR BmRNA的表达。结论　Lp(a)可增加THP 1细胞源的巨噬细胞结合、摄入及降解Ac LDL ,这种作用可能通过Lp(a)增强巨噬细胞ScR A基因的表达来实现。     

脂蛋白(a)对巨噬细胞清道夫受体-A表达的影响

目的研究脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]对巨噬细胞清道夫受体A(scavengerreceptorclassAtypeIandtypeⅡ,ScR-A)的影响.方法利用细胞培养、受体摄取配体及Northern印迹杂交方法,观察Lp(a)对从人类单核细胞株细胞形成的巨噬细胞受体摄取乙酰化LDL(acetylatedLDL,Ac-LDL)以及对THP-1细胞形成的巨噬细胞ScR-AmRNA表达的影响.结果人类单核细胞株细胞形成的巨噬细胞对Ac-LDL的结合量随Lp(a)浓度的增加而增加,而天然LDL对此无影响.加入50μg/ml(a),巨噬细胞对Ac-LDL结合量为(188.06±16.80)ng/mg蛋白,与对照组的(48.26±5.61)ng/mg蛋白比较显著增加(P＜0.01);巨噬细胞对Ac-LDL的摄入量为(363.80±11.77)ng/mg蛋白,与对照组的(228.15±17.07)ng/mg蛋白比较显著增加(P＜0.05);巨噬细胞对Ac-LDL的降解量为(948.17±31.43)ng/mg蛋白与对照组的(608.68±38.11)ng/mg蛋白比较显著增加(P＜0.05).加入50μg/ml(a),其ScR-AmRNA表达明显增强,与对照组比较增强43.56%.结论Lp(a)可增强从THP-1细胞形成的巨噬细胞ScR-A基因的表达,Lp(a)的这种作用可能参与了动脉粥样硬化形成和发展的病理过程.     

氧化型脂蛋白(a)对人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α的影响

探讨氧化型脂蛋白 (a)能否诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。在内皮细胞培养基中分别加入天然脂蛋白 (a)及不同浓度的氧化型脂蛋白 (a) ,采用细胞酶联免疫检测巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白的表达 ,用一步法提取RNA ,逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞炎性蛋白 1αmR NA的表达 ,并用单核细胞粘附率试验检测单核细胞粘附。结果发现 ,氧化型脂蛋白 (a)呈剂量依赖性增加内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达 ,5、10及 2 0nmol/L氧化型脂蛋白 (a)分别使巨噬细胞炎性蛋白 1α表达明显增加到12 1%± 8%、16 3%± 13%及 2 4 1%± 2 8%。氧化型脂蛋白 (a)促使单核细胞粘附率增加 ,并且粘附率与氧化型脂蛋白 (a)浓度呈正相关。且氧化型脂蛋白 (a)能促使巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达明显增加。结果提示 ,氧化型脂蛋白 (a)能诱导内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α表达增强 ,这可能与脂蛋白 (a)致动脉粥样硬化作用机制有关     

脂蛋白对巨噬细胞的作用研究进展

脂蛋白的种类、组成、氧化修饰以及基因突变等影响脂蛋白与巨噬细胞的相互作用.载脂蛋白E基因敲除鼠血浆极低密度和中间密度脂蛋白组分通过一种特异而不依赖载脂蛋白E途径诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积,是体内主要致动脉粥样硬化脂蛋白.低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度和中间密度脂蛋白组分也显著诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积.人载脂蛋白AⅠ第235位谷氨酸残基缺失明显降低其促巨噬细胞胆固醇外流能力.人极低密度、低密度、高密度脂蛋白以及脂蛋白(a)等氧化后,不仅诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积,也具有显著促巨噬细胞增殖效应.     

巨噬细胞氧化修饰极低密度脂蛋白及Cu2+修饰的极低密度脂蛋白对单核细胞与内皮细胞粘附的影响

极低密度脂蛋白(VLDL)与小鼠腹腔巨噬细胞温育24小时和48小时后,其硫代巴比妥酸反应物质值明显高于无细胞对照组,琼脂糖电泳速度也加快,两者一致。结果说明小鼠腹腔巨噬细胞可以氧化修饰极低密度脂蛋白。VLDL在体外用Cu²⁺修饰后。硫代巴比妥酸反应物质明显增加,琼脂糖凝股电泳速度加快。比较正常的VLDL(n—VLDL)及Cu²⁺氧化的VLDL(Ox—VLDL)对内皮细胞粘附单核细胞的影响时,发现在所用各种浓度下,Ox—VLDL单核细胞的粘附率比n—VLDL组大得多(p<0.0001),说明VLDL被氧化后明显增加单核细胞与内皮细胞的粘附。     

含载脂蛋白B的脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞内脂质的影响

将小鼠腹腔巨噬细胞和含载脂蛋白Ｂ的两种脂蛋白、这两种脂蛋白与硫酸葡聚糖或相应抗体形成的复合物一起培养２４ｈ后，用薄层层析法测定巨噬细胞内胆固醇酯的含量。结果发现，天然脂蛋白（ａ）对巨噬细胞内胆固醇酯含量影响不大（增加８％，Ｐ〉０．０５）；天然低密度脂蛋白具有促进巨噬细胞内脂质蓄积作用（增加３５．４％，Ｐ〈０．０５）；上述两种脂蛋白与硫酸葡聚糖一起共同作用，促进巨噬细胞内胆醇酯蓄积作用明显加强（分别     

去唾液酸对低密度脂蛋白和脂蛋白(a)代谢的影响

将低密度脂蛋白和脂蛋白（ａ）用神经氨酸酶处理，去除低密度脂蛋白（ａ）中所含末端唾液酸，然后用＾１２５Ｉ－纤维素二糖酪胺标记，经刺猬腋下静脉注射，分别于３ｈ和６ｈ处死，测定血，肝，脾，肾和胆汁中放射含量，分析和比较去唾液酸和富含唾液酸低密度脂蛋白和脂蛋白（ａ）的代谢变化，实验发现，注射去唾液酸低密度脂蛋白的最初３ｈ，组织内的代谢速率低于低密度脂蛋白组，后６ｈ后代谢速率则高于低密度脂蛋白组。注射去唾液     

脂蛋白(a)受体的研究

本文用蛋白免疫印迹方法发现了猴肝细胞膜上脂蛋白受体，为进一步研究这一导致动脉粥样硬化的脂蛋白的致病机理提供了新的研究内容，具体方法为：取新鲜猴肝匀浆，离心，超声波等处理制得可溶性的膜受体粗提液，经十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后转移至硝酸纤维膜，用蛋白质免疫印迹方法检测，出现特异的脂蛋白受体条带。     

氧化型脂蛋白(a)对人脐静脉血管内皮细胞P选择素表达的影响

目的探讨氧化修饰的脂蛋白(a)[Ox-Lp(a)]能否诱导人脐静脉内皮细胞表达P选择素,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用.方法在内皮细胞培养基中分别加入天然脂蛋白(a)[n-Lp(a)]与ox-Lp(a)及天然与氧化的低密度脂蛋白(n-LDL、ox-LDL).用细胞酶联免疫检测P选择素蛋白的表达,用单核细胞黏附率试验检测单核细胞黏附,并用Northern杂交检测P选择素mRNA的表达.结果ox-Lp(a)呈剂量依赖性增加内皮细胞P选择素蛋白表达,10nmol/L及20nmol/LOx-Lp(a)分别使P选择素表达明显增加到(145±10)%及(202±22)%.同时观察到Ox-Lp(a)促使单核细胞黏附率增加,并且黏附率与加入的Ox-Lp(a)浓度呈正相关.四种脂蛋白的作用进行比较显示Ox-Lp(a)的作用最强,10nmol/Ln-LDL、n-Lp(a)、ox-LDL、ox-Lp(a)分别使P选择素表达增加到(105±7)%、(127±9)%、(176±19)%、(245±22)%.Northernblot结果显示Ox-Lp(a)能促使P选择素mRNA表达明显增加.结论Ox-Lp(a)能诱导内皮细胞表达P选择素增强,这可能与脂蛋白(a)致动脉粥样硬化作用机制有关.     

氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及可能机制

研究氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响 ,并探讨其与组织蛋白酶活性之间的关系。用 10 0mg/L的乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞胞浆和溶酶体中胆固醇的含量以及溶酶体中组织蛋白酶的活性。结果发现 ,乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白均可引起细胞胆固醇含量增加 (分别为 2 2 .2± 0 .4 μg和 2 2 .5 5± 0 .15 μg比对照组的 7.0± 0 .4 μg ,P <0 .0 1) ,但蓄积部位和形式完全不同 ,前者蓄积部位主要在胞浆并以胆固醇酯为主 (胞浆与溶酶体分别为 18.9± 0 .4 μg和3.3± 0 .2 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 0 .73± 0 .0 5 μg和 18.1± 0 .4 μg) ,后者主要在溶酶体并以游离胆固醇为主 (胞浆与溶酶体分别为 3.6 5± 0 .14 μg和 18.90± 0 .15 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 14 .13± 0 .14 μg和 4 .77±0 .33μg) ;前者不引起溶酶体组织蛋白酶的活性改变和蛋白含量增加 (组织蛋白酶L和D分别为 99.5± 3.4和 2 8.0± 2 .4 ,对照组分别为 10 2 .3± 8.2和 2 7.3± 1.6 ,P >0 .0 5 ;蛋白含量为 8.8± 0 .4 μg ,对照组为 9.0± 0 .3μg,P >0 .0 5 ) ;后者则造成溶酶体组织蛋白酶活性的明显降低和蛋白蓄积 (组织     

A型清道夫受体基因敲除小鼠的腹腔巨噬细胞特异性氧化型低密度脂蛋白受体

为研究巨噬细胞表面是否存在特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,选用A型清道夫受体基因敲除小鼠来进行研究。竞争抑制实验发现 ,在乙酰化低密度脂蛋白存在 (终浓度为 2 0 0mg L)的情况下 ,A型清道夫受体基因敲除小鼠的腹腔巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取降低了 2 4 .8% ,还有大约 80 %的氧化型低密度脂蛋白可能通过特异性受体途径被摄取。蛋白配基印迹技术发现一种膜蛋白 ,分子量为 84～ 97kDa,它不结合乙酰化低密度脂蛋白 ,只结合氧化型低密度脂蛋白 ,并且未标记1 2 5I的氧化型低密度脂蛋白能竞争性抑制1 2 5I标记氧化型低密度脂蛋白与该膜蛋白的结合 ,上述结果提示这种膜蛋白是特异性氧化型低密度脂蛋白受体     

正常人两种极低密度脂蛋白亚组分对小鼠腹腔巨噬细胞脂质堆积的影响

本文研究了正常人极低密度脂蛋白两种亚组分，即贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ对小鼠腹腔巨旨质堆积的影响。     

天然和氧化型极低密度脂蛋白对巨噬细胞胞内游离钙浓度的影响

为了更好地阐明极低密度脂蛋白，尤其是氧化型极低密度脂蛋白在动脉粥样硬化发病过程中的作用机制，本文利用双波长显微分光光度计，检测了天然和氧化型极低密度脂蛋白对巨噬细胞内游离钙浓度（Ｃａ＾２＋）的影响，结果表明，极低密度脂天蛋和氧化型极低密度脂蛋均能刺激巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ升高，极低密度脂蛋白可增加巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的５７％，而氧化型极低密度脂蛋白则增加巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的１１５％。这     

氧化型和正常极低密度脂蛋白对猪主动脉平滑肌细胞脂类堆积的不同影响

为了观察氧化型及正常极低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞内脂类堆积的不同影响，探索平滑肌细胞摄取氧化型极低密度脂蛋白的受体途径，用２００ｍｇ／Ｌ的氧化型及正常极低密度脂蛋白与猪主动脉平滑肌细胞温有４８ｈ后，细胞内甘油三脂含量分别为对照组的３．２倍和１０．６倍（Ｐ〈０．０１），且两个实验组之间相比，差异也有显著性意义（Ｐ〈０．０１），细胞内总胆固醇明显升高（Ｐ〈０．０５），但是两个实验组之间无显著差异（Ｐ     

低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核细胞ABC1 mRNA表达的影响

为探讨低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核巨噬细胞ABCl表达的影响，用40μg/L佛波酯作用48h，将单核细胞诱导成巨噬细胞，再分别与20mg/L、120mg/L的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白作用24h，提取细胞中总RNA，用逆转录聚合酶链反应法检测其ABCl mRNA的表达。结果发现，小剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可引起THP-1细胞ABClmRNA不同程度的表达增高，小剂量的高密度脂蛋白对ABCl表达无明显影响；而大剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可使THP-1细胞ABClmRNA的表达不同程度降低，其中高密度脂蛋白组轻微降低。结果提示，不同浓度脂蛋白和氧化型脂蛋白对血中单核细胞ABCl表达水平的影响可能在动脉粥样硬化的发生发展过程起重要作用。     

正常人两种极低密度脂蛋白亚组分对小鼠腹腔巨噬细胞脂质堆积的影响

本文研究了正常人极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＶＬＤＬ）两种亚组分，即贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ对小鼠腹腔巨噬细胞（ｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭＰＭ）脂质堆积的影响。将贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ分别与ＭＰＭ温育２４ｈ后，细胞内甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ）和胆固醇酯（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌｅｓｔｅｒ，ＣＥ）随ＶＬＤＬ浓度的增加而增加（方差分析，Ｐ＜０．０５），且对ＭＰＭ内ＴＧ的增加量以贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ居多（Ｐ＜０．０１），而对ＭＰＭ内ＣＥ的增加量两者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。这提示，贫含载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ和富合载脂蛋白Ｅ的ＶＬＤＬ均能促进ＭＰＭ内ＴＧ、ＣＥ堆积，从而使巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭＰ）转变为泡沫细胞。     

极低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白E基因表达的影响

为研究载脂蛋白Ｅ含量不同的极低密度脂蛋白对巨噬细胞载脂蛋白Ｅ表达的影响，以肝素－琼脂糖凝胶亲和层析法将正常人极低密度脂蛋白分离为富含载脂蛋白Ｅ和贫含载脂蛋白Ｅ的二种不同亚组分，并分别以不同浓度与小鼠腹腔巨噬细胞共培养。     

激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡的影响

目的探讨激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264.7经氧化型低密度脂蛋白处理24h诱导凋亡,同时观察给予视黄醇类X受体特异性配体9-cisRA或SR11237对氧化型低密度脂蛋白诱导凋亡的干预作用,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪PI单染法和DAPI染色检测细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果RAW264.7细胞经氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理24h后细胞活力较对照组下降约60,细胞凋亡百分率较对照组升高约75,10-8mol/L和10-7mol/L9-cisRA及10-7mol/LSR11237能够显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导引起的细胞活力下降和凋亡(P<0.05)。给予氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)4h后细胞内活性氧水平显著升高约17倍以上,如联合给予9-cisRA(10-7mol/L)或SR11237(10-6mol/L),平均荧光强度分别下降约52和28,较氧化型低密度脂蛋白单独处理组有显著性差异(P<0.05)。结论激活视黄醇类X受体能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。