反义c-mycRNA的表达对大鼠血管平滑肌细胞c-mycmRNA和c-Myc蛋白水平的影响

为探讨反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒载体是否影响血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白水平，用基因重组方法，将第二外显子及其两侧部分内含子共１．５３ｋｂ序列的ｃ－ｍｙｃ基因片段反向连接于ＰＬＸＳＮ的５’长末端重复序列下游，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒导入ＰＡ３１７包装细胞系，并经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。反义ｃ－ｍｙｔ逆转录病毒上清液转染的平滑肌细胞经ＤＮＡ印迹杂交和ＥＮＡ印迹杂交及蛋白印迹杂交证实其是否整合于平滑肌细胞基因组中，有无反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ表达及表达的反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ对平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达的影响。结果发现，反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒载体能整合于平滑肌细胞基因组中，ＲＮＡ印迹杂交和蛋白印迹杂交发现反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ显著抑制了平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表达，而正义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ对其无影响。此实验结果说明反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ是以序列特异性方式抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达的有效工具，这为ｃ－ｍｙｃ基因过度表达的疾病的基因治疗提供了一种新的途径。     

丹参酮Ⅱa磺酸钠抑制巨噬细胞源性生长因子刺激平滑肌细胞c-myc基因表达

本实验采用原位杂交技术，探讨丹参酮Ⅱａ磺酸钠对血管平滑肌细胞增殖相关基因ｃ－ｍｙｃ表达的影响。观察到巨噬细胞源性生长因子可明显促进平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ高表达；丹参酮Ⅱａ磺酸钠能阻止巨噬细胞源笥长因子刺激平滑肌细胞的作用，使ｃ－ｍｙｃ表达水平下降，提示丹参酮Ⅱａ磺酸钠可能在动脉粥样硬化疾病中阻止平滑肌细胞增殖起重要作用。     

丹参酮Ⅱa磺酸钠抑制巨噬细胞源性生长因子刺激平滑肌细胞c-myc基因表达

本实验采用原位杂交技术，探讨丹参酮Ⅱａ磺酸钠对血管平滑肌细胞增殖相关基因ｃ－ｍｙｃ表达的影响。观察到巨噬细胞源性生长因子可明显促进平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ高表达；丹参酮Ⅱａ磺酸钠能阻止巨噬细胞源性生长因子刺激平滑肌细胞的作用，使ｃ－ｍｙｃ表达水平下降，提示丹参酮Ⅱａ磺酸钠可能在动脉粥样硬化疾病中阻止平滑肌细胞增殖起重要作用。     

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及Bcl-2蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及Bcl-2蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对血管平滑肌细胞增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24 h后,用免疫印迹法检测Bcl-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应检测凝血酶受体mRNA的表达。结果凝血酶对血管平滑肌细胞有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值,且凝血酶浓度在0.1~1.0 u/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成及血管平滑肌细胞Bcl-2蛋白的表达;高浓度(1.5×10-3mol/L)葛根素可显著抑制凝血酶诱导的凝血酶受体mRNA上调。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖,这可能与其抑制Bcl-2蛋白有关,并部分与其抑制凝血酶受体mRNA表达有关。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数法等观察了胰岛素对体外培养的人血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成，细胞增殖及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，在培养基中加入不同浓度的胰岛素后，血管平滑肌细胞增殖，细胞ＤＮＡ合成增加，原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ表达增加，上述三者均具有胰岛素剂量依赖性，呈现量－效关系，实验结果表明，高胰岛素血症可能促进平滑肌细胞增殖和原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数法等观察了胰岛素对体外培养的人血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成、细胞增殖及原癌基因：ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，在培养基中加入不同浓度的胰岛素后，血管平滑肌细胞增殖，细胞ＤＮＡ合成增加，原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加，上述三者均具有胰岛素剂量依赖性，呈现量－效关系．实验结果表明，高胰岛素血症可能通过促进平滑肌细胞增殖和原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达和来加速动脉粥样硬化的发生与发展的。     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法建立血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞中钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性的影响。结果与正常对照组比较,血管紧张素Ⅱ组能够明显刺激血管平滑肌细胞增殖,血管紧张素Ⅱ处理的血管平滑肌细胞的钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性及细胞增殖活度均较正常对照组显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪处理后,各组钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性均显著下降(P<0.01)。结论川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其抑制机制可能与其干预钙调神经磷酸酶依赖的信号转导途径有关。     

反义c-mycRNA的表达对大鼠血管平滑肌细胞c-mycmRNA和c-Myc蛋白水平的影响

为探讨反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒载体是否影响血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白水平，用基因重组方法，将第二外显子及其两则部分内含子共１．５３ｋｂ序列的ｃ－ｍｙｃ基因片段反向连接于Ｐ＾ＬＸＳＮ的５′长末端重复序列下游，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒导入ＰＡ３１７包装细胞系，并经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。反义－ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒上清液转染的平滑肌细胞经ＤＮＡ印迹     

反义凝血酶受体基因序列对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

为了研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增埴中的作用 ,探讨反义凝血酶受体基因序列对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ;用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ;用Western blot检测反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 ;用3 H 肌醇掺入率检测反义凝血酶受体序列抑制血管平滑肌细胞磷酸肌醇代谢的影响。结果发现 ,反义凝血酶受体基因序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 .0 5 ) ;明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 ;明显抑制了血管平滑肌细胞磷酸肌醇代谢。提示反义凝血酶受体基因序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ;凝血酶受体反义序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 (特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达 ) ,抑制细胞内信号传递来完成     

可罗卡林对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察对大鼠主动脉平滑肌细胞起负调节作用的可罗卡林(cromakalim对同型半胱氨酸(hcy)刺激的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)增殖及c—myc基因表达的影响。方法：在建立hcy诱导的平滑肌细胞增殖模型后，应用流式细胞术观察VSMC增殖周期的变化；并用免疫细胞化学方法观察可罗卡林对VSMC增殖及c—myc基因蛋白表达的影响。结果：可罗卡林使VSMC处于G0／G1期的细胞数显著增多(P＜0．01)，S期G2 M期的细胞数显著减少(P＜0．01．)，能够抑制hcy诱导的VSMC增殖和c—myc基因蛋白表达的增加。结论：可罗卡林对hcy诱导的VSMC增殖有显著的抑制作用，其作用机制与抑制c—myc基因表达有关。     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

卡托普利对血管平滑肌细胞增殖和PDGF—B、bFGF及相关癌基因的影响

采用内皮素建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型。用氚-胸腺嘧啶核苷（［3H］－TdR）参入法，流式细胞术，免疫细胞化学及NorthemBlot杂交方法，观察卡托普利（Cap）对VSMC增殖的作用及对生长因子PDGF－B，bFGF及其相关癌基因c－sis，c－myc表达的影响。结果发现：Cap能逆转内皮素所致的［3H］－TdR参入量增多，阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂（G2／M期），并能逆转内皮素引起的PDGF—B，bFGF抗原，c－sis，c－mycmRNA表达增强。提示：aop有抑制血管平滑肌细胞增殖作用，与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

瓜蒌皮提取物对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的 研究瓜蒌皮提取物对血小板源生长因子BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响并探讨其可能机制.方法 组织块贴块法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,3H-TdR掺入观察瓜蒌皮提取物(10、20和30mg/L)对血小板源生长因子BB(20 μg/L)所致血管平滑肌细胞DNA合成的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;real time RT-PCR检测血管平滑肌细胞中c-fos、c-myc mRNA表达.结果 血小板源生长因子BB可明显升高细胞每分钟脉冲数(P＜0.01),并增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例(P＜0.01),并上调c-fos、c-myc mRNA表达(P＜0.01).瓜蒌皮提取物各浓度组均明显抑制血小板源生长因子BB诱导的每分钟脉冲数升高(P＜0.01),降低S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例,明显下调血小板源生长因子BB所致的c-fos、c-myc mRNA高表达(P＜0.01).结论 瓜蒌皮提取物通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期进入S期而抑制血小板源生长因子BB所致的增殖,其作用机制可能与降低细胞内c-fos、c-myc mRNA高表达有关.     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨ＡＰＩ０１３４防治冠状动脉继样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法，流式细胞术、免疫细胞化学检测及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，观察了ＡＰＩ０１３４对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子Ｂ链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，ＡＰＩ０１３４能逆转内皮素所致的氚标胸     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨API0134防治冠状动脉粥样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学检测及Northernblot方法，观察了API0134对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因C－sis和C－mpc表达的影响。结果发现，API0134能逆转内皮素所致的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量增多（对照组为499±92，内皮素组为617±98，API0134组为506±102），阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期；对照组为72％，内皮素组为50％，API0134组为60％）进入DNA合成期（S期；三组分别为26％、36％和30％）和有丝分裂期（G2／M期，三组分别为2％、14％和4％），并能逆转内皮素引起的血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子抗原、c－sis和c－mpc的mRNA表达增强。提示API0134有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，这种作用与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制.选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞,在与凝血酶(4.0 ku/L)共同孵育的条件下,分别给予水蛭素(6.0 ku/L)和肝素(6.O ku/L)进行干预.通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期,免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达.结果发现,重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖,其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关.     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的免胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞，在与凝血酶(4．0ku／L)共同孵育的条件下，分别给予水蛭素(6．0ku／L)和肝素(6．0ku／L)进行干预。通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性，流式细胞术检测细胞周期，免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达。结果发现，重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖，其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关。