miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF-BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)的作用及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR-NC组、PDGF-BB+miR-145组及PDGF-BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT-PCR方法检测PCNA、c-Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达、JNK和p-JNK的表达以及p38MAPK和p-p38MAPK的表达。结果 miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF-BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论 miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

机械牵张力和氧化型低密度脂蛋白协同激活大鼠血管平滑肌细胞LOX-1受体-ERK1/2信号通路

目的为证实α1-肾上腺素能受体(α1-AR)是否介导了机械牵张力和/或去甲肾上腺素(NE)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的协同激活并加速血管重构。方法静息培养的小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)经有或无Prazosin(α1-AR抑制剂)预处理后,给予机械牵张力和/或NE刺激,Western Blotting检测ERK1/2的磷酸化水平,免疫荧光检测ki-67的表达(细胞增殖),RT-PCR检测细胞α1-AR亚型(α1A-,α1B-和α1D-AR)mRNA的表达。分别用三种亚型的α1-AR-siRNA预处理细胞,观察α1-AR各亚型基因沉默对机械牵张力诱导的VSMC ERK1/2磷酸化的影响。结果机械牵张力可分别上调α1B-和α1D-AR mRNA表达,但α1A-AR mRNA未检测到。机械牵张力和/或NE均可激活ERK1/2,引起ERK1/2磷酸化增加,而两种因素共同存在时ERK1/2激活更加明显;ki-67的表达呈现类似效应;这种由机械牵张力和/或NE激活的作用均可被Prazosin部分抑制。α1B-和α1D-AR-siRNA预处理可分别减少α1B-和α1D-AR ...     

MiR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p在ox-LDL诱导大鼠VSMC表型转化和增殖中的作用

目的探讨miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖中的作用及其与ERK1/2信号通路的相关性。方法分离、培养大鼠VSMC,以ox-LDL(50 mg/L)诱导VSMC,采用ERK1/2特异性抑制剂U0126(10μmol/L)阻断ox-LDL(50 mg/L)诱导VSMC的ERK1/2信号激活,MicroRNA微阵列分析VSMC的miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p表达,CCK-8法和Brdu流式细胞术检测细胞增殖;免疫荧光法检测VSMC收缩表型标志蛋白SM22α的变化;Western blot检测VSMC的ERK1/2通路信号激活情况(ERK、p-ERK)、表型标志蛋白SM22α、细胞周期相关蛋白(PCNA、cyclin D1、p21、p27)的表达情况。结果 ox-LDL诱导下,VSMC的miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p表达明显上调,VSMC的ERK1/2磷酸化水平明显增加,SM22α的表达降低,同时细胞周期相关蛋白PCNA、cyclin D1高表达,p21、p27低表达;ERK1/2通路特异性抑制剂U0126干预后,ERK1/2磷酸化水平受抑制,相应的VSMC miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p表达明显下调(P0.05),VSMC增殖显著下降,SM22α的表达上调(P0.05),提示VSMC由合成表型转化为收缩表型,并下调PCNA、cyclin D1的表达,上调p21、p27蛋白的表达(P0.05),说明其表型转化和增殖明显受抑制。结论 miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p在ox-LDL诱导VSMC表型转化和增殖中起重要作用,并与ERK1/2信号通路密切相关。     

血管平滑肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子的调节

目的 阐明有丝分裂源激活的蛋白激酶(MAPK)和磷脂酶C(PLC)通路在调节细胞周期紊依赖性激酶抑制因子(CKI)p27，p21，p57蛋白表达量中的作用及其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法 分离SD大鼠主动脉中层平滑肌，贴壁法培养平滑肌细胞，无血清培养基培养静止后，分别加入血小板源性生长因子(PDGF)(20ng／m1)、PDGF PD98059(20ng／ml 20mmol／L)、PDGF 硫酸新霉紊(20ng／ml 10mmol／L)等刺激因素，以无血清培养基培养的VSMC作对照。在刺激后90min收集细胞，用免疫沉淀法检测MAPK(p44／p42)活性的改变。在刺激后6和24h收集细胞，用Western蛋白印迹法检测p27、p57和p21蛋白表达量。结果 PDGF刺激后，MAPK活性明显升高(较对照组增加46．6％)，同时VSMC明显增殖。刺激24h后，细胞增殖程度为对照组的1．43倍，p27蛋白的表达量显著下降至对照组的71％；p21和p57蛋白表达量却明显增加；加用PD98058(MAPK抑制剂)和新霉紊(PLC抑制剂)可明显抑制PDGF引起的上述改变，MAPK活性分别较PDGF。刺激组下降了46％和37％，p27蛋白表达量则分别为PDGF刺激组的1．77倍和1．49倍，细胞增殖程度分别降为后者的68％和65％。结论 MAPK(-14／42)变化的幅度是决定CKI表达量和VSMC增殖的关键因素。PLC通路在PDGF刺激VSMC增殖信号转导中同样起关键作用。     

盐酸小檗碱通过抑制PKCα磷酸化抑制机械牵张力诱导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡

[目的]观察机械牵张力(SS)是否通过激活PKCα诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡,并探讨盐酸小檗碱(BBR)对它的作用及机制。[方法]实验共分6组：正常对照组、BBR组、PKCα抑制剂(Go6976)组、SS组、SS+BBR组、SS+Go6976组。静息培养的细胞给予BBR或Go6976预处理1 h,继而予10%强度的SS刺激15 min后收集细胞,Western blot检测PKCα和MAPK(ERK、JNK、p38)磷酸化水平。BBR或Go6976预处理1 h,牵拉时间为1 h,继续培养23 h,免疫荧光法检测细胞增殖(Ki67)和凋亡(TUNEL)。[结果] Western blot与免疫荧光结果显示,与正常对照组相比较,SS可升高PKCα和MAPK(ERK、JNK和p38)磷酸化水平(P<0.05),并增加VSMC的增殖和凋亡水平(P<0.05)。BBR可抑制PKCα和ERK、JNK、p38磷酸化水平(P<0.05),同时抑制VSMC增殖和凋亡(P<0.05);Go6976可抑制PKCα和ERK、JNK磷酸化水平(P<0.05),但对...     

大电导钙激活钾通道介导血管平滑肌细胞增殖及其机制

目的探讨大电导钙激活钾通道(BKca)是否通过Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号途径影响兔主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖。方法用低浓度的四乙胺(TEA)处理体外传代培养的家兔胸主动脉VSMC。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术(FCM)检测TEA对VSMC的增殖和细胞周期的影响,分别采用免疫组化法和免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(P-ERK1/2)蛋白表达。结果 (1)MTT法检测结果显示,TEA能够呈时间依赖性和剂量依赖性地降低吸光值、增加细胞抑制率(P0.05);(2)流式细胞术分选结果显示,TEA处理48 h后能够呈剂量依赖性地增加G1期细胞比例,减少S期、G2期细胞比例(P0.05);(3)免疫组化检测结果显示,随着TEA浓度的增加,VSMC的PCNA阳性表达率逐渐下降(P0.01);(4)免疫印迹法结果表明,经400μmol/L的TEA处理48 h后,ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达,ERK活化率与未经处理的对照组比较,均无统计学意义(t=0.354~1.035,P0.05)。结论 TEA可呈浓度依赖性地阻止细胞周期由G1向S期推进,抑制VSMC增殖;该过程的分子机制不经由Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号途径介导。     

平肝潜阳法对SHR血管平滑肌细胞增殖及HSP27表达的影响

目的 探讨平肝潜阳法对体外培养的自发性高血压大鼠(SHRs)血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,及与热休克蛋白27(HSP27)表达的关系.方法 采用改良的贴块法行SHR主动脉VSMC的分离培养,α-actin 单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定培养细胞;以MTT法反映VSMC增殖情况;用RT-PCR和Western印迹方法检测HSP27基因和蛋白的表达水平.结果 对照组和治疗组均能抑制VSMC增殖,两组有显著差异(P＜0.01);RT-PCR和Western印迹分析显示,与正常组比较,模型组HSP27表达明显增强(P＜0.01);与模型组比较,对照组和治疗组HSP27表达明显减弱(P＜0.01).结论 平肝潜阳法通过抑制VSMC增殖可能与抑制HSP27表达有关,是改善高血压血管重构的重要作用分子机制之一.     

内脂素在人脐静脉内皮细胞增殖凋亡中的作用及机制

目的研究内脂素在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖凋亡中的作用及机制。方法选取产科提供的健康剖腹产的孕妇脐带进行原代培养HUVEC。使用MTT法检测内皮细胞增殖,流式细胞仪法检测细胞凋亡情况,通过Western blot检测内皮细胞中磷酸化热休克蛋白27(p-HSP27)的蛋白表达量。内脂素(10nmol/L)分别加入10μmol/L的丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK),磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)或细胞外信号调节激酶(ERK)1/2选择性抑制剂(分别为SB202190,LY294002和U0126)预处理的内皮细胞后,检测内皮细胞增殖、凋亡及蛋白表达情况改变。结果 10nmol/L的内脂素能促进HUVEC的增殖、抑制高糖诱导的凋亡(均P0.05)。预先给予LY294002或U0126能够有效地减少内脂素诱导的HSP27磷酸化的表达,分别使磷酸化峰值减少77.8%和51.7%(均P0.01),并且LY294002或U0126可以阻断内脂素诱导的HUVEC的增殖促进及凋亡保护作用。结论内脂素通过ERK1/2和PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路激活HSP27磷酸化,从而促进HUVEC增殖并抑制高糖诱导凋亡的重要过程。     

β_2-肾上腺素受体亚型激动对于血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究β2-肾上腺素受体亚型(beta2-adrenergic receptor,β2-AR)激动对于血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控效应。方法应用携带重组β2-AR片段的腺病毒感染VSMC制备受体过表达模型。分别应用Zinterol(ZIN)以及异丙基肾上腺素(ISO)刺激生理状态和β2-AR过表达的平滑肌细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和细胞计数法检测吸光度(A,曾称光密度OD)值和细胞数目的改变。结果ZIN刺激1天时A值开始下降(P<0.05),3天时抑制作用达高峰,抑制率为(32.00±1.62)%。细胞计数法测得ZIN激动3天时细胞数为对照组的(69.29±9.26)%。应用CGP20712A阻断β1-AR激活后,非选择性-βAR激动剂ISO刺激细胞后得到结果相似。特异性β2-AR拮抗剂ICI 118,551可逆转此抑制效应。ISO刺激过表达的β2-AR 3天时MTT检测结果相似。结论β2-AR亚型激动可抑制VSMC的增殖。     

血管周围脂肪组织源瘦素促进高脂喂食诱导的肥胖大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的探讨血管周围脂肪组织来源的瘦素对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及其可能机制。方法 20只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为2组,分别给予高脂饲料及标准大鼠饲料喂养,12周后筛选出7只肥胖大鼠作为肥胖组,普食组随机选取7只作为对照组,每周称重。喂养12周后,颈动脉插管测得血压;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清瘦素水平;取大鼠降主动脉行HE及Masson染色,比较两组血管结构改变;Western blot法检测两组大鼠血管周围脂肪组织瘦素和瘦素受体蛋白表达水平。利用大鼠血管周围脂肪组织制备条件培养基,ELISA法检测条件培养基中瘦素水平;分别利用条件培养基、瘦素、瘦素拮抗剂(leptin-tA)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂、p38抑制剂等干预大鼠VSMC,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖情况,Western blot法检测细胞瘦素、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、总ERK1/2(t-ERK1/2)、磷酸化p38(p-p38)、总p38(t-p38)蛋白表达。结果与对照组相比,肥胖组大鼠血清瘦素水平升高;主动脉壁结构紊乱,主动脉中膜厚度[(125.48±20.36)比(80.33±15.62)μm]和中膜厚度/管腔直径(0.14±0.01比0.08±0.01)增高(均P0.05)。大鼠血管周围脂肪组织瘦素及瘦素受体蛋白表达增高(均P0.05)。体外实验发现,条件培养基(血管周围脂肪组织细胞培养制成的上清液)瘦素水平明显升高[(8.34±0.92)比(4.38±0.66)μg/L,P0.05],且高于血清瘦素水平[(8.34±0.92)比(5.85±1.16)μg/L,P0.05];与对照组大鼠血管周围脂肪组织制备的条件培养基培养的VSMC相比,利用肥胖组大鼠血管周围脂肪组织制备的条件培养基培养的VSMC增殖显著增加,ERK1/2、p38磷酸化水平升高(均P0.05);加入瘦素拮抗剂后,细胞ERK1/2及p38磷酸化水平降低(均P0.05);加入瘦素拮抗剂、ERK1/2抑制剂、p38抑制剂后细胞增殖降低(P0.05)。结论血管周围脂肪组织来源的瘦素可以促进肥胖大鼠VSMC增殖,这种作用可能与ERK1/2和p38信号通路激活有关。     

激活原代星形胶质细胞α7尼古丁胆碱能受体对PI3K/Akt/HSP70信号通路的影响

目的研究尼古丁激活星形胶质细胞α7尼古丁胆碱能受体(nAChR)对热休克蛋白(HSP)70表达的影响,探讨激活α7nAChR对阿尔茨海默病(AD)的神经保护作用及其机制。方法从刚出24 h内的小鼠的大脑皮质中分离出原代星形胶质细胞,培养并进行细胞纯度鉴定。将培养好的星形胶质细胞分为空白对照组、尼古丁组、α7nAChR阻断剂MLA组、MLA+尼古丁组、PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002组和LY294002+尼古丁组。用Western印迹法检测细胞内HSP70及P-Akt蛋白的表达情况。结果与对照组相比,尼古丁组中HSP70的表达水平显著升高(P0.01);与尼古丁组相比,MLA+尼古丁组中HSP70蛋白表达水平受到明显抑制(P0.05);LY294002+尼古丁组中HSP70蛋白表达水平明显受到抑制(P0.05);且尼古丁可以显著上调P-Akt蛋白水平(P0.05),该上调效应能被MLA或LY294002抑制(P0.05)。结论尼古丁激活星形胶质细胞α7nAChRs,可通过PI3K/Akt信号通路上调HSP70蛋白表达水平。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的作用及其机理。方法:本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC、用细胞计数和流式细胞仪(FCM)进行VSMC增殖和凋亡的检测。结果:(1)不同浓度AngⅡ对VSMC增殖均有显著促进作用、呈剂量依赖关系至10μmol/L时趋于饱和,AngⅡ能促进VSMC从G_0/G_1期进人S期、进行DNA合成,AngⅡ的促增殖作用为一快相作用。(2)Losartan和CGP42112A均能不同程度地取消AngⅡ对VSMC的促增殖作用。(3)100μmol/L AngⅡ能很好地诱导VSMC凋亡的发生、且随时间延长而增加,CGP42112A能阻止凋亡的发生而Losartan则不能。结论:本实验显示AngⅡ能通过ATR-1和ATR-2共同促进VSMC进入合成期、进行增殖反应,同时证实AngⅡ能诱导VSMC发生凋亡,可能主要由ATR-2介导。     

细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化.方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)刺激VSMC内贮Ca2+释放入胞浆,用3H-亮氨酸及3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响.结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P＜0.05或0.01).RY刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaM-PK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY刺激组相比差异显著(P＜0.01).结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2+、PKC、MAPK来介导.钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖.     

脱氢表雄酮抑制血管平滑肌细胞增殖的体外研究

目的研究脱氢表雄酮(DHEA)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖过程中的作用及机制。方法 AngⅡ处理体外培养的VSMC,再用DHEA处理VSMC,MTS、细胞计数检测DHEA对AngⅡ诱导的VSMC增殖的影响。定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测DHEA对AngⅡ诱导的VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)、Krüppel样因子5(KLF5)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测DHEA对AngⅡ诱导的VSMC的培养基中过氧亚硝基阴离子(ONOO~-)浓度的影响。用小干扰RNA(siRNA)内源性敲低iNOS,Western blot检测VSMC中PCNA的表达。结果 MTS和细胞计数结果显示,DHEA能显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖(P0.05)。qRT-PCR和Western blot结果显示,在mRNA和蛋白质水平,DHEA显著抑制AngⅡ诱导的VSMC中PCNA、KLF5和iNOS表达(P0.05)。ELISA结果显示,DHEA显著减少AngⅡ处理的VSMC培养基中ONOO~-的浓度(P0.05)。内源性敲低iNOS后,Western blot结果显示,DHEA对AngⅡ诱导的PCNA蛋白表达无影响(P0.05)。结论 DHEA可能通过抑制iNOS产生的ONOO~-,使KLF5的表达下调,进而发挥抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖的作用。     

去除Mfn2基因PKA磷酸化位点对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究大鼠线粒体融合素基因2(Mfn2)在去除蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其相关的信号通路.方法:构建携带去除PKA磷酸化位点的Mfn2重组腺病毒[Adv-Mfn2-PKA(△)]和携带Mfn2的重组腺病毒(Adv-Mfn2)并感染VSMC.Western blot分析法Mfn2-PKA(△)和Mfn2蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位;荧光显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法比较其对细胞增殖的影响;Western blot法分析磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达变化.结果:激光共聚焦显微镜示Mfn2-PKA(△)与Mfn2蛋白都主要分布于线粒体外膜;荧光显微镜示Mfn2组细胞数较少,而Mfn2-PKA(△)组与对照组相似;MTT示,Mfn2-PKA(△)抑制VSMC增殖作用较Mfn2显著减弱(P＜0.01),与对照组无显著差异;Western blot结果显示,Mfn2-PKA(△)较Mfn2组p-ERK1/2表达显著升高(P＜0.01),与对照组无明显差异.结论:Mfn2-PKA(△)与Mfn2蛋白一样都定位于线粒体外膜,但抑制VSMC增殖的作用消失,对ERK1/2信号通路无抑制作用.表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2抗VSMC增殖的重要功能位点.     

Notch信号通路介导血小板源生长因子AA诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨Notch信号通路在血小板源生长因子AA(PDGF-AA)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用及机制。方法脱臼处死1~2月龄雄性SD大鼠,无菌取腹主动脉,剥弃外膜及去除内皮后,贴块法培养VSMC,α-SM-actin染色鉴定。实验分为四组:对照组、γ-secretase抑制剂组(DAPT组)、PDGF-AA组和PDGFAA+γ-secretase抑制剂组(PDGF-AA+DAPT组)。实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)检测Notch信号分子mRNA表达;Cell Titer96 Aqueous One Solution试剂盒检测细胞增殖活性;采用细胞划痕实验检测VSMC的迁移能力。结果腹主动脉VSMC表达Notch信号通路Jagged1、Jagged2、Notch1~3等几种主要的配体及受体;PDGF-AA刺激24h和48 h后分别导致Jagged2和Jagged1 mRNA表达显著增强(P0.01,n=4);与0 h相比,PDGF-AA刺激72 h后,Notch1、Notch3 mRNA表达显著增高(P0.01,n=4),而刺激24 h后Notch2 mRNA表达显著降低。PDGF-AA显著促进HES1(P0.05,n=4)、HEY2(P0.05,n=4)和转录因子Rbp-jКmRNA(P0.05,n=4)表达,DAPT抑制PDGF-AA介导的HES1、HEY2 mRNA表达增强(P0.01,n=4),但是进一步促进PDGF-AA诱导的Rbp-jКmRNA表达(P0.05,n=4);PDGF-AA刺激促进VSMC增殖(P0.01,n=5)和减少划痕余留面积(P0.01,n=4),两种效应均可被DAPT显著阻抑(P0.01,n=4)。结论 PDGF-AA调节了VSMC Notch信号分子表达,PDGF-AA部分通过激活Notch信号通路调节VSMC的增殖和迁移。     

血管平滑肌细胞中Survivin的表达和咖啡酸苯乙脂的干预效应

目的 观察脂多糖(LPS)激活血管平滑肌细胞(VSMC)后,咖啡酸苯乙酯(CAPE)对细胞表达存活素(Survivin)的影响.方法 MTT法检测LPS及CAPE对VSMC增殖能力的影响.分别用免疫细胞化学法和实时荧光定量RT-PCR法检测细胞Survivin蛋白和mRNA的表达.结果 0.1～10.0 mg/L的LPS刺激VSMC生长并诱导细胞表达Survivin,而5、10、20、40、80 mg/L CAPE呈剂量依赖性地抑制激活的VSMC生长,同时降低细胞中Survivin的表达水平.结论 CAPE可能通过降低激活的VSMC中表达的Survivin,增加细胞的凋亡而抑制其增殖.     

ADAM17调控CGRP对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制效应

目的阐明肿瘤坏死因子α转化酶(ADAM17)调控降钙素基因相关肽(CGRP)的抗血管平滑肌细胞(VSMC)增殖效应。方法以大鼠源性胸主动脉平滑肌细胞株(A10VSMC)为研究对象,采用RNA干扰抑制ADAM17表达;采用蛋白质免疫印迹和实时定量PCR检测蛋白和mRNA表达水平;采用噻唑蓝比色法评估细胞活性。结果 CGRP显著抑制血管紧张素Ⅱ介导的VSMC增殖。血管紧张素Ⅱ刺激24 h后,VSMC中ADAM17表达显著增加。CGRP预处理30 min能显著降低VSMC中ADAM17表达,而CGRP受体拮抗剂CGRP8-37可抑制或逆转上述效应。ADAM17 RNA干扰可显著抑制血管紧张素Ⅱ介导的VSMC增殖。结论降低ADAM17表达可能是CGRP抑制血管紧张素Ⅱ介导的VSMC增殖效应的机制。     

氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及促血管平滑肌细胞增殖的机制

目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤及损伤条件培养基作用于血管平滑肌细胞(VSMC)的影响.方法 采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、凋亡率及VSMC细胞周期各时相DNA含量、增殖指数.结果 ox-LDL致ECV304细胞活力降低,细胞内Ca2+浓度升高,MMP下降,细胞凋亡率明显增高；损伤条件培养基有明显促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著差异(P＜0.01,P＜0.001).结论 ox-LDL导致血管内皮细胞损伤,引起ECV304细胞内Ca2超载,致线粒体功能障碍,促进细胞凋亡；促进VSMC增殖.     

川芎嗪抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察川芎嗪注射液对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中黏附分子信号传递的影响,以明确川芎嗪活血化瘀作用的新靶点。方法采用贴块法培养VSMC,建立PDGF诱导的VSMC增殖模型,用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的抑制作用。用Western印迹方法分别检测各组细胞间黏附分子(ICAM-1)及黏附分子信号传递蛋白——整合素耦联激酶(ILK)的表达变化及川芎嗪影响。结果与PDGF刺激组相比,川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的细胞增生,并显著降低ICAM-1〔仅相当于刺激组的44%,(P0.05)〕及ILK〔仅相当于刺激组的62%,(P0.05)〕的表达。结论川芎嗪通过抑制黏附信号传递及黏附分子的表达而发挥抗VSMC增生的作用。