氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡及其对p53、p21和Bcl-2表达的影响

为研究单核细胞源性泡沫细胞凋亡机制,以氧化型低密度脂蛋白诱导人髓系白血病细胞U937凋亡,观察p5 3、p2 1和Bcl- 2的表达。用流式细胞术和DNA断裂分析检测细胞凋亡;用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测p5 3、p2 1和Bcl- 2蛋白表达,反转录聚合酶链反应显示p5 3、p2 1和Bcl- 2mRNA表达水平。结果表明氧化型低密度脂蛋白可致U937细胞凋亡,其作用具有浓度效应;氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡过程中,p5 3、p2 1mRNA和蛋白表达增加,Bcl- 2mRNA和蛋白表达减少。提示氧化型低密度脂蛋白可能通过上调p5 3、p2 1基因表达,下调Bcl- 2基因,导致U937细胞凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡时泛素缀合酶和p53的表达

为研究氧化型低密度脂蛋白致U937细胞凋亡时泛素-蛋白酶体通路中泛素缀合酶、p53与泡沫细胞凋亡之间的关系，用氧化型低密度脂蛋白处理人单核细胞U937细胞，诱导其凋亡，采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应检测泛素缀合酶和p53的基因表达；流式细胞术分析泛素缀合酶、载脂蛋白B和P153的蛋白表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白可以诱导U937细胞凋亡，在U937细胞凋亡过程中泛素缀合酶表达降低，p53表达增高，而且细胞内载脂蛋白B也增加。结果提示，泛素缀合酶的表达降低可能使P53和栽脂蛋白B经泛素-蛋白酶体通路的降解减慢．从而引起P53和载脂蛋白B在细胞内积聚．导致U937细胞凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡时细胞间粘附分子-1的表达时序

研究氧化型低密度脂蛋白诱导人单核细胞U937细胞吞噬脂质发生凋亡过程中对细胞间粘附分子－1表达的影响,用胸腺嘧啶核苷将U937细胞阻滞在G1期,流式细胞仪监测同步化处理效果;流式细胞术检测U937细胞泡沫化过程中细胞凋亡和细胞间粘附分子－1的表达;逆转录－聚合酶链反应分析细胞间粘附分子－1 mRNA的表达,结果显示,80mg/L氧化型低密度脂蛋白温育U937细胞48h可形成典型的泡沫细胞,72h可见凋亡细胞增多;氧化型低密度脂蛋白温育U937细胞12h即可检测到细胞间粘附分子－1表达,24h时达到最高值,48h略有降低,72h时则明显降低。结果表明,氧化型低密度脂蛋白可以促进U937细胞细胞间粘附分子－1表达,细胞间粘附分子－1的表达增强有利于巨噬细胞的趋化运动和对脂质的吞噬。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡及Bcl-2、BaX、P53和Caspase-3蛋白表达的影响

目的：研究沥水调脂胶囊抑制内皮细胞凋亡的机制。以氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，观察Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达。方法：用流式细胞术检测细胞凋亡并进行周期分析；用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达水平。结果：沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用。在此过程中沥水调脂胶囊上调了Bcl-2蛋白表达水平，对Bax蛋白表达未见明显影响，同时下调了P53和Caspase-3蛋白表达水平。结论：推测沥水调脂胶囊可能是通过上调Bcl-2蛋白表达，下调P53和Caspase-3蛋白表达抑制内皮细胞凋亡的。     

LOX-1在氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡中的作用和卡托普利的干预作用

目的探讨ox-LDL受体LOX-1在ox-LDL诱导单核/巨噬细胞凋亡中的角色和卡托普利的干预作用。方法应用流式细胞术检测细胞凋亡,采用免疫组织化学技术和Western Blot测定Caspase3、8、9的表达。结果ox-LDL可诱导U937细胞的凋亡峰出现(12.773±1.413),应用卡托普利和LOX-1的阻断剂角叉菜胶、PIA后凋亡峰明显减少,其百分比分别为(1.02±0.166)(4.94±0.47)(2.62±0.656),同时U937细胞在用ox-LDL培养后代表线粒体通路的Cas-pase9,3和代表死亡受体通路caspases8,3表达都增加,应用卡托普利和LOX-1的阻断剂角叉菜胶、PIA后caspase3、8、9的表达均减少。结论ox-LDL是通过与其受体LOX-1结合发挥损伤作用的。卡托普利可以抑制ox-LDL对U937细胞凋亡的诱导作用,从而对单核巨噬细胞起到保护作用。     

β淀粉样蛋白诱导U937细胞凋亡

为探讨β淀粉样蛋白对U937细胞的作用,用β淀粉样蛋白处理培养的U937细胞,以原位凋亡法、DNA琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞分析法检测细胞凋亡。结果发现,β淀粉样蛋白可引起U937细胞凋亡,表现在原位凋亡染色呈现阳性,DNA图谱呈现典型的梯形,而在流式细胞仪测得的直方图上显示出凋亡特征性的亚二倍体峰（亚G1峰）。     

青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡的研究

目的：研究青蒿琥酯体外诱导U937细胞凋亡及其过程中细胞内游离钙的变化。方法：采用光镜、透射电镜技术、DNA片段化电泳、流式细胞术对青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡进行了观察，并应用激光共聚焦显微镜技术检测凋亡过程中细胞内游离钙浓度的变化。结果：6．250mg／L的青蒿琥酯可诱导U937细胞凋亡，作用于细胞后30min，Ca^2＋浓度即明显升高，1h达高峰，48h仍维持在较高水平。结论：青蒿琥酯可诱导U937细胞凋亡，细胞胞质内Ca^2＋是青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡信号传导过程中重要的信号分子。     

鸦胆子油乳通过caspase-3途径诱导U937细胞凋亡

目的：研究鸦胆子油乳诱导白血病细胞(U937细胞)凋亡及凋亡过程中caspase-3的变化及其意义。方法：MTT法检测鸦胆子油乳对U937细胞增殖的抑制率；通过细胞形态、DNA片段化电泳、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡；应用酶联反应法检测caspase-3活性。结果：在31．25～1000．00mg／L浓度下鸦胆子油乳抑制U937细胞的增殖，IC50值为214mg／L，并呈现剂量-时间-效应关系；500mg／L鸦胆子油乳处理U937细胞，出现典型的细胞凋亡形态特征和DNA梯形带。流式细胞术检测显示125、250、500mg／L鸦胆子油乳诱导U937细胞凋亡；在诱导细胞凋亡过程中Caspase-3活性明显增高，且随作用时间延长，活性增加。结论：鸦胆子油乳在体外能够诱导U937细胞凋亡，诱导细胞凋亡可能是鸦胆子油乳抗白血病作用的机制之一，caspase-3活化参与了鸦胆子油乳诱导U937细胞凋亡的调控。     

CD36介导氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化和凋亡

为探讨清道夫受体ＣＤ３６在氧化型低密度脂蛋白诱导Ｕ９３７细胞泡沫化和凋亡中的作用,用氧化型低密度脂蛋白温育Ｕ９３７细胞,观察Ｕ９３７细胞泡沫化过程中ＣＤ３６的表达时序和泡沫细胞的凋亡;用ＣＤ３６单克隆抗体阻断Ｕ９３７细胞的吞噬作用,观察Ｕ９３７细胞吞噬蓄积胆固醇和细胞凋亡的改变。细胞胆固醇以修饰的酶荧光法测定;用流式细胞术检测异硫氰酸荧光素－抗ＣＤ３６单克隆抗体特异标记的ＣＤ３６和细胞的凋亡情况;用逆转录聚合酶链反应检测ＣＤ３６ｍＲＮＡ的表达。结果发现,８０ｍｇ／Ｌ氧化型低密度脂蛋白与Ｕ９３７细胞温育２４ｈ可增加细胞内总胆固醇,４８ｈ时可形成典型的泡沫细胞;ＣＤ３６表达呈现时序性改变,６ｈ即可检出ＣＤ３６表达增高,２４ｈ达到最高值,４８ｈ表达略有降低,ＣＤ３６ｍＲＮＡ的转录与ＣＤ３６的表达一致。用２００ｍｇ／Ｌ     

氧化型低密度脂蛋白诱导猪主动脉平滑肌细胞凋亡

为了探讨氧化型低密度脂蛋白是否引起血管平滑肌细胞凋亡 ,把体外培养的猪主动脉平滑肌细胞与 15mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育 72h ,分别使用荧光染色技术和激光共聚焦显微技术观察细胞核的变化 ,应用流式细胞仪鉴别凋亡细胞。结果发现 ,15mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用 72h后 ,荧光显微镜下可见染色质高度凝集 ,有核碎裂现象 ;激光共聚焦显微镜下见染色质固缩 ,核变小 ;流式细胞术鉴别为凋亡细胞。此结果提示 ,氧化型低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞发生凋亡 ,有典型的形态学改变。     

抗磷脂抗体对巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白及CD36表达的影响

为了探讨抗磷脂抗体对巨噬细胞摄入氧化型低密度脂蛋白的影响及其主要清道夫受体CD36抗原表达的调节 ,将培养的U937细胞与氧化型低密度脂蛋白 (80mg L)和抗磷脂抗体 (10 0mg L)孵育 ,用酶荧光法观察人类单核细胞株U937内脂质的变化、逆转录—聚合酶链反应和流式细胞术观察CD36抗原mRNA和蛋白水平表达的改变。结果发现氧化型低密度脂蛋白存在时细胞内胆固醇和胆固醇酯含量分别为 2 4 3± 9mg g细胞和 2 89± 12mg g细胞 ,流式细胞仪测CD36抗原为 2 5 % ,凝胶电泳分析CD36mRNA β actionmRNA为 1.0 5 ;在加入抗磷脂抗体后 ,胞浆内胆固醇和胆固醇酯明显增加 ,分别为 2 76± 10mg g细胞和 4 78± 13mg g细胞 ,流式细胞仪测CD36抗原为 37% ,凝胶电泳分析CD36mRNA β actionmRNA为 1.90 ;两组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。以上提示抗磷脂抗体有促进U937细胞摄取氧化型低密度脂蛋白的作用 ,这一过程是通过在转录及蛋白水平上调CD36抗原表达而实现的     

外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中CD36表达的影响

为研究抑癌基因Rb基因在U937细胞泡沫化过程中的表达，应用重组腺病毒载体导入外源性Rb基因。采用逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中清道夫受体CD36和Rb基因的表达和外源性Rb基因导入U937细胞后CD36和Rb基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中，Rb mRNA和蛋白的表达随作用时间延长呈下调趋势，CD36 mRNA和蛋白的表达则呈上调趋势；随着外源性Rb导入U937细胞并表达，CD36表达呈下调趋势。结果提示，外源性Rb基因的导入可以下调清道夫受体CD36的表达。     

氧化型低密度脂蛋白对培养的内皮细胞的致凋亡作用及尼莫地平的保护作用

通过研究氧化型低密度脂蛋白对培养的内皮细胞生长状态的影响及其致凋亡作用,阐述其致动脉粥样硬化机理,并研究尼莫地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡的作用。用Cu^2 引发脂质过氧化过程,制备氧化型低密度脂蛋白,用MTT检测法检测细胞活性,PI杂色法及ELISA法检测细胞凋亡。结果显示,细胞生长对氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性抑制作用。ELISA法和PI染色法进一步证实氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞发生凋亡。而尼莫地平可以抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡。提示氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞的细胞毒作用及其作用剂量有关;体内氧化型低密度脂蛋白通过致内皮细胞凋亡的途径,损伤血管内皮,引发动脉粥样硬化。尼莫地平可以对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡起到保护作用。     

U937源性泡沫细胞形成中组织因子途径抑制物2的表达定位及变化规律

目的研究U937源性泡沫细胞形成过程中组织因子途径抑制物2的表达定位及变化规律。方法采用沉淀法提取人血浆低密度脂蛋白,硫酸铜氧化制备氧化型低密度脂蛋白,与U937单核细胞共同孵育,建立泡沫细胞模型,同时体外培养人脐静脉内皮细胞,加入U937泡沫细胞中共同培养,观察内皮细胞对泡沫细胞形成的影响。采用双重细胞免疫荧光定位组织因子途径抑制物2蛋白,时间免疫分辨荧光定量组织因子途径抑制物2蛋白,逆转录聚合酶链反应和荧光定量聚合酶链反应检测泡沫细胞内组织因子途径抑制物2基因的动态变化。结果组织因子途径抑制物2主要定位于U937单核细胞胞质中,与组织因子有相似的分布。氧化型低密度脂蛋白作用于U937细胞6h后组织因子途径抑制物2蛋白和基因表达水平持续增高,6h达至峰值而后表达持续降低。氧化型低密度脂蛋白作用于人脐静脉内皮细胞后组织因子途径抑制物2蛋白表达增加,24h时达至峰值。加入内皮细胞可改善氧化型低密度脂蛋白抑制U937细胞表达组织因子途径抑制物2的作用。结论U937泡沫细胞形成过程中,体外培养的人源性单核细株胞U937上存在组织因子途径抑制物2的表达抑制,而与人脐静脉内皮细胞共同培养可改善这种异常。     

低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白对HepG2细胞肝脂酶活性及肝脂酶mRNA表达的影响

为观察低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白对肝脂酶合成和肝脂酶活性的影响 ,将不同浓度的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与人肝癌细胞株HepG2细胞共同培养 ,用MTT法测定细胞增殖抑制率 ,用组织化学法测定细胞肝脂酶活性 ,用逆转录聚合酶链反应测定细胞肝脂酶mRNA的表达水平。结果发现 ,低密度脂蛋白浓度在 2 7.4 7、5 4 .95mg/L时HepG2细胞逆转录聚合酶链反应产物的吸光度值分别是细胞对照的 2 .8倍和 2 .3倍 ,浓度在 10 9.89mg/L时逆转录聚合酶链反应产物的吸光度值与细胞对照比较降低 2 0 %。细胞肝脂酶活性随低密度脂蛋白浓度增加而降低 ,两者呈负相关 (r=- 0 .95 6 14 ,P <0 .0 5 ) ;低密度脂蛋白浓度在 5 4 .95mg/L时开始产生细胞增殖抑制作用 ,其细胞增殖抑制率与低密度脂蛋白浓度呈正相关 (r=0 .91199,P <0 .0 5 )。不同浓度的氧化型低密度脂蛋白处理HepG2细胞其肝脂酶mRNA逆转录聚合酶链反应产物的吸光度值均低于细胞对照孔 ;脂蛋白浓度为2 7.4 7、5 4 .95及 10 9.89mg/L时低密度脂蛋白组细胞肝脂酶活性是氧化型低密度脂蛋白组的 3～ 4倍 ;浓度在 5 4 .95mg/L时氧化型低密度脂蛋白对细胞的增殖抑制作用是低密度脂蛋白的 2倍。结果提示 ,低密度脂蛋白在一定浓度范围能诱导HepG2细胞肝脂酶mRNA     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学ＤＮＡ末标记法,流式细胞仪,Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｔｔｉｎｇ观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,ＤＮＡ末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白（前者是后者的１０倍）。电镜下凋亡细胞