正交试验法提取鼠尾腱胶原工艺的优化

目的: 探讨浸提时间、乙酸浓度及料液比对鼠尾腱胶原提取的影响,建立并优化鼠尾腱胶原的提取工艺,提高胶原提取效率。方法: 选取健康SD大鼠鼠尾,采取酸溶法提取鼠尾腱胶原,观察不同浸提时间(12、24、48、72和96 h)、乙酸浓度(0.10、0.25、0.50、0.75和1.00 mol·L^-1)及料液比(g:mL)(1:5、1:10、1:20、1:40和1:80)对胶原提取率的影响,利用正交试验判断浸提时间、乙酸浓度及料液比等影响因素的最佳工艺参数。通过SDS-PAGE电泳实验、单宁酸沉淀实验和傅里叶红外光谱实验等对提取的胶原进行鉴定。结果: 单因素分析,胶原提取率在一定参数范围内随浸提时间、乙酸浓度及料液比的增加而增加。正交试验,鼠尾腱胶原提取的最佳工艺参数为浸提时间72 h、乙酸浓度0.5 mol·L^-1、料液比为1:40。SDS-PAGE电泳显示,样品为Ⅰ型胶原,单宁酸沉淀实验显示胶原降解程度低,傅里叶红外光谱显示胶原结构完整。样品氨基酸含量测定符合胶原蛋白的成分特征。中性胶原溶液在37℃时能够形成固态胶原凝胶,胶原凝胶经过碳化二亚胺(EDC)交联后,扫描电镜下显示内部相互连接,构成孔径适中的蜂窝状多孔结构。结论: 成功建立并优化鼠尾腱胶原蛋白的提取工艺,得出浸提时间、乙酸浓度及料液比等因素的最佳工艺参数,有效提高了鼠尾腱胶原的提取效率。     

鼠尾肌腱胶原蛋白的提取及凝胶的制备

为了探索鼠尾肌腱胶原蛋白在实验医学中的应用,用简单的方法溶解新鲜大白鼠鼠尾肌腱,从中提取较纯的胶原蛋白,制成胶原凝胶。将提取的胶原蛋白液进行定性、定量鉴定。结果：提取液主要为Ｉ型胶原蛋白：７２小时３７℃恒温培养箱内培养无细菌生长;紫外分光度计测定,吸收高峰为２３０ｎｍ;氨基酸成分主要为甘氨酸：占４０％,脯氨酸：１４．３％,显微镜下见：相互交织的胶原原纤维结构组成的网状结构;纤维均匀,有规则横纹。胶     

胶原的提取、改性、交联及其应用

胶原蛋白或称胶原是动物体内含量最丰富的蛋白质，在动物体内起支持、保护、连接等多种作用。目前，胶原已广泛应用于医学医药工业、食品工业、日用化学品工业、生物合成及胶原修饰等领域，本现将胶原的提取、改性、交联及其应用加以综述。     

Ⅱ型胶原微量提取与纯化

Ⅱ型胶原是关节软骨中主要细胞外间质之一,多种风湿性疾病的发生与Ⅱ型胶原异常有关。现已知类风湿关节炎发病与Ⅱ型胶原自身免疫反应有关,用Ⅱ型胶原免疫某些动物可诱导出多关节炎。然而口服Ⅱ型胶原可通过诱导免疫耐受来治疗类风湿关节炎,因此Ⅱ型胶原的提取是研究Ⅱ型胶原的重要步骤。虽然Ⅱ型胶原在人体含量较多,但临床取材可获得的数量有限,为此我们探讨了Ⅱ型胶原的微量提取和纯化方法。1　Ⅱ型胶原的提取与纯化方法　　真空干燥,4℃,获得Ⅱ型胶原(平均每2.5克关节软骨可获Ⅱ型胶原10ｍｇ)2　Ⅱ型胶原鉴定2.1　紫外分光光度计鉴定提取…     

胶原与肺间质纤维化的研究进展

胶原蛋白是细胞外基质中最丰富的结构蛋白，现已发现有19种不同的胶原蛋白分子组成了胶原分子超家族。原胶原是形成胶原纤维的分子单位，不同类型胶原纤维的形态及粗细有别，同一类型胶原在不同组织中所形成的纤维，但各种胶原纤维都是以定向整齐排列的原胶原分子间通过共价键架桥连接，形成稳定的胶原微纤维，再进一步合成各种胶原纤维。每条胶原微纤维是由5个原胶原分子通过横向错位聚合形成的。前胶原(procollagen)是原胶原的前体。     

丹参、甘西鼠尾、荫生鼠尾种子的扫描电镜鉴别

目的 鉴别丹参、甘西鼠尾、荫生鼠尾种子.方法 采用扫描电镜观察三种种子的整体形态和种皮表面超微结构特征.结果 种子之间在整体形态和种皮表面超微结构特征上都有明显差异.结论 利用扫描电镜可以有效鉴别这三种种子.     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

药用桑黄总黄酮的提取工艺研究

目的：研究提取桑黄总黄酮的工艺。方法：以正交试验,采用超声辅助提取桑黄中总黄酮,以总黄酮提取率为指标。结果：超声法提取桑黄总黄酮为最佳工艺：其乙醇浓度为70%,料液比为1∶30（g/mL）,提取时间为20 min,颗粒粗细度为40~60目。结论：超声波法提取桑黄总黄酮提取率高,成本低廉,方法简单。     

胶原的提取、改性、交联及其应用

胶原蛋白或称胶原是动物体内含量最丰富的蛋白质，在动物体内起支持、保护、连接等多种作用。目前，胶原已广泛应用于医学医药工业、食品工业、日用化学品工业、生物合成及胶原修饰等领域，本文现将胶原的提取、改性、交联及其应用加以综述。     

胶原蛋白预防阻生齿拔除后并发症的临床研究

目的将胶原蛋白应用于下颌智齿拔牙创中,研究对拔牙后并发症的影响。方法将88例下颌阻生齿拔除的患者按照随机数字表分为甲乙两组,甲组拔牙创植入胶原蛋白,乙组为空白对照组,观察两组的并发症发生的差异。结果与对照组比较,填充胶原蛋白组在减少术后出血时间和减少干槽症发生率方面均有统计学差异。结论医用胶原蛋白可以降低出血时间,减少术后并发症,并且可以促进组织生长。     

胶原纤维与OSAHS的相关性研究

目的：探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征发病过程中胶原纤维的形态学改变以及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维面积和总的胶原纤维面积与OSAHS患者各项临床指标的相关性。方法：回顾性分析成年男性8例非鼾症和14例鼾症组的一般情况,比较组织标本形态学染色,并测量Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维面积和总的胶原纤维的面积。结果：通过实验我们发现OSAHS患者的软腭和悬雍垂结缔组织中的胶原纤维排列不规则,而且胶原纤维的面积和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维面积的增多,胶原纤维面积和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维面积与平均血氧饱和度、AHI、呼吸暂停指数存在相关性。结论：胶原纤维改变可能与OSAHS患者口咽弹性的降低相关。     

用心肌胶原含量定量测量晚期灶状心肌坏死程度的研究

研究了用心肌胶原含量定量测量晚期灶状心肌坏死程度的方法。给大鼠皮下注射异丙肾上腺素(ISP)和饮含丙烯胺的水造成灶状心肌坏死。测定心室肌羟脯氨酸含量并计算出胶原含量。用逐区点测量法定量测量心肌纤维化程度。结果发现注射ISP后和饮丙烯胺水21天的动物心肌胶原含量与其心肌纤维化程度呈明显正相关。本研究结果表明,心肌胶原含量可定量测量晚期灶状心肌坏死程度。     

同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞胶原蛋白合成及其mRNA表达的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 ( Hcy)对血管平滑肌细胞 ( VSMCs)胶原合成的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :本实验采用体外培养的大鼠 VSMCs,加入不同浓度的 Hcy,通过 3 H-脯氨酸掺入、α1[ ]型胶原测定观察 Hcy对 VSMCs胶原合成的影响 ,并通过半定量 RT- PCR检测其对 α1[ ]型胶原 m RNA表达的影响。结果 :Hcy促进 VSMCs的胶原合成及 α1[ ]型胶原 m RNA表达 ,并呈剂量依赖效应。结论 :Hcy促进 VSMCs的胶原合成 ,可能是通过促进 α1[ ]型胶原 m RNA表达实现的。提示 Hcy促进胶原合成可能是动脉粥样硬化的发病机制之一     

孟鲁司特对慢性低氧大鼠肺动脉管壁胶原的影响

目的　探讨孟鲁司特对慢性低氧大鼠肺动脉管壁胶原的影响。方法　将 30只雄性 Wistar大鼠分为对照组、低氧组和孟鲁司特预防组 ,以常压低氧 3周制备肺动脉高压模型 ,免疫组化法观察大鼠肺小动脉管壁 型和 型胶原的变化。结果　低氧组肺小动脉管壁 型胶原染色强度较对照组高 (1.5 1± 0 .0 9vs 1.15± 0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,预防组肺小动脉管壁 型胶原染色强度 (1.19± 0 .0 6 )较低氧组低 (P<0 .0 1) ; 型胶原染色强度各组间差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　孟鲁司特对慢性低氧大鼠肺动脉管壁胶原沉积具有一定的预防作用。     

胶原酶注射法治疗腰椎间盘突出症的疗效观察及护理

目的:观察用胶原酶治疗腰椎间盘突出症的疗效及总结护理要点。方法:胶原酶注射法治疗腰椎间盘突出症患者78例,均给予常规护理措施,同时进行正确卧位指导、按摩、功能锻炼、物理治疗。结果:胶原酶注射法治疗过程顺利,总有效率达97%。无并发症。结论:胶原酶注射法治疗腰椎间盘突出症安全、有效、操作简单、创伤小。     

肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响

目的:通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养观察,了解肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞,实验分为三组:对照组,正常大鼠肺成纤维细胞培养;接触共育组,肥大细胞与肺成纤维细胞接触共体培养;非接触共育组,肥大细胞与肺成纤维细胞非接触共体培养。每组设3复孔,并作细胞爬片,共培养5 d,每日镜下计数肺成纤维细胞数量,建立生长曲线,5 d后用MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率,通过ELISA法检测培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:①细胞计数显示:接触共育组各时段成纤维细胞的数目均较非接触共育组和对照组明显增多。接触共育组中成纤维细胞增殖数与非接触共育组和对照组比较,有明显差异(P<0.05);非接触共育组和对照组比较,差异不明显(P>0.05)。②MTT结果:接触共育组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组和非接触共育组(P<0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞增殖明显高于对照组和非接触共育组,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P>0.05)。③ELISA法检测结果提示,在肥大细胞与肺成纤维细胞接触共育培养组,培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于非接触共育组和对照组(P<0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白明显增加,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P>0.05)。结论:肥大细胞影响肺成纤维细胞的增殖及胶原合成;肥大细胞可能通过紧密接触来促进肺成纤维细胞的增殖及胶原合成。