用染色体畸变研究AT细胞系辐射敏感性和适应性反应

目的探讨毛细血管扩张运动共济失调症(ataxiatelangiectasia,AT)细胞系的辐射敏感性和对低剂量辐射能否诱导细胞遗传学适应性反应。方法用2cGy60Coγ射线预先照射进入G1期的AT5B1VA(AT)细胞和GM0639(GM)细胞,培养6h后再照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线,分析染色体畸变。结果G1期的GM细胞在预照射2cGy60Coγ射线的诱导剂量后能非常显著地降低随后照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发的染色体畸变率,染色体畸变的观察值非常显著地低于预期值(P<0.001),而对AT细胞则没有观察到这种现象,染色体畸变的观察值与预期值差异无统计学意义(P>0.05);另外,1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发AT细胞的各种畸变率(包括着丝粒畸变、无着丝粒畸变和染色单体型畸变)均显著地高于GM细胞(P<0.001)。结论低剂量电离辐射不能诱导AT细胞产生细胞遗传学适应性反应;AT细胞对电离辐射诱发染色体畸变高度敏感,可能是由于不能正确修复DNA双链断裂的结果。     

低剂量X射线照射的人淋巴细胞对再次辐射的致突变作用不敏感

人T淋巴细胞用低剂量的X射线处理后,可以抵抗大剂量X射线引起的细胞突变反应.研究中使用的T细胞是从外周血分离出来的,进行体外培养.培养液RPMI 1640含有2mmol的谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和20%的HL-1培养液.细胞浓度为10~5/ml,用PHA刺激细胞有丝分裂.在PHA作用24小时后实验组给以1cGy的X线照射,在PHA作用24小时后,用300cGy的X射线照射,细胞培养液加入20%的T细胞生长因子(淋巴因子作用于K细胞后的上清液)培养6～8天,使HPRT~-突     

低剂量X射线诱导离体人淋巴细胞染色体损伤的适应性反应

适应性反应的存在已被广泛证实,但主要是通过染色单体型畸变或SCE(姐妹染色单体互换)指标证实的.本文试图对低剂量(简称D_1)辐射如何影响DNA复制前大剂量(D_2)辐射诱发体型染色体畸变进行观察.实验用健康成年人静脉血淋巴细胞,分成三组.(1)G_0期(加PHA前)照射D_1后间隔0、3、5、7和9h再照射D_2;(2)G_1期照射D_1后间隔0,3,5,7和9h再照射D_2.(1)、(2)组用的D_1和D_2分别为0.02Gy和3.0Gy X射线;(3)用标记BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)法分析G_0和G_1期受0.01～0.10Gy X射线照射后细胞动力学变化.结果:1.染色单体型畸变率在G_0和G_1期受D_1     

电离辐射及顺铂对人肺癌细胞中TOB1基因表达的影响

目的 探讨电离辐射及其联合顺铂对人肺腺癌细胞株SPCA-1、LTEP-α-2中TOB1基因表达的影响.方法 体外培养人肺腺癌SPCA-1、LTEP-α-2细胞,用X射线一次性照射,细胞吸收剂量为2、4、6、8和10 Gy,源靶距为100 cm,吸收剂量率为200 cGy/min,在6GyX射线照射后6、12、18和24 h取样;X射线和顺铂联合对TOB1表达的研究设立单纯照射组(6 Gy)、顺铂处理组(20 mol/L顺铂)和联合处理组(6 Gy +20 mol/L顺铂);上述实验同时设立未处理的对照组.采用RT-PCR和Western blot法检测TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 SPCA-1、LTEP-α-2细胞在不同剂量的X射线照射后24 h,其TOB1蛋白及mRNA表达量均明显增加(t=8.25 ～24.48,P ＜0.05);不同时间检测提示,细胞在X射线照射后6h,TOB1蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h(t=14.23 ～15.82,P＜0.05);联合处理组TOB1的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=4.67 ～ 13.67,P＜0.05).结论 TOB1基因有可能作为临床肺癌放化疗靶基因,对临床放化疗疗效的判断具有一定的应用潜力.     

同源染色体间的重组在辐射诱导的染色体畸变的形成中不起主要作用

目的 :哺乳类细胞辐射诱导双键断裂 (DSB)的修复与同源重组的关系还不十分清楚。因此 ,以 X射线诱导染色体畸变作为终点 ,研究重组在同源染色体和 DSB同源 -直接修复间的作用。方法 :XR- C1是 DNA- PK活性缺陷型中国仓鼠细胞系 ,XR- C18为人 -仓鼠杂交细胞系 ,大约 6 0 %人 -仓鼠杂交细胞有两条 8号染色体 ,而 40 %仅有一条 8号染色体。用野生型细胞 CHO- 9已有的研究结果作对照 ,G1 期细胞采用剂量为2和 4Gy X射线照射后 ,分别用溴脱氧尿苷 (Brd U)和秋水仙胺处理 ,G2 期细胞用 0 .75 Gy X射线照射。含有人 8号染色体的染色单…     

人正常细胞和肿瘤细胞的适应性反应及其变化

目的:应用6种人细胞株评价适应性反应(AR)是否可能与辐射敏感性或肿瘤和正常细胞株有关。方法:16种人细胞株分别为成纤维细胞株OMB18和S11358,人乳腺癌细胞株T47D和HTB30及人黑色素瘤细胞株Sk-Mel3和HT144。所有细胞均于25cm2培养瓶中,用DMEM/F-12(50∶50)培养,经流式细胞仪检测细胞处于坪期时用于实验。2分别用0、0.2、0.5、1.0、2.0和4.0Gy诱导剂量照射后6h(T47D细胞株另进行1～24h实验)再用1、2、4、6和8Gy攻击剂量照射,剂量率为142cGy/min,电压250kVp,滤板1.07mmAl,以存活分数来估计AR。结果:1T47D细胞株经50cGy诱导剂量照…     

外周血淋巴细胞复合染色体畸变作为高LETα粒子照射的潜在生物标志

目的 :测定高传能线密度 (L ET) α粒子照射后诱导外周血淋巴细胞复合染色体畸变和传递至二次、三次分裂细胞的份额。研究复合染色体畸变作为既往照射的生物标志的可用性。方法 :将 4名自愿供血者外周血中分离的淋巴细胞在RPMl 16 40培养基中培养。用 2 3 8Pu源的高 L ETα粒子(12 1ke V;0 .5 Gy)或低 L ET X射线 (2 5 0 k V;3Gy)照射培养细胞。收获照射后一次、二次和三次分裂细胞 ,用荧光原位杂交 (FISH)和二脒苯基吲哚 (DAPI) / Hoechst332 5 8多色染色技术分析各次分裂细胞的染色体畸变。用 1、2和 5号全染色体探针和着丝粒…     

人类淋巴细胞的适应性反应对氡诱导染色体损伤的修复

低剂量X射线诱导的适应性反应是激活了染色体断裂修复机制,从而使畸变率下降.那么,是否能通过低剂量的X射线诱导产生染色体断裂修复机制,使随后氡照射产生的染色体断裂减少.材料和方法:人外周血淋巴细胞培养,实验组     

V79细胞系中辐射诱发微核和染色体畸变的比较研究

方法:用剂量率为152cGy/min的X射线(剂量为100、200、400和800cGy)和波为254nm的UV(剂量为100,200,100和800μJ×102/cm2)照射呈指数生长的V79中国仓鼠肺成纤维细咆。     

预缺氧对急性放射小鼠存活和染色体损伤的影响

目的：观察间歇性预缺氧对急性放射小鼠的存活和染色体损伤的影响；方法：实验动物随机分为5组，按不同时间进行间歇性预缺氧后予以6Gy的^60COγ射线照射，照后21小时取部分小鼠的股骨骨髓观察其染色体畸变率和微核细胞形成率，并观察其余小鼠20天的存活率，计算平均存活时间；结果：经预缺氧5天后照射的小鼠与单纯照射小鼠相比，平均存活时间延长，染色体畸变率和微核细胞形成率均降低；结论：间歇性预缺氧对急性放射损伤有一定的保护作用。     

氚β射线体外照射人精子诱发染色体结构畸变的剂量效应关系

异种体外受精使分析正常人精子和X射线离体照射精子的染色体畸变成为可能.本文首次报道氚水(HTO)诱发人离体精子染色体畸变的研究,并与X射线的RBE进行了比较.实验取5名健康男性的九份精液,每份又分成一份正常对照和一份照射5.66～89.97×10~7Bq(1.53～24.3mCi)/ml的HTO80分钟.因个体之间差异较大,故采用下式计算β射线诱发染色体畸变的绝对率.     

辐射诱发小鼠体细胞和生殖细胞染色体畸变

本实验用剂量率为0.05Gy/min的X线全身均匀照射小白鼠0～1.0Gy,照后7小时和60天观察体细胞,生殖细胞染色体畸变率,井观察了1.0GyX射线照射后不同间隔时间两类细胞染色体畸变率,结果为两类细胞染色体畸变的剂量效应关系均为直线相关,染色体随时间延长畸变率初期迅速减少,晚期波动在一定范围内。比较两类细胞辐射敏感性.似乎生殖细胞敏感性高.并提出假设,用男性外周血中易位率可以估算其生殖细胞染色体易位率及后代的易位再现率。     

γ线对小鼠细胞遗传学的影响及重组人超氧化物歧化酶的抗放射作用(论著)

目的：研究γ射线对小鼠遗传学的影响及重组人超氧化物歧化酶（rhSOD）的抗放作用。方法：实验用甲基纤维素缩集法计算淋巴细胞微核率和活体秋水仙素法进行骨髓细胞染色体畸变率分析。结果：（1）4．0Gyγ线能明显增加小鼠淋巴细胞微核细胞率、微核率和骨髓染色体畸变率。（2）rhSOD可减轻射线所致小鼠淋巴细胞微核细胞率、微核率及骨髓细胞染色体畸变率，尤以照射前后给药为佳。结论：rhSOD对小鼠细胞遗传学辐射损伤有明显保护作用。     

X射线离体照射人精子诱发的染色体畸变类型及频度的研究

本文首次报道用体外异种受精技术分析人精子体外受X射线照射诱发的染色体畸变,结合γ射线损伤结果,讨论了精子中DNA损伤在受精卵中被修复的机制.实验取自5名健康男性的28份精子样品,每份又分成对照组和X射线照射组.结果分析时用X射线诱发的绝对畸变率,目的是排除各自对照组不一致的影响.结果表明:在0.23、0.45、0.91和1.82Gy剂量点中的畸变精子率分别为6.1±1.6%、16.8±5.5     

X射线诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的适应性反应及相关miRNA筛选的研究

目的 研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选适应性反应相关的微RNA（miRNA）。 方法 将NSCLC A549细胞分为6组,包括 50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy）,前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射,培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射,20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA,并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果 50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%,低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%,且差异均有统计学意义（t=10.680、8.006,均P<0.01）。与20 Gy照射组相比,50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR-193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示,差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示,靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示,miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论 X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选到一组共同差异表达的miRNA,可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用,有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。     

两例人淋巴细胞缺乏对低水平氚标记胸腺嘧啶和X射线照射后适应性反应的观察结果

Oliveri(1984年)首先报告了用~3H-TdR慢性预处理人淋巴细胞,可降低细胞对相继较大剂量X射线急性照射所诱导的染色体畸变的敏感性,并称之为适应性反应(AR).以后又被许多作者证实.然而,Morimoto用MNNG(1-甲基-1-亚硝基-3-硝基胍)诱导4例供血者淋巴细胞SCE时没有发现AR现象,认为AR存在着个体间的异质性.本文用已往曾经证明不能被低剂量电离辐射诱导AR的两个供血     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN) 7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变( ATM)激酶磷酸化在这一过程中的作用.方法 人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATM siRNA+CpG+X射线组.采用集落形成法观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.Western blot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)和P53蛋白的表达.结果 A549细胞经CpG ODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=13.41,P＜0.05);增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=17.32和7.71,P＜0.05);明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平;小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpG ODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义(t=26.84和2.98,P＜0.05).结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节.     

染色体畸变率估算32P的辐射剂量

目的 应用G显带的染色体双着丝粒畸变率评估32p的辐射剂量.方法 应用4 MV的X射线对离体人血液进行0.5 Gy、1 Gy、2 Gy和4 Gy的照射,建立染色体双着丝粒畸变率和X射线的辐射剂量的剂量-效应曲线.将74 kBq的32p胶体加入淋巴细胞的培养液后72 h,进行G显带染色体分析,通过X射线的辐射剂量和染色体双着丝粒畸变率的剂量-效应曲线来评估32p的辐射剂量.结果 4 MV的X射线的辐射剂量和染色体的双着丝粒畸变率呈线性正相关,剂量-效应曲线为y=24.05x- 13.34 (R2=0.975).74 kBq的32P胶体产生的染色体双着丝粒畸变率为18％,即74 kBq的32p胶体在5 ml淋巴细胞培养液中72 h约产生1.3 Gy的辐射剂量.结论 应用染色体畸变率可以有效地评估放射性核素的内照射剂量.     

啤酒与乙醇对γ射线诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变的影响

目的 观察啤酒及乙醇对不同剂量γ射线照射小鼠所诱发的骨髓细胞染色体畸变的影响.方法 雄性健康BALB/c小鼠,随机分成对照组、啤酒组和乙醇稀释液组,分别用1 ml灭菌生理盐水、啤酒及乙醇稀释液灌胃.30 min后给予不同剂量γ射线1次全身照射.照射后24 h颈椎离断法处死动物(处死前4 h按4 μg/g体重腹腔注射秋水仙胺),立即取双侧股骨,进行骨髓细胞常规染色体制片、染色.每一剂量点选取5个个体进行染色体畸变观察.每只动物镜检分析100个细胞分裂相.结果 啤酒组及乙醇稀释液组染色体畸变率在照射剂量达0.5 Gy以上时明显降低(P＜0.05或P＜0.01),其中啤酒组的下降比乙醇稀释液组更明显.结论 啤酒中除乙醇以外的其他成份(如酚类化合物等)也发挥了降低染色体畸变的作用.     

我国医用诊断X线工作者的染色体畸变分析

本文报道了我国医用诊断X线工作者和不接触X线的其他医务人员的细胞遗传学变化.结果表明,放射组染色体型畸变率、畸变细胞率和断片等明显高于对照组;染色体型畸变率有随累积剂量、年剂量率的增加而增高的趋势.相关检验表明与受照剂量有关,其直线回归方程分别为(这里有图片19840513-46-1.GIF)_(D)=0.23+0.00183X和(这里有图片19840513-46-1.GIF)_(d)=0.189+0.040lX,与工龄,性别相比未见差异.