17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制

目的 探讨热休克蛋白 90（HSP90）抑制剂17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制。 方法 体外培养人绒毛膜癌JAR细胞系,经不同浓度的17-AAG作用24 h后,采用TUNEL细胞凋亡法及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;Real-time PCR法和Western blotting法检测血管内皮生长因子（VEGF）、cyclinD1、cyclinA1和 Caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达情况。 结果 17-AAG对JAR细胞生长具有明显的抑制作用,并存在浓度依赖性。各组细胞发生G₂期阻滞及明显凋亡;5、10、20 mg/L 17-AAG 作用24 h 后,各组细胞增殖相关基因cyclinD1 mRNA及蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组（对照组）均下调,VEGF蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组（对照组）下调,且下调程度与处理浓度成正比,而凋亡相关基因Caspase-3的mRNA未出现明显上调,但其在蛋白表达水平上调。 结论 17-AAG能够抑制JAR细胞增殖活力,诱导细胞凋亡,17-AAG 可能通过下调VEGF 的表达,产生抗肿瘤血管新生作用;可能通过下调cyclinD1使细胞周期发生G₂期阻滞;且可能通过上调Caspase-3诱导细胞凋亡。     

HSP90抑制剂抑制糖酵解并促进小鼠肝癌细胞系H22凋亡

目的探讨热休克蛋白HSP90抑制剂对小鼠肝癌细胞糖酵解和细胞凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法皮质酮(CORT)、糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486和HSP90抑制剂17-AAG处理小鼠肝癌细胞系H22后检测乳酸和ATP水平;流式细胞仪检测H22细胞凋亡;CORT、RU486和17-AAG分别处理H22细胞,利用Western blot检测GR及PI3K/Akt通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,CORT促进GR核转位,RU486使其水平降低,与CORT单独处理相比,CORT与17-AAG共处理可抑制CORT对GR核转位的促进作用(P0.05);CORT处理后乳酸和ATP水平显著升高(P0.05),与17-AAG共处理后此作用被显著抑制(P0.05),乳酸和ATP水平分别下降了24%和17%;17-AAG可显著升高H22细胞总凋亡率,呈现剂量依赖性(P0.05);与对照组相比,CORT显著上调pAkt表达水平,与17-AAG共处理后表达水平显著下降(P0.05)。结论 HSP90抑制剂17-AAG通过抑制GR核转位从而抑制糖酵解并促进肝癌细胞系凋亡,其机制可能与对PI3K/Akt通路的调控有关。     

毛钩藤碱对缺氧乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察毛钩藤碱对缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取MCF-7细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测毛钩藤碱的细胞毒性作用;采用细胞划痕实验测量细胞迁移率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力;采用Western blot法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平。结果:自32μmol/L开始,随着毛钩藤碱浓度的升高,MCF-7细胞存活率明显降低(P0.05),IC_(50)为62.82μmol/L;在缺氧条件下,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05),HIF-α、Snail和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P0.05),HIF-1α的mRNA水平也显著升高(P0.05);除缺氧MCF-7细胞中HIF-α的mRNA水平未受影响外,上述效应均被毛钩藤碱(16μmol/L)明显抑制(P0.05)。结论:毛钩藤碱可在体外抑制缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭,这可能与毛钩藤碱下调HIF-1α、Snail和MMP-9蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平有关。     

蒙花苷通过调控IKK/NF-κB信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭

目的:探究蒙花苷(LIN)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的分子机制。方法:用不同浓度(5、 10、 20、 40、 80和160μmol/L)的LIN处理MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A细胞24 h后,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测Snail、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκB激酶α/β(p-IKKα/β)和磷酸化p65(p-p65)的蛋白水平。结果:LIN可剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞活力(P0.05),IC_(50)为55.89μmol/L;20μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞集落形成率显著降低(P0.05);与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭率显著降低(P0.05),Snail和MMP-9的蛋白水平下调(P0.05),E-cadherin的蛋白水平上调(P0.05),IKKα/β和p65蛋白的磷酸化水平降低,IκBα的蛋白水平上调(P0.05);同时,IKK-16(IKKα/β抑制剂)和PDTC(NF-κB抑制剂)也可下调MDA-MB-231细胞中Snail和MMP-9的蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin的蛋白水平(P0.05)。结论:LIN可能通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化而下调Snail和MMP-9蛋白水平并上调E-cadherin蛋白水平,最终导致MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力降低。     

三氧化二砷抑制人肝癌SMMC-772细胞侵袭及其机制

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法:划痕愈合和侵袭实验检测As2O3对SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力的影响;Real-time PCR、Western blot法检测As2O3作用SMMC-7721细胞后CD147、MMP-2的表达.结果:划痕实验结果显示,2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞12 h和24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞迁移.Transwell实验结果显示,2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞12 h和24h后,穿膜细胞数较未处理组明显减少(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞侵袭能力.Real-time PCR结果显示,以2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞6、12、24h后,CD147和MMP-2 mRNA表达均明显下调(P＜0.05).Western blot结果显示,2.0 μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞12、24、48h后,CD147和MMP-2蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结论:As2O3可抑制人肝癌SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调CD147和MMP-2有关.     

福辛普利抑制LPS诱导的人肾小管上皮HK-2细胞TAK1表达

目的 探讨福辛普利(FOS)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法 体外培养正常HK-2细胞,分为3组:对照组(Ctrl)、LPS诱导组(10μg/L)、FOS干预组(LPS 10 μg/L+FOS 1×106 mol/L).细胞培养12、24和48 h,以甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附(ELISA)法观察细胞上清纤维黏连蛋白(FN)变化,Western blot法检测TAK1、FN蛋白表达,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的含量.结果 LPS诱导组较对照组细胞的增殖水平(在48 h分别为0.462±0.013及0.363±0.014)、胞质中FN的含量均显著增高,且自12 h开始TAK1蛋白(在48 h分别为1.627±0.101及0.547±0.010)及mRNA表达水平上调(P＜0.01,P＜0.05),FOS干预组细胞增殖(在48 h为0.396 ±0.011)、FN的含量及TAK1的表达(在48 h蛋白表达为1.308±0.097)较同时间点LPS组(在48 h蛋白表达为1.627 ±0.101)显著下调(P＜0.01).结论 FOS可能通过抑制HK-2的增生与活化,减轻细胞外基质FN的沉积,起到延缓肾间质纤维化的作用.     

XAV939抑制人肝癌HepG2细胞血管生成拟态的形成

目的初步研究XAV939对人肝癌Hep G2细胞血管生成拟态形成的影响及其可能的机制。方法实验分为对照组和实验组(0.5和1μmol/L XAV939分别处理Hep G2细胞48 h);体外成管实验检测各组细胞形成血管拟态的能力,RT-PCR检测ZEB1及MMP-7 mRNA的表达,Western blot检测β-catenin、ZEB1和MMP-7蛋白的表达。结果对照组与实验组形成管状结构数目分别为9.67±0.70,5.67±0.64(0.5μmol/L)和2.27±0.81(1μmol/L),体外形成管道结构的数目减少(P0.01);实验组ZEB1及MMP-7 mRNA表达和ZEB1、MMP-7及β-catenin蛋白表达均较对照组减少(P0.05)。结论 XAV939能有效抑制人肝癌Hep G2细胞血管生成拟态的形成。     

抑制Hedgehog信号通路对前列腺癌DU125细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对前列腺癌Dul45细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对DU145细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对DU145细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对DU145细胞Gli-1 m RNA表达的变化,Westernblot检测环王巴明对DU145细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.01±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.71±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.10±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.12±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.97±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.26±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.56±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%Gli-1m RNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.79±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.59±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.41±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制DU145细胞增殖、诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

抑制Hedgehog信号通路对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养U87细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24h,MTT法检测环王巴明对U87细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对U87细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对U87细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对U87细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.11±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.81±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.87±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.22±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.87±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.66±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.48±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.58±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.40±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

黄芪甲苷对氧糖剥夺复氧后星形胶质细胞上TNF-α与AQP-4表达的影响

目的:探索黄芪甲苷(astragaloside IV,ASIV)对氧糖剥夺复氧(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后星形胶质细胞上肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis facror-alpha,TNF-α)与水通道蛋-4(aquaporin-4,AQP-4)表达的影响。方法:选用第二代第1 d的星形胶质细胞。将星形胶质细胞放入缺氧培养箱(1%O_2、94%N2、5%CO_2),分别干预1、2、3、4 h,复氧24 h后用RT-PCR和Western Blot检测AQP-4和TNF-α的表达情况。将星形胶质细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+0.001μmol/ml ASIV组、OGD/R+0.01μmol/ml ASIV组,用RT-PCR和免疫荧光检测AQP-4和TNF-α的表达情况。结果:RT-PCR和Western Blot结果显示:氧糖剥夺复氧后AQP-4和TNF-α的表达均增加,且AQP-4在OGD3 h时表达达到高峰,TNF-α在OGD1 h时表达达到高峰(P0.05);OGD3h+0.001μmol/ml ASIV组和OGD3 h+0.01μmol/ml ASIV组的AQP-4基因表达水平较OGD3 h组相比均明显降低(P0.05);与OGD3 h组相比,OGD3 h+0.001μmol/ml ASIV组的AQP-4蛋白表达水平明显降低(P0.05);OGD1 h+0.001μmol/ml ASIV组和OGD1 h+0.01μmol/ml ASIV组的TNF-α基因表达水平与OGD1 h组相比均明显降低(P0.05);与OGD1 h组相比,OGD1 h+0.001μmol/ml ASIV组的TNF-α蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论:氧糖剥夺复氧模型可以诱导星形胶质细胞上TNF-α和AQP-4的表达,且TNF-α的表达先于AQP-4;黄芪甲苷可能是通过下调TNF-α的表达来影响AQP-4的表达,进而影响细胞水肿。     

17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制

目的探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制。方法用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA并转染BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;CHIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响。结果用10-8mol/L的E2处理不同时间BCPAP细胞,随着E2处理时间增加,E2对BCPAP细胞中Hsp27蛋白的表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P0.05);E2作用转染ERαsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P0.05);E2作用转染ERβsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P0.05);Ch IP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合。结论 E2可以通过ERα促进BCPAP细胞中Hsp27蛋白水平的增高。     

肺结核患者外周血Th17/Treg的表达及其病理意义

为探讨肺结核患者外周血Th17与Treg的表达及其病理意义,收集2017年1月至2018年6月青海省第四人民医院收治的80例肺结核患者作为结核组,同期收集80例健康成人作为对照组。观察两组外周血Th17与Treg及其细胞因子的表达情况,同时分析Th17与Treg及其细胞因子与肺结核患者病情严重程度的相关性。结果显示,与对照组比较,结核组Th17降低[(2.69±0.93)%vs(1.94±0.91)%,P=0.000],Treg升高[(7.88±2.65)%vs(9.60±2.59)%,P=0.000],IL-17降低[(32.89±8.92) pg/mL vs(25.72±9.62) pg/mL,P=0.000],IL-10升高[(22.80±6.81) pg/mL vs(26.61±7.62) pg/mL,P=0.001]。肺结核患者病灶数目、直径总和与Th17、IL-17呈显著负相关(P0.05),与Treg、IL-10呈显著正相关(P0.05)。与无空洞形成的患者比较,空洞形成的患者Th17降低[(2.06±0.62)%vs(1.76±0.68)%,P=0.045],Treg升高[(8.79±2.12)%vs(10.81±2.41)%,P=0.000],IL-17和IL-10差异无统计学意义(P0.05)。提示外周血中Th17与Treg在肺结核患者中表达异常,与结核病情严重度相关。     

抑制Hedgehog信号通路对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养食管癌EC9706细胞,以10、50、100μmol/Lol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对EC9706细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对EC9706细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(86.11±2.61)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(77.81±3.13)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(70.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(16.22±0.21)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(25.87±0.24)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(32.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.76±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.58±0.06)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(0.40±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.93±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.48±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.75±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制食管癌EC9706细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

双氢青蒿素诱导人前列腺癌细胞系PC-3凋亡

目的探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌细胞系PC-3的凋亡诱导作用,并探讨其可能机制。方法人前列腺癌PC-3细胞经不同浓度(0、25、50和100μmol/L)DHA处理48 h,用FCM法检测各组细胞凋亡率。用荧光定量PCR检测细胞中HSP70 mRNA的表达。用蛋白质印迹法检测细胞中HSP70蛋白、凋亡酶激活因子(Apaf-1)及caspase-3的表达;荧光定量PCR及蛋白质印迹法增加两组,即100μmol/L HSP70抑制剂槲皮素(quercetin)作为阳性药物对照组,以DMSO作为溶剂对照组。结果 DHA能明显诱导PC-3细胞凋亡(P0.05)。不同浓度DHA能明显下调HSP70 mRNA及蛋白表达水平(P0.05),上调Apaf-1及caspase-3蛋白表达水平(P0.05)。结论双氢青蒿素能诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能是DHA干扰HSP70的表达,促进caspase信号通路中Apaf-1及caspase-3表达。     

Ubiquitin B在HSP90抑制剂17-AAG诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞中的作用

目的 研究Ubiquitin B(Ubb)在热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及机制.方法 不同浓度17-AAG处理HeLa细胞后,流式细胞术检测细胞周期分布,荧光分光光度法检测细胞蛋白酶体活性变化;Ubb siRNA 转染HeLa细胞后,Real Time PCR法检测Ubb干扰效应,Western 印迹检测细胞周期相关蛋白的表达改变.结果 17-AAG可以诱导HeLa细胞阻滞于G2/M期,同时显著增强细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性,并且两者的变化均呈现剂量依赖性;干扰HeLa细胞内Ubb后,可以逆转17-AAG引起的G2/M期阻滞;17-AAG可明显下调HeLa细胞周期相关蛋白Cdk1和Hec1的表达,并且这一变化也是Ubb依赖的.结论 Ubb在17-AAG诱导的HeLa细胞周期阻滞中发挥重要作用,Ubb和HSP90抑制剂17-AAG在功能上相互关联,可能成为宫颈癌治疗的新靶点.     

氧化损伤对内皮细胞内质网应激相关蛋白表达的影响

目的:通过第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立体外氧化应激的细胞凋亡模型,观察氧化损伤对内皮细胞内质网应激(ER stress)相关蛋白表达的影响。方法:不同浓度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)诱导HUVECs 1-24 h,MTT法观察t-BHP作用后细胞的存活率;Hoechst/PI染色荧光显微镜观测细胞凋亡形态;Western blotting检测ER应激标志物肌醇需求激酶1α(IRE1α)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达情况。结果:不同浓度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)诱导HUVECs 1-24 h后,发现随着t-BHP作用浓度的增加和时间的延长,细胞活力逐渐下降;不同浓度t-BHP处理8 h后,t-BHP大于25μmol/L时,细胞凋亡率明显增加(6.3%±0.6%、16.1%±0.9%、24.7%±1.5%、23.8%±1.3%,P0.05);ER应激相关信号蛋白IRE1α、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)及凋亡蛋白caspase-3表达增加。结论:氧化应激可导致内皮细胞发生凋亡,可能与引起内质网应激相关信号蛋白的表达有关。     

黄连素对人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激-自噬途径的调节作用

目的:观察黄连素对人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激-自噬途径的调节作用。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分别加入12.5、25、50、100、200和400μmol/L黄连素,作用12 h、24 h和48 h后,MTT法检测黄连素对SKOV3细胞活力的影响;将细胞分为对照组、黄连素(50μmol/L)组、黄连素(100μmol/L)组和黄连素(200μmol/L)组,处理SKOV3细胞24 h后,倒置相差显微镜观察黄连素对SKOV3细胞形态的影响;间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和泛素结合蛋白p62的表达;采用Western blot法检测beclin-1、LC3、p62、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白的表达。结果:MTT结果显示,黄连素(12.5、25、50、100、200和400μmol/L)作用SKOV3细胞12 h、24 h和48 h,SKOV3细胞活力明显降低,12 h、24 h和48 h的IC_(50)分别为(764.7±0.3)μmol/L、(231.6±0.1)μmol/L和(96.2±0.1)μmol/L。激光共聚焦显微镜检测发现,LC3和p62蛋白散在分布,且荧光强度增加的同时呈现点状聚集,黄连素(200μmol/L)组可见明显增强,且有明显的共定位现象。Western blot检测结果表明,与空白对照组相比,黄连素(200μmol/L)组内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP及自噬相关蛋白beclin-1、LC3和p62表达显著上升(P0.05)。结论:黄连素可能通过调节细胞自噬促进SKOV3细胞内质网应激。     

吲哚-3-甲醇酸性代谢产物辐射防护作用的研究

目的 探讨吲哚-3-甲醇(I3C)酸性代谢产物的辐射损伤防护作用.方法 采用细胞克隆形成实验检测细胞的存活分数;采用Western Blot方法检测蛋白表达水平.结果 采用正常纤维上皮细胞184A1,发现7种I3C酸性代谢产物表现出不同的辐射损伤防护效果,其中CTET(1μmol/L)、LTET(1μmol/L)、HI-IM(1 μmol/L)和3,3'-二吲哚甲烷(DIM)(0.3 μmol/L)4种代谢产物在细胞γ-射线照射前24 h预处理细胞均不同程度地提高了辐照细胞的存活分数,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),而CT(1μmol/L)、LTr-1(1 μmol/L)和ICZ(1μmol/L)3种代谢产物则对辐照细胞存活分数无影响(P＞0.05).进一步研究发现CTET、LTET、HI-IM和DIM可导致ATM、BRCA1和NBS1蛋白磷酸化水平的改变.同样,CT、LTr-1和ICZ对这些蛋白的磷酸化水平不产生影响.另外,HI-IM可明显降低辐射损伤诱导的细胞坏死和细胞凋亡.结论 CTET、LTET、HI-IM和DIM 4种I3C酸性代谢产物可明显降低184A1细胞的辐射敏感性,即具有辐射防护作用,其机制可能与其调节DNA损伤与修复蛋白磷酸化和细胞凋亡有关.     

咪唑克生对体外血脑屏障炎症模型通透性的影响

目的:观察咪唑克生(idazoxan,IDA)对体外血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)炎症模型的通透性、紧密连接蛋白ZO-1表达和分布及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和MMP-9抑制物——金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法:采用培养7 d的小鼠脑微血管内皮细胞株b.End3建立体外BBB模型,采用TNF-α(10 nmol/L)处理24 h诱导BBB炎症模型,并对BBB炎症模型分别采用IDA 50、100、200μmol/L预处理6 h以观察IDA对BBB炎症模型的作用。通过检测异硫氰酸荧光标记的葡聚糖通过率来确立模型的通透性,采用Western blot法检测紧密连接蛋白ZO-1的表达,通过免疫荧光法观察ZO-1的分布情况,并通过RT-PCR法检测MMP-9/TIMP-1的表达。结果:培养7 d的b.End3细胞汇合成稳定的单层连接,有较好的屏障功能,而采用TNF-α处理24 h后诱导的BBB炎症模型的通透性明显升高,紧密连接蛋白ZO-1在膜上的表达明显减少、不连续,Western blot法显示ZO-1蛋白表达水平明显下降,MMP-9的表达明显升高;而采用IDA 50、100、200μmol/L预处理6 h能明显降低其通透性,增加ZO-1蛋白的表达和改善ZO-1的分布异常,降低MMP-9的表达,其中200μmol/L IDA作用最明显,差异有统计学意义(P0.01)。结论:IDA能够直接作用于脑血管内皮细胞,降低TNF-α诱导的体外BBB炎症模型MMP-9的表达,增加紧密连接蛋白ZO-1的表达、修复紧密连接ZO-1的异常分布,从而改善其异常增高的通透性。     

类风湿性关节炎患者外周血芳香烃受体表达与Th17细胞相关性研究

目的 检测类风湿性关节炎患者(RA)外周血单个核细胞芳香烃受体(AhR)的表达情况,分析其表达与Th17细胞相关性并初步探讨AhR在RA发病中的作用机制.方法 Ficoll密度梯度法分离75例RA患者(其中活动期RA患者40例,缓解期RA患者35例)及70例健康对照者外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附实验(EUSA)检测细胞裂解上清中AhR蛋白表达.流式细胞术检测75例RA患者Th17细胞表达比例.分析RA患者AhR蛋白表达与Th17细胞比例及其他临床指标的相关性.结果 RA患者PBMC内AhR表达[(91.25±15.27) ng/L]高于健康对照组[(41.81 ±9.72) ng/L],差异有统计学意义(t=3.191,P＜0.01).活动期RA患者AhR表达与缓解期RA患者表达差异无统计学意义(P＞0.05).RA患者PBMC中AhR水平与Th17细胞表达呈正相关(r=0.361,P=0.0015).RA患者PBMC中AhR表达与血清IL-17水平呈正相关,与其他临床指标无相关性(r=0.324,P=0.006).结论 RA患者PBMC中AhR表达升高,且与Th17细胞和血清中IL-17水平呈正相关,推测RA中AhR可能正向调控Th17细胞分化,促进IL-17表达.