心肺复苏后大鼠肾小管上皮细胞凋亡的实验研究

目的研究心肺复苏后大鼠肾小管上皮细胞的凋亡情况及其可能机制。方法Sprague Dawley雄性大鼠48只,随机分为6组:对照组(假手术组)以及复苏后3、6、12、24、48h组,每组各8只。采用窒息合并冰氯化钾(0·5mol/L)停跳液致大鼠心搏骤停-心肺复苏模型,心搏骤停5min后开始心肺复苏。采用TUNEL法观察复苏后肾小管上皮细胞的凋亡情况,采用免疫组化的方法观察大鼠肾小管上皮细胞Bcl-2、Fas蛋白的表达情况。结果复苏后3h大鼠肾小管上皮细胞就有明显凋亡,之后表达持续增加,至24h达高峰,平均灰度值为(19·75±4·04)%。复苏后3h肾小管上皮细胞Bcl-2有少量表达,其后表达呈上升趋势,48h达到高峰。而Fas复苏后3h呈高表达,与对照组比较(P<0·01),平均灰度值为(47·78±2·18)%,随后持续高表达,至24h达高峰。结论心肺复苏后大鼠存在肾小管上皮细胞凋亡,其中Fas的高表达介导了肾小管上皮细胞凋亡。     

5/6肾切除大鼠残肾细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

目的：观察5／6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas和Fas-L的表达变化及其意义。方法：SD大鼠行5／6肾切除,术后6周、12周采集标本,除常规光镜、电镜观察外,利用TUNEL及流式细胞术,观察肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化,并结合肾功能变化分析肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达与肾小球、肾小管及间质病变的关系。结果：5／6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡增加,凋亡相关基因表达增强,这些变化与肾脏形态和功能变化相平行。结论：肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化可能参与肾小球硬化、肾小管萎缩及间质纤维化的病理过程。     

氯沙坦介导AngⅡ/AT1R信号通路减轻百草枯诱导肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨氯沙坦在减轻百草枯诱导人肾小管上皮细胞损伤的机制和效果。方法:体外培养人肾小管细胞并将其分为对照组、实验组和干预组,以CCK8方法测得百草枯和氯沙坦的半数有效剂量。干预组使用百草枯+氯沙坦干预24小时,制成细胞爬片使用HE、TUNEL染色镜下查看细胞情况;采用RT-PCR技术测定AngⅡ、AT1R、IL-1C、IL-6和TNF-α的变化;采用Westen Blot技术检测AT1R。结果:实验组细胞可见空泡变性与凋亡增加,AngⅡ,AT1R,IL-1胞,IL-6和TNF-胞表达量增加,差异有统计学意义(P0.05);干预组细胞可见空泡变性与凋亡减少,AngⅡ,AT1R,IL-1β,IL-6和TNF-变表达量下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:氯沙坦可能通过抑制AngⅡ/AT1R的表达,进而减轻百草枯诱导人肾小管上皮细胞的炎症和凋亡。     

Bcl-2、Bax与气道上皮细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡抑制基因(Bcl-2)、Bax是Bcl-2基因家族分别抑制和促进气道上皮细胞凋亡的结构相似、作用相反的一对胞内蛋白质,其比值决定细胞凋亡抑制作用强弱及气道上皮细胞凋亡的发生、发展方向.本文综述了Bcl-2、Bax基因及相关蛋白的特点,Bcl-2蛋白可能通过稳定线粒体膜发挥基质金属蛋白酶(MMP)的抑制效应抗气道上皮细胞凋亡,Bax作用于线粒体增加其外膜通透性促进气道上皮细胞凋亡及二者相互作用调节气道上皮细胞凋亡的机制.     

黄芩素对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的调节作用

目的:探讨黄芩素对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的调节作用。方法:18只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(正常组,n=6)、阿霉素肾病组(模型组,n=6)和黄芩素治疗组(治疗组,n=6),模型组和治疗组一次性尾静脉注射阿霉素2.0mg/kg诱导阿霉素肾病动物模型,正常组注射等量生理盐水。造模后第1天开始,治疗组予黄芩素300 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组予等量蒸馏水灌胃,共治疗8周。8周时留取各组大鼠24 h尿液标本及肾脏组织标本,使用TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组化检测肾组织中caspase-3表达,western Blot方法检测肾皮质中Bcl-2及caspase-3蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组24 h尿蛋白定量明显升高(P0.05),肾小管上皮细胞凋亡数量明显增加(P0.05),肾皮质中caspase-3蛋白水平明显增加(P0.05),Bcl-2蛋白水平明显下降(P0.05)。与模型组比较,治疗组24 h尿蛋白定量明显下降(P0.05),TUNEL阳性肾小管上皮细胞数量明显减少(P0.05),肾皮质中caspase-3蛋白水平明显下降(P0.05),Bcl-2蛋白水平明显增加(P0.05)。结论:黄芩素对阿霉素肾病具有一定的保护作用,其作用机制可能与调节肾小管上皮细胞凋亡有关。     

抗CD20单克隆抗体诱导B淋巴瘤细胞株凋亡的实验研究

本研究探讨抗CD20单克隆抗体体外诱导B淋巴细胞株凋亡情况及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namalwa细胞经Rituximab 20μg／ml作用24小时后Bcl-2的表达情况。结果表明：抗cD20单克隆抗体对Daudi、Raft和Namalwa淋巴瘤细胞有轻度的抗增殖作用,对Ramos细胞无抗增殖作用,抗增殖作用与单克隆抗体作用浓度无关。抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3％-10％之间波动。Na—malwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后,Bcl-2蛋白表达下调。结论：单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa和Raji细胞株有轻度抗细胞增殖作用,但与作用浓度和作用时间无明显相关。单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa、Raji和Ramos细胞株有微弱的诱导凋亡作用。Namalwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后Bcl-2表达下调,这可能是抗CD20单克隆抗体增敏细胞毒药物作用的机制之一。     

KI对染铅近曲肾小管上皮细胞XIAP mRNA及蛋白表达和凋亡的影响

目的研究碘化钾对染铅肾小管上皮细胞XIAP的表达及凋亡的影响,探讨其对抵抗铅导致的近曲肾小管上皮细胞损伤的可能机制。方法应用实时定量PCR、流式细胞术检测染铅HK-2细胞及对照组细胞中XIAP的mRNA及蛋白的表达及凋亡情况。结果染铅HK-2细胞中XIAP的表达明显低于对照组,且随染铅浓度的增高而降低（P〈0．05）,碘化钾能够减弱上述变化（P〈0．05）;染铅HK-2细胞的凋亡率明显高于对照组,且随铅浓度的增高而升高（P〈0．05）,碘化钾能够降低染铅细胞的凋亡率（P〈0．05）。结论碘化钾能够上调染铅HK-2细胞中抗凋亡蛋白XIAP的表达,降低凋亡率,在一定程度上降低铅对细胞的损伤。     

粉防己碱对急性缺血性肾损伤细胞凋亡的影响

目的 :探讨粉防己碱在急性缺血性肾损伤中的作用及与细胞凋亡的关系。方法 :在钳夹双侧肾蒂 45min致大鼠急性缺血性肾损伤模型的基础上 ,采用肾组织切片HE染色、肾组织DNA片段分析及原位末端转移酶标记法等技术 ,定性、定量分析了急性缺血性肾损伤时肾小管上皮细胞的凋亡现象。结果 :急性缺血性肾损伤时 ,肾小管上皮细胞的凋亡现象明显增加 ;粉防己碱对急性缺血性肾损伤具有保护作用 ,能够明显降低受损肾小管的细胞凋亡水平。结论 :急性缺血性肾损伤时 ,中药粉防己碱能够调节肾小管上皮细胞的凋亡水平 ,以减轻肾组织的损伤     

泪腺上皮细胞凋亡与丙酸睾酮的抑制效应

目的:分析丙酸睾酮抑制泪腺上皮细胞凋亡的机制,为干眼症的性激素防治提供科学的理论依据。方法:实验于2003-09/2004-01在重庆医科大学附属第一医院中心实验室完成。①实验材料:二三月龄新西兰健康白色家兔30只,无眼疾,雌性,体质量1.5～2.5kg。丙酸睾酮(产品批号:020902,上海通用药业股份有限公司产品),用DMSO配成储存液,-70℃保存。分析纯过氧化氢购自北方同正生物技术发展有限公司。②实验方法:经耳缘静脉注射空气处死家兔,按常规无菌操作行泪腺摘除术,酶消化法分离兔泪腺上皮细胞。取二三代培养的泪腺上皮细胞,按约1×108L-1密度接种于预置小玻片的24孔板内,培养4d后,加入浓度为1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L丙酸睾酮,继续培养24h,另以未加丙酸睾酮的培养液培养的同期传代的泪腺上皮细胞作空白对照。培养24h后,再分别加入终浓度为100μmol/LH2O2于不同浓度丙酸睾酮组继续培养60min,另以未加丙酸睾酮的DMEM/F12培养液培养的同期传代的泪腺上皮细胞作对照。③实验评估:应用TUNEL法检测泪腺上皮细胞凋亡,采用免疫细胞化学法检测泪腺上皮细胞Bax和Bcl-2表达。结果:①丙酸睾酮对过氧化氢诱导的泪腺上皮细胞凋亡的影响:与单纯加入100μmol/LH2O2组比较,加入不同浓度丙酸睾酮组泪腺上皮细胞凋亡率均明显下降且丙酸睾酮的抗凋亡作用呈现一定范围内的剂量依赖性[(15.15±1.05)%,(13.94±0.73)%,(12.51±0.91)%,(10.63±0.78)%,(8.19±0.85)%,P<0.01]。②免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白表达:与单纯加100μmol/LH2O2组相比较,同时加入1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L丙酸睾酮各组均可使泪腺上皮细胞Bcl-2的表达明显增强和Bax的表达明显减弱,且与丙酸睾酮的剂量呈正相关(Bcl-2:0.92±0.10,1.01±0.08,1.12±0.06,1.24±0.12,1.37±0.11;Bax:2.28±0.09,2.17±0.11,2.06±0.07,1.91±0.13,1.77±0.10,P<0.01)。结论:丙酸睾酮抑制泪腺上皮细胞凋亡的机制可能与凋亡调节相关基因Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关。     

细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达在脓毒症大鼠肾脏损伤中的作用

目的:探讨细胞凋亡及Bcl-2、Bax在脓毒症大鼠肾损伤中的作用。方法:大鼠分为正常组(n=6)、假手术组和脓毒症组(均n=24)。采用盲肠穿孔结扎术建立脓毒症模型。建模后3、6、12、24h测定血Cr、BUN,电镜观察肾组织超微结构,免疫组化法检测Bcl-2、Bax表达。结果:脓毒症组Cr、BUN较假手术组明显增高,随时间呈上升趋势;电镜下见肾小管上皮细胞凋亡;6h组Bax表达明显增加(0.485±0.011vs0.351±0.020;P<0.01),随病程延长,Bcl-2表达有所增加(P>0.05),Bcl-2/Bax比值降低(0.725±0.035vs0.991±0.060;P<0.01),随病程延长而下降。结论:脓毒症后Bax表达增强、抑制Bcl-2的表达,引起细胞凋亡及肾脏损伤。     

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

细胞凋亡在脑出血肠屏障功能障碍中的作用

目的:评估脑出血应激时肠粘膜细胞凋亡的状况。方法:健康成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为脑出血组和对照组,各15只。实验组建立急性脑出血模型。免疫组化法检测肠粘膜细胞Bax和Bcl-2表达;TUNEL法检测肠粘膜细胞凋亡情况。结果:脑出血组大鼠均成功建成脑出血模型。脑出血组肠粘膜细胞Bax阳性细胞率高于对照组,Bcl-2阳性细胞率低于对照组,凋亡指数高于对照组(均P0.05)。结论:脑出血后肠屏障功能障碍可能与肠粘膜上皮细胞的加速凋亡相关。     

利用基因芯片分析RNA干扰PNAS-2后凋亡相关基因表达的变化

目的:采用基因芯片技术,比较RNA干扰法封闭U937细胞中PNAS-2基因前后,与凋亡有关基因的变化情况,从而了解PNAS-2在凋亡通路中的可能定位。方法:将急性单核细胞白血病细胞株U937分别转染已构建的靶向封闭PNAS-2的干扰质粒组和对照质粒组,合并使用流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,并运用半定量PCR及实时PCR方法验证RNAi效果。采用affymetrix u133A 2.0基因芯片技术比较2组细胞间基因表达的差异。进一步通过半定量RT-PCR对其中的2条上调基因(IER3、CCL2)和6条下调基因(CASP8、CD74、VEGF、DNASE2、PRTN3、TERT)的表达情况进行验证。结果:半定量及实时PCR检测结果表明,合并使用G418及FCM筛选后得到的转染细胞在90%以上,干扰质粒组对PNAS-2的抑制率达到70%以上;基因芯片筛选结果提示共有1651条出现上调,1404条出现下调。其中比值≥2倍的基因共有336条,上调114条,下调222条。根据功能分类初步筛选出与凋亡相关基因共22条,上调基因11条,下调基因11条。RT-PCR检测证实基因芯片结果可靠。结论:抑制PNAS-2表达后促进U937细胞凋亡的机制可能与c-Jun过表达、JNK通路的激活及VEGF基因下调有关。     

补阳还五汤对脓毒症大鼠脾细胞凋亡的实验研究

目的 通过观察脓毒症大鼠脾脏T、B淋巴细胞数量、细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化,探讨补阳还五汤对脓毒症大鼠免疫功能的影响及其作用机制.方法 按随机数字表法将180只雄性Wistar大鼠分为假手术组(30只)、模型组(50只)及补阳还五汤治疗组(50只)和防治组(50只).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.治疗组于术后30 min、防治组于术前3 d灌胃补阳还五汤浓缩液(含生药1 g/ml)15 ml/kg,每日1次.分别于术后6、12、24、48、96 h处死大鼠,观察各组动物脾脏形态学变化,脾T、B淋巴细胞,凋亡细胞,Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 光镜下观察CLP术后大鼠脾脏白髓逐渐萎缩,淋巴小结破坏,损伤的严重程度为模型组＞治疗组＞防治组.与假手术组比较,模型组术后各时间点CD4+T淋巴细胞、CD40 B淋巴细胞、Bcl-2蛋白表达明显降低,凋亡细胞、Bax蛋白表达明显增加,均于24 h达谷值或峰值[均为积分吸光度(A)值:CD4+T淋巴细胞:18.28±4.57比98.60±18.18;CD40 B淋巴细胞:26.96+6.26比104.87±30.97;Bcl-2蛋白表达:20.23±11.75比149.67±5.24;凋亡细胞:241.75±44.79比14.67±5.24;Bax蛋白表达:128.75±44.79比5.34±4.26,均P＜0.01];而CD8+淋巴细胞无明显变化.与模型组比较,补阳还五汤治疗组和防治组各时间点脾脏CD4+T淋巴细胞、CD40B淋巴细胞明显升高,凋亡细胞、Bax蛋白表达明显减少,而CD8+T淋巴细胞、Bcl-2蛋白表达无明显变化;防治组治疗效果优于治疗组(A值:CD4 +T淋巴细胞:94.12±15.45比72.37±8.00;CD40 B淋巴细胞:90.46±13.34比55.66±4.23;凋亡细胞:27.63±9.91比40.83±16.09;Bax蛋白表达:11.63±5.91比30.83±16.09,P＜0.05或P＜0.01);至96 h时各指标逐渐接近假手术组水平.细胞凋亡与Bax呈显著正相关(r=0.522,P=0.000),与Bcl-2呈显著负相关(r=-0.659,P=0.000).结论 补阳还五汤通过减少脾脏CD4+T淋巴细胞、B淋巴细胞凋亡,从而改善脓毒症时的免疫抑制;这可能与补阳还五汤减弱Bax对细胞凋亡的促进作用相关.     

沙棘提取物通过CD68对淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨沙棘提取物对淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用终浓度为0.185 mg/ml、0.37 mg/ml、0.74 mg/ml的沙棘提取物处理细胞Raji,作为沙棘提取物低、中、高浓度(HrL-L、HrL-M、HrL-H)组;未添加药物的细胞作为正常对照(Con)组。将si-NC、si-CD68转染至细胞Raji中,记为si-NC组、si-CD68组;pcDNA3.1、pcDNA3.1-CD68转染至细胞Raji后再用0.74 mg/mL的沙棘提取物处理,记为HrL-H+pcDNA3.1组、HrL-H+pcDNA3.1-CD68组。蛋白质印迹(Western Blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、CD68蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,沙棘提取物低、中、高浓度组Cyclin D1表达水平显著降低,P21表达水平显著升高,细胞活性显著降低,且呈浓度依赖性(P0.05);沙棘提取物高浓度组中Bax表达水平显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,CD68表达水平显著降低(P0.05)。抑制CD68表达,Cyclin D1、Bcl-2表达水平显著降低,P21、Bax表达水平显著升高,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高(P0.05)。过表达CD68逆转了沙棘提取物对细胞Raji增殖抑制和凋亡促进作用。结论沙棘提取物可抑制细胞Raji增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调CD68的表达有关。     

凋亡相关基因Bcl-2在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的:探讨凋亡相关基因Bcl-2在溃疡性结肠炎中的表达及意义。方法:选取75例溃疡性结肠炎患者为观察组,其中活动期50例,缓解期25例。另选取50例健康者为对照组,对比分析两组中性粒细胞凋亡和Bcl-2基因表达情况。结果:观察组患者活动期中性粒细胞凋亡率明显低于缓解期和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者活动期Bcl-2基因表达明显高于缓解期和对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);观察组活动期不同病情患者的中性粒细胞凋亡率和Bcl-2基因表达之间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:活动期溃疡性结肠炎患者的周围血中性粒细胞凋亡延迟,且直接影响患者的病情;Bcl-2基因表达上调可能会引起中性粒细胞凋亡延迟。     

二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法选用人绒毛膜癌细胞系JEG-3,分为对照组和二甲双胍组(终浓度为5、10、20、40mmol/L)处理48h后,使用流式细胞术和免疫荧光检测细胞凋亡情况,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫蛋白印迹检测凋亡相关基因半胱天冬酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和凋亡调节蛋白(Bax)的mRNA及蛋白变化趋势。结果和对照组相比,二甲双胍组的JEG-3细胞早晚期凋亡率显著上升,同时Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白表达水平显著增加,但Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低。结论二甲双胍可以通过Caspase-3及Bcl-2/Bax通路诱导JEG-3细胞发生凋亡。     

生长激素释放肽对高糖诱导下胰岛β细胞凋亡的影响

目的 探讨生长激素释放肽(Ghrelin)对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响.方法 根据不同的培养基将胰岛β细胞株NIT-1细胞划分为四组:A组(5.6 mmol/L葡萄糖全程),B组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,5.6 mmol/L葡萄糖72 h),C组(5.6 mmol/L葡萄糖24 h,33.3 mmol/L葡萄糖72 h),D组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,33.3 mmol/L葡萄糖培养72 h).流式细胞仪Annexin V/PI双染色法测定四组NIT-1细胞早期凋亡率;Hoechst 33258标记细胞核并在荧光显微镜下测各组细胞总凋亡率;RT-PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA水平.结果 (1)与A组比较,B组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均无统计学意义(P均>0.05),而C组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均显著增加(P均<0.01);与C组比较,D组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均降低(分别P<0.01,P<0.05).D组较A组细胞早期凋亡率有增加(P<0.05),而总凋亡率无统计学意义(P>0.05).(2)与A组比较,B组NIT-1细胞Bax、Bcl-2、Bcl-2/Bax表达水平无变化,而C组Bcl-2、Bcl-2/Bax水平显著下降(P<0.05);与C组比较,D组Bcl-2、Bcl-2/Bax表达有升高趋势,但无统计学意义;各组Bax表达水平无差别.结论 Ghrelin对葡萄糖生理浓度下的胰岛β细胞凋亡无影响,但可抑制高浓度葡萄糖诱导的β细胞凋亡.Ghrelin可能不通过Bcl-2、Bax抑制高糖诱导的β细胞凋亡.     

槲皮素抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促凋亡机制的研究

目的观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法人肝癌HepG2细胞系,分为6组,A～E组加入终浓度分别为12.5,25.0,50.0,100.0,200.0μmol/L槲皮素,F组为空白对照组,加入等量营养液。采用MTT法及流式细胞检测技术检测各组人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性,应用免疫细胞化学技术检测细胞中Bcl-2及Bax蛋白的表达情况。结果槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,作用48h后,A～E组抑制率与凋亡率高于F组,差异均有统计学意义(P<0.05);槲皮素作用HepG2细胞24h后,D组G1期细胞比率高于F组,差异有统计学意义(P<0.05),S和M期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);作用48h后,D组Bcl-2和Bax表达灰度值与F组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过激活线粒体凋亡途径来促进细胞凋亡。     

5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法诱导HL-60细胞线粒体介导的凋亡

本研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)作用于白血病细胞株HL-60后线粒体膜电位改变及凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。以白血病细胞株HL-60为实验模型,实验分为4组:对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA+PDT组。采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位,RT-PCR及实时定量PCR方法检测PDT前后Bcl-2基因表达变化。结果表明,ALA-PDT后线粒体膜电位出现快速下降,0 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例升高至(58.28±0.92)%,与对照组相比有显著差异(P<0.05)。随着时间延长,这种细胞比例逐步增多,而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化;ALA-PDT后2 h Bcl-2基因表达显著下降,4 h进一步下降达到谷底,24 h时仍呈低表达,并通过实时定量PCR进一步得到了证实。结论:ALA-PDT诱导的HL-60细胞凋亡过程与其影响线粒体跨膜电位有关,即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡;ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的。