紫杉醇产生菌美丽镰刀霉K178的诱变育种

采用紫外线与亚硝酸对美丽镰刀霉（Fusarium mairei）K178的孢子进行复合诱变，于含40μg／ml制霉菌素的平板上进行筛选，获得31株突变株，其中5株的紫杉醇摇瓶发酵产量高于出发菌株，突变株UH23的紫杉醇产量为259．8μg／L，进一步优化其发酵工艺条件，紫杉醇产量达286．4μg／L，较出发菌株提高了29．9％。     

产腺苷蛋氨酸酵母菌株的选育

目的筛选产腺苷蛋氨酸(SAM)的酵母菌并进行诱变育种。方法以选择性培养基筛选酵母菌株并用高效液相色谱检测SAM。利用紫外线和γ-射线处理对菌株进行诱变。结果从34份土样中筛选到1株产SAM的酵母菌Q95菌株,经过5轮紫外线诱变和1轮γ-射线诱变,筛选到1株SAM产量显著提高的正突变株Q6-13。摇瓶发酵27 h后,其SAM产量达到1860μg/mL,与Q95相比提高了86.9%。在15 L外循环气升式生物反应器中补料发酵22 h后,Q6-13的SAM产量达到2540μg/mL。结论通过筛选和诱变,得到了1株高产SAM的酵母菌突变株,为SAM的微生物发酵法规模化生产奠定了基础。     

选育紫杉醇高产菌种链格孢单孢变种

以从红豆杉树皮中分离得到的高产紫杉醇(paclitaxel)菌株013为出发菌株,采用紫外线诱变、亚硝基胍诱变交替进行的方法,同时复合含1%乙酰胺的理性化筛选模型,获得一株遗传性状稳定的链格孢单孢变种ST 026,摇瓶发酵产量可稳定达到227mg/L,比出发菌株产量提高81.6%。     

A40926高产菌株的选育及发酵工艺优化

目的通过菌种选育与发酵工艺优化,提高A40926发酵产量。方法本文采用紫外线和亚硝基胍两种方法诱变,结合抗生素抗性筛选方法,对A40926的产生菌Nonomuraea sp.SIPI-H3020进行诱变选育,并通过工艺优化提高发酵产量。结果筛选得到一株高产突变株Nonomuraea sp.SIPI-H5972,其发酵效价比出发菌株提高了257%。在优化的摇瓶发酵工艺下,突变株SIPI-H5972的发酵效价达到990μg/m L,又提高了153%。通过补料工艺优化,在50L发酵罐中发酵效价为1223μg/m L,比摇瓶发酵提高了23.5%。结论紫外线和亚硝基胍诱变并结合抗生素抗性筛选对提高A40926发酵单位效果明显,补料工艺可以显著提高其产量。     

麦考酚酸高产菌株的选育

以短密青霉MA-4为出发菌株，应用紫外和亚硝基胍诱变，结合麦考酚酸与三氟乙酸抗性筛选，获得高产、稳定的突变株MA—H8。经过发酵培养基优化，突变株发酵水平为4500μg／ml。     

复合诱变法选育普那霉素高产菌株

以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)ZP2为出发菌株,经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)复合诱变,并结合普那霉素抗性突变株的理化筛选,选育到一株高产突变菌株UN2056,其普那霉素产量达到1490 mg/L,比出发菌株提高了45.7%.传代试验表明该高产突变菌株的高产性能遗传特性稳定.高产突变株UN2056在5 L发酵罐中进行发酵试验,其平均发酵产量达到1645 mg/L,比出发菌株提高了60.8%.     

达托霉素生产菌(ATCC31568)的紫外诱变和抗生素抗性筛选

目的 建立一种提高达托霉素生产水平的方法.方法 以玫瑰孢链霉菌(ATCC31568)为出发菌株,利用紫外诱变结合抗生素抗性筛选以提升达托霉素生产水平.结果 通过对致死率和正突变率的考察,确定紫外诱变时间为45s,利福平和庆大霉素的合适筛选浓度分别为1.4μg/mL、1.0μg/mL,得到的突变株经摇瓶发酵后,采用高效液相色谱仪(HPLC)对最终发酵液进行检测.筛选到的突变株Ge-27最高产量达到79.44 mg/L,比原始菌株提高了42.2％.结论 采用紫外诱变结合抗生素抗性筛选得到了达托霉素合成水平提高的菌株.     

尼莫克汀高产菌株诱变选育研究

目的 为了提高尼莫克汀产量以满足生产需求。方法 本试验以蓝灰链霉菌N20-69为出发菌株,探索了紫外(UV)诱变、常压室温等离子体(ARTP)诱变、亚硝基胍诱变、UV氯化锂复合诱变与ARTP缬氨酸氧肟酸复合诱变育种。结果 筛选到了11株高产突变株,均将出发菌株提高了20%以上,其中突变株NAX-96遗传性稳定,最适种龄为19 h。在500 L发酵罐发酵实验中,突变株NAX-96在生产能力上优势明显,尼莫克汀的产量达到3593μg/mL,比出发菌株N20-69(2477μg/mL)提高了45%。结论 研究结果对实际生产有重要指导作用。     

新型常压室温等离子体-紫外复合诱变选育埃莎霉素I高产菌株#br#

目的 通过对埃莎霉素Ⅰ产生菌WSJ-IA进行诱变选育研究,以期获得埃莎霉素Ⅰ高产菌株。方法 使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system, MPMS)对出发菌株的孢子进行等离子体和紫外复合诱变,设定不同的诱变时间处理孢子悬液,通过致死率确定合适的诱变条件,利用突变株摇瓶发酵效价筛选出正突变菌株。结果 在MPMS射频功率为100W,处理距离5mm,气体流量12.5SLM,等离子体-紫外辐射时间为50s时,菌株致死率为96.08%。在此诱变条件下,以突变株的初筛效价为指标的突变率、正突变率分别达到63.96%和22.52%,复筛效价是出发菌株1.5倍以上的有5株,占复筛菌株的9%。最终筛选出一株发酵单位比出发菌株提高221%、埃莎霉素Ⅰ组分含量提高192%的正突变株IA-425。42L自动发酵罐发酵结果表明,该菌株埃莎霉素Ⅰ产量达到(2000±200)μg/mL左右。结论 新型等离子体复合紫外诱变方式,可有效提高菌株的埃莎霉素Ⅰ发酵产量和组分含量。这为埃莎霉素Ⅰ的大规模发酵和临床前研究奠定了良好基础。     

复合诱变选育星形孢菌素产生菌

目的提高蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素产生菌株的发酵效价。方法以海洋来源的链霉菌Strepto-myces fradiae 007、S.arenaeZ4007和S.rubrolavendulae T H W-12为出发菌株,采用紫外线照射和亚硝基胍复合诱变,结合HPLC进行筛选。结果从菌株Streptomyces fradiae 007中得到一株高产突变株,发酵效价由原来的1.02μg.mL-1提高到9.06μg.mL-1,提高了8倍,突变株性状稳定。结论复合诱变是一种简便有效的提高菌株发酵效价的方法。