全反式维甲酸对白血病NB4细胞PRAM蛋白的影响

目的:探讨在NB4细胞增殖过程中PRAM蛋白表达情况,并且用全反式维甲酸（ATRA）进行干扰,观察其对PRAM蛋白的影响。方法:①细胞增殖抑制实验:体外培养NB4细胞共5天,用台盼蓝染色法筛选ATRA有效干预浓度后,选取ATRA(1×10^-6mol/L)为目的干预浓度。②Western blot:ATRA(1×10^-6mol/L)持续干扰NB4细胞1、2、3天后检测PRAM蛋白的相对表达量。结果:①与对照组比较,4种浓度ATRA组细胞与NB4细胞的增殖率呈量效与时效关系;浓度越大,抑制率越高;于培养第4天出现最强抑制。②选取1×10^-6mol/L ATRA干扰NB4细胞共3天,对照组及ATRA组PRAM蛋白的表达在时间上有规律性:第2天表达最强烈。③1×10^-6mol/L ATRA使PRAM蛋白在第2天的相对表达量较对照组低（P<0.05）。④1×10^-6mol/l ATRA使NB4细胞PRAM蛋白在第2天出现最大表达量,同时该组细胞出现生长抑制。结论:ATRA能通过PRAM位点来达到抑制APL增殖分化的目的。     

三氧化二砷对NB4细胞珠端粒酶活性的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞珠端粒酶活性的影响,并探讨与细胞增殖、分化及细胞周期之间的关系。方法:应用MTT法、BNT法检测细胞的增殖抑制率、细胞分化率、流式细胞仪检测CD11b的表达率、细胞周期时相比率,以PCR为基础的TRAP法检测端粒酶活性。结果:As2O3能有效地使NB4细胞增殖抑制、诱导分化,伴随着端粒酶活性的变化为活性降低。细胞周期分析发现,G0/G1期高或S期低对应低水平端粒酶活性,G0/G1期低或S期高对应高水平端粒酶活性。结论:As2O3可抑制NB4细胞端粒酶活性,并与细胞分化、细胞周期时相有关。     

三氧化二砷及全反式维甲酸对白血病NB4细胞PML/RARA融合基因的影响

目的探讨在NB4细胞增殖过程中PML/RARA融合基因表达的情况,并用三氧化二砷(As2O3)和/或全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)干扰后观察目的基因的变化。方法用As2O3(1×106 mol/L)或/和ATRA(1×106 mol/L)干扰体外培养成熟的NB4细胞,后用real/Time PCR检测PML/RARA融合基因的相对表达量。结果ATRA及As2O3均使PML/RARA融合基因表达抑制,但双药联用无明显协同作用(P<0.05)。As2O3对PML/RARA融合基因表达抑制较同剂量ATRA强。结论 ATRA及As2O3均能下调PML/RARA融合基因。As2O3对PML/RARA融合基因的下调作用及对NB4细胞的增殖抑制均比同剂量的ATRA强。双药联用与单药干预,无叠加效应。     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导NB4细胞株分化的体外研究

目的评估丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对急性早幼粒细胞白血病（NB4）细胞增殖、分化的效应。方法以不同浓度的As2O3、Tan ⅡA单独及联合作用于NB。细胞,观察细胞的生长状况、形态学改变,用流式细胞术（FCM）检测细胞膜表面CD11b,分析NB4细胞的增殖、分化情况。结果TanⅡA、As2O3单独均能抑制NB4细胞生长,以1．0μmol·L^-1 As2O3作用更显著,两药联合应用可增强对NB。细胞增殖的抑制作用;经Tan ⅡA处理的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征;NB4细胞表面CD11b检测显示Tan ⅡA的诱导分化能力更强,以0．5μg·mL^-1组为著,联合应用As2O3可拮抗其诱导分化能力,相反TanⅡA则可促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。结论两药对NB4细胞均有增殖抑制作用,且具有协同效应;两药对NB4细胞诱导分化作用表现为：As2O3可以拮抗Tan ⅡA对NB4细胞的诱导分化能力,而Tan ⅡA则促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。     

丹参酮ⅡA联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡的影响

目的 观察丹参酮ⅡA（Tanshinone,TanⅡA）联合三氧化二砷（ATO）对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）凋亡的作用;并通过观察两药联合诱导NB4细胞凋亡时p53、Bcl-2表达的变化,探讨其可能的机制.方法 通过Annexin V FITC/PI荧光染色观察1.0μg·mL-TanⅡA分别联合0.25、0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO作用于NB4细胞的形态学变化;流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测定各组细胞凋亡率;流式细胞仪检测各组细胞p53、Bcl-2的表达.结果 （1） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA分别与0.5、1.0μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞24、48和72h的凋亡率均较相应单独用药组凋亡率明显增高（P＜0.05）;染色荧光显微镜观察1.0μg·mL^-1TanⅡA联合1.0μmol·L^-1ATO实验组较1.0μmol·L^-1ATO对照组72h时更易见到中晚期凋亡细胞和死亡细胞;（2） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA与0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞48h、72h表达p53蛋白的细胞较1.0μmol· L^-1ATO单药组明显增多（P＜0.05）,作用高峰时间为72h; 1.0μg·mL^-1TanⅡA分别与0.25、0.5、1.0 μmol·L-的ATO联合作用NB4细胞24h时,表达Bcl-2蛋白的细胞数较1.0μmol· L^-1 ATO单药组显著下降（P＜0.05）,且与ATO的浓度呈负相关（r=-0.858,P=0.000）.结论 联合1.0μg·mL^-1 TanⅡA可增强0.5、1.0μmol·L^-1ATO诱导NB4细胞凋亡;TanⅡA联合ATO诱导NB4细胞p53表达增强和Bcl-2表达减少可能是其促凋亡机制之一.     

中药518对人白血病细胞K562、NB4作用研究

目的 研究中药518地K62、NB4细胞的作用;并比较518A、518B药效。方法 用台盼蓝染色、光镜观察、流式细胞仪方法,观察518A、518B处理K562、NB4细胞后形态学、生化指标的改变。结果 台盼蓝染色法证实518A、518B对K562、NB4细胞有抑制作用,抑帛率与药物浓度正相关;光镜下可见给药后细胞形态学改变;流式细胞仪检测显示中药518对K562细胞作用48h后出现凋亡峰。结论 518A、518B对K562、NB4细胞有抑制增殖作用,诱导K562细胞凋亡,518A药效优于518B。     

RNA干扰对NB4细胞凋亡的影响

目的:探讨靶向PML-RARαmRNA的siRNAs对急性早幼粒白血病NB4细胞株凋亡的影响。方法:体外培养人白血病细胞株NB4细胞,以不同浓度的siRNAs分别转染细胞,MTT法检测siR-NAs对NB4细胞的抑制作用,细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:siRNA转染NB4细胞后,对细胞的增殖有明显的抑制,siRNA1244的24hIC50为46.578nM;细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡现象,流式细胞仪检测也证明转染siRNA后细胞凋亡率增加,转染50nM siRNA1244的NB4细胞,24h后凋亡率从4.29%增至59.35%。结论:siRNA1244诱导NB4细胞凋亡效果最为明显,并且与抑制细胞增殖的效应一致,具有抗急性早幼粒细胞白血病效应,它的作用分子机制很可能是下调PML-RARα基因的表达而抑制增殖并诱导凋亡。     

氯化甲基汞对NB4和K562白血病细胞凋亡及增殖的影响

目的：研究氯化甲基汞（MMC）对NB4和K562白血病细胞凋亡及增殖的影响。方法：NB4、K562细胞经1.25、2.50、5.00、10.00和20.00 μmol•L^-1MMC、三氧化二砷（ATO）分别作用0、6、12、24、48和72 h,采用MTT法测定细胞的存活率,采用Hoechst 33258染色后荧光镜下观察细胞凋亡情况。结果： NB4和K562细胞接触10 μmol•L^-1 MMC 24 h后,细胞存活率分别为22.0%和70.0%,与对照比较差异有显著性（P值分别为0.000和0.014）;NB4和K562细胞接触10 μmol•L^-1ATO 24 h后,细胞存活率分别为24.4 %和52.0%（P值分别为0.001和0.000）;荧光镜检呈现明显的凋亡图像。MMC与ATO对NB4、K562细胞诱导凋亡及抑制增殖作用相似。结论：MMC能诱导NB4和K562细胞凋亡,抑制其增殖,并呈时间剂量依赖性。     

槲皮素对NB4细胞株p53及蛋白的影响

目的研究治疗白血病的有效药物。方法 将槲皮素作用于培养的NB4细胞株，应用RT－PCR及Western blot方法，研究不同浓度槲皮素（30、60、90μmol/L）诱导细胞24、48、72、96、120h后，急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株中突变型p53基因及蛋白表达的情况，结果 证实其在30－90μmol/L浓度时对突变型p53基因无影响，面坚突变型p53蛋白的表达有抑制作用。结论 本研究为槲皮素应用于急性早幼粒细胞白血病的研究提供了有效手段。     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-kB信号通路的影响

目的探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF．KB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制。方法以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验。实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组（终浓度分别为5、10、15μmol／L）,培养24、48、72h。采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标Annex—inV／propidiumiodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF—KB通路相关基因mRNA的差异表达。结果辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用（均P〈0．01）,且呈时间与剂量依赖性。15μmol／L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72h细胞抑制率分别达到45．75％、92．91％、96．46％,而细胞早期凋亡率分别为30．25％、64．34％、87．38％。与对照组相比,15μmol／L辛伐他汀处理NB4细胞48h组中NF—KB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调。结论辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF—KB通路相关基因的表达有关。     

三氧化二砷与维甲酸联合作用在NB4,MR2细胞系中的体外研究

目的：观察三氧化二砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)联合作用对NB4，MR2不同亚型急性早幼粒白血病细胞株，诱导分化、增殖、凋亡的影响。方法:以NB4，MR2为体外模型，利用细胞生长曲线、台盼蓝拒染法、MTT法、NBT、细胞形态Wrigh‘s-Gimesa染色，观察细胞增殖、分化、凋亡的相互作用。结果：NB4细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现拮抗，而0．5μmol/L As2O3与(10^-7--10^-8mol/L)ATRA呈现协同；MR2细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现协同。结论：As2O3与全反式维甲酸协同效应呈现不同细胞、剂量的特异性，MR2细胞株协同效应明显强于NB4细胞株。     

槲皮素对NB4,HL—60细胞形态、PML mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨槲皮素对NB4,HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。方法 以NB4,HL-60细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright′s染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PML mRNA表达采用RT-PCR法。结果 1）经槲皮素处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2）槲皮素处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL-60细胞,PML发生相似改变。3）槲皮素处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论 在槲皮素诱导下,PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制;槲皮素能诱导,NB4,HL-60细胞凋亡,抑制白血病细胞生长。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导NB4细胞株分化的体外研究

目的评估丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用对急性早幼粒细胞白血病(NB4)细胞增殖、分化的效应。方法以不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合作用于NB4细胞,观察细胞的生长状况、形态学改变,用流式细胞术(FCM)检测细胞膜表面CD11b,分析NB4细胞的增殖、分化情况。结果 TanⅡA、As2O3单独均能抑制NB4细胞生长,以1.0μmol.L-1As2O3作用更显著,两药联合应用可增强对NB4细胞增殖的抑制作用;经TanⅡA处理的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征;NB4细胞表面CD11b检测显示TanⅡA的诱导分化能力更强,以0.5μg.mL-1组为著,联合应用As2O3可拮抗其诱导分化能力,相反TanⅡA则可促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。结论两药对NB4细胞均有增殖抑制作用,且具有协同效应;两药对NB4细胞诱导分化作用表现为:As2O3可以拮抗TanⅡA对NB4细胞的诱导分化能力,而TanⅡA则促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。     

槲皮素对NB4细胞株p53及蛋白的影响

目的研究治疗白血病的有效药物。方法将槲皮素作用于培养的NB4细胞株,应用RT-PCR及Westem bolt方法,研究不同浓度槲皮素(30、60、90μmol/L)诱导细胞24、48、72、96、120h后,急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株中突变型p53基因及蛋白表达的情况。结果证实其在30～90μmol/L浓度时对突变型p53基因无影响,而对突变型p53蛋白的表达有抑制作用。结论本研究为槲皮素应用于急性早幼粒细胞白血病的研究提供了有效手段。     

丹参酮ⅡA对NB4细胞促凝活性的影响

目的：研究丹参酮ⅡA（Tan ⅡA)对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞促凝活性（PCA）的影响。方法：使用Tan ⅡA处理NB4细胞，复钙时间检测NB4细胞的PCA，并用发色底物法测量反应体系中因子Xa(FXa)水平，ATRA处理的NB4细胞作为阳性对照组。结果：Tan ⅡA可下调NB4细胞PCA水平，与空白对照之间有统计学差异（P＜0．01）；Tan ⅡA和ATRA下调NB4细胞的PCA水平相似，无统计学差异（P＞0．05）；经Tan ⅡA作用的NBA4细胞，FXa水平降低。结论：Tan ⅡA与ATRA相似，均可降低NB4细胞的PCA水平，其降低PCA作用是通过下调NB4细胞TF的表达实现的。     

丹参酮ⅡA与三氧化二砷协同诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 研究丹参酮ⅡA(TanⅡ A)与三氧化二砷(ATO)联合对急性早幼粒白血病细胞(NIM)分化以及凋亡有无协同作用.方法 用TanⅡA联合ATO作用于NB4细胞.观察药物作用不同时间段的活细胞数,计算实验各时段的生长抑制率;Giemsa染色与透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术Annexin V法测定细胞凋亡率,并进行细胞周期和细胞凋亡分析.结果 ①TanⅡ A与ATO联合对NB4细胞生长有协同抑制作用,这种抑制作用随作用时间及联合ATO浓度的增加而增加.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.125、0.25以及0.5 μmol/LATO联合作用5 d对NB4细胞的生长抑制率均强于相应浓度ATO单独作用对NB4细胞的生长抑制率(P＜0.01);②TanⅡA与ATO联合对诱导NB4细胞凋亡有协同作用.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.5 μmol/L和1.0μmol/L ATO联合作用NB4细胞1 d,NB4细胞的凋亡率分别比相应ATO单独用药组的促凋亡效应增强(P＜0.05),TanⅡA与0.5 μmol/L ATO联合的促凋亡协同效应持续3 d;③TanⅡA与ATO联合对NB4细胞增殖有协同抑制作用,使G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.125、0.25和0.5 μmol/L ATO联合作用NB4细胞3 d的增殖指数(PI)均低于相应单药的PI值(P＜0.05).结论 TanⅡA联合ATO对诱导NB4细胞凋亡有明显的协同作用,这种协同作用和联合使用的ATO的浓度密切相关;TanⅡA联合ATO对NB4细胞诱导分化未显示明显的协同作用.     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-κB信号通路的影响

目的 探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4细胞)增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF-κB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制.方法 以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15 μmol/L),培养24、48、72 h.采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF-κB通路相关基因mRNA的差异表达.结果 辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用(均P＜0.01),且呈时间与剂量依赖性.15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72 h细胞抑制率分别达到45.75％、92.91％、96.46％,而细胞早期凋亡率分别为30.25％、64.34％、87.38％.与对照组相比,15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞48 h组中NF-κB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调.结论 辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF-κB通路相关基因的表达有关.     

补骨脂素加长波紫外线对NB4细胞线粒体膜电位的影响

补骨脂素(psoralen,PSO)是中药补骨脂中的主要成分.研究表明自中药补骨脂中提取的PSO加长波紫外线(UVA),即PUVA对人白血病细胞NB4>、K562>、HL-60的生长均有抑制作用[1-2]>,并可诱导白血病细胞凋亡.本研究应用析因设计观察PUVA对NB1>细胞线粒体膜电位(△Ψm)的影响,以探讨PUVA诱导其凋亡的作用机制.