酶联免疫吸附试验检测巨细胞病毒IgM抗体影响因素探讨

本文讨论了酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CMV IgM抗体各种影响因素,并引入正交试验方法。我们评价抗原和酶标板的预处理、封板液、包被时温对测定结果的影响顺序和程度。结果表明:预处理和封板步骤在酶标试验中非常重要。用正交试验得出的最佳条件确定抗晾最佳包被浓度较常规方法更快速,准确。     

ABC 法与 ELISA 法检测巨细胞病毒 IgM 抗体的比较研究

本文应用 ABC 法对89份新生儿脐血、103份围产期妇女及126份未婚育龄妇女进行血清抗巨细胞病毒特异性 IgM 抗体测定,同时与常规 ELISA 法做比较。三组人群的阳性检出率分别为4.49%,32.02%和17.46%。在新生儿和晚期妊娠妇女组中,民汉检出率存在显著性差异(P<0.05),且围产期妇女检出率高于对照组(C组)。两法同为阳性患者 ABC 法检出的抗体滴度为 ELISA 法的2.08倍。12例 ELISA法阴性者 ABC 法阳性,提示该法对抗体水平较低的 CMV 患者更具有诊断价值。实验结果表明:ABC 法在测定巨细胞病毒 IgM 较 ELISA 法敏感,且特异、简单和快速。     

实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体的比较

目的：比较实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体水平的敏感性及准确率。方法：收集108例孕前筛查妇女,同时采用实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测外周血巨细胞病毒-IgM抗体水平,并对这两种检测方法的阳性率进行比较。结果：实时荧光定量-PCR法阳性率为74%,酶联免疫吸附法为57%,两者差异有统计学意义（P〈0.05）;18例荧光定量-PCR法阳性的妇女血清巨细胞病毒-IgM拷贝数低于10-4/ml。结论：实时荧光定量-PCR与酶联免疫吸附法相比,对巨细胞病毒-IgM抗体检测具有较高的敏感性和准确率,值得临床推广使用。     

糖尿病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性IgM的酶联捕获技术,来分析糖尿病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM(μ链特异性)抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测727例糖尿病患者及230例健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行了比较。结果糖尿病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为81例(11.14%,酶标抗体法)和78例(10.73%,酶标抗原法),与健康组(0.87%)相比存在统计学差异(P<0.05)。酶标抗体法与酶标抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时不存在显著性差异(P>0.05),且不受RF因子的影响。HCMV pp65-IgM与HCMV pp65蛋白表达呈现良好的相关性。结论酶联捕获HCMV pp65特异性IgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

酶联免疫吸附试验法检测基础免疫儿童破伤风抗体水平

目的了解0～7岁基础免疫儿童破伤风IgG保护性抗体产生情况。方法采用两种定量酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒分别检测262份0～7岁基础免疫儿童血清破伤风IgG抗体水平,IgG抗体≥0.1 U/ml为阳性。结果 "安图试剂"IgG抗体阳性146份,阳性率为55.73%;"MP试剂"IgG抗体阳性154份,阳性率为58.78%,两种试剂盒的检测结果间差异无统计学意义(P>0.05)。结论本地区0～7岁基础免疫儿童血清破伤风IgG抗体保护率较低,加强人群破伤风类毒素免疫很有必要。     

渗滤酶联斑点法快速检测人血清中巨细胞病毒IgM抗体

渗滤酶联斑点法快速检测人血清中巨细胞病毒ＩｇＭ抗体吴汉勇１吴发龙２１．福建医科大学临床微生物学教研室（福州３５０００４）２．福建省自强生物工程研究所关键词巨细胞病毒ＩｇＭ渗滤酶联斑点法人血清巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩｇＭ抗体的检测对于早日发现孕妇有无感染...     

ELISA检测脐血中巨细胞病毒IgM抗体诊断先天性巨细胞病毒感染的探讨

作者用直接和间接ELISA方法,对成都市6所医院初生婴儿582例的脐应进行了巨细胞病毒(CMV)IgM抗体检测。结果:两种方法检出CMV IgM抗体阳性者共27扮,阳性率4.6％,其中用直接ELISA检测,阳性者25份,间接ELISA阳性者为15份。前者明显优于后者(P<0.05),表明其敏感性高,特异性强。CMV IgM抗体阳性儿临床随访至5～6月龄,2例听力异常,1例眼底可疑异常。     

673例妊娠妇女巨细胞病毒活动性感染的调查

采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）捕获法对６７３例妊娠妇女血清抗巨细胞病毒ＩｇＭ型抗体（ＣＭＶ—ＩｇＭ）进行检测，证实ＣＭＶ活动性感染率为５５／６７３（８．１７％）．活动性感染者尿聚合酶链反应（ＰＣＲ）结果表明尿液ＣＭＶ—ＤＮＡ阳性率４７．５％。鉴于孕妇ＣＭＶ活动性感染时时其子代有一定程度的危害或影响，建议通过检测ＣＭＶ—ＩｇＭ对孕妇ＣＭＶ感染状态进行监测，以采取相应措施。     

肾盂肾炎发病与巨细胞病毒相关性研究

本文应用免疫酶斑点法（ＥＩＢＡ）检测肾盂肾炎病人尿液中巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），同时应用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法检测病人血中ＨＣＭＶ抗体，结果表明：尿中ＨＣＭＶ阳性率为５２．９％，血清ＨＣＭＶ抗体为５７．４％，与正常对照组相比，差异非常显著Ｐ＜０．０１。另外，还对２０例病人进行尿液中巨细胞病毒分离，结果有３例阳性，阳性率１５％，本结果说明肾盂肾炎发病与ＨＣＭＶ感染有关。     

免疫印迹和酶联免疫吸附法检测糖尿病自身抗体的结果比较

目的:探讨免疫印迹(IB)和酶联免疫吸附法(ELISA)在糖尿病自身抗体检测中的差异。方法:用IB和ELISA分别测定43例Ⅰ型糖尿病(T_1DM)和50例正常人血清中胰岛细胞抗体(IcA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和胰岛素抗体(IAA),评价其敏感性和特异性。结果:IB法检测T_1DM患者血清中IcA、GADA和IAA的阳性率分别为69. 7%、67.4%和23.3%。3种抗体联合检测的敏感性和特异性分别是93.0%和98.0%;ELISA检测IcA、GADA和IAA的阳性率分剐为72.1%、81.4%和41.9%,3种抗体联合检测的敏感性和特异性分别是97.7%和88%。结论:IB法检测糖尿病自身抗体的敏感性低于ELIsA(P<0.05);而IB法的特异性明显高于ELISA(P<0.05)。     

酶联免疫吸附试验异常结果分析及对策

酶联免疫吸附试验是免疫学中最常见的试验方法,操作简单,如在操作中不注意,会引起许多异常结果,如白板、显色弱和灵敏度低、灵敏度过高、板底高、高背景、假阳性等,针对存在的问题进行分析并提出解决的办法,那就是实验前检查试剂和室温平衡试剂、选择合适的防腐剂、质控品或标本按要求储存、检查滤光片、严格操作、注意洗板事项,只有按操作说明书严格操作,才能得到正确的结果。     

酶联免疫法检测幽门螺杆菌抗体179例临床分析

用酶联免疫法(ELISA)对经胃镜检查179例胃病人血清幽门螺杆菌(HP)抗体测定同时胃粘膜活组织MB染色光镜观察HP和尿素酶试验(HPUT)作一比较,结果显示ELISA、HPUT及组织MB染色检出率分别为76.5％(137/179)、49.1％(88/179)和99.4％(178/179)。其中浅表活动性胃炎25例、抗HP抗体阳性亦25例,阳性率100％(25/25)。浅表活动性胃炎的抗HP抗体阳性率明显高于非活动性胃炎73.4％(112/152)。该法为非创伤性检查,具有敏感特异的特点,有用于临床对HP感染的诊断价值。     

基于常见影响乙肝五项酶联免疫吸附法检测结果因素讨论

近年来临床免疫学不断发展的同时,使得酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)在临床上的应用更加广泛,主要用于测定各种血清免疫学标志物如乙肝血清标志物(俗称乙肝"两对半")、HIV抗体、HCV抗体、梅毒抗体等.该种方法的优点是灵敏度和特异度较高,无需使用特殊设备,可以进行定性分析.但是在实际工作中,一些异常指标可能会因操作不当而出现,试验的检测结果受操作中的每个环节的影响都较大,如果没有按常规步骤进行操作,假阳性和假阴性的情况就可能随之出现.总而言之,检验结果出现偏差可能只是由于一点小小的疏忽、失误造成的,但是却会给患者及其家属带来物质与精神上的损失,给临床医生确诊带来一定的麻烦.     

酶联免疫吸附试验检测人叶酸受体抗体IgM方法的建立及评价

目的 建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血浆叶酸受体抗体IgM的方法。方法 将从正常分娩健康产妇的胎盘中提取、纯化人叶酸受体蛋白稀释至5 ng/μl,作为抗原包被96孔板,以羊抗人IgM作为二抗,以健康人混合血浆作为标准品,浓度设定为1。采用ELISA检测人血浆叶酸受体抗体IgM水平,并评价该方法的灵敏度、精密度和稳定性。分别以人叶酸受体蛋白和牛源叶酸结合蛋白作为包被蛋白,检测24例健康新生儿母亲和20例神经管畸形患儿母亲的血浆标本叶酸受体抗体IgM水平,比较两种包被蛋白的检测结果。结果 ELISA方法可以检测的人血浆叶酸受体抗体IgM浓度为6.25×10-4~8.00×10-2,最低检测限为3.12×10-4。该方法检测高、中和低浓度血浆叶酸受体自身抗体IgM的批内差异分别为6.61%、3.50%和5.12%,批间差异分别为4.54%、5.49%和5.44%,此方法检测不同稀释倍数样品中叶酸受体自身抗体IgM浓度的测定值均在均数±10%范围内。人叶酸受体包被检测板测得的健康新生儿母亲(t=-11.9,P<0.001)及神经管畸形患儿母亲(t=7.35,P<0.001)的叶酸受体抗体IgM浓度均显著高于牛源叶酸结合蛋白包被检测板的测定值。结论 本研究成功建立了检测人血浆叶酸受体抗体IgM的ELISA方法,该方法以人叶酸受体蛋白作为包被蛋白,检测灵敏度高,精密度好,结果稳定。     

ELISA法和免疫印迹法检测抗ENA抗体的比较

目的：将目前国内新开展的两种检测ＥＮＡ技术,即免疫印迹法（ＩＢＴ）和酶免疫法（ＥＬＩＳＡ）进行对比、分析。方法：用 ＩＢＴ法及 ＥＬＩＳＡ法同时检测 １３０例各种结缔组织病、非结缔组织病人及健康人血清中的抗ＥＮＡ抗体。结果：２０例健康人,两法均为阴性;８０例结缔组织病患者,两法检出抗 Ｓｍ抗体的符合率为 ９１．３％,检测抗 ＲＮＰ抗体的符合率为 ８２．５％,以上抗体两法的敏感性无显著差异（Ｐ＞０．０５）。检测抗ＳＳＡ抗体,ＩＢＴ法检出率低。抗ＳＳＢ抗体检出率两法亦无显著差异（Ｐ＞０．０５）,符合率为８７．５０％,在１２例ＳＳ的检测中符合率比较低,为５０％。结论：两种方法在检测抗Ｓｍ、ＲＮＰ、ＳＳＢ抗体时,敏感性无显著差异,ＥＬＩＳＡ法检测抗ＳＳＡ抗体优于ＩＢＴ法。上述两种方法在临床应用于抗ＥＮＡ抗体的检测中于可互相验证和补充。     

快速微粒凝胶免疫测定法与酶联免疫吸附测定法检测HIT抗体的临床应用比较

目的比较快速微粒免疫凝胶法（PaGIA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测HIT抗体在诊断肝素诱导的血小板减少症（HIT）中的应用。方法选取应用肝素制剂患者197例,男性120例、女性77例,根据4 Ts评分系统临床诊断HIT,所有患者均应用ELISA法进行HIT抗体检测,对ELISA法检测阳性及出现血小板减少的患者再次应用PaGIA法进行检测,并对两次HIT抗体检测结果进行比较。结果 4 Ts评分临床诊断HIT患者6例,两种检测方法分别检测出5例抗体阳性。24例ELISA法检测阳性患者中的19例非HIT患者,应用PaGIA法再次检测仅有3例阳性。结论4 Ts评分系统仍是目前临床诊断HIT的重要依据,联合HIT抗体检测可提高确诊和除外HIT诊断的准确性。PaGIA法检测HIT抗体与临床符合度更高,优于ELISA法。     

应用亲和层析纯抗入Apo(a)及ApoBIgG测定人血浆脂蛋白(a)——夹心ELISA法

利用亲和层析纯抗人 Apo(a) 和 ApoB IgG 在国内首次建立了 Lp(a)测定的夹心 ELISA 方法,此法不受纤溶酶原的干扰,与纤溶酶原、HDL 及 CDL 的交叉反应率均小于0.05%;标准曲线在0.5～0.6 ng/孔范围内呈线性关系,对应于血浆稀释1000倍时 Lp(a)含量5～600 mg/L;最低可测0.3 ng/孔,平均批内和批间变异系数分别为4.2%和7.5%,平均回收为率102%.本法与国外采用Apo(a)单克隆抗体的 Capture ELISA 及 EIA 均有很好的相关性,相关系数 r 分别为0.982(n=50)和0.919(n=60)。用此方法测定208例正常血脂个体.均值为122.17 mg/L (s 为121.63),中位数为90 mg/L.未发现性别差异。     

酶联免疫吸附试验检测人血清抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的性能评估

目的对人血清抗双链DNA(dsDNA)抗体的酶联免疫吸附检测试剂盒Anti-dsDNA-NcX ELISA行实验室检测性能评估及在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的应用评价。方法对Anti-dsDNA-NcX ELISA试剂盒进行实验性能评价;并用间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)两种方法共三种试剂盒,同时检测健康体检正常者30例、非系统性红斑狼疮自身免疫病患者27例及SLE患者92例血清抗dsDNA抗体。以SLE的临床诊断为金标准,评价Anti-dsDNA-NcX ELISA试剂盒用于SLE的诊断性能。结果 Anti-dsDNA-NcX ELISA试剂盒达到了各项实验室检测性能指标,试剂盒的最低检测限为2.7 U/m l,线性相关系数为0.998,批内精密度变异系数(CV)<6%,批间精密度CV<10%,溶血、脂血、黄疸对检测结果没有干扰,与类风湿性关节炎、干燥综合征等非SLE自身免疫病患者血清间不存在交叉反应。健康体检正常者血清抗dsDNA抗体水平P97.5为67.0 U/m。l92例狼疮性肾炎患者,两种ELISA试剂的阳性率(60.9%)均高于IIF(20.6%),差异有统计学意义(P...     

472例患者巨细胞病毒感染的分析

目的 :了解人类巨细胞病毒 (CMV)感染与流产、死 (畸 )胎、肾炎、冠心病、糖尿病和婴儿黄疸的关系。方法 :应用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测 CMV- Ig M抗体 ,对 4 72例患者和 6 0例健康对照者 CMV感染状态进行调查分析。结果 :CMV- Ig M抗体阳性率患者组 17.5 8% (83/472 ) ,对照组 1.6 7% (1/6 0 ) ,两组阳性率比较 ,差异非常显著(χ2 =10 .14 4 ,P<0 .0 1)。结论 :CMV感染与流产、死 (畸 )胎、肾炎、冠心病、糖尿病和婴儿黄疸等疾病的部分患者的发病有关。