肿瘤特异性抗原纳米乳剂的制备及抗肿瘤免疫效应

目的制备包裹基因工程MAGE1HSP70的纳米乳剂,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应。方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1HSP70的纳米乳剂(NEMAGE1HSP70),于电镜下观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性。用NEMAGE1HSP70免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NEMAGE1HSP70激活机体细胞免疫反应的状况。结果成功地制备出粒径为(25±10)nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0091g·L-1,4℃放置6mon后性质稳定。体外释药特性显示有70%的蛋白释放在24h内完成。ELISPOT和LDH显示NEMAGE1HSP70可以激活机体免疫反应产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞。结论NEMAGE1HSP70具有良好的包裹率和载药量,性质稳定且具有缓释作用,可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE1的CTL,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗。     

复合碳酸钙空腔纳米粒的制备及性能评价

目的 制备甘草次酸/海藻酸钠修饰碳酸钙空腔纳米粒并进行性能评价。方法 以可溶性淀粉为模板剂制备中空球状碳酸钙纳米粒（CaCO₃ nanoparticles,CaCO₃ Nps）;在非均相体系中合成了甘草次酸/海藻酸钠聚合物（glycyrrhetinic acid/sodium alginate copolymer,GA-ALG）;并以GA-ALG为壳,以中空结构的CaCO₃ Nps为核,合成了壳核结构的GA-ALG-CaCO₃ Nps。采用Malvern粒度分析仪测定纳米粒子的粒度分布和Zeta电位,并通过SEM对纳米粒的形态进行表征。应用荧光分光光度计评价载盐酸阿霉素（doxorubicin hydrochloride,DOX）纳米粒的载药量、包封率及体外释放特征。结果 GA-ALG-CaCO₃ Nps分布均一,平均粒径为（425.4±31.1）nm,PDI为0.289;Zeta电位为（-17.0±0.3）mV;其载药量为（13.06±0.51）%,包封率为（78.35±3.08）%。体外释放结果显示,纳米粒具有一定的缓释作用。肝靶向研究结果显示DOX/GA-ALG-CaCO₃ Nps的靶向效率为68.2%,远高于DOX对照组24.2%。结论 GA-ALG-CaCO₃ Nps作为新型的药物载体,具有良好的pH响应性,并能显著提高载药量,还具有明显的缓释效果及良好的肝靶向能力。     

叶酸偶联壳聚糖纳米粒的制备

目的制备叶酸偶联的壳聚糖纳米粒。方法根据叶酸与壳聚糖的偶联比选择最佳工艺条件,通过叶酸活性酯与壳聚糖上的氨基反应,制得叶酸偶联的壳聚糖,再通过离子交联法制得叶酸偶联壳聚糖纳米粒,并测定纳米粒的粒径和表面电位。结果正交实验结果显示叶酸活性酯用量和反应温度是影响偶联比的主要因素,在叶酸活性酯与壳聚糖用量比为2∶1,反应温度50℃,反应时间2 h的条件下可得到偶联比大致为每个壳聚糖分子上偶联3个叶酸分子的叶酸偶联壳聚糖。所制得的纳米粒粒径316 nm,表面电位为(24.85±1.14)mV,透射电镜下观察其形态圆整。结论该方法可成功制备叶酸偶联壳聚糖纳米粒。     

克拉霉素固体脂质纳米粒冻干灭菌粉末剂的制备与质量评价

目的以硬脂酸为载体制备克拉霉素固体脂质纳米粒(CLM SLN)冻干灭菌粉末剂，并对其质量进行初步评价。方法采用乳化蒸发 低温固化的方法制备硬脂酸固体脂质纳米粒冻干灭菌粉末；用透射电镜考察CLM SLN的形态；建立高效液相色谱（HPLC）法测定药物含量；在强光和高温下进行加速实验。结果CLM SLN基本成球形，大小比较均匀，平均粒径208.8 nm，平均Zeta电位－28.14 mV，平均含药量为每瓶9.8 mg，平均包封率为87.2％，制剂在强光照射和高温下均较稳定。结论该法可用于克拉霉素固体脂质纳米粒冻干灭菌粉末的制备。     

体外免疫法制备特异性iRNA

体外免疫法制备特异性ｉＲＮＡ０５００２１河北省医学科学院韩彩芝，余素清，傅宏杰，魏丽君免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ），尤其是抗癌特异性ｉＲＮＡ在实验研究中能特异性增强细胞免疫功能［１］，增强ＬＡＫ细胞的杀瘤活性［２］。但现阶段因制备特异性ｉＲＮＡ的细胞来源...     

盐酸小檗碱明胶纳米粒的制备

目的制备盐酸小檗碱明胶纳米粒。方法以明胶为囊材,采用单凝聚法制备盐酸小檗碱明胶纳米粒,并通过单因素实验优化其最佳制备工艺。结果盐酸小檗碱纳米粒最佳制备工艺条件为:明胶质量浓度为10g·L-1,凝聚剂体积分数为81.25%,滴定速度为2mL·min-1,搅拌速度为600r·min-1,投料比(盐酸小檗碱与明胶的质量比)为2∶4,交联剂体积分数为10%。结论该制备工艺简便可行,制得的盐酸小檗碱纳米粒有较明显的缓释效果。     

用DDC预处理肝癌提高阿霉素纳米粒的抗肿瘤效果

目的 通过用DDC（Diethyldithiocarbamate)预先处理耐药肿瘤细胞和荷有Walk-256肝癌模型的大鼠的方法，考察此方法对提高纳米级阿霉素碘油乳剂体内外抗肿瘤作用的可行性。方法 用MTT试验评价阿霉素及其纳米级碘油乳剂对耐药细胞及肿瘤细胞的杀灭作用，用220－250g SD大鼠建立Walk-256肝癌模型，通过肝动脉分别注入生理盐水、阿霉素、纳米级阿霉素碘油乳剂。DDC加纳米级阿霉素碘油乳剂以及DDC加阿霉素脂质体碘油乳剂，分别测定各组的肿瘤生长率和生命延长率。结果 经过DDC预处理后，阿霉素对两种阿霉素耐药肿瘤细胞SGC7901／CVR和SGC790／WT的IC50（μg.mL^-1)分别从原来的18.4降至0.74和从4．0降至0．32。除生理盐水外，各组处理后的肿瘤体积均有所下降，未用DDC处理过各组的平均肿瘤生长率远大于预先用DDC处理过的各组（P＜0．01）。而生命延长率则明显小于预先用DDC处理过的各组（P＜0．05）。结论 通过用DDC预先处理来抑制肿瘤细胞中的SOD可以提高阿霉素的抗肿瘤作用，脂质体和聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒作为阿霉素的释放载体，使阿霉素具有缓释性和一定的组织靶向性，延缓了肿瘤细胞中被DDC抑制的超氧化物，增强肿瘤细胞中自由基的作用，提高了疗效。     

多柔比星壳聚糖纳米粒的制备及其体外评价

目的 制备多柔比星壳聚糖纳米粒,并研究其包封情况和控释能力.方法 采用离子交联法制备多柔比星壳聚糖纳米粒,激光粒度仪测定粒径的分布,HPLC法测定纳米粒的包封率,透析法测定多柔比星壳聚糖纳米粒的体外释放情况.结果 壳聚糖的浓度增加,纳米粒的粒径增加、包封多柔比星的效率也增加;壳聚糖溶液的pH增加,纳米粒的粒径降低而包封多柔比星的效率增加;壳聚糖分子量增加对多柔比星的包封效率影响较小,但粒径增加,多柔比星突释减小,释放速率降低.结论 多柔比星可以通过离子交联法制备壳聚精纳米粒,其粒径、包封率可控,具有缓释效果.     

载基因壳聚糖纳米粒的制备及其特性的研究

目的制备壳聚糖纳米粒,并连接上质粒,研究壳聚糖纳米粒的特性及其对DNA的结合及保护能力。方法采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,并用喷金扫描电子显微镜检测,了解粒径的分布与形态;通过静电吸附作用连接上pGenesil-1质粒(报告基因);经琼脂糖凝胶电泳分析壳聚糖纳米载体与质粒DNA的结合能力,及不同pH值的壳聚糖纳米粒对质粒DNA的结合能力;并通过DnaseⅠ消化壳聚糖纳米-质粒结合物以观察壳聚糖纳米载体对质粒的保护作用。结果喷金扫描电镜检测证实壳聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒,平均直径为5nm;琼脂糖凝胶电泳的结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合载体pGenesil-1质粒;不同pH值的壳聚糖纳米粒对质粒的保护作用不同,当pH值<7时壳聚糖纳米载体能100%结合质粒;DnaseⅠ消化试验证实壳聚糖纳米载体对质粒DNA有保护作用。结论采用离子交联法制备出粒径较小、均匀的壳聚糖纳米粒,并且壳聚糖纳米粒能有效地连接上质粒并对其有保护作用。     

载阿霉素金纳米粒的制备和细胞毒性研究

目的 构建载阿霉素（DOX）的甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰的金纳米粒AuNPs-mPEG@DOX，以降低DOX的毒副作用。方法 制备AuNPs-mPEG@DOX，通过粒径、电位和紫外可见光吸收光谱（UV-Vis）进行表征。考察连接巯基的DOX（HS-DOX）投药浓度对AuNPs-mPEG@DOX吸附率和载药量的影响。建立未吸附HS-DOX含量测定的高效液相色谱法（HPLC），对专属性、线性、精密度、稳定性和加样回收率进行考察。采用CCK-8法检测AuNPs-mPEG@DOX对MCF-10A和MCF-7细胞的毒性作用。结果 成功制备了AuNPs-mPEG@DOX，粒径为（46.12±0.49） nm，电位为（18.60±1.51） mV，最大吸收波长为530 nm。建立了可用于检测AuNPs-mPEG@DOX未吸附HS-DOX含量的HPLC方法，测定最佳投药浓度11.18 μg/ml，HS-DOX条件下的吸附率为（9.21±2.88）%，载药量为（2.01±0.62）%。细胞毒性实验表明AuNPs-mPEG@DOX可明显降低DOX对正常乳腺细胞的毒副作用；DOX在≥4.75 μmol/L时，AuNPs-mPEG@DOX与游离DOX对乳腺肿瘤细胞的细胞毒性作用一致。结论 AuNPs-mPEG@DOX可有效降低DOX的毒副作用，为后续AuNPs连接药物降低其毒副作用的研究提供参考。     

高乌甲素纳米粒的制备及其在大鼠体内药动学

目的:制备可持续释放且能治疗疼痛的载高乌甲素(LA)的聚乳酸(PLA)纳米粒,并考察其体外释药情况和在大鼠体内的药动学特性。方法:采用O/W乳化-溶剂挥发法制备载高乌甲素的聚乳酸纳米粒(LA/PLA NPs),运用激光粒度仪测定其粒径,原子力显微镜观察其形貌,动态透析法考察其体外释药特性,反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定血药浓度,PKSolver程序处理药-时数据,并以LA为参比进行大鼠腹腔注射的药动学研究。结果:LA/PLA NPs外观呈圆形或类圆形,大小均匀,平均粒径(429±9.19)nm,包封率(86.34±2.15)%、载药量(45.85±1.34)%,体外可持续缓慢释放15 d,体内可释药8 d以上,其主要药动学参数为:t_1/2=(103.16±21.57)h,t_max=(3.6±1.34) h,C_max=(3.50±0.69)μg·mL^-1,AUC_(0-t)=(455.14±26.18) μg·mL^-1·h。结论:LA/PLA NPs制备工艺简单,重复性好,体内药-时过程符合非房室模型,具有良好的缓释效果。     

纳米粒子对免疫系统影响的研究进展

随着纳米技术及纳米材料的不断发展和完善,纳米粒子因其独特的结构和理化性质使其在一些疑难疾病的治疗上取得了明显进展。但纳米粒子作为异物进入机体,会引起一系列机体反应,影响固有免疫细胞的活性,促进免疫系统免疫分子的分泌,而且纳米粒子对抗原递呈细胞具有活化作用,可促进其对抗原的递呈,还可诱导激活抗原特异性CD8+T细胞免疫应答,从而介导抗原特异性细胞毒效应。此外,纳米粒子可增强体液免疫应答,并导致严重的炎症反应。     

高载药量和厚朴酚纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究

目的 研究一种高载药量和厚朴酚纳米粒, 评价其对小鼠肝癌H22移植瘤的生长抑制作用。方法 用牛血清白蛋白(BSA)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为辅料, 采用超声-沉淀法制备和厚朴酚纳米粒。建立H22肝癌皮下小鼠肿瘤模型, 以环磷酰胺注射液(CTX)为阳性对照, 考查ip给药后其对肿瘤的抑制作用。结果 和厚朴酚纳米粒呈球形, 平均粒径为(116.5±1.3)nm, 多分散指数(PDI)为0.116±0.001, 体外溶出较原料药大幅度提升。在H22荷瘤小鼠体内, 和厚朴酚纳米粒显示出剂量相关的抑瘤作用, 低、中、高剂量(10、20、40 mg/kg)组抑瘤率分别为52.57%、66.33%和71.24%。结论 和厚朴酚纳米粒对肿瘤有明显的抑制作用。     

Magnetically triggered drug release from nanoparticles and its applications in anti-tumor treatment

The objective of this study was to describe the magnetic nanoparticle–drug conjugates for improved control of drug delivery and drug release. The widely used anticancer agent Doxorubicin (DOX) was successfully conjugated via amine groups to the carboxylic functional groups coating magnetic nanoparticles (fluidMAG-CMX). Following purification of the nanoparticles, the conjugation of DOX on fluidMAG-CMX was confirmed using FTIR spectroscopy and confocal microscopy. The observed drug loading capacity of DOX was 22.3%. Studies of magnetically triggered release were performed under an oscillating magnetic field (OMF). DOX exhibited a significant release percentage of 70% under an OMF, as compared with the release in enzyme. A magnetic field turn-on and turn-off experiment was also conducted to confirm the control of drug release using this triggered system. In vivo experiments indicated that the tumor-inhibitory rate of CMX–DOX NPs under a magnetic field was higher than the other control groups. According to the toxicity assessments, CMX–DOX NPs were not noticeably toxic to mice at our tested dose.     

人血浆蛋白多烯紫杉醇纳米粒子的自组装及对肿瘤的靶向性

目的：提高多烯紫杉醇的溶解度,提高其靶向性能。方法用二硫键断裂法制备人血清白蛋白多烯紫杉醇纳米粒子,并用电镜进行观察。对粒子载药量、稳定性及粒子对肿瘤部位趋向性进行表征。结果二硫键断裂法成功组装了白蛋白?多烯紫杉醇纳米粒子。电镜观察该纳米粒子外貌为80～100 nm左右的球形粒子,高效液相和蛋白质定量检测多烯紫杉醇载药量可达21．5％。结果白蛋白多烯紫杉醇纳米制剂可显著提高多烯紫杉醇的溶解度,提高对肿瘤靶向性。结论白蛋白?多烯紫杉醇纳米粒子对肿瘤细胞具有良好的靶向作用,具有临床运用的潜在价值。     

壳聚糖纳米载体提高抗乙肝免疫核糖核酸免疫活性的研究

目的:通过制备抗乙肝免疫核糖核酸(iRNA)的壳聚糖纳米载体,提高其免疫活性.方法:复凝聚方法制备壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒,扫描电镜、原子力显微镜、Zeta电位/粒度分析仪观察测定壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒形态、粒径和表面电位;核糖核酸酶(RNase)保护试验观察壳聚糖对包裹的iRNA的保护作用;白细胞黏附抑制(LAI)试验测定壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒免疫活性.结果:壳聚糖与iRNA形成表面带正电荷的纳米粒,iRNA未被RNase的降解,白细胞黏附抑制率增高.结论:壳聚糖纳米载体提高了抗乙肝免疫核糖核酸的免疫活性.     

The responses of immune cells to iron oxide nanoparticles

Immune cells play an important role in recognizing and removing foreign objects, such as nanoparticles. Among various parameters, surface coatings of nanoparticles are the first contact with biological system, which critically affect nanoparticle interactions. Here, surface coating effects on nanoparticle cellular uptake, toxicity and ability to trigger immune response were evaluated on a human monocyte cell line using iron oxide nanoparticles. The cells were treated with nanoparticles of three types of coatings (negatively charged polyacrylic acid, positively charged polyethylenimine and neutral polyethylene glycol). The cells were treated at various nanoparticle concentrations (5, 10, 20, 30, 50 μg ml^?1 or 2, 4, 8, 12, 20 μg cm^?2) with 6 h incubation or treated at a nanoparticle concentration of 50 μg ml^?1 (20 μg cm^?2) at different incubation times (6, 12, 24, 48 or 72 h). Cell viability over 80% was observed for all nanoparticle treatment experiments, regardless of surface coatings, nanoparticle concentrations and incubation times. The much lower cell viability for cells treated with free ligands (e.g. ~10% for polyethylenimine) suggested that the surface coatings were tightly attached to the nanoparticle surfaces. The immune responses of cells to nanoparticles were evaluated by quantifying the expression of toll‐like receptor 2 and tumor necrosis factor‐α. The expression of tumor necrosis factor‐α and toll‐like receptor 2 were not significant in any case of the surface coatings, nanoparticle concentrations and incubation times. These results provide useful information to select nanoparticle surface coatings for biological and biomedical applications. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

Preparation of folate-modified pullulan acetate nanoparticles for tumor-targeted drug delivery

The purpose of this work was to develop a novel nano-carrier with targeting property to tumor. In this study, pullulan acetate (PA) was synthesized by the acetylation of pullulan to simplify the preparation technique of nanoparticles. Folic acid (FA) was conjugated to PA in order to improve the cancer-targeting activity. The products were characterized by proton nuclear magnetic resonance (¹H NMR) spectroscopy. Epirubicin-loaded nanoparticles were prepared by a solvent diffusion method. The loading efficiencies and EPI content increased with the amount of triethylamine (TEA) increasing in some degree. FPA nanoparticles could incorporate more epirubicin than PA nanoparticles. The folate-modified PA nanoparticles (FPA/EPI NPs) exhibited faster drug release than PA nanoparticles (PA/EPI NPs) in vitro. Confocal image analysis and flow cytometry test revealed that FPA/EPI NPs exhibited a greater extent of cellular uptake than PA/EPI NPs against KB cells over-expressing folate receptors on the surface. FPA/EPI NPs also showed higher cytotoxicity than PA/EPI NPs. The cytotoxic effect of FPA/EPI NPs to KB cells was inhibited by an excess amount of folic acid, suggesting that the binding and/or uptake were mediated by the folate receptor.     

吡喹酮聚乳酸纳米粒制备工艺研究

目的探讨改良的自乳化溶剂扩散法制备吡喹酮聚乳酸纳米粒的最佳工艺。方法以包封率为指标，采用正交设计，考察聚乳酸和吡喹酮原料药药物的投料比、PVA浓度、有机相与水相体积比和搅拌速度等影响因素，筛选出比较理想的制备工艺。结果最佳工作条件为：聚乳酸与吡喹酮药物的投料比10：1，水相和有机相比为10：1，PVA浓度选择0．5％，搅拌速度600r·min^-1。所得纳米粒包封率为（46．74％±0．47％），收率为（49．30％±1．85％）。结论改良的自乳化溶剂扩散法可用于吡喹酮纳米粒的制备。