米诺环素和TrkB/Fc对神经病理性疼痛发生期大鼠脊髓背角脑源性神经营养因子表达的影响

目的 观察鞘内注射小胶质细胞抑制剂米诺环素、脑源性神经营养因子(BDNF)拮抗剂TrkB/Fc对大鼠神经病理性疼痛发生期脊髓背角BDNF表达的影响,探讨BDNF在神经病理性疼痛发生中的作用机制.方法 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠42只,行鞘内置管,建立L5神经根结扎(SNL)致神经病理性疼痛模型,仅切开皮肤及皮下组织暴露L5神经根者为假手术.根据手术类型及注射药物的不同分为7组,每组6只:I组,对照基础值组,鞘内置管成功大鼠,不用任何药物;Ⅱ组,鞘内注射1 g/L TrkB/Fc 10μL+SNL组,观察TrkB/Fc对SNL大鼠的作用;Ⅲ组,鞘内注射l g/L TrkB/Fc 10μL+假手术组,观察TrkB/Fc对假手术大鼠的作用;Ⅳ组,鞘内注射磷酸盐缓冲液(PBS)10μL+SNL组,使用溶剂PBS作为对照组,观察溶剂对SNL大鼠的作用;V组,鞘内注射PBS 10 rμL+假手术组,观察溶剂对假手术大鼠的作用;Ⅵ组,鞘内注射8 g/L米诺环素10μL+SNL组,观察米诺环素对SNL大鼠的作用;Ⅶ组,鞘内注射8 g/L米诺环素10 pL+假手术组,观察米诺环素对假手术大鼠的作用.分别于术前1 h、末次给药前1 h用von Frey纤维丝以up-down法测大鼠的50%机械缩爪阈值(50%PWT).末次给药后3 h取手术侧腰膨大段脊髓背角,采用Western印迹法测定BDNF.结果 末次给药前1 h,Ⅳ组的50%PWT较术前1 h明显降低(P＜0.01),其余各组的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).末次给药后3 h,Ⅳ组术侧脊髓背角BDNF的表达显著高于其余各组(P值均＜0.01),而其余各组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 小胶质细胞抑制剂米诺环素、BDNF拮抗剂TrkB/Fc均能有效抑制神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏的发生,疼痛发生期脊髓背角BDNF的表达增高可能与小胶质细胞的活化相关.     

BDNF对脊神经根结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化的影响

目的观测脊神经根结扎(SNL)大鼠脊髓背角中脑源性神经营养因子(BDNF)与星形胶质细胞活化标记蛋白胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)表达的变化,以及BDNF清除剂TrkB/Fc对GFAP表达和疼痛的影响。方法取18只SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组和SNL组(n=6)。分别于术前、术后第1～6天测定大鼠50%机械缩爪阈值(50%PWT),末次测定后取腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP和BDNF的表达。另取18只SD大鼠,随机分为对照组、SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组(n=6),其中对照组仅行鞘内置管术;SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组分别在行SNL术前,予鞘内注入PBS或TrkB/Fc 10μL,术后1次/d×6 d,每次注药前1 h测定50%PWT,末次给药后1 h取大鼠腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP的表达。结果术后第1～6天,SNL组手术同侧后肢50%PWT均较术前基础值显著下降(P<0.01);术后第6天,SNL组手术同侧脊髓背角BDNF和GFAP表达均较空白对照组显著升高(P<0.01);SNL+TrkB/Fc组大鼠手术同侧50%PWT与基础值比较无明显变化(P>0.05),手术同侧脊髓背角GFAP表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BDNF活化的脊髓星形胶质细胞对SNL诱发的神经病理性疼痛具有调控作用。     

鞘内注射布托啡诺对SNI模型大鼠脊髓背角NMDAR表达的影响

目的 采用免疫组织化学方法 ,观察鞘内注射布托啡诺时SNI模型大鼠痛阈及脊髓背角NMDAR表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠20只,随机分为4组:假手术组(C组,n=5)、生理盐水组(NS组,n=5)、布托啡诺12μg组(B1组,n=5)、布托啡诺24μg组(B2组,n=5).根据改良Yaksh法进行鞘内置管.置管5 d后,C组不结扎神经.其他3组按Woolf等方法 建立神经病理性疼痛模型(SNI),制模2 d后,C组和NS组用25μL微量注射器鞘内注射20μL生理盐水,B1、B2组则分别用微量注射器鞘内注射10μL布托啡诺12和24μg,然后用10μL生理盐水冲管(共20μL).在3 0 min后,行疼痛行为学观察.注药后2 h处死大鼠,用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角NMDAR的表达.结果 NMDAR1主要分布于细胞膜及胞浆.显微镜下及免疫组化观察,NS组大鼠脊髓背角NMDAR免疫阳性细胞数密度与C组比较明显增加:B1组和B2组的阳性细胞数量与NS组比较阳性细胞数量减少,并且两者之间差异也有显著性(P＜0.05);NS组,B1组和B2组的阳性细胞光密度值较C组增高(P＜0.05).结论 鞘内注射24μg布托啡诺可减轻SNI模型大鼠痛觉过敏,且呈剂量依赖性;SNI模型引起大鼠脊髓背角神经元NMDAR表达上调;鞘内注射布托啡诺可降低SNI大鼠脊髓背角神经元NMDAR表达上调.     

脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶对神经痛大鼠热痛觉过敏影响的研究

目的:观察脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的激活对神经病理性疼痛大鼠热痛觉过敏的影响,探讨神经痛的机制。方法:40只雄性SD大鼠,建立坐骨神经结扎性损伤(CCI)疼痛模型,随机分成五组,对照组、SB 0.1μg组、SB0.5μg组、SB2.5μg组和SB5μg组,(n=8),CCI后7 d,鞘内注射5%二甲基亚砜或不同剂量的p38 MAPK抑制剂SB203580(0.1μg、0.5μg、2.5μg、5μg)10μL,在给药前和给药后0.5 h、3 h、6 h、12 h、24 h,用热辐射刺激仪测定大鼠术侧后爪热缩足反射潜伏期(TWL)。另24只大鼠随机分为假手术组、CCI组、溶媒对照组和SB203580组(n=6),分别于假手术后7d、CCI后7 d、CCI后7 d鞘内注射5%二甲基亚砜后第6 h或SB203580 5μg后第6 h取材脊髓,用免疫组织化学方法观察脊髓背角磷酸化p38 MAPK表达的变化。结果:鞘内注射SB203580剂量依赖性地延长了TWL(P<0.05或P<0.01),SB203580同时抑制脊髓背角磷酸化p38 MAPK的表达。结论:脊髓p38 MAPK的激活参与了CCI...     

脊髓背角P2X4、P2Y12和P2Y13受体参与AM1241对CCI大鼠的镇痛效应

目的 观察鞘内注射大麻素CB2受体激动剂AM1241对慢性坐骨神经结扎(CCI)大鼠机械痛阈、脊髓背角P2X4P2Y12和P2Y13受体表达变化的影响.方法 健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为5组(n=8):假手术组、CCI组(坐骨神经结扎+鞘内注射0.005％ DMSO生理盐水)、1 pmol/LAM1241处理组(坐骨神经结扎+鞘内注射AM1241 1pmol/L) 、10 pmol/LAM1241处理组(坐骨神经结扎+鞘内注射AM1241 10 pmol/L)、100 pmol/LAM1241处理组(坐骨神经结扎+鞘内注射AM1241 100 pmol/L).CCI组及不同浓度AM1241处理组大鼠均于鞘内置管7d之后行坐骨神经结扎,连续14 d鞘内注射,每天2次;分别在术前1d,术后第1、3、5、7、10、14天注射1h后测定机械痛阈(MWT),分别在术后第7,14天免疫印迹法(western blot)观察脊髓背角P2X4、P2Y12和P2Y13受体表达变化.结果 ①CCI组术后第1、3、5、7、10、14天MWT显著低于假手术组(P＜0.05),10 pmol/L AM1241和100 pmol/L AM1241处理组术后第1、3、5、7天MWT明显高于CCI组(P＜0.01);但10 pmol/L AM1241处理组术后第10、14天MWT与CCI组相比无明显差异(P＞0.05);100 pmol/LAM1241处理组术后第10、14天MWT仍高于CCI组(P＜0.05);②与假手术组相比,CCI组术后第7、14天脊髓背角P2X4、P2Y12和P2Y13受体表达显著上调(P＜0.01);与CCI组相比,100 mol/L AM1241处理组在术后第7天抑制脊髓背角P2Y12和P2Y13受体表达(P＜0.05),在术后第14天抑制背角P2X4受体表达(P＜0.05).结论 大麻素CB2受体激动剂AM1241的镇痛效应可能与抑制脊髓背角小胶质细胞P2X4、P2Y12和P2Y13受体表达有关.     

鞘内注射补体调节蛋白衰变加速因子对大鼠神经病理性疼痛的影响

目的 观察鞘内注射补体调节蛋白衰变加速因子（decay accelerating factor,DAF）对大鼠神经病理性疼痛（neuropathic pain,NPP）的影响,探索其在NPP发病机制中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体质量200～250g,选取鞘内置管成功的大鼠30只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组（n=10）,即假手术组、CCI组和DAF组.后2组采用慢性坐骨神经损伤法制作动物模型,假手术组分离大鼠坐骨神经干后逐层缝合.DAF组于术前1d开始鞘内注射DAF溶液20μL,1次/d,连续7d,假手术组和CCI组在相同时间点鞘内注射等容量生理盐水.于术前,术后1、3、7d,用热刺激和机械刺激法测定大鼠的痛阈值变化.术后7d处死大鼠,取L4～6段脊髓背角,用Western-Blot测定其DAF蛋白含量.结果 与假手术组相比,CCI组和DAF组大鼠术后1、3、7d热痛阈值和机械痛阈值降低（P＜0.05）;与CCI组相比,DAF组大鼠术后3、7d热痛阈值和机械痛阈值升高（P＜0.05）.Western-Blot 检测显示,CCI组大鼠脊髓背角DAF表达显著低于假手术组（P＜0.05）;与CCI组相比,DAF组大鼠脊髓背角DAF表达上调（P ＜0.05）.结论 鞘内注射DAF可抑制大鼠NPP的痛觉过敏,脊髓背角DAF的表达变化与NPP形成有关.     

鞘内注射p38 MAPK抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角脑源性神经营养因子表达的影响

目的 观察鞘内注射p38 MAPK抑制剂SB203580对坐骨神经压缩性损伤(CCI)神经病理性疼痛大鼠的镇痛效果及脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达,探讨大鼠神经病理性疼痛可能的发生机制。 方法 30只SD雄性大鼠随机分为3组(n=10):假手术组、对照组(CCI组)、SB203580组(CCI术前30 min及术后第1~3天鞘内注射SB203580,剂量为0.1 ml/kg)。于CCI术前2 h以及术后第4~14天测定大鼠右足机械痛阈值;术后第14天取损伤侧腰段脊髓,采用免疫组化方法观察脊髓背角p38 MAPK及BDNF的表达。结果 与术前相比,假手术组术后机械痛阈值差异无统计学意义,对照组、SB203580组在CCI术后机械痛阈值明显降低(P<0.05);与假手术组相比,CCI术后,对照组、SB203580组机械痛阈值明显降低(P<0.05);与对照组相比,CCI术后第4~14天SB203580组机械痛阈值明显升高(P<0.05)。与假手术组相比,对照组、SB203580组脊髓背角p38 MAPK表达及BDNF释放明显增加(P<0.05);与对照组相比,SB203580组损伤侧脊髓背角p38 MAPK表达及BDNF释放明显降低(P<0.05)。结论 鞘内注射p38 MAPK抑制剂可能通过降低损伤侧脊髓背角p38 MAPK表达,抑制BDNF释放,从而缓解CCI大鼠慢性神经病理性疼痛。     

米诺环素、氟代柠檬酸和B型酪氨酸激酶受体/Fc对维持期神经病理性疼痛大鼠脊髓背角脑源性神经营养因子表达的影响

目的:研究鞘内注射小胶质细胞抑制剂米诺环素、星形胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸及脑源性神经营养因子(BDNF)清除剂B型酪氨酸激酶受体(TrkB)/Fc对神经病理性疼痛维持期大鼠的脊髓背角BDNF表达的影响,探讨BDNF在神经病理性疼痛维持期中的作用.方法:取36只成功鞘内置管大鼠,随机分为6组,每组6只:Ⅰ组为对照组,未行神经根结扎(SNL)术,未给药;Ⅱ组为SNL组;Ⅲ组为SNL+磷酸盐缓冲液组;Ⅳ组为SNL+米诺环素组,Ⅴ组为SNL+氟代柠檬酸组;Ⅵ组为SNL+TrkB/ Fc组.各组均于SNL术后7d鞘内给药,每日1次,连续5d.分别于SNL术前1h、首次给药前1h及末次给药前1h测定大鼠的50%机械缩爪阈值(50%PWT),并于末次给药后3h采用Western印迹法测定手术同侧脊髓背角的BDNF表达水平.结果:除Ⅰ组外,其他各组大鼠在SNL术后第7天的50%PWT均较术前1h显著降低(P值均<0.01).连续用药5d后,Ⅴ、Ⅵ组的50%PWT均较术后第7天显著升高(P值均<0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组维持期给药后脊髓背角BDNF表达水平显著高于Ⅰ组(P值均<0.01),Ⅴ、Ⅵ组显著低于Ⅱ组(P值均<0.01),结论:星形胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸能显著抑制神经病理性疼痛维持期大鼠脊髓背角BDNF的过表达,进而缓解神经病理性疼痛,而小胶质细胞抑制剂米诺环素对维持期神经病理性疼痛大鼠的作用甚小.BDNF对神经病理性疼痛大鼠机械痛觉过敏的维持起重要作用,其机制可能与星形胶质细胞的活化有关.     

缝隙连接蛋白pannexin1在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角的表达变化

目的 观察缝隙连接蛋白pannexin1(PX1)在坐骨神经分支选择结扎模型大鼠脊髓背角上的表达变化.方法 健康SD雄性大鼠50只 ,分为对照组(WT组 ,n=10)、假手术组(sham组 ,n=10)和坐骨神经分支选择性损伤组(SNI组 ,n=30).SNI组20只大鼠于术后3、5、7、14 d(n=5) ,WT、sham组于术后14 d(n=5)取脊髓腰段用Western blot法检测PX1表达变化 ,另20只大鼠于术后7 d取脊髓腰段进行免疫组化染色 ,检测脊髓背角内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平.SNI组中10只于建模前进行鞘内置管 ,术后7 d分别向鞘内注射生理盐水20 μL(SNI+NS组)或甘珀酸(CBX)20 μL(SNI+CBX组) ,再进行免疫组化染色.结果 SNI组脊髓背角内PX1表达增多 ,并随时间增强 ,明显高于WT、sham组(P＜0 .05);7 d后SNI组脊髓背角内GFAP表达较WT、sham组明显增强(P＜0 .05);SNI+CBX组GFAP表达较SNI+ NS组明显下调(P＜0 .05).WT、sham组脊髓背角的PX1蛋白和GFAP表达差异无统计学意义(P＞0 .05).结论 缝隙连接蛋白PX1可能参与了星形胶质细胞的激活 ,提示其在因外周神经损伤引起的神经病理性痛中起重要作用.     

活性氧参与神经病理性疼痛大鼠脊髓背角神经元凋亡信号转导过程

目的 观察神经病理性疼痛大鼠模型鞘内注射自由基清除剂后脊髓背角神经元细胞自由基水平和凋亡情况的变化.方法 20只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为苯亚甲基叔丁基氮氧化物(PBN)处理组和0.9%氯化钠溶液(NS)对照组,大鼠进行鞘内置管和脊神经结扎,术后每隔24 h分别注射PBN和0.9%氯化钠溶液.另选5只大鼠作脊神经结扎的假手术,不进行鞘内置管,不给药.所有大鼠每天测量机械性痛阈,至术后第12天结束.结果 NS对照组大鼠脊神经结扎后机械性痛阈迅速下降,PBN处理组大鼠脊神经结扎后机械性痛阈下降缓慢,整个测定期间PBN处理组的机械性痛阈均显著高于NS对照组(P值均<0.01).假手术组大鼠的L4～L5脊髓背角细胞内8-羟基-鸟嘌呤(8-OH-G)的水平较低;NS对照组大鼠的L4～L5脊髓患侧背角细胞内8-OH-G的水平明显升高;PBN处理组大鼠的L4～L5脊髓患侧背角细胞内8-OH-G水平升高,但显著低于NS对照组(P<0.05).假手术组大鼠的L4～L5脊髓背角细胞内浓染的Hoechest的水平低;NS对照组大鼠的L4～L5脊髓患侧背角细胞内浓染的Hoechest的水平明显升高;PBN处理组大鼠的L4～L5脊髓患侧背角细胞内浓染的Hoechest的水平升高,但显著低于NS处理组(P<0.05).结论 脊神经结扎后脊髓背角神经元细胞内活性氧(ROS)水平增加,凋亡的神经元数目增多,用PBN鞘内注射可以减少神经元凋亡的数量,并缓解神经病理性疼痛.ROS促进脊髓背角神经元凋亡的过程,介导了神经病理性疼痛.     

鞘内注射新斯的明和吗啡对大鼠脊髓背角c-fos表达的影响

目的 研究鞘内注射新斯的明和吗啡对大鼠脊髓背角c-fos表达的影响。方法 在大鼠切口疼痛模型上结合鞘内置管技术,采用累积疼痛评分法评定大鼠疼痛行为,运用免疫组织化学法观察术前或术后鞘内注射新斯的明和吗啡对脊髓背角c-fos表达的影响。结果 手术组大鼠累积疼痛评分明显高于假手术组,术前或术后鞘内注射新斯的明及吗啡均可明显降低手术切口引起的累积疼痛评分升高,各用药组间无明显差别。手术组大鼠脊髓背角Fos-LI神经元明显多于假手术组(P<0.01)。术前或术后鞘内注射吗啡、新斯的明和吗啡分别可使切口疼痛引起的Fos-LI减少69％和48％,76％和55％,术前和术后两用药组间比较差异亦有统计学意义。新斯的明两用药组的Fos-LI表达均未见明显减少(P>0.05)。结论 鞘内注射新斯的明和吗啡可减少术后疼痛大鼠脊髓背角c-fos的表达,尤以术前用药为甚。     

鞘内注射地塞米松对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽和P物质表达的影响

目的 探讨鞘内注射地塞米松对神经病理性痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)含量的影响.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠48只,体重200～250 g,随机分为4组:假手术+0.9%氯化钠溶液组(sham组)、坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)+0.9%氯化钠溶液组(C组),CCI+地塞米松早期治疗组(ET组),CCI+地塞米松晚期治疗组(LT组).每组分别于术后第1天和鞘内注射后第1天处死6只大鼠,取脊髓组织,采用免疫组织化学法测定CGRP和SP含量.大鼠均于术前1 d(基础值)、术后1 d及鞘内给药后1 d测定机械刺激缩足反应阈值(PWMT).结果 鞘内给药后1 d,ET和LT组PWMT均较术后1 d显著升高(P值均＞0.05),且均显著高于C组(P值均＜0.05);ET和LT组术侧脊髓背角SP及CGRP含量均较术后1 d显著降低(P值均＜0.05),且均显著低于C组(P值均＜0.05),而C组和sham组与术后1 d的差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 鞘内注射地塞米松可能通过降低脊髓背角SP及CGRP含量减轻神经病理性痛大鼠的机械痛过敏.     

鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛大鼠的镇痛作用

目的通过观察鞘内注射氟代柠檬酸（FC）对骨癌痛大鼠机械性痛敏的影响,探讨脊髓胶质细胞在骨癌痛中的作用。方法 （1）20只大鼠分为假手术组和骨癌痛组两组,骨癌痛组分别在注射Walker256细胞后第7、14、21天各处死5只大鼠取腰段脊髓,假手术组术后第7天取腰段L4～L5脊髓,分别测定两组星形胶质细胞标志物胶原纤维酸性蛋白（GFAP）和小胶质细胞标志物补体受体-3单克隆抗体（OX-42）的表达。（2）12只骨癌痛模型大鼠,成功建模置管后第14天随机分为PBS组和FC组两组,鞘内分别注射PBS、FC1nmol（10μl）,在给药前后测定大鼠机械性缩足反射阈值（PWMT）。结果 （1）骨癌痛组与假手术组比较,大鼠脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞活化明显,平均吸光度值较假手术组显著增加（P〈0.01）。（2）FC组大鼠鞘内注射FC1 nmol后,PWMT较PBS组和给药前显著升高（P〈0.01）。结论脊髓胶质细胞的激活参与了骨癌痛疼痛信息处理过程。     

鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体和降钙素基因相关肽表达的影响

目的:观察鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:将54只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=9):舒芬太尼组[S+保留神经损伤(spared nerve injury model,SNI)组]、舒芬太尼+PKC抑制剂组(SP+SNI组)和PKC抑制剂组(P+SNI组)在SNI模型制作后14 d内每天分别鞘内注射舒芬太尼1μg、舒芬太尼1μg+PKC抑制剂11μg、PKC抑制剂11μg,注射药物容量均为20μL。对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理痛模型组(SNI组)则在上述相同时间点分别注入0.9%的生理盐水20μL。在模型制作前1 d和模型制作后14 d内,对各组大鼠进行疼痛行为学观察,并用免疫组织化学法观察各组大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达。结果:与C组和S组比较,SNI组在SNI术后均出现机械刺激痛阈降低(P<0.01),且脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加(P<0.01)。与SNI组比较,S+SNI组、P+SNI组和SP+SNI组注药后机械刺激痛阈提高(P<0.01),脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物表达降低(P<0.05或0.01),且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,同时可显著抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。     

鞘内注射可乐定对神经病理性疼痛大鼠背根神经节内交感神经芽生的影响

目的观察鞘内注射可乐定对神经病理性疼痛(NPP)大鼠痛阈及对背根神经节(DRG)内篮状结构数量的影响.方法通过左侧L5脊神经结扎(SNL)建立NPP模型.32只雄性Sprague-Dawley大鼠鞘内留置给药导管后随机分为4组:假手术伍用0.9%氯化钠溶液组(S组),假手术伍用可乐定组(SC组),SNL伍用0.9%氯化钠溶液组(L组),SNL伍用可乐定组(LC组).术前测量大鼠机械性痛阈[50%缩爪阈值(50%PWT)]基础值;术后7 d内,每天鞘内注射可乐定或0.9%氯化钠溶液,1 h后测量各组大鼠的50%PWT.术后第8天,取各组大鼠左侧L5、L4及右侧L5 DRG,通过免疫组织化学法观察DRG内篮状结构数量的变化.结果术后1～7 d,L组大鼠的50%PWT均显著低于S组同时间(P值均<0.05),LC组大鼠的50%PWT均显著高于L组同时间(P值均<0.05),SC组与S组间大鼠的50%PWT的差异均无统计学意义(P值均>0.05).术后第8天,与S组比较,L组术侧L5、L4DRG内篮状结构的数量显著增多(P值均<0.05),对侧L5 DRG内篮状结构的数量略有增加,但差异无统计学意义(P>0.05);与L组比较,LC组术侧L5、L4 DRG内篮状结构的数量显著减少(P值均<0.05);SC组与S组间术侧L5、L4及对侧L5 DRG内篮状结构的数量的差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论可乐定可能通过减少DRG内交感神经节后纤维芽生而发挥其对NPP的镇痛作用.     

鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C表达的影响

目的观察甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C(PKC)的表达,以及鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠脊髓背角PKC表达的影响。方法 32只SD大鼠采用改良Yaksh法进行鞘内置管,随机分为4组(每组8只):对照组(C组)、鞘内注射生理盐水组(NS组)、氯胺酮50μg组(K1组)和氯胺酮100μg组(K2组)。NS、K1、K2组于置管5 d后,复制甲醛炎性疼痛模型。采用疼痛加权评分法(PIS)评估大鼠甲醛致痛后1 h内的疼痛行为,24 h后测量致痛足厚度并用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角PKC的表达。结果与NS组比较,K1组和K2组在甲醛炎性痛第二时相的PIS值明显降低(P<0.01);致痛24 h后,NS组大鼠致痛足厚度与对照组比较明显增加,而K1、K2组致痛足厚度与NS组比较则明显减少(P<0.05);NS组大鼠脊髓背角PKC免疫反应阳性细胞数量及免疫组化评分均较C组明显增加(P<0.01),而K1、K2组则明显低于NS组(P<0.05)。结论鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠具有明显的抗伤害作用;鞘内注射氯胺酮可明显抑制甲醛炎性痛引起的脊髓背角PKC表达的增加,PKC在脊髓水平伤害性信息的传递和调节中可能发挥重要作用。     

艾司洛尔对福尔马林炎性大鼠脊髓背角pERK表达的影响

目的:探讨鞘内注射艾司洛尔对福尔马林炎性大鼠脊髓背角pERK蛋白表达的影响。方法:36只SD大鼠鞘内置管后,采用随机数字表法分为生理盐水组(N组)、艾司洛尔注射液400μg/kg组(S1组)、艾司洛尔注射液800μg/kg组(S2组),各12只。鞘内置管5 d后,各组注射以上药物,然后在大鼠后肢皮下注射福尔马林50μL,以Vonfrey及Hargreaves法测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL),观察大鼠的疼痛行为学变化。观察1.5 h后,采用免疫组织化学方法检测脊髓背角pERK蛋白表达。结果:与N组相比,S1、S2组的Ⅱ相阶段的疼痛行为均有减少,且S1、S2组L4~5节段脊髓表达的pERK蛋白表达均比N组少(P0.01)。结论:鞘内注射艾司洛尔可减少福尔马林大鼠脊髓背角pERK蛋白表达。     

Endoglin重组蛋白对SNI大鼠的镇痛作用及机制研究

目的 观察鞘内注射内皮糖蛋白（Endoglin）重组蛋白对选择性坐骨神经损伤（SNI）大鼠疼痛、脊髓背角小胶质细胞活化和促炎因子表达的影响。方法 将66只成年雄性SD大鼠随机分为三组：假手术组（Sham组）、SNI模型组（SNI组）和干预组（ENG组）,每组22只,并预先进行鞘内置管。随后,SNI组大鼠构建SNI模型,并间断鞘内给予生理盐水20μL;ENG组在SNI模型的基础上给予20μL Endoglin重组蛋白（2μg/mL）;Sham组则仅做SNI的伤口对照,不损伤神经,并且给予等量生理盐水。于SNI术前1 d,术后3、7、14 d采用Von Frey纤维丝测定机械缩足阈值（PWT）;免疫荧光染色观察术后14 d时脊髓背角小胶质细胞的激活;同时,Western blot检测脊髓转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、p-Smad2的蛋白表达;ELISA检测脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的释放水平。结果 在术后3～14 d时,SNI组和ENG组的PWT值均明显低于Sham组,但相比于SNI组,ENG组的PWT明显增加,...     

脊髓糖皮质激素受体在神经病理性疼痛中的作用

目的观察脊髓背角糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)在慢性病理性神经痛中的作用。方法成年SD大鼠分为假手术组、坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)组、CCI+生理盐水组、CCI+RU38486治疗组。测定各组大鼠不同时间点热缩足反射潜伏期(TWL);CCI组于术后7、14 d处死大鼠,取L4～L6脊髓冰冻切片,应用免疫组织化学方法观察GR表达变化;大鼠蛛网膜下腔埋管,于CCI术后1～14 d鞘内注射生理盐水、GR拮抗剂RU38486,测定其对TWL的影响。结果 CCI大鼠术后1 d损伤侧下肢TWL即显著降低,到第14天热疼敏仍持续存在;术后7、14 d损伤侧L4～L6节段脊髓背角GR表达显著增加(P<0.05);术后1～14 d鞘内给予GR拮抗剂RU38486可明显减轻CCI所致的热疼敏。结论脊髓背角糖皮质激素受体的激活可促进坐骨神经慢性压迫损伤所致的神经痛的发生和维持。     

鞘内注射吗啡诱导脊髓背角自噬状态的改变

目的研究鞘内注射吗啡诱导吗啡耐受过程中大鼠脊髓背角自噬状态的变化。方法选择鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠48只,随机分为M组和C组,每组24只。M组2次/d,连续7 d鞘内注射吗啡20μg;C组2次/d,连续7 d鞘内注射生理盐水。于鞘内注射前及第1、3、5、7天第2次鞘内注药后30 min采用电子VonFrey测痛仪测定机械缩足反射阈值,然后随机取6只大鼠L4～6脊髓背角采用Western blot测定自噬标记蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及自噬调节信号相关蛋白Beclin-1的表达。结果鞘内注射吗啡7 d后,吗啡镇痛作用较第1天下降60.2%,提示出现吗啡耐受形成。C组各时点LC3Ⅱ及Beclin-1均有少量表达,各时点比较差异无统计学意义;与C组比较,M组各时间点脊髓背角Beclin-1、LC3Ⅱ表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著上调(P<0.05);M组内不同时点比较,第1天LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值最高(P<0.05),随后逐渐下降;第1天Beclin-1表达最高(P<0.05),随后下降,在第5天后表达量趋于稳定。结论鞘内注射吗啡可诱导脊髓背角自噬增加,Beclin-1可能参与鞘内注射吗啡诱导所致的自噬状态改变。