热启动双重聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体

建立了蜡隔热启动双重聚合酶链反应同时检测临床泌尿生殖道样品的淋病奈瑟菌和沙眼衣原体的方法，对１７５例临床样品进行了检测，其中淋病奈瑟菌阳性２０例，占１１．４％，沙眼衣原体阳性为３９例，占２２．３％，淋病奈瑟菌和沙眼衣原体双重感染为１２例，占６．９％，做了单一ＰＣＲ与双重ＰＣＲ对照，结果完全相符，并对阳性ＰＣＲ产物进行了限制性酶切鉴定，本实验表明，双重ＰＣＲ对于临床检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体是一快捷     

细菌分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应用于健康人群脑膜炎奈瑟菌携带率研究

目的 了解河北省部分地区健康人群脑膜炎奈瑟菌(Nm)带菌状况,评价实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)作为菌株分离培养法的补充在健康人群带菌调查中的应用价值。 方法 按年龄分层整群随机抽取577人采集咽拭子,采用Nm分离培养和FQ-PCR法同时检测,并使用血清学和分子生物学方法分群。 结果 分离到18株Nm菌株,总阳性率3.12%,其中不可分群最多(9株),其次为B群(3株)、W135群(3株)、X群(2株)、C群(1株)。FQ-PCR检测阳性样本46份,总阳性率7.97%,其中B群最多(13份),其次为W135群(12份)、不可分群(11份)、X群(7份)、C群(3份)。 结论 细菌培养和FQ-PCR均提示这些地区健康人群携带Nm血清群多样化。FQ-PCR检测方法在发现病原体及分群方面比传统菌株分离培养方法都有显著提升,可作为传统方法的有力补充。     

淋病奈瑟菌隐蔽性质粒的克隆及PCR的建立与应用

用分生物学方法自淋病奈瑟菌标准分离株中克隆４．２ｋｂ的隐蔽性质粒，并根据该质粒ＤＮＡ序列，设计引物，建立淋病奈瑟菌ＰＣＲ检测方法。该方法标处理简单、反应程序优化，可在２．５小时内完成一次检测。     

脑脊液标本中分离出脑膜炎奈瑟菌W135群及B群各1例

我们于2008年2月、2011年1月从2例流行性脑脊髓膜炎患者的脑脊液标本中分别分离出W135群和B群脑膜炎奈瑟菌(N.meningitidis)。这两种脑膜炎奈瑟菌血清群均为广西壮族自治区首次报告。1病历摘要     

淋病奈瑟菌461例聚合酶链反应检测分析

淋病（Gonorrhea）是由淋病奈瑟菌（Neissefia gonorrhoeae．NG）引起的泌尿生殖系统化脓性感染．居我国性传播性疾病发病率的首位。目前实验室主要采用外生殖器分泌物或脓液涂片染色镜检与淋球菌培养的方法．其检出率较低．特别是对慢性淋病患者易出现假阴性。聚合酶链反应（PCR）是采用分子生物学技术而建立的一种新的检测方法．针对淋病奈瑟菌具有敏感度高，特异性强，而且检测速度较快的优点。本文对我院461例经PCR检测淋病奈瑟菌-DNA（NG-DNA）的结果进行回顾与分析。总结其检测特点，现报告如下。     

聚合酶链反应诊断女性淋病性尿道炎和宫颈炎

本文报告用聚合酶链反应诊断女性淋病性尿道炎和宫颈炎17例,将聚合酶链反应与淋菌分离培养比较,认为聚合酶链反应检测淋菌优于淋菌分离培养,具有快速、特异性和敏感性高的特点。     

不可分群脑膜炎奈瑟菌PCR基因分型研究

目的对自健康人群鼻咽拭子中分离的74株表型特征为不可分群的脑膜炎奈瑟菌,利用PCR基因分型技术进行基因特征分析。方法用PCR方法扩增脑膜炎奈瑟菌种属特异性基因crgA和A、B、C、W135、Y、Z、X以及29E不同群的特异性基因片段,确定不同菌株的基因型。结果以脑膜炎奈瑟菌crgA基因为靶基因进行PCR扩增,74株不可分群脑膜炎奈瑟菌中,66株脑膜炎奈瑟菌crgA基因扩增阳性,检出率89.19%。66株菌株进行不同血清群的PCR分群鉴定,40株菌株（60.61%）可检测为不同的血清群基因型,B群27株,29E群7株,X、Y群各2株,C、W135各1株。结论不可分群脑膜炎奈瑟菌进行PCR基因分型研究对脑膜炎奈瑟菌的研究具有重要的流行病学意义。     

1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤坏疽的护理

目的:总结1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤及皮下组织坏疽护理经验。方法:根据伤口的不同恢复周期选择不同的护理方法,结合多学科的治疗和护理优势为患儿选择伤口护理技术、负压及植皮治疗,对患儿实行换药时预防性镇痛干预,并积极给予1年的延续性照护等。结果:住院时间2月余,双下肢伤口瘢痕愈合出院。随访1年,该患儿经过多次激光、瘢痕松解等康复训练,基本能够正常行走。结论:针对Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿的皮肤护理,利用多学科的治疗和护理,积极给予疼痛干预及康复指导,结合长期有效的延续性照护,对该患儿的预后起重要作用。     

2003-2012年中国部分地区脑膜炎奈瑟菌体外抗生素敏感性分析

目的 了解我国脑膜炎奈瑟菌对抗生素敏感性的变化趋势. 方法 对2003-2012年本研究室收集的脑膜炎奈瑟菌菌株,根据分离年份、血清群和来源(患者或健康携带者)选择487株,采用微量肉汤稀释法和E-test浓度梯度扩散法,对其进行体外12种抗生素敏感性检测和分析. 结果 所有菌株对头孢噻肟、头孢曲松、阿奇霉素、美洛培南、氯霉素和米诺环素均敏感;对青霉素和氨苄西林不敏感的菌株分别是4.9%(24/487)和3.5%(17/487),75.6%(368/487)的菌株对萘啶酸耐药,87.1%(424/487)对复方新诺明耐药,48.9%(238/487)对环丙沙星耐药.从2005年开始出现对环丙沙星耐药的菌株23.8%(24/101),从2006年开始出现对青霉素类药物不敏感菌株2.4%(2/82).患者和健康携带者来源的菌株对萘啶酸、复方新诺明和环丙沙星3种药物显现不同的耐药率. 结论 我国流脑菌株对磺胺类和喹诺酮类药物具有较高的耐药性,对青霉素类药物不敏感的菌株也逐渐增多.这种耐药性与菌株分离年份、血清群和菌株来源具有相关性.     

Detection of resistance to rifampicin and decreased susceptibility to penicillin in Neisseria meningitidis by real-time multiplex polymerase chain reaction assay

In this study, we designed primers and probes for the rpoB gene of Neisseria meningitidis to detect rifampicin-resistant strains in a combined use with primers and probes previously described for penicillin intermediate isolates. The assay was set up in the Light Cycler instrument using the Fluorescence Resonance Energy Transfer platform. The method was applied to N. meningitidis strains and to culture-negative cerebrospinal fluids (CSFs) from patients with meningococcal invasive disease. A spiked CSF was used to determine the sensitivity of the assay.     

合肥市健康人群A、C、Y、W135群流行性脑脊髓膜炎抗体浓度水平研究

目的 掌握合肥市健康人群A、C、Y、W135群流行性脑脊髓膜炎(流脑)抗体浓度水平,监测免疫状况和流行趋势,探讨定量监测标准。 方法 应用分层随机抽样方法,以合肥市辖区县划分为7个研究地区,调查流脑流行季节流行前期健康人群945例。应用酶联免疫吸附试验,分析血清样本A、C、Y、W135群流脑抗体浓度水平。 结果 945例健康人群中,A、C、Y、W135群流脑抗体浓度中位数分别是12.06、4.08、2.36、1.25 μg/ml,几何平均浓度(GMC)分别是11.75、4.57、2.32、1.35 μg/ml;Y、W135群流脑抗体浓度单侧百分位数P95分别是8.74 μg/ml和5.60 μg/ml。A、C、Y、W135群流脑抗体浓度不同年龄组之间差异有统计学意义,A群和C群≤1岁最高,21~30岁最低; Y群和W135群21~30岁最高。 结论 合肥市健康人群流脑抗体浓度水平,A群较高,C群偏低,Y、W135群最低。需要规范监测方法,明确定量监测标准,以利于全国不同区域之间资料分析。     

基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用

目的 利用多重荧光PCR技术,建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法.方法 以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因,设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针,探针的5’端分别用FAM 、ROX、HEX和JOE进行荧光标记,3’端标记淬灭荧光.通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增,评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度.采用建立的多重荧光PCR方法,采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本,结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较.采用x2检验比较3种方法的阳性率.结果 该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌,检测灵敏度均为1 ×101 cfu/ml.对68份痰液标本进行检测,结果显示31份检测结果阳性,阳性率45.6％,明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7％),差异具有统计学意义(x2=15.4,P ＜0.05),其中28例为结核分枝杆菌,1例为鸟分枝杆菌,2例为胞内分枝杆菌,与细菌培养鉴定方法一致.1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌.结论 本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速,能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌,可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断.     

Neisseria meningitidis infection: who,when and where?

Neisseria meningitidis is a Gram-negative β-proteobacterium responsible for an endemic worldwide infection. The epidemiology and serogroup distribution can change very quickly. The incidence of meningitis infection varies from very rare to more than 1000 cases per 100,000 of the population yearly. The carriage of N. meningitidis, which represents an exclusive human commensal, is asymptomatic, but in rare cases bacteria proliferate in the CNS and rapidly lead to the death of the affected subjects. Host genetic factors, such as single nucleotide polymorphisms, can promote meningococcal disease, being able to influence the individual predisposition to the pathology. Although a reduction in meningococcal disease has been observed in Europe, a continuous surveillance is necessary to control any possible outbreaks of new hypervirulent clones into populations that could modify the epidemiology of meningococcal infections and the clinical spectrum of affected subjects.     

中国脑膜炎奈瑟菌penA基因及PBP2蛋白多态性研究

目的掌握中国脑膜炎奈瑟菌对青霉素类抗生素敏感性的变化情况,探讨脑膜炎奈瑟菌菌株对青霉素敏感性降低的机制、敏感性变化与penA基因及PBP2蛋白多态性之间的关系。方法采用MIC肉汤稀释法和E-test药敏纸条法检测脑膜炎奈瑟菌菌株对青霉素的敏感性,并对penA基因进行扩增、测序,分析penA以及PBP2蛋白与菌株的青霉素敏感性变化的关系。结果通过肉汤稀释法和E-test法检测出4株对青霉素中介敏感菌株,未发现对青霉素耐药菌株;菌株的药物敏感性变化情况与penA及PBP2蛋白的多态性无明显关系,所检测菌株的PBP2高度保守。结论应该继续对流脑菌的青霉素敏感性变化情况开展基因水平监测,及时发现高耐药性菌株,防止耐药菌株克隆在人群间扩散。     

布鲁菌PCR快速检测方法的建立及应用

目的建立布鲁菌聚合酶链反应(PCR)方法,对其进行应用评价。方法针对布鲁菌外膜蛋白编码基因(omp-2)设计PCR引物,建立PCR方法,利用19种常见细菌和布鲁菌株DNA分别对其进行特异性和敏感度评价,对3株疑似布鲁菌株进行核酸检测,并与分离培养法进行结果比对。结果本研究建立的布鲁菌PCR检测方法仅能检出布鲁菌阳性菌株,对照菌DNA未出现目的条带;敏感度为100拷贝/反应;PCR方法对3株疑似布鲁菌株检出omp-2基因条带,鉴定结果为布鲁菌,与分离培养法结果相同。结论本研究建立了一种布鲁菌PCR检测方法,与分离培养法相比,布鲁菌PCR方法准确、快速,适合布鲁菌病疫情的快速检测。