B淋巴细胞刺激因子（BlyS）的功能研究进展

BLyS及其受体TACI、BCMA、BAFF—R在B淋巴细胞的发育和体液免疫中起着重要作用：转基因小鼠呈现出严重的SLE症状TACI—Fc和BCMA—Fc能明显抑制SLE症状的发生，BLyS-／-与A／WySnJ小鼠均导致免疫能力大为下降TACI-／-和BCMA-／-小鼠对B淋巴细胞的发育影响不大。此外，BLyS能够活化T细胞和抑制B系肿瘤细胞的生长。BLyS及其受体的研究有望开辟出一条治疗自身免疫性疾病的途径。     

B淋巴细胞刺激因子的研究进展

肿瘤坏死因子超家族成员B淋巴细胞刺激因子(BAFF)通过和隶属与肿瘤坏死因子受体超家族成员的BCMA、TACI和BAFF-R的结合,在调节外周成熟B淋巴细胞的发育过程中起着重要的作用。由于在多种自身免疫性疾病中的异常表达,BAFF和其受体也被认为是治疗自身免疫性疾病的重要治疗靶点。     

重组人B淋巴细胞刺激因子纯化及其生物活性鉴定

目的 获得高纯度和高活性的B淋巴细胞刺激因子。方法 重组原核表达载体pQE-80L-BLyS112-285在大肠杆菌DH5a中经IPTG诱导表达rhBLyS112-285，超声碎菌，提取包涵体，经Ni^2 -NTA亲和层析和Sepharcryl S-200凝胶过滤层析纯化后，选择不同氧化还原条件进行复性，进而检测其生物学活性。结果 得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBLyS112-285蛋白。结论 优化了BLyS蛋白的纯化和复性的参数，所获结果为进一步研究创造了条件。     

B淋巴细胞刺激因子(BlyS)的功能研究进展

BLyS及其受体TACI、BCMA、BAFF R在B淋巴细胞的发育和体液免疫中起着重要作用 :转基因小鼠呈现出严重的SLE症状TACI Fc和BCMA Fc能明显抑制SLE症状的发生 ,BLyS 与A WySnJ小鼠均导致免疫能力大为下降TACI 和BCMA 小鼠对B淋巴细胞的发育影响不大。此外 ,BLyS能够活化T细胞和抑制B系肿瘤细胞的生长。BLyS及其受体的研究有望开辟出一条治疗自身免疫性疾病的途径     

097 B淋巴细胞刺激因子(BlyS)的功能研究进展

BLyS及其受体TACI、BCMA、BAFF-R在B淋巴细胞的发育和体液免疫中起着重要作用转基因小鼠呈现出严重的SLE症状TACI-Fc和BCMA-Fc能明显抑制SLE症状的发生,BLyS-/-与A/WySnJ小鼠均导致免疫能力大为下降TACI-/-和BCMA-/-小鼠对B淋巴细胞的发育影响不大.此外,BLyS能够活化T细胞和抑制B系肿瘤细胞的生长.BLyS及其受体的研究有望开辟出一条治疗自身免疫性疾病的途径.     

B淋巴细胞刺激因子受体的结构与功能

TAC I、BCMA和BAFF-R是BLyS的3个受体,主要分布在B淋巴细胞中。它们首先与其配体BLyS相互作用,然后与细胞内不同的下游接头分子TRAFs结合,激活NF-κB、NF-κB2等下游信号转导途径,从而调节B细胞的存活、增殖、发育和分化。另外,TAC I、BCMA还能与APR IL配体相互作用,促进某些肿瘤细胞的增殖。近来有研究表明,BLyS受体可能在治疗自身免疫性疾病中有重要的临床应用前景。     

人B淋巴细胞刺激因子融合蛋白的表达与功能鉴定

目的:构建人B淋巴细胞刺激因子(hBAFF)的真核表达质粒,表达具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白。方法:PCR扩增hbaff胞外区编码基因,加入HA信号肽与hIgG1 Fc后,连入pTT3真核表达载体,采用磷酸钙法转染293T细胞。培养上清经蛋白G纯化后,SDS-PAGE与Westernblot鉴定目的蛋白的表达。流式细胞术检测Fc-hBAFF对人B细胞的增殖情况。结果:成功构建pTT3-HA-hIgG1 Fc-hBAFF融合表达质粒,体外大量表达纯化的Fc-hBAFF蛋白经SDS-PAGE与Western blot鉴定正确,并发现Fc-hBAFF蛋白对人外周血B细胞有明显促增殖作用。同时通过尾静脉高压注射的方式证实该质粒能在体内持续表达7 d。结论:体外表达并获得了具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白。     

B淋巴细胞刺激因子与自身免疫性疾病

BLyS是肿瘤坏死因子家族新成员,由285个氨基酸组成,为Ⅱ型跨膜蛋白。BLyS可刺激B淋巴细胞增殖、分化和分泌抗体,在机体的体液免疫中发挥重要调节作用。BLyS表达失衡与多种自身免疫性疾病的发生有关。     

B淋巴细胞刺激因子与类风湿性关节炎的研究进展

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)是肿瘤坏死因子超家族成员之一,其通过与细胞表面的受体结合而发挥重要的免疫调节作用。BLyS的过量表达能引起机体的免疫失衡,进而诱发类风湿性关节炎(RA)等自身免疫疾病。以BLyS及其受体为靶点的生物制剂,在对RA及其动物模型的治疗中已取得良好效果,BLyS拮抗剂有望成为RA治疗的有效药物。     

B淋巴细胞刺激因子及其拮抗剂与系统性红斑狼疮

B淋巴细胞刺激因子是B细胞生长、发育和分化中重要的免疫调控因子,其过度表达可能参与系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)发病机制中自身反应性B细胞的产生和自身免疫耐受的失衡。鉴于BlyS具有明显的B细胞趋向性,针对BLyS靶目标研制特异性抗体、相应受体或人可溶性BLyS结合小肽等,通过特异性封闭BLyS的免疫调控信号,拮抗其诱导的T、B淋巴细胞的高度活化和病理性自身抗体的产生,有望开辟一条治疗SLE等自身免疫病的新途径。     

B淋巴细胞刺激因子与自身免疫性疾病

B淋巴细胞刺激因子 (Blymphocytestimulator,BLys)是新发现的属肿瘤坏死因子 (TumorNecrosisFactor ,TNF)族的细胞因子[1] ,又称为B细胞激活因子 (Bcellactivatingfactor ,BAFF) [2 ] 。具有特异的激活B淋巴细胞 ,诱导B淋巴细胞增殖、分化为浆母细胞、分泌抗体 ,以及促进成熟B淋巴细胞的存活等功能[3 ] 。在删除B淋巴细胞刺激因子的小鼠 ,可导致其成熟B淋巴细胞缺乏[4] 。而异常过高表达B淋巴细胞刺激因子又可引起自身免疫性疾病 ,系统性红斑狼疮样症状[3 ] 。因为BLys具有调节B淋巴细胞的功能以及它与自身免疫性疾病的关系而得到…     

转染小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子稳定表达细胞株的筛选与鉴定

用脂质体包裹纯化的小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)重组表达质粒 ,体外转染小鼠结肠癌细胞系CT2 6 ,通过Zeosin抗性筛选获得抗性的单克隆肿瘤细胞株。提取细胞总RNA做半定量RT PCR ,鉴定出高表达msBlyS的稳定细胞克隆 ,进一步做Western blotting鉴定和生物活性测定。转染后得到 8个单克隆抗性肿瘤细胞株 ,其中有 5个经RT PCR扩增出msBlyS目的条带。Western blotting显示该克隆株细胞裂解物可与抗msBlyS的抗体结合 ,在杂交膜上形成一条与预期蛋白分子量一致的条带。生物活性测定显示细胞分泌上清可共刺激(Costimulate)体外培养的B淋巴细胞增殖 ,这表明已成功转染并筛选出msBlyS稳定表达小鼠结肠癌细胞株 ,可以进一步用于msBlyS抗肿瘤作用的观察和研究。     

粒细胞集落刺激因子调节T淋巴细胞免疫功能的实验研究

目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对T淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法以15例健康供者为对象,在其应用G-CSF前后,用流式细胞仪(FCM)检测外周血T淋巴细胞表面免疫标记、Annexin V及细胞内细胞因子的表达,用淋巴细胞转化试验检测T淋巴细胞的增殖反应。结果供者用G-CSF后,CIM^ 、CD8^ 细胞数无明显变化,CIM^ 、CD8^ 细胞内IFN-γ表达降低,IL-4表达增高;T细胞对丝裂原的增殖反应降低。Th1和Th2细胞表面Annexin V的表达无显著性差异。结论G-CSF制了丝裂原刺激T细胞的功能,使供者T细胞向Th2型细胞转化,细胞凋亡不是Th1／Th2转化的机制。     

B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究

目的:探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应 (RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA 含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性.结果:MM患者血清 BLyS含量[(7.95±4.93) g/L 明显高于健康对照组[(2.70±1.09) g/L,P<0.01 ,并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4% (18/19),84.2% (16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32% (9/19)患者TACI mRNA表达水平降低.结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.     

人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的:钓取人B细胞刺激因子基因,构建其表达的大肠杆菌工程菌,并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA,用PCR扩增目的基因,连接到原核生物表达载体pET-30a上。制备质粒后,酶切、进行菌落PCR及DN测序对其进行鉴定。然后转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达对纯化的目的蛋白进行肽质量指纹分析、鉴定,并进一步做体外B细胞刺激试验。结果:RT-PCR钓取出可溶性B细胞刺激因子基因片段。DNA测序结果与报道序列完全一致。在IPTG诱导下,目的基因在工程菌中表达。利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱分离。纯化目的蛋白的肽质量指纹图经Mascot搜索与B细胞刺激因子吻合。纯化的蛋白在体外可刺激B细胞增殖。结论:成功地克隆可溶性B细胞刺激因子基因,表达的纯化目的蛋白是具有生物学活性的B细胞刺激因子。     

实时荧光定量PCR方法检测非霍奇金淋巴瘤患者B淋巴细胞刺激因子表达水平

目的:建立实时荧光定量PCR方法(RFQ-PCR)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者B淋巴细胞刺激因子(BAFF)表达水平。方法:47例NHL患者及20例健康对照,采用实时荧光定量PCR方法检测其外周血单个核细胞中的B淋巴细胞刺激因子表达水平。结果:RFQ-PCR检测BAFF含量的示灵敏度为10 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为8.56%和11.32%,高浓度样本批内和批间CV分别为0.76%和4.58%。NHL患者和健康对照者BAFF mRNA表达量分别为(0.48±0.023,0.25±0.023),两者具有显著性差异(P=0.0001)。结论:RFQ-PCR检测BAFF mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性。NHL患者BAFF mRNA高表达,提示BAFF可能在NHL发生发展中发挥重要作用。     

IFN-γ和IL-6对多发性骨髓瘤B淋巴细胞刺激因子表达变化的调控研究

目的 探讨IFN-γ和IL-6对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达变化的影响及相关机制.方法 采用流式细胞术、实时荧光定量PCR、E1.ISA及Western blot方法 分析人MM肿瘤细胞KM3在IFN-γ和IL-6以及相关信号通路特异性抑制剂作用前后BLJys表达水平的变化.结果 lFN-γ和IL-6促进KM3细胞BLyS的表达水平;NF-KB抑制剂能够抑制BLyS的表达水平;NF-KB抑制剂BAY11-7082能够完全下调IFN-γ引起的BLyS表达的上调作用;抑制促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性能够下调BLyS的表达水平.结论 MAPK与NF-KB信号通路参与了Blys的表达调节.     

人B淋巴细胞刺激因子体外活性分析

目的:分别采用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析人B细胞刺激因子对培养的小鼠脾细胞的生物学活性.方法:分离小鼠脾细胞,培养72 h后,MTF和ATP方法测定不同密度脾细胞的增殖,从中选定适当的脾细胞密度分析BLyS活性.然后,检测不同剂量的BLyS对脾细胞的刺激作用.结果:用MTT和ATPLiteTM-M发光法分析发现:BLyS在1、5、10和20 mg/L时,都能明显促进小鼠脾细胞的增殖.结论:MTT法检测.BLyS对小鼠脾细胞的增殖作用是一种简单、快捷的方法.利用这种细胞模型,可以对BLyS拮抗剂进行初步筛选以期获得具有潜在应用价值的治疗剂.     

T细胞活化的辅助刺激因子:CD28和B7

近年来研究发现,T细胞受体与抗原-主要组织相容性抗原复合物的结合并不能有效地激活T细胞,T细胞的活化尚需要一种辅助刺激因子。T细胞表面的CD28与抗原呈递细胞表面的B7间的作用是T细胞活化最主要的辅助刺激途径。     

B7-H3:一种新的共刺激分子

B7 H3是B7家族的最新成员 ,B7 H3mRNA广泛存在于非淋巴组织 ,其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达 ,且此受体不同于CTLA 4、ICOS和PD 1。在抗人CD3单克隆抗体存在的情况下 ,B7 H3可增加CD4 + 和CD8+ 细胞的生成 ,且是剂量依赖性的 ,并可选择性的增加IFN γ的生成 ,参与T、B细胞的活化和机体免疫 ,在肿瘤治疗、器官移植和自身免疫病的治疗方面具有重要的作用