卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv／hGM—CSF融合蛋白质 …

目的：为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性，构建表达６Ｂ１１ｓｃＦｖ／ｈＧＭ－ＣＳＦ融合蛋白质，并对其活性进行测定。方法：用ＤＮＡ重组技术，将以前构建的６Ｂ１１ｓｃＦｖ－Ｌｉｎｋｅｒ－ｈＧＭ－ＣＳＦ融合基因克隆至ｐＥＴ１６（ａ＋）表达载体，表达可溶蛋白质，用ＥＬＩＳＡ分析技术和细胞增殖试验测定融合蛋白质的抗体和细胞因子活性，结果：融合蛋白质可实溶表达，能与ＣＯＣ１６６－９单抗和小鼠抗人ＧＭ－ＣＳＦ单     

结扎冠状动脉对大鼠心肌凋亡相关基因表达的影响

目的：研究大鼠冠状动脉结扎时心肌组织中凋亡相关基因的表达状况与急性心肌缺血的关系。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型。描记Ⅱ导心电图;检测血清肌酸激酶（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＣＫ） 活性、心肌组织丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ, ＭＤＡ）含量和超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ） 活性;ＲＴＰＣＲ 法检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ＣＰＰ３２ 、Ｂｃｌ２ 和Ｂａｘ 在心肌组织的相对表达量。观察伪结扎组、结扎组、苦豆碱（ａｌｏｐｅｒｉｎｅ,Ａｌｏ）给药组（２０ ｍｇ·ｋｇ－ １）、普萘洛尔（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ,Ｐｒｏｐ）给药组（２ ｍｇ·ｋｇ－１） 对上述各指标的影响。采用单因素方差分析（Ｏｎｅ Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ） 对结果进行统计处理。结果：结扎大鼠左冠状动脉前降支可导致心电图明显的缺血性改变及血清ＣＫ 活性显著升高;心肌组织的ＭＤＡ 含量和ＳＯＤ 活性显著增加;缺血心肌组织中Ｆａｓ、ＣＰＰ３２ 和Ｂｃｌ２基因的表达显著增加（ Ｐ＜０ ．００１）,Ｂａｘ 变化不明显（ Ｐ＜ ０．０５） 。Ａｌｏ 和Ｐｒｏｐ 能明显缓解心电图的缺血性改变并降低血清ＣＫ 活性;减少心肌组织的     

冷血心肌麻痹液温度与SR Ca^2＋—ATPase活性及SR Ca^2＋—AT …

评价冷血心肌麻痹液（ＣＢＣ）温度对心肌保护效果的影响。方法：离体鼠心经ＣＢＣ不同温度（４,８,１２,１６和２０℃）停搏１２０ｍｉｎ及再灌注６０ｍｉｎ,测定心肌肌浆网（ＳＲ）Ｃａ＾２＋ＡＴＰａｓｅ活性、钙摄取和ＳＲ Ｃａ＾２＋－ＳＴＰａｓｅｍＲＮＡ表达的改变．结果：４,８,１２℃组ＳＲ Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性、钙摄取保护优于１６和２０℃组（Ｐ〈０．０１）,４℃￣１６℃组ＳＲＣａ＾２＋－ＡＴ－     

以包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体的复性、纯化和活性研究

目的：探讨以细菌胞浆内包涵体形式表达的６Ｂ１１卵巢癌抗独特型单链抗体（６Ｂ１１ｓｃＦｖ）的复性、纯化及其活性。方法：重组质粒ｐＬ６Ｂ１１ｓｃＦｖ转化大肠杆菌ｐｏｐ２１３６，温度诱导，以包涵体形式获高效表达。超声破碎细菌细胞得包涵体，用８ｍｏｌ·Ｌ－１尿素溶解包涵体后直接稀释复性，探讨复性条件并采用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化复性蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ分析蛋白纯度，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ及竞争抑制ＥＬＩＳＡ测活性。结果：复性蛋白质经纯化，纯度达９５％以上。当氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）浓度为５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）浓度为０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，１０℃复性４８ｈ以上时，复性率较高。纯化后的表达蛋白６Ｂ１１ｓｃＦｖ能与ＨＲＰＣＯＣ１６６９卵巢癌单抗反应并与卵巢癌抗原共同竞争结合卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９，抑制率达６７％，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示其相对分子质量为２８×１０４，证明纯化后的表达蛋白质，能模拟卵巢癌抗原与卵巢癌单抗特异结合。结论：以包涵体表达的６Ｂ１１ｓｃＦｖ，经溶解复性纯化后，纯度高，活性好。     

肾综合征出血热病毒对体外培养的人胚肾小球系膜细胞的影响

观察肾综合征出血热病毒Ａ９株（ＨＦＲＳＶ－Ａ９）对体外培养的人胚肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）的影响以及病毒唑、磷甲酸钠对病毒感染的抑制作用。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、间接免疫荧光法（ＩＦＡ）、免疫酶组化法和电镜等技术检测ＭｓＣ中病毒、抗原与培养上清液中的病毒滴度。结果：ＨＦＲＳＶ－Ａ９感染ＭｓＣ７天后细胞中便有病毒抗原表达；电镜下胞浆中见到病毒颗粒和包涵体：病毒唑与磷甲酸钠能降低病毒抗原表达     

结扎冠状动脉对大鼠心肌凋亡相关基因表达的影响

目的;研究大鼠冠状动脉结扎时心肌组织中凋亡相关基因的表达状况与急性心肌缺血的关系。方法;结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急笥心肌缺血模型。描记Ⅱ导心电图;检测血清肌酸激酶（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＣＫ）活性,心肌组织丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ,ＭＤＡ）含量和超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ）活性;ＲＴ－ＰＣＲ法检测凋亡相关基因Ｆａｓ,ＣＰＰ３２,Ｂｃ     

转化生长因子—β1对活化巨噬细胞杀伤阿米巴原虫的作用

活化巨噬细胞产生的一氧化氮（ＮＯ）是抗阿米巴原虫的主要效应分子，转化生长因子（ＴＧＦ－β１）能够调节巨噬细胞的许多机能，包括ＮＯ产量，本文探讨了ＴＧＦ－β１对活化巨噬细胞体外杀伤溶组织内阿米巴滋养体的效力和ＮＯ产量及其合酶（ｍａｃ－ＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达与其相互关系。方法Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓巨噬细胞（ＢＭＭ）的ＮＯ产量用Ｇｒｉｅｓｓ方法检测ｍａｃ－ＮＯＳｍＲＮＡ表达水平（１）ＴＧＦ－β１本身不能直     

冠心病病人红细胞变形能力与脂质过氧化损伤及血浆sC5b—9浓度 …

①目的 探讨冠心病病人红细胞变形能力（ＥＤ）变化与红细胞膜脂质过氧化物（ＬＰＯ）及血将补体激尖片段（ｓＣ５ｂ－９）的关系。②方法 采用ＤＸＣ－３００Ａ型核孔膜红细胞变形能力测定仪,硫代巴比妥酸比色法和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,检测了３５例冠心病病人红细胞滤过指数（ＥＦＩ）、红细胞膜ＬＰＯ含量和ｓＣ５ｂ－９浓度的变化。③结果 冠心病病人ＥＦＩ,ＬＰＯ,ｓＣ５ｂ－９明显增高,与对照组比较差异有显著     

肺癌患者肺泡巨噬细胞一氧化氮活性研究

用镀铜镉还原－Ｃｒｉｅｓｓ法检测肺癌患者ＢＡＬＦ及肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养上清液中ＮＯ水平；ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达。结果显示，肺癌组ＢＡＬＦ及ＡＭ培养上清液中ＮＯ水平均明显低于对照组。两组ＡＭ ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达阳性率分别为６９％和９１％（Ｐ〉０．０５），但表达强度肺癌组明显弱于对照组（Ｐ〈０．０１）。经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后，ＡＭ ｉＮＯＳ表达强度及培养上清液中ＮＯ水平均显     

肺癌患者肺泡巨噬细胞一氧化氮活性研究

用镀铜镉还原－Ｇｒｉｅｓｓ法检测肺癌患者ＢＡＬＦ及肺泡巨噬细胞（ＡＭ）培养上清液中ＮＯ水平；ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡＭｉＮＯＳｍＲＮＡ表达。结果显示，肺癌组ＢＡＬＦ及ＡＭ培养上清液中ＮＯ水平均明显低于对照组。两组ＡＭｉＮＯＳｍＲＮＡ表达阳性率分别为６９％和９１％（Ｐ＞０．０５），但表达强度肺癌组明显弱于对照组（Ｐ＜０．０１）。经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后，ＡＭｉＮＯＳ表达强度及培养上清液中ＮＯ水平均显著提高。提示肺癌局部ＡＭ抗肿瘤功能可能存在某些缺陷；ＧＭ－ＣＳＦ可刺激ＡＭ使其功能增强     

杜鹃花总黄酮对心肌缺血损伤的保护作用

目的观察杜鹃花总黄酮（TFR））对心肌缺血性损伤的保护作用及其机制。方法小鼠心肌缺血采用SC异丙肾上腺素（Iso）法,观察心电图ST段的变化,测定小鼠血清和心肌中的丙二醛（MDA）含量及血清中乳酸脱氢酶（LDH）活性;Langendorff法离体大鼠心脏缺血30min后再灌30min,测定心脏的冠脉流量、心肌中的MDA、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合酶（NOS）及一氧化氮（NO）等的变化。结果TFR25、50mg／kg可以抑制Iso引起的小鼠心电图ST段的抬高和抑制心肌中MDA的含量的升高,TFR50mg／kg降低血清中LDH和MDA的增高;TFR20、40、80mg／L抑制离体心脏冠脉流量的减少和心肌中SOD活性的下降。TFR80mg／L能抑制心肌中MDA含量的增高和NOS活性的降低,TFR40mg／L抑制心肌中的NO含量下降。结论TFR对心肌缺血和缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抗自由基及增加NO产生有关。     

一氧化氮介导干扰素-α对大鼠心肌的负性肌力作用

目的:研究干扰素-α(IFN-α)对大鼠离体心脏及其乳头肌的影响和可能机制。方法:采用离体Langendorff灌流心脏和离体右心室乳头肌模型,观察IFN-α对左心室发展压、左心室内压最大上升和下降速率、左心室舒张末压、心率、冠脉流量和乳头肌平均最大收缩力的影响。结果:在离体Langendorff灌流心脏上,IFN-α(10 U/m l、100 U/m l、1 000 U/m l、10 000 U/m l)浓度依赖性的抑制左心室发展压、左心室内压最大上升和下降速率,抬高左心室舒张末压,高浓度IFN-α增加冠脉流量,但对心率无明显影响。在离体右心室乳头肌模型上,IFN-α浓度依赖性的抑制离体右心室乳头肌的发展张力。一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAM E,1-0 4m o l/L)预处理后,可阻断IFN-α在离体灌流心脏和离体右心室乳头肌上的负性肌力作用。同时,IFN-α(1 000 U/m l)预处理10 m in可以引起右心室乳头肌对β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素(ISO,1-0 9m o l/L~1-0 6m o l/L)浓度曲线的反应性降低,合用L-NAM E(1-0 4m o l/L)预处理后,可削弱IFN-α的作用。结论:IFN-α对大鼠离体心肌具有负性肌力作用,并且能降低乳头肌对β-肾上腺素受体激动剂ISO的反应性,以上作用可能部分是由一氧化氮介导的。     

大鼠离体等容收缩心脏模型的研制

目的在国内首次建立等容收缩离体大鼠心脏模型。方法采用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，游离心脏通过主动脉行逆行灌流左心室放入充满生理盐水的乳胶小球，多导生理记录仪（ｓａｎ—ｅｉ３６２）和压力换能器（ＧｏｕｌｄＰ２３ｄｂ）测定血液动力学变化．结果心脏富氧灌流３０ｍｉｎ（ｎ＝６）时，左心室收缩压（ＬＶＳＰ）为９．１±０．３ｋＰａ、左心室舒张压（ＬＶＥＤＰ）ｏｋＰａ、左心室内压最大上升速率（ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘ）１６２．８±６．８ｋＰａ·Ｓ－１心率（ＨＲ）２３７．０±４．０ｂｅａｔｓ·ｍｉｎ－１。结论等容收缩离体大鼠。Ｃ脏模型位测定的心脏血液动力学指标更力。科学与可靠。     

Cardioprotective effects of morphine on rat heart suffering from ischemia and reperfusion

Objective To investigate the cardioprotective effects of morphine on ischemic reperfused rat heart in vitro and its mechanism.Methods The isolated rat heart was perfused in a Langendorff apparatus. Infarct myocardium was determined by TTC. Coronary flow (CF), heart rate (HR), left ventricular pressure (LVP), the first derivative of ventricular pressure (LVP/dtmax) and infarct size after ischemia and reperfusion in rat heart given 0.3 μmol/L morphine were observed. The effects of naloxone and glibenclamide on the cardioprotection of morphine were also measured.Results After ischemia and reperfusion, CF, HR, LVP and LVP/dtmax of isolated rat hearts decreased significantly (P<0.01). After morphine preconditioning, HR, LVP and LVP/dtmax increased (P<0.01) and infarct size was reduced significantly (P<0.01), while no significant change in CF (P>0.05). The cardioprotective effects of morphine were abolished by naloxone or glibenclamide completely.Conclusions Morphine can reduce ischemia-reperfusion injuries in isolated rat heart. The cardioprotective effects of morphine are mediated by a local opioid receptor-KATP channel linked mechanism in rat hearts.     

κ-阿片受体介导缺血后处理的心肌保护作用及其受体后机制

目的:探讨κ-阿片受体是否参与缺血后处理的对抗心肌缺血/复灌(I/R)损伤和心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法:采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,全心停灌30 m in、复灌120 m in复制I/R模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌组织form azan含量。酶解分离的心肌细胞采用缺氧60 m in、复氧60m in复制H/R模型,测定心肌细胞存活率。结果:在离体心脏模型上,与I/R组相比,缺血后处理组心肌组织的form azan含量明显增高,复灌期间冠脉流出液中LDH含量明显降低,同时缺血后处理明显改善心室力学指标,缓解冠脉流量的减少;在分离心肌细胞模型上,缺氧后处理明显提高心肌细胞存活率。κ-阿片受体阻断剂nor-b inaltorph im ine(nor-BN I)和线粒体ATP敏感性钾通道(m itoKATP)阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)在离体大鼠心脏模型和分离心肌细胞模型上均能明显减弱缺血后处理的作用。同时在心肌细胞模型上,与H/R组相比,κ-阿片受体激动剂U 50488H明显提高心肌细胞存活率,其作用可被m itoKATP阻断剂5-HD所阻断。结论:缺血后处理具有抗心肌缺血/复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其激活κ-阿片受体和m itoKATP有关。     

眼镜蛇毒心脏毒素对心肌电及机械活动的影响（一）

中华眼镜蛇毒心脏毒素(Cardiotoxin,简称CTX)对离体的豚鼠心肌电及机械活动有明显而持久的影响。1mg/L CTX可提高离体的大鼠心房和离体的豚鼠心脏肌张力,减少收缩振幅,ECG的S-T段下降或抬高,T波由正常倒置型全部转为直立,电压增加。离体的大鼠心房ERP、豚鼠心脏P-R及Q-T间期、心率、冠脉流量(CF)不变。反复用生理溶液冲洗标本,不能使CTX抑制了的标本恢复正常。而5mM Ca~(+2)拮抗CTX对心肌电及机械活动的影响。     

镁对大鼠离体缺血再灌注心肌的作用

目的：观察在缺血再灌注5min后应用镁剂是否能对离体缺血再灌注心肌起到保护作用。方法：建立Langendorff离体心脏缺血再灌注模型，结扎冠状动脉左前降支，缺血20min，复灌60min，高镁组在复灌5min时应用浓度为2．4mmol／L、4．8mmol／L、8．4mmol／L的高镁K—H液灌注10min。观察心脏血流动力学指标，实验结束时测心肌匀浆MDA含量，免疫组化检测SOD的含量。结果：①复灌15min时三个高镁组LVSP、LVDP×HR、LV±dp／dtmax明显低于缺血再灌组。②复灌60min时三个高镁组各指标与缺血再灌组相比差异无显著性。③三个高镁组MDA含量明显低于缺血再灌组，SOD阳性表达明显高于缺血再灌组。结论：缺血再灌注5min应用高镁K—H液对缺血再灌注心肌的即时作用表现为抑制心脏的血流动力学，复灌结束测得的MDA含量说明镁对心肌有保护作用，体现为抗脂质氧化作用。     

血红素加氧酶1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:观察重组腺相关病毒介导血红素加氧酶1(AAV-rHO-1)基因在大鼠心肌的表达情况,及其对大鼠心肌离体缺血再灌注损伤的影响。方法:雄性SD大鼠30只随机分成3组,对照组(C组,n=6),缺血再灌注组(I/R组,n=12),AAV-rHO-1基因组(A-r组,n=12)。基因转染3个月后,半定量RT-PCR检测转染基因的表达情况,并建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组持续灌注100 min,其他各组均平衡15 min,停灌40 min与再灌注45 min,记录各组心功能变化,测定冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性,测定再灌注后45 min时的心肌超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,同时取每组大鼠心肌检测梗死面积。结果:经半定量RT-PCR分析显示,血红素加氧酶在A-r组心肌中有效表达。离体心肌Langendorff灌注时,与I/R组比较,A-r组在复灌后各时间点心功能明显增强(P<0.01),复灌后冠脉流出液LDH活性降低(P<0.01),复灌后45 min后心肌MDA含量降低(P<0.01),SOD活性增高(P<0.01),梗死面积较小(P<0.01)。结论:腺相关病毒携带的血红素加氧酶1基因能有效地转染心肌组织,并在体内稳定表达,AAV-rHO-1转染预处理对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用。     

抑制CaMKII减轻线粒体氧化应激可改善离体心脏缺血再灌注损伤

目的探讨钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）在离体心脏缺血再灌注（IR）损伤中的作用和可能机制。方法采用大 鼠离体心脏缺血再灌注（IR 45 min/120 min）模型,将40只大鼠随机分为对照组（Control）、KN-93药物对照组（2.5 μmol/L KN- 93）、IR组和CaMKII特异性抑制剂KN-93干预缺血再灌注组（KN-93+IR）,以左室心脏功能、冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH） 活性和心肌肌钙蛋白（cTnI）含量、心肌梗死面积评价心脏损伤程度,Western-blot检测CaMKII磷酸化（p-CaMKII）、CaMKII氧 化（ox-CaMKII）和PLN磷酸化（p-PLN）蛋白的表达,试剂盒检测线粒体超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含 量。结果与Control组相比,KN-93组各项指标均无明显变化;IR组心脏功能、线粒体SOD的活性降低（P<0.01）,而心肌梗死面 积、冠脉流出液中LDH活性和cTnI 含量、p-CaMKII、ox-CaMKII和p-PLN的表达、线粒体MDA的含量均明显升高（P<0.01）; KN-93干预IR组可明显改善心脏功能（P<0.01）,增加线粒体SOD活性,减小心肌梗死面积、LDH活性、cTnI含量、p-CaMKII、 ox-CaMKII和p-PLN的表达以及线粒体MDA含量（P<0.01）。结论CaMKII参与离体心脏缺血再灌注损伤,抑制CaMKII可通 过降低线粒体氧化应激进而减轻离体心脏缺血再灌注损伤。     

肉苁蓉总苷对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究肉苁蓉总苷（Glycosides of Cistanche,GCs)对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用Langendorff离体大鼠心脏灌流模型。在心脏低灌流期（55min),给药组在灌流液中分别加入GCs125、250mg/L,以普萘洛尔（0.2μmol/L)为阳性对照组,以比色法测定心肌Se-GSH-Px、Sox活性及丙二醛（MDA）含量,电镜检查心肌超微结构的改变。结果：GCs125、250mg/L组明显保护心肌SOD、Se-GSH-Px活性,降低MDA含量,增加再灌后冠脉流量,降低冠脉阻力,促进心肌收缩力的恢复,并明显减轻心肌超微结构损伤,结论：GCs可能是通过清除氧自由基,防止脂质过氧化耐保护缺血心肌再灌注损伤。