利用噬菌体肽库筛选IL-2Rα模拟表位肽的研究

目的 筛选IL-2Rα模拟表位肽,为研制高效、特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础.方法 应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗人IL-2Rα单克隆抗体5G1,细胞ELISA方法检测其特异性.用5G1单抗筛选噬菌体环七肽库,并对噬菌体克隆进行抗原性鉴定.根据阳性克隆的DNA序列合成环肽并鉴定其生物活性.结果 经5轮筛选、鉴定,获得5个与5G1有较强结合特性的噬菌体阳性克隆.DNA测序并推导氨基酸序列,得到Lys-X-{X}-Lys-Gly保守序列.依此序列合成环七肽CP,小鼠淋巴细胞增殖试验证实其有免疫抑制活性.结论 环肽CP为IL-2Rα模拟表位肽,可作为IL-2Rα的拮抗剂发挥免疫抑制效应.     

利用噬菌体肽库确定IL-2Rα表位序列

目的：确定ＩＬ－2Ｒα表位,为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法：用抗ＩＬ－２Ｒα单克隆抗体５Ｇ１对噬菌体六肽库进行筛选,选择出与５Ｇ１结合较强的克隆,经ＤＮＡ序列分析,获得保守序列。对合保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果：选择出３１个与５Ｇ１结合较强的克隆。获得Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ和Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ两种保守序列。生物学活性鉴定表明：含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ序列克隆较含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ被抑制效果好。结论：Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ是ＩＬ－２Ｒα表位的关键序列。以此表位序列合成的小分子肽可作为ＩＬ－２Ｒα的拮抗剂而成为免疫抑制剂。     

噬菌体肽库确定IL—2Rα表位序列

目的：确定ＩＬ－２Ｒα表位，为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法：用抗ＩＬ－２Ｒα单克隆抗体５ＧＩ对噬菌体六肽库进行筛选，选择出与５ＧＩ结合较强的克隆，经ＤＮＡ序列分析，获得保守序列。对含保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果：选择出３１个与５ＧＩ结合较强的克隆。获得Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ两种保守序列。生物学活性鉴定表明：含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ序列克隆较含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ     

利用噬菌体随机肽库筛选IL-5结合的相关多肽

目的：采用噬菌体随机肽库筛选人IL-5，以获得能高亲和力结合IL-5的相关多肽。方法：以重组人IL-5作为筛选分子，应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选。经过三轮淘筛后，经夹心ELISA、竞争ELISA法进一步鉴定噬菌体克隆与IL-5的亲和力，对阳性克隆进行了扩增和DNA测序，据此推导结合随机多肽的氨基酸序列。结果：经鉴定得到9个阳性噬菌体克隆能与IL-5呈高亲和力结合。通过测序和序列比较分析，发现CX1-2AS为相对保守的结合表位。结论：研究表明通过噬菌体肽库能够筛选到IL-5结合的相关多肽，为进一步研究IL-5结合表位及抑制剂奠定了基础。     

大肠杆菌脂多糖2630模拟位的研究

目的 :利用纯化的抗大肠杆菌L2 6 30多抗筛选噬菌体环七肽库 ,以获得可模拟脂多糖 (LPS)表位的短肽克隆。方法 :以亲和层析纯化的抗大肠杆菌L2 6 30多克隆抗体为靶分子 ,筛选噬菌体随机环七肽库 ,用双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的抗原性。结果 :对噬菌体环肽库进行 3轮筛选后 ,随机挑选 2 0个克隆 ,经鉴定其中 12个可与抗L2 6 30抗体结合 ,即为阳性克隆 ;其中有 5个阳性噬菌体克隆表现出与抗鼠伤寒沙门氏菌LPS多抗结合的活性 ,提示这 5个噬菌体展示的短肽具有模拟大肠杆菌LPS及鼠伤寒沙门氏菌LPS共同表位的性质。经DNA序列分析显示 ,其中 8个克隆的氨基酸序列具有X DGLL XX或X EDGLL X保守序列 ,其余 4个克隆的序列均不相同。结论 :筛选获得的噬菌体环七肽克隆具有模拟大肠杆菌LPS表位的活性 ,为大肠杆菌L2 6 30多表位模拟短肽。其中 5个阳性噬菌体克隆短肽具有模拟大肠杆菌LPS及鼠伤寒沙门氏菌LPS共同表位的活性     

用噬菌体表面显示肽库技术筛选乙酰胆碱酯酶有效抗原表位的研究

目的：筛选和鉴定乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位。方法：收集乙酰胆碱受体抗体阴性而乙酰胆碱酯酶抗体阳性的重症肌无力病人血清，采用溴化氰活化的琼脂糖柱（CNBr-actived sepharose^TM4B）纯化抗乙酰胆碱酯酶的多克隆抗体并定量；用纯化的抗乙酰胆碱酯酶的抗体对随机的12肽噬菌体表面显示肽库进行5轮免疫学筛选，随机挑取克隆；采用Western blot免疫识别，识别为阳性的克隆进行核苷酸序列的测定，并与乙酰胆碱酯酶的氨基酸序列进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠，采用Western blot筛选能刺激小鼠产生抗乙酰胆碱酯酶抗体的阳性克隆，进行生物学活性的鉴定。结果：经5轮免疫学筛选后挑取的49个克隆中，经Westem blot识别15个克隆能被抗乙酰胆碱酯酶抗体识别。核苷酸序列分析发现共有7种不同的表位，其中1种表位与乙酰胆碱酯酶有较高的同源性，其余6种表位与其无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选，共有5个免疫原性较强的阳性克隆，其免疫的鼠血清均可识别人乙酰胆碱酯酶。结论：获得了5种乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位，1种可能为结构表位，4种为模拟表位。     

广谱抗革兰氏阴性菌单克隆抗体3A8识别表位的初步研究

目的:利用噬菌体肽库技术筛选抗广谱革兰氏阴性菌与LPS单克隆抗体3A8的识别表位,以获得来源于不同LPS的保守表位.方法:用广谱抗G-菌、LPS的单克隆抗体3A8为靶,筛选噬菌体环七肽库,蚴鉴定阳性噬菌体克隆并测序.根据阳性保守序列合成短肽A2及A5,并与KLH载体交联,ELISA鉴定A2-KLH、A5-KLH与3A8单抗的结合.结果:随机挑选的33个噬菌体克隆中有15个可特异性与3A8结合,该结合可被LPS2630所抑制.根据阳性克隆DNA序列推导氨基酸序列,共有7种序列,均以疏水氨基酸为主,且包含保守序列Ser Pro Pro/Pro X Pro;选择所获阳性序列经设计与改造合成延长的两个环肽;经ELISA鉴定表明这些环肽可特异地与3A8结合.结论:得到可被3A8单抗特异性识别并含保守残基Ser Pro Pro/ProX Pro的阳性序列,据此合成的短肽可特异性结合3A8,提示该短肽可能模拟LPs共同表位的抗原性,有望成为疫苗候选表位.     

模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究

目的 利用针对HIV-1跨膜蛋白gp41CHR序列合成肽C34的单克隆抗体1G1筛选噬菌体12肽库，旨在找寻模拟C34肽表位的序列，同时探索该短肽成为HIV-1gp41NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法 以1G1为钓饵蛋白对噬菌体12肽库进行亲和筛选，以双夹心ELISA鉴定阳性克隆。结果 经3轮筛选后，随机挑选17个噬菌体克隆，其中6个克隆与1G1显示出较强的结合活性，上述6个阳性克隆经DNA测序，氨基酸序列相同；HYEFWAWNWEAN，其明显的疏水性质类似于G34N末端，特异性鉴定显示这些克隆均能够与HIV-1gp41N多肽结合，结论 该噬菌体克隆展示肽可模拟HIV-1gp41CHR多肽表位，并可与N多肽结合。     

从噬菌体环肽库中筛选TNF-α表位模拟肽的研究

目的：用具有中和活性的抗TNF—α单抗(mAb)J1D9筛选噬菌体环七肽库，从中获得可模拟TNF—α表位的短肽。方法：筛选TNF—α表位模拟肽，并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆。结果：对环七肽库进行3轮筛选后，随机挑选20个噬菌体克隆，经ELISA鉴定出9个阳性克隆。DNA序列分析后，推导的氨基酸序列共3种：c—RRPAQSG—c、c—NKHNRKI—c和c—RGMSRKI—c。结论：筛选的环七肽克隆展示肽具有TNF—α的抗原性，为TNF—α表位模拟肽。     

HIV-1 gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定

目的：筛选可作为小分子先导化合物的HIV-1 gp41 C螺旋模拟位，为开发抗HIV-1早期感染的小分子药物奠定基础。方法：以源于HIV-1 gp41端的肽N36为靶，对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果：3轮筛选后随机挑取26个噬菌体克隆，ELISA鉴定表明有16个克隆可与N36结合，将其中10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列，每一克隆至少含有2个疏水氨基酸，其中9个克隆均有WW，7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No.8进一步鉴定，游离N36肽阻断No.8克隆与固相化N36结合，C34肽竞争抑制N36肽与No.8克隆结合(IC50为12.5μg/ml)。结论：表达WW保守序列的肽模拟HIV-1 gp41C螺旋与N螺旋结合，该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。