泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡及Survivin表达和Caspase-3活性的影响

目的探讨泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡,生存素(Survivin)表达和Caspase-3活性的影响。方法体外细胞培养,待细胞生长处于对数期时,加入不同浓度泰素帝,MTY比色法检测细胞活性。参考MTT结果,选取100ng/ml泰素帝处理A549细胞。透射电镜,流式细胞术检测细胞凋亡的发生;RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;Western印迹法检测Survivin蛋白质的表达;Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果泰素帝可抑制A549细胞生长,诱导细胞凋亡,呈时间依赖性降低Survivin的表达,增强Caspase-3酶活性。结论 100ng／ml泰素帝可诱导A549细胞凋亡,Survivin表达降低和Caspase-3活性增强可能是其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子途径之一。     

短期机械拉伸加载对人肺腺癌细胞A549细胞的增殖效应

目的测量人肺腺癌细胞株A549对机械拉伸加载的短期响应。方法用加载Flexercell-4000TTM系统在4h内对A549细胞进行正常生理参数范围的应变刺激,并测量细胞的增殖效应。结果细胞的增殖率均有不同程度的提高,增殖响应系数M(%)为:0.5h,M=18%;1h,M=22%;4h,M=5%。结论研究证明细胞对短期加载的增殖响应与人成骨细胞特征相似,在1800循环数左右有一峰值,间歇式加载能保持长期高增长率,而过去的研究表明连续加载相反,只会抑制细胞的增长。     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

nm23-HI基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法：构建nm23-HI基因的真核表达载体。转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中，通过G418筛选出稳定表达克隆，RT—PCR及免疫组化检测nm23-HI在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-HI基因对细胞生长的影响，流式细胞仪检测细胞周期，原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果：转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-HI基因，抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-HI基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少，停滞于G0期。转染nm23-HI基因后细胞边缘的伪足减少。结论：nm23-HI基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖，可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。     

3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解阻止A549肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、20、40、80、160) μmol/L 3-BP处理24、48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、50、100、150) μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细胞24 h,异硫氰...     

Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖影响实验研究

目的：探讨慢病毒载体介导survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制，为肺癌基因治疗新策略提供帮助。方法:构建表达survivin-siRNA的慢病毒载体感染A549细胞株，测定病毒滴度。采用RT-PCR、免疫组化及Western blotting等检测感染后不同分组A549细胞survivin-mRNA和蛋白的变化及caspase-3蛋白的变化，通过流式细胞仪及MTT法检测感染后A549细胞周期及生长曲线。结果: RT-PCR及Western blotting检测显示，转染细胞(MOI=150)中survivin基因mRNA和蛋白的表达明显降低，抑制率分别为97%、88%；细胞生长曲线和周期结果显示转染组细胞增殖明显减慢，G1期细胞比例明显增加，S期细胞比例则明显减少；转染细胞中caspase-3被激活。结论: 慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制人肺腺癌A549细胞survivin基因的表达和细胞增殖，有效激发细胞凋亡，有望成为肺腺癌基因治疗的新策略之一。     

MADD在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的质粒和能够沉默MADD表达的慢病毒载体分别转染A549细胞,Western blot、MTT分析和流式细胞术检测其MADD表达、增殖及凋亡。结果:肺腺癌组织MADD表达水平明显高于肺正常组织和肺鳞癌组织;A549细胞能够表达MADD;高表达MADD能抑制A549细胞凋亡,提高其增殖活力,而沉默MADD表达则能促进A549细胞凋亡,降低其增殖活力。结论:肺腺癌组织MADD表达明显增高;MADD可通过抑制凋亡来促进肺腺癌细胞生存。     

nm23-H1基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的:研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法:构建nm23-H1基因的真核表达载体,转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中,通过G418筛选出稳定表达克隆,RT-PCR及免疫组化检测nm23-H1在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-H1基因对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期,原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果:转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-H1基因,抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-H1基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少,停滞于G0期。转染nm23-H1基因后细胞边缘的伪足减少。结论:nm23-H1基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖,可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。     

BHD基因在人肺腺癌A549细胞的表达及其对A549细胞转移能力的影响

目的 了解BHD基因在肺癌细胞中的表达部位及其在影响肺癌细胞转移、运动方面的作用. 方法 制备BHD真核表达质粒,转染肺腺癌细胞,用免疫荧光法检测Folliculin蛋白在肺癌细胞中的表达位置;筛选sRNAi片段,选取有效抑制片段转入肺癌细胞,与转入BHD质粒的肺癌细胞对比,用Transwell实验了解BHD基因对肺癌细胞运动方面的影响. 结果 转入BHD质粒后,A549细胞质内出现明显的Folliculin蛋白表达,Transwell实验显示,转入BHD质粒能抑制A549细胞的侵袭能力,而转入BHD siRNA片段的A549细胞运动迁移能力升高.结论 BHD表达产物Folliculin蛋白在肺癌细胞的胞质内表达,BHD可能是肺癌转移抑制基因.     

二氢杨梅素对肺癌A549细胞凋亡的作用

目的 探讨二氢杨梅素（DMY）对肺癌A549细胞的诱导凋亡作用。方法 以肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法研究DMY对A549细胞的抗肿瘤作用,并进一步通过流式细胞术检测DMY对A549细胞的凋亡作用,免疫印迹法（Western blotting）检测促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达水平,进一步探讨其机制。
结果 DMY浓度越大,对A549细胞的抑制作用越明显,48h的IC50为64.45g/L;流式细胞术显示,随着DMY浓度的增加A549细胞凋亡也逐渐增加;Western blotting结果显示,DMY可诱导A549细胞中凋亡因子Bax蛋白表达增加,同时抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达减少,尤其高浓度组改变明显。
结论 DMY可以在体外诱导A549细胞凋亡。     

基膜聚醣基因过表达对肺腺癌细胞A549增殖的影响及可能机制

目的 为探讨基膜聚糖(lumican)基因对肺腺癌细胞A549增殖能力的影响以及可能机制.方法 以携带人lumican基因的重组慢病毒感染A549细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选法构建稳定细胞株;荧光定量PCR和Western blot法检测lumican mRNA及蛋白的表达.采用MTT法、流式细胞仪检测细胞生长曲线、倍增时间、增殖指数,在体动物实验检测其成瘤情况,Western blot法检测RhoC、p-Akt蛋白的表达.结果 成功构建lumican基因过表达的A549细胞株;与空载体组或对照组比较,实验组细胞生长速度变快(P＜0.05)、倍增时间缩短(P＜0.05)、增殖指数增大(P＜0.05)、皮下瘤体积、瘤体质量及分裂相细胞均增加(P＜0.05),RhoC及p-Akt的蛋白表达量均增高(P＜0.05);以上各参数比较对照组与空载体组之间均没有明显差异(P＞0.05).结论 Lumican基因能促进肺腺癌细胞A549的增殖,其机理可能与RhoC及p-Akt蛋白增高有关.     

纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响

BACKGROUND: Studies have found that realgar has anti-tumor effect, but its effect on proliferation, apoptosis and migration of A549 lung cancer cells is rarely reported. OBJECTIVE: To study the effect of nano-realgar on A549 lung cancer cell proliferation, apoptosis and migration. METHODS: Cultured A549 lung cancer cells were seeded onto 6-well culture plates containing 100 mg/L nano-realgar (experimental group) or normal saline (control group). Cell growth was observed under microscope for 48 hours. Cell proliferation and apoptosis were detected using MTT assay (24, 48, 72 hours of culture) and flow cytometry (24 and 48 hours of culture), respectively. Integrin β1 and cadherin expression was detected using immunohistochemical method at 24 hours of culture. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Cell growth. In the experimental group, shrunk cells that were round or oval-shaped were scattered, and cell number was reduced. In the control group, adherent cells characterized by big size, abundant cytoplasm and fusiform shape grew vigorously. Moreover, some cells were fused into pieces. (2) Cell proliferation. The absorbance values of cells were significantly lower in the experimental group than the control group at different time (P < 0.05), while the cell growth inhibition ratio was higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (3) Cell apoptosis. The end-stage apoptotic rate and total apoptotic rate of cells were both higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (4) Immunohistochemical detection. The A549 cell surface integrin β1 and cadherin positive densities were significantly lower in the experimental group than the control group (P < 0.05). Taken together, the nano-realgar can inhibit the proliferation, invasion and metastasis, and induce apoptosis in A549 cells.     

miRNA let-7a1真核表达载体的构建及对肺癌细胞增殖的影响

目的： 构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法：以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNA pre-let-7a1基因序列, 将miRNA pre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMV neo中,构建成pSilencerTM 4.1-let-7a1重组体。将pSilencerTM 4.1-let-7a1表达载体瞬时转染肺癌A549细胞,RT-PCR法检测miRNA let-7a1在转录水平的表达。根据miRBase Targets数据库,查hsa-let-7a1靶序列,构建 let-7a1靶序列-报道基因融合质粒pMIR-report-let-7a1T,与pSilencerTM 4.1-let-7a1表达载体共转染A549细胞,通过荧光素酶活性检测pSilencerTM 4.1-let-7a1质粒对其靶序列的作用。MTT法检测pSilencerTM 4.1-let-7a1转染A549细胞后,对细胞增殖的影响。结果：pSilencerTM 4.1-let-7a1真核表达栽体和let-7a1靶序列-报道基因融合质粒经酶切及测序鉴定正确。pSilencerTM 4.1-let-7a1转染 A549细胞后,经RT-PCR证明能有效表达miRNA let-7a1。 pSilencerTM 4.1-let-7a1 质粒和pMIR-report-let-7a1T质粒共转染A549细胞后,通过报告基因检测,相对荧光素酶活性明显降低,表明pSilencerTM 4.1-let-7a1转染A549细胞后,可表达let-7a1并具有生物学活性。MTT检测结果显示：pSilencerTM 4.1-let-7a1 转染后的A549活细胞数目明显减少。结论：成功构建了真核表达载体pSilencerTM 4.1-let-7a1,转染肺腺癌A549细胞后能有效表达,miRNA let-7a1基因过表达抑制A549细胞的增殖。     

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的: 探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法: 采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨ_m)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2 μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨ_m显著下降,而细胞内活性氧和Ca²⁺浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl- 2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。     

雷帕霉素对顺铂作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、侵袭、黏附及自噬凋亡的影响

 目的:研究雷帕霉素（Rap）对顺铂（DDP）作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP 细胞增殖、迁移、黏附及其自噬凋亡的影响。方法: 培养人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞株,利用MTT方法分别检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞增殖抑制率的影响;Transwell方法检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;黏附实验检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;流式细胞术检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞凋亡的影响;Western blotting检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞自噬标志蛋白beclin-1和LC3表达的影响。 结果: 与Rap或DDP单独作用组相比,Rap和DDP联合作用能够同时显著抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、体外侵袭能力及细胞黏附能力,并能够促进细胞凋亡和自噬标志蛋白beclin-1和LC3的表达（均P＜0.05）。结论: Rap能够通过促进细胞自噬而增强DDP的作用,进而抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞的增殖、侵袭、黏附并促进细胞凋亡作用,具有协同作用。     

Opposing effect by cytokines on Fas-mediated apoptosis in A549 lung epithelial cells.

Tissue repair is determined by many signals provided in the local environment. Central to this process is the commitment of the parenchymal cell to undergo apoptosis, survive, or proliferate following inflammation. We hypothesize that lung epithelial cell apoptosis is influenced by exposure to cytokines released into the alveolar microenvironment during the inflammatory process. In this investigation we demonstrate that interferon (IFN)-gamma and interleukin (IL)-1beta have opposing effects on Fas-mediated apoptosis in A549 cells, a human lung epithelial cell line. Exposure to IFN-gamma before Fas activation significantly increased caspase activity, caspase processing of CK-18, a key cytoskeletal protein in epithelial cells, and increased the appearance of apoptotic nuclei. Induction of Fas-mediated death by IFN-gamma was 3-fold higher than with Fas activation alone. In contrast, pretreatment with IL-1beta before Fas activation completely inhibited apoptosis. Furthermore, our results demonstrate that IFN-gamma and IL-1beta induce opposite effects at multiple checkpoints during Fas-mediated apoptosis. Most striking, IL-1beta prevented the activation of caspases involved in Fas-mediated death by inducing an anti-apoptotic effect proximal to or at the point of caspase-8 activation. Finally, our investigation demonstrates that the differential impact of IL-1beta and IFN-gamma on Fas-mediated apoptosis are in part dependent on modulation of the PI 3-K/Akt survival pathway.