脂质体介导的VEGF-C反义寡核苷酸对肺腺癌细胞系 A549生长、凋亡的影响

目的 探讨脂质体介导的血管内皮生长因子C(VEGF-C) 反义寡核苷酸对肺腺癌细胞系 A549生长、凋亡的作用.方法 将 A549 细胞随机分为磷酸盐缓冲液对照组(PBS组)、正义寡核苷酸对照组(SODN组)和反义寡核苷酸转染组(AODN组),应用细胞计数方法计数每组细胞数,苏木精-伊红(HE)染色法观察细胞形态及分布,流式细胞仪分析A549细胞凋亡情况.应用Western印迹方法检测转染后各组A549细胞中VEGF-C蛋白表达.结果 VEGF-C反义寡核苷酸转染后,AODN组细胞生长受抑程度显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),生长缓慢且核分裂像较对照组明显减少.流式细胞仪检测结果显示AODN组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).Western印迹结果显示VEGF-C反义寡核苷酸可明显抑制VEGF-C基因表达.结论 脂质体介导的VEGF-C反义寡核苷酸能有效地干扰VEGF-C基因表达,并可抑制肺腺癌A549细胞生长并促进其凋亡.     

吲哚美辛联合奥沙利铂对人肺癌A549细胞株裸鼠移植瘤微淋巴管生成的影响及其化疗增敏作用

目的 研究非甾体抗炎药物吲哚美辛与化疗药物奥沙利铂对人肺癌A549细胞株裸鼠移植瘤微淋巴管生成的影响及化疗增敏作用.方法 将人肺癌A549细胞接种于裸鼠背部皮下,将裸鼠按随机数字表法分为4组:对照组、吲哚美辛组、奥沙利铂组、吲哚美辛和奥沙利铂联合用药组,并给予相应的药物.观察裸鼠生长情况,每7天测量1次肿瘤体积.42 d后处死裸鼠,切取移植瘤组织,用免疫组织化学染色法检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)、β-连环素及生存素蛋白的表达,并测定微淋巴管密度,用实时荧光定量PCR检测VEGF-C mRNA及生存素mRNA的表达.用SPSS 16.0软件进行统计学分析,实验数据以((-x)±s)表示.多组间比较用方差分析,多组样本均数两两比较采用SNK检验,两变量的相关程度采用直线相关分析.结果 (1)吲哚美辛组、奥沙利铂组和联合用药组治疗后移植瘤体积分别为( 1322±327) mm3、(962 ±221) mm3和(611±161) mm3,低于对照组的(1664 ±318) mm3(F=23.33,P＜0.01);(2)吲哚美辛组和联合用药组VEGF-C、生存素、β-连环素蛋白的表达及微淋巴管密度积分吸光度值均低于对照组(均P＜0.05).奥沙利铂组VEGF-C蛋白含量(20 825±2067)高于对照组(16 075±875,F=97.24,P＜0.05),β-连环素蛋白和微淋巴管密度( 17 396±1693,9666±978)与对照组(9824±1181,17 588±1698)比较无明显差异;(3) VEGF-C蛋白、生存素蛋白与微淋巴管密度呈直线正相关(r值分别为0.737和0.662,均P＜0.01),β-连环素蛋白与生存素蛋白呈直线正相关(r =0.582,P＜0.01),VEGF-C mRNA的表达与其蛋白表达呈直线正相关(r =0.873,P＜0.01).结论 吲哚美辛与奥沙利铂联合应用可提高抗肿瘤及抗微淋巴管生成作用,其作用机制可能是协同抑制了VEGF-C/VEGF受体3和Wnt信号途径.     

罗格列酮对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长和淋巴管生成的影响

背景:血管内皮生长因子-C(VEGF-C)可激活淋巴管内皮细胞表面的VEGFR-3,诱导淋巴管生成。体外研究显示PPARγ配体罗格列酮(ROS)可通过抑制VEGF-C表达抑制人胃癌细胞的淋巴管生成。目的:明确ROS在体内能否抑制胃癌生长及其淋巴管生成。方法:建立人胃癌细胞株SGC7901裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤裸鼠随机分为模型组和3组ROS组,后者分别予50、75、100 mg.kg-1.2 d-1ROS灌胃42 d。处死裸鼠,测定移植瘤体积,D2-40淋巴管内皮免疫组化染色计数微淋巴管密度(LMVD),RT-PCR和蛋白质印迹法检测VEGF-C mRNA和蛋白表达。结果:50、75、100 mg/kg ROS组移植瘤体积、肿瘤组织LMVD以及VEGF-C mRNA和蛋白表达依次降低并均显著低于模型组(P<0.05),作用呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:ROS可呈浓度依赖性地抑制人胃癌细胞祼鼠移植瘤生长,并通过下调VEGF-C表达抑制肿瘤淋巴管生成。     

VEGF反义寡核苷酸对体外生长的大肠癌HT-29细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的抑制作用.方法:实验设空白对照组、脂质体转染组、错义链转染组(SODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组).用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸(SODN)转染人大肠癌细胞株HT-29,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF mRNA的表达:Western blot测定转染48、72 h后VEGF蛋白表达:MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡.结果:转染48 h后,ASOND组的VEGF mRNA表达水平明显低于脂质体对照组和SODN组(0.455±0.032 vs 0.934±0.031,0.915±0.004,p<0.01);脂质体对照组与SODN组之间无显著差异.细胞转染48、72 h后,ASODN组蛋白表达明显弱于脂质体对照组和SODN组,且72h弱于48 h.与对照组比较.VEGF ASODN对HT-29细胞有明显的生长抑制作用,并且抑制呈剂量和时间依赖性(P<0.05).结论:VEGF ASODN通过抑制VEGF的基因表达,对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的增殖进行抑制.     

端锚聚合酶1反义寡核苷酸对人肺癌细胞增殖的影响

目的　探讨端锚聚合酶 1(tankyrase 1,TANK1)反义寡核苷酸对人肺癌细胞的影响 ,为肺癌治疗的靶向研究探索新途径。方法　合成TANK1正义寡核苷酸 (TANK1 SODN)、反义寡核苷酸(TANK1 ASODN) ,待人肺癌细胞株CALU在裸鼠蹊部皮下接种成瘤后 ,将成瘤裸鼠随机分成 3组 :对照组 4只 (每天上午于瘤体内多位点注射生理盐水 2 0 0 μl/只 ) ,正义组 (每天同法注射含TANK SODN10 0 μg的生理盐水 2 0 0 μl/只 )和反义组 (每天同法注射含TANK ASODN 10 0 μg的生理盐水 2 0 0 μl/只 )各 5只 ,观察肿瘤的生长情况及组织学改变。用链霉亲和素 生物素 酶复合物 (SABC)法检测肿瘤细胞Ki6 7及端粒酶反转录酶 (hTERT)的阳性表达率。结果　在裸鼠成瘤部位连续注射相应液体 16d后 ,反义组移植瘤体积为 (1 4 6± 0 70 )cm3 ,明显小于对照组的 (3 2 9± 0 4 7)cm3 及正义组的 (3 14±0 70 )cm3 ,差异有显著性 (P均 <0 0 1) ;肿瘤细胞Ki6 7标记指数及hTERT细胞阳性率均明显低于对照组及正义组 (P均 <0 0 1)。结论　人肺癌细胞株端粒酶呈高度表达 ,TANK1 ASODN可降低瘤细胞端粒酶活性 ,抑制肺癌细胞增殖     

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌移植瘤生长的作用

目的:检测Survivin反义寡核苷酸(ASODN)在人肝癌耐药细胞株裸鼠皮下移植瘤中的表达情况．方法:将30只裸鼠建立人肝癌耐药细胞系 SMMC-7721／ADM皮下移植瘤模型,随机分成6组:空白对照组(A)、脂质体转染对照组 (B)、正义链对照组(C)、200(D)、400(E)和 600 μg/L(F)反义链组(ASODN组),用不同的转染液注射后2,4,8,12,16,20 d,用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)和Western blot蛋白免疫印迹法检测治疗后各组肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白表达的变化．结果:注射后20 d,ASODN组肿瘤细胞生长明显抑制,空白对照组、脂质体转染对照组和正义链对照组裸鼠的mRNA和蛋白表达无明显差异,而ASODN组mRNA和蛋白表达随着时间和浓度的增加,Survivin表达减弱,E,F组与其余个组(A,B,C,D)相比有显著差异(mRNA: 0．33±0．04,0．28±0．03 vs 0．82±0．02,0．78± 0．05,0．72±0．04,0．57±0．03,P<0．05;蛋白: 34．9±3．89,21．2±3．65 vs 72．14±6．53,69．31 ±5.34,68．29±4．98,53．8±5．23,P<0．05)．结论:Survivin反义寡核苷酸能够下调 Survivin mRNA和蛋白的表达,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长．     

NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子和NF-κB表达的影响

目的:探讨NF-κB p65反义寡核苷酸对实验性结肠炎BALB/c小鼠肠黏膜NF-κB表达的抑制作用和对黏膜肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-10、IL-1β)表达的影响,研究其对肠道炎症的治疗作用.方法:将50只BALB/c小鼠均分为模型对照组(UC组)、NF-κB p65反义寡核苷酸组(ASODN组)、错义寡核苷酸组(MSODN组)和正义寡核苷酸组(SODN组),采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠造模.造模后24h后对各组进行相应灌肠治疗,灌肠后第7天处死小鼠,行光镜下观察肠黏膜炎症并评分,免疫组化检测各组小鼠肠黏膜CTNF-α、IL-1β、IL-10和NF-κB表达.结果:ASODN组小鼠在结肠炎症评分较UC组、MSODN组和SODN组明显改善(均P<0.05).ASODN组小鼠TNF-α、IL-1β、NF-κB表达较UC组、MSODN组和SODN组明显减少(82.68±14.30 VS 168.48±11.89,166.49±11.63,176.49±12.33, P<0.05;42.42±5.77 VS 168.48±11.89,120.43±28.21,131.43±30.601, P<0.01;62.66±11.32 VS 158.38±12.49,161.09±12.73,168.64±11.83, P<0.01),而IL-10表达则显著增多(146.68±6.02 VS 62.50±11.57,58.44±10.92,54.24±10.64, P<0.01).结论:NF-κB p65反义寡核苷酸可抑制NF-κB的活化,降低TNF-α、IL-1β表达,升高IL-10的表达,减轻小鼠结肠炎症,可用于治疗实验性结肠炎.     

survivin ASODN对人胰腺癌PANC细胞移植瘤生长的影响及机制探讨

目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤生长及瘤组织中survivin、PTEN、CEACAM-1表达的影响,并探讨其作用机制。方法构建28只人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、正义寡核苷酸(SODN)组、ASODN组、脂质体组,各7只,分别于瘤周及瘤体注射50μL的PBS、SODN、ASODN、脂质体+无血清DMEM。注射结束后2 d,切取瘤体,测算肿瘤生长抑制率和生长指数,免疫组化法检测瘤组织中的survivin、PTEN、CEACAM-1蛋白,TUNEL染色镜下观察细胞凋亡情况,半定量RT-PCR检测瘤组织中的survivin mRNA、PTEN mRNA、CEACAM-1 mRNA。结果与其他三组相比,ASODN组肿瘤生长抑制率高、生长指数低、细胞凋亡指数高(P均<0.05),其瘤组织中survivin和CEACAM-1表达下降、PTEN表达上升(P均<0.05)。结论 survivin ASODN可有效抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin和CEACAM-1的表达、促进PTEN的表达有关。     

血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用。方法复制小鼠Lewis肺癌模型24只,随机分为对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)组、VEGF错义寡核苷酸(MSODN)组,每组8只,接种肿瘤细胞24h内分别给予生理盐水、VEGF-ASODN、VEGF-MSODN皮下注射,隔日一次,共15次。检测皮下移植瘤的变化和肺转移率,并用免疫组织化学的方法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),及用Western blot的方法检测肿瘤组织VEGF蛋白表达。结果ASODN组和MSODN组的抑瘤率分别为47.34%和7.28%,具有显著差异(P<0.01);ASODN组肺转移率为37.5%,低于MSODN组(75.0%)和对照组(87.5%);ASODN组MVD为12.29±2.06,低于MSODN组(17.38±3.24)和对照组(20.14±3.90)(P<0.05);且ASODN组VEGF蛋白表达亦明显减弱。结论VEGF-ASODN可抑制小鼠Lewis肺癌的生长和转移,为肺癌的治疗提供新的方法。     

Bcl-2反义寡核苷酸对环已亚胺诱导U251细胞凋亡的影响

目的 探讨Bcl-2反义寡核苷酸对环已亚胺（CHX）诱导胶质瘤细胞U251凋亡的影响。方法在光镜下观察Bcl-2反义寡核苷酸、CHX及二者联合应用对U251凋亡的形态学改变;应用MTT法检测各组U251细胞的抑制率;通过DNA电泳检测CHX诱导U251细胞凋亡的情况。结果 Bcl-2反义寡核苷酸可明显促进CHX诱导的U251凋亡,对照组、SODN组与CHX组、AODN组、SODN＋CHX组及AODN＋CHX组的细胞抑制率相比P均〈0．01,AODN组、SODN＋CHX组和AODN＋CHX组的细胞抑制率相比P均〈0．01;Bcl-2反义寡核苷酸可促进细胞凋亡,呈现出特征性的DNA梯状带。结论Bcl-2反义寡核苷酸和CHX均可诱导胶质瘤细胞U251发生凋亡,且Bcl-2反义寡核苷酸可明显促进CHX诱导的胶质瘤细胞U251凋亡,提高胶质瘤细胞对CHX的敏感性。     

Survivin反义寡核苷酸抑制宣威肺腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的研究靶向survivin mRNA的反义寡核苷酸对裸鼠宣威肺腺癌细胞XWLC-05移植瘤的抑制作用。方法建立宣威肺腺癌细胞XWLC-05裸鼠移植瘤模型,随机分为：空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组、反义链转染组,观察裸鼠一般活动情况、移植瘤体积、计算抑瘤率。病理学检测各组对肿瘤的影响以及对心脏、肝脏、肾脏的影响情况。结果空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组移植瘤随时间增长而增大,但3组间无显著差异（P〉0．05）。反义链转染组注射反义寡核苷酸后,裸小鼠肿瘤生长速度较为缓慢;肿瘤重量低于其他3组;其肿瘤生长抑制率高于其他3组（P〈0．05）;病理检查见瘤组织中有大量的细胞坏死灶。各组裸鼠均未出现死亡,病理检查重要脏器未见明显损害。结论survivin反义寡核苷酸能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,未对其他脏器产生明显损害。     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌A-549细胞株侵袭力的影响

目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞株A-549体外侵袭力的影响。方法应用脂质体介导的VEGF-C正义、反义寡核苷酸转染人肺癌细胞株A-549细胞,并设对照组,检测癌细胞的侵袭力变化。结果经VEGF-CASODN转染的A-549细胞株黏附能力显著降低(P0.01),对重组基底膜体外侵袭能力明显减弱(P0.01)。结论 VEGF-CASODN能够明显抑制肺癌细胞株A-549体外侵袭力。     

基质金属蛋白酶9反义寡核苷酸治疗人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的 探讨以基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)为靶点反义基因治疗人 肺腺癌移植瘤的可行性.方法 常规体外培养A549细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型.裸鼠成瘤后,随机分为4组.以脂质体(liposome,Lip)包裹的MMP-9反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率和肿瘤生长指数,并观察对心、肝、肾组织有无毒副作用.结果 MMP-9 ASODN/Lip组肿瘤生长指数为3.20±0.14,明显低于其他三组(MMP-9 SODN/Lip组为5.93±0.20,Lip组为5.874±0.02,对照组为6.40±0.33)(P＜0.01);MMP-9 ASODN/Lip组的瘤重为(1.25±0.03)g,明显低于其他三组[MMP-9 SODN/Lip组为(2.15±0.07)g,Lip组为(2.31±0.04)g,对照组为(2.43±0.04)g](P＜0.01);MMP-9 ASODN/Lip组抑瘤率为(33.41±1.18)%,心、肝、肾组织结构基本正常.结论 MMP-9 ASODN可以抑制人肺腺癌移植瘤的生长,对心、肝、肾组织无明显不良反应;特异性靶向MMP-9 ASODN可能成为肺癌的辅助治疗方法.     

存活素与血管内皮生长因子反义寡核苷酸对人甲状腺髓样癌裸鼠模型的作用

目的探讨存活素与血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人甲状腺髓样癌（MTC）裸鼠模型的作用。方法构建的28只人甲状腺髓样癌裸鼠模型，随机分配到对照组和治疗组。对照组包括未处理组，正义寡核苷酸（SODN）组（VEGF SODN组和存活素SODN组）和SODN联合组；治疗组包括ASODN组（VEGF ASODN组和存活素ASODN组）和ASODN联合组。各组每日一次瘤内注射相应处理液，连续7d。治疗结束后l周末，杀死全部瘤鼠，切取瘤体，测算瘤重和抑瘤率以评价肿瘤生长情况，瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化和DNA末端原位标记法（TUNEL法）染色以评价组织病理构造、VEGF与存活素蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示，治疗组血管生成明显降低。此外，相对于对照组，治疗组具有显著的VEGF和存活素低表达、高凋亡、低瘤重和高抑瘤率特点（均P〈0．01），并且ASODN联合组较ASODN组更为显著（均P〈0．05），而对照组间和SODN组间未见上述各特点的统计学差异。结论在裸鼠MTC模型，人甲状腺髓样癌存活素和VEGF的单或双靶向基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果。并且联合治疗更为突出。这为发展甲状腺髓样癌的基因治疗提供了实验依据。     

利用siRNA抑制环氧合酶-2对人胃癌裸鼠移植瘤的影响

目的 观察环氧合酶2(COX-2)对人胃癌裸鼠移植瘤的影响并探讨其机制.方法 构建靶向COX-2表达质粒和在BALB/c裸鼠皮下建立SGC-7901人胃癌细胞动物模型,用COX-2表达质粒基因转染治疗.结果 构建的COX-2表达质粒在体内、外均可稳定表达.COX-2基因治疗可抑制裸鼠皮下肿瘤的生长和淋巴管的生成.COX-2基因转染下调血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达.结论 通过构建靶向COX-2 siRNA真核表达载体可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长和淋巴管生成,COX-2对抑制胃癌细胞(SGC-7901)治疗有确切效果.     

血管内皮生长因子受体2反义核酸体内抑制人乳腺癌生长作用研究

目的 探讨血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR)反义寡核苷酸(asONs)在体内对人乳腺癌生长的抑制作用. 方法构建MCF-7乳腺癌裸鼠模型,将14只裸鼠随机分为生理盐水对照组及反义核酸(asON4)组,asON4按50 mg/kg剂量腹腔注射,1次/d,共20 d;对照组给予相应体积的生理盐水.给药过程中测量各组裸鼠瘤结节的大小;21 d时收集肿瘤标本,免疫组化法检测移植瘤的增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平. 结果在荷瘤鼠模型中,KDR反义核酸组瘤结节生长变慢,瘤结节大小及移植瘤PCNA阳性细胞数明显低于生理盐水对照组(P<0.05). 结论 KDR反义核酸显著抑制KDR蛋白表达,在体内抑制了乳腺癌增殖.     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCC)中血管内皮生长因子C(VEGF-C)信使核糖核酸(mRNA)的表达及其反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞的作用.方法 应用原位杂交技术检测48例新鲜肺癌标本中VEGF-C mRNA的表达,将脂质体介导的VEGF-C ASODN转染人肺癌细胞株A-549,用Western印迹法检测肺癌细胞VEGF-C蛋白的表达.结果 VEGF-C mRNA在肺鳞癌和腺癌细胞中的表达阳性率分别为65.4%(17/26)和59.1%(13/22),经VEGF-C ASODN转染的细胞株A-549中,VEGF-C蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论 VEGF-C mRNA在NSCC中有一定程度的表达,体外实验VEGF-C ASODN通过下调VEGF-C蛋白的表达抑制肺癌细胞的侵袭作用.     

VEGF反义寡核苷酸对淋巴瘤新生血管生成的抑制作用

目的研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠淋巴瘤血管生成的作用。方法将终浓度为20μmol/L的VEGFASODN、错义序列及PBS分别与人淋巴瘤细胞系Namal-wa细胞孵育24h,裸鼠随机分为VEGFASODN组、错义序列组和对照组,将上述处理的Namalwa细胞(5×106溶于PBS液20μl)接种于裸鼠皮下,4周后处死全部裸鼠,测定肿瘤大小,标本采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组化法(SP法)检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果第28天VEGFASODN组、错义序列组和PBS组肿瘤体积的大小分别为(212.6±196.5)、(468.2±161.3)和(473.1±166.7)mm3。VEGFASODN组微血管密度(12.26±0.78)较对照组(24.13±1.21)显著减少。结论VEGFASODN对裸鼠淋巴瘤的生长及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

MicroRNA-486-5p通过下调Neuropilin-2的表达抑制人大肠癌中微淋巴管的生成

目的:探讨过表达micro RNA-486-5p(mi R-486-5p)对人大肠癌细胞系SW620体内生长的作用及其作用机制的研究.方法:构建mi R-486-5p的过表达质粒,体外脂质体法瞬时转染人大肠癌细胞SW620;建立人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每3 d瘤周注射mi R-486-5p过表达质粒,对照组注射等量的空白载体.每天观察肿瘤的生长情况并每3 d测量肿瘤的体积;实时荧光定量-PCR(Real-time PCR)检测各组肿瘤组织中mi R-486-5p的表达水平;免疫组织化学技术检测移植瘤内神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2,NRP2)及微淋巴管的的分布情况;Western blot技术检测各组移植瘤中NRP2蛋白的表达.结果:转染后,实验组中mi R-486-5p的相对表达量较对照组提高12.57±2.31倍,过表达m i R-486-5p后实验组裸鼠皮下移植瘤的生长速度较对照组明显减缓(P0.05),瘤体质量明显减轻(P0.05).过表达mi R-486-5p可明显抑制NRP2蛋白的表达(P0.05),此外,mi R-486-5p组微淋巴管密度降低.结论:过表达mi R-486-5p可明显抑制大肠癌细胞的生长,抑制微淋巴管的生成,这可能与下调NRP2蛋白的表达有关.     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷诱导裸鼠HepG2种植瘤细胞T-cadherin的表达及其对种植瘤的抑制作用

目的: 探讨去甲基化药物5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)在裸鼠体内诱导HepG2细胞T-cadherin的表达,及其对HepG2种植瘤生长的抑制作用.方法:皮下接种法建立HepG2细胞裸鼠种植瘤模型,随机分为实验组(11只)和对照组(10只).实验组裸鼠给予5-Aza-CdR注射,对照组裸鼠注射等量PBS.4wk后处死裸鼠,观察种植瘤的生长情况,用RT-PCR技术及免疫组织化学技术检测T-cadherin mRNA及蛋白的表达.结果:用药4wk后,实验组肿瘤组织的T-cadherin mRNA的表达水平显著高于对照组(t=6.613, P<0.05);对照组HepG2细胞几乎检测不到T-cadherin蛋白表达,而实验组裸鼠种植瘤细胞膜上可检测到T-cadherin蛋白表达;实验组肿瘤的平均体积明显小于对照组肿瘤平均体积(t=2.337,P=0.025).结论:5-Aza-CdR能诱导裸鼠皮下种植HepG2瘤细胞的T-cadherin表达,抑制HepG2种植瘤的生长,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的T-cadherin启动子去甲基化,恢复T-cadherin的表达,从而抑制HepG2种植瘤生长.