银杏叶提取物对乙醇、鱼油诱导的E47细胞内细胞色素P450 2E1表达的影响

目的:研究银杏叶提取物(GBE)对乙醇、鱼油诱导后的E47细胞内细胞色素P450 2E1(CYP2E1)表达的影响.方法:E47细胞随机分为5组接种培养.对照组:用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养.乙醇组:接种24 h后换含100 mmol/L乙醇、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养.鱼油组:接种24 h后换含3 μmol/L鱼油、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养.GBE 乙醇组:接种24 h后用150 g/L GBE作用3 h,用PBS洗2次后换用100 mmol/L乙醇、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养.GBE 鱼油组:接种24 h后用150 g/L的GBE作用3 h,用PBS洗2次后换用含3 μmol/L鱼油、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养.培养24 h后,Western blot法观察E47细胞CYP2E1蛋白的表达,用对硝基苯酚探针测定全细胞CYP2E1的活性,测定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果:与对照组比较,乙醇组、鱼油组细胞CYP2E1蛋白表达量及活性、MDA含量升高,SOD含量降低(P均<0.05).与乙醇组、鱼油组比较,GBE 乙醇组、GBE 鱼油组细胞CYP2E1蛋白表达量及活性、MDA含量降低,SOD含量增高(P均<0.05).结论:GBE能抑制CYP2E1的表达和活性,减轻脂质过氧化反应.     

脂多糖对牙周膜成纤维细胞IL-8和RANKL基因表达的调节作用

目的:研究牙龈卟啉单胞菌（P. g.）脂多糖（LPS）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）中白细胞介素８（ＩＬ－８）和NF-κB 受体活化因子配体 (RANKL)基因表达的调节。 方法:取第4代hPDLFs细胞在含有10%胎牛血清（ＦＣＳ）的DMEM培养基中培养至完全融合后,分别用0.01、0.1、1、10 、100 mg/L P.g. LPS 作用hPDLFs 10 h,实时荧光定量PCR检测IL-8和RANKL mRNA的表达水平。 结果:P.g. LPS 浓度依赖性地刺激hPDLFs中IL-8 和RANKL mRNA的表达水平升高,10 mg/L P.g. LPS上调IL-8 mRNA水平,达到峰值（P＜0.01）;100 mg/L P.g. LPS显著增强RANKL mRNA水平（P＜0.01）。结论:高浓度的 P.g. LPS明显刺激hPDLFs中IL-8和RANKL的基因表达增强。     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞基质金属蛋白酶2活性和表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性和表达的影响。 方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,糖化牛血清白蛋白作为刺激物,未经糖化的牛血清白蛋白及常规培养作为对照,分别用含100 mg•L^-1 AGEs（AGEs组）、100 mg•L^-1牛血清白蛋白（BSA组）和不含刺激物（DMEM组）的无血清DMEM培养基,作用于系膜细胞48 h后,酶谱法检测各组系膜细胞上清MMP-2活性,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测系膜细胞MMP-2 mRNA的表达。 结果：与BSA组及DMEM组比较,AGEs组系膜细胞MMP-2 mRNA的表达明显下降(P<0.01),上清MMP-2活性明显降低(P<0.01)。 结论：AGEs能降低大鼠肾小球系膜细胞MMP-2的活性和表达。     

高糖刺激对大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体表达的影响

目的:观察体外高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体基因及其蛋白表达变化。方法:正常大鼠近端肾小管上皮细胞细胞株(NRK-52E)常规培养于含10%灭活新生胎牛血清的低糖DMEM培养液传代培养,待细胞生长至亚融合状态时,更换为无胎牛血清低糖DMEM培养基培养24h使其同步化,将NRK-52E细胞分为5组:A组为正常对照组,低糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖5.5mmol/L);B组为高糖刺激12h组:高糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖25mmol/L)刺激12h;C组为高糖刺激24h组:高糖DMEM完全培养液刺激24h;D组为高糖刺激48h组:高糖DMEM完全培养液刺激48h;E组为高糖刺激72h组:高糖DMEM完全培养液刺激72h。然后分别提取各组总RNA和总蛋白,分别用RT-PCR检测各组目的基因AdipoR 1/2mRNA的表达,Western印迹法检测各组目的蛋白AdipoR 1/2蛋白的表达。结果:脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)在NRK-52E细胞中均有表达;在高糖刺激情况下,随着刺激时间的延长,目的基因AdipoR 1/2mRNA的表达均有先增高后降低的趋势,在刺激24h时升高到最高点,和对照组相比有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,高糖刺激后各时间点AdipoR 1/2蛋白的表达有上升的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NRK-52E细胞AdipoR1/2蛋白的表达不受高糖刺激的影响;高糖影响NRK-52E细胞AdipoR1/2mRNA的表达,并随着刺激时间的延长表现出先增高后降低。高糖通过影响脂联素受体基因的表达从而影响脂联素发挥其生物学作用,以致影响大鼠近端肾小管上皮细胞的功能。     

培养基对兔骨髓间充质干细胞体外扩增的影响

目的考察含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基(DMEM HG, 10％FBS)、10％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG,10％FBS)、15％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 15％FBS)、20％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 20％FBS)对兔骨髓间充质干细胞体外贴壁、扩增的影响。方法① 选2月龄的新西兰大白兔,股骨转子间区抽取骨髓利用密度梯度离心贴壁法分离纯化细胞,体外培养。选取传代第一代骨髓间充质干细胞 (passenger one, P1)分别用以上4种细胞培养基培养,测细胞扩增倍数;② 选取传代第二代骨髓间充质干细胞(passenger two, P2)分别将以上4种细胞培养基混悬液接种于24孔板中,观察细胞生长状态并测生长曲线;③ 选取4种培养基中培养效果最好的一组细胞,以密度0.5×104/mL接种于24孔板中,成骨诱导,茜素红染色测其矿化能力。结果DMEM LG(15％FBS) 组中细胞扩增倍数为(16.20±1.60)倍,细胞集落形成数为6.11±1.17,与其它组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,并矿化能力最强。结论DMEM LG (15%FBS)培养基较其他3种培养基更符合兔骨髓间充质干细胞体外扩增培养的条件,且更好的保持了细胞的正常形态和生物活性。     

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠肺微血管VEGF、VEGFR2、PAI-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的通过观察肺纤方提取物干预体外培养肺微血管的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR 2)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)基因表达的影响,探讨肺纤方干预肺纤维化微血管生成的机制。方法从肺纤维化模型大鼠分离培养肺微血管内皮细胞,将其等量分为模型组,氯沙坦组,泼尼松组,肺纤方大、中、小剂量组。模型组加入含20%胎牛血清的DMEM培养基,氯沙坦组加入含20%胎牛血清及10 mg/L氯沙坦的DMEM培养基,泼尼松组加入含20%胎牛血清及5 mg/L泼尼松的DMEM培养基,肺纤方大、中、小剂量组分别加入含20%胎牛血清及100、60、20 mg/L肺纤方提取物的DMEM培养基,分别作用24 h。双链嵌合荧光染料SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测VEGF、VEGFR 2、PAI-1与VCAM-1的mRNA转录水平。结果与模型组比较,肺纤方大、中、小剂量组VEGF基因表达水平均显著降低,而VEGFR2无显著差异;肺纤方大剂量组PAI-1 mRNA表达显著降低;肺纤方大、中剂量组VCAM-1 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论肺纤方可通过抑制肺微血管VEGF、PAI-1及VCAM-1的表达改善血凝及纤溶,抑制血管形成而发挥抗肺纤维化作用。     

Drp1和Mfn2在棕榈酸诱导大鼠肝细胞损伤中的作用机制及姜黄素衍生物L6H4的干预作用

目的：研究棕榈酸（PA）诱导肝细胞损伤的体外模拟非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型中线粒体发动相关蛋白1（Drp1）和融合蛋白2（Mfn2）的作用机制以及姜黄素衍生物L6H4的保护作用。方法：①分别以不同浓度的PA、油酸（OA）和PA+姜黄素衍生物L6H4的混合培养基培养大鼠BRL-3A正常肝细胞24 h。用MTT法检测细胞活力,以筛选制作体外模拟NAFLD模型的最佳PA浓度及姜黄素衍生物L6H4的干预浓度。②将细胞分为4组：对照组（CON组）、油酸组（OA组）、棕榈酸组（PA组）及姜黄素衍生物L6H4干预组（L6H4组）,分别给予正常培养基、含有OA的培养基、含有PA的培养基及含有PA和姜黄素衍生物L6H4的混合培养基进行干预,24 h后收获细胞。分别用羟胺法测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）含量、硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量、Real-time PCR及Western Blot法检测肝细胞Drp1、Mfn2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、TNF-α mRNA及蛋白的表达。结果：①不同浓度PA对BRL-3A细胞的生长均具有一定的抑制作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）,并呈明显剂量依赖关系,0.1 mmol/L是分界点,而0.05 mmol/L OA对细胞活力无明显影响。因此选择0.05 mmol/L PA作为最佳造模浓度以建立NAFLD体外模型。②当姜黄素衍生物L6H4干预浓度≤10 µmol/L时,细胞活力均高于75%,浓度＞20 µmol/L时,细胞活力降至50%以下,差异具有统计学意义（P＜0.05）。10 µmol/L时是分界点,因此选择5 µmol/L作为后续L6H4干预浓度。③与CON组相比,PA组细胞MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的mRNA及蛋白的表达均显著增加,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;而T-SOD活力、Mfn2、Bcl-2的mRNA及蛋白表达则显著下降,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;与PA组相比,L6H4组的MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的mRNA及蛋白的表达均显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,T-SOD活力、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达显著提高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,但Mfn2的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：姜黄素衍生物L6H4减轻PA诱导的大鼠BRL-3A正常肝细胞的损伤,其机制可能与其减少肝细胞脂质过氧化反应,抑制线粒体的分裂及其下游线粒体凋亡途径及炎症因子信号传导有关。这可能是姜黄素衍生物L6H4防治NAFLD的机制之一。     

地塞米松给药及撤药后糖皮质激素受体的表达

目的 观察地塞米松对体外培养人皮肤角质形成细胞--HaCaT细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid recep-tor,GR)α仅和β表达的调节以及撤药后GRα、GRβ基因表达的后续变化,并探讨其临床意义.方法 以含10-6mol/L地塞米松的DMEM(高糖)培养基孵育细胞,48 h后换不含地塞米松的培养摹继续孵育.在地塞米松给药后24、48 h以及撤药后24、48、72 h的不同时相点,采用RT-PCR和Western blot检测GRα、GRβ的表达变化,采用免疫荧光化学法观察GRα、GRβ的细胞内定位.结果 地塞米松给药后24、48 h,GRα的mRNA和蛋白质水平逐渐下降(P<0.05),呈时间依赖性,GRβ的mRNA和蛋白质水平均逐渐上升(P<0.05);撤药后24、48、72 h,GRα和GRβ的上述变化不同程度地向原有水平回复.结论 地塞米松下调GRα并上调GRβ,可部分解释持续外用糖皮质激素制剂后出现的激素耐受现象;下调的GRα和上调的GRβ在地塞米松撤药后呈现向其原有水平恢复的趋势,提示临床上外用激素治疗应避免长期使用.     

ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响作用

目的：探讨体外培养中ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞的肥大是否具有抑制作用。方法：新生Wistar大鼠心肌细胞在含有10%小牛血清的DMEM中培养72h后，换用无血清培养基并分别加入高糖高胰岛素、高糖高胰岛素+ERK1/2抑制剂培养48h，未加入任何药物的心肌细胞在无血清培养基中继续培养48h作为对照。检测心肌细胞肥大指标：心肌细胞表面积、总蛋白含量的变化；并检测心肌营养素1（CT-1）mRNA的表达。结果：高糖高胰岛素可增加心肌细胞表面积、总蛋白含量以及CT-1 mRNA表达。ERK1/2抑制剂可部分抑制心肌细胞的肥大，降低心肌细胞表面积和总蛋白含量，但对CT-1 mRNA表达的影响不明显。结论：ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大具有一定的抑制作用，其作用机制可能是ERK1/2抑制剂通过作用于CT-1下游或独立于CT-1之外的信号分子而参与了高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大的过程。     

复方丹参注射液对RF滑膜细胞VEGF mRNA的影响

目的:观察复方丹参注射液对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织,消化分离滑膜细胞进行分组培养。对照组:含9.0 g/L氯化钠注射液 100 ml/L胎牛血清的达氏修正依氏培养基(DMEM)培养;复方丹参低剂量组:1.5μg/ml复方丹参 100 m l/L胎牛血清的DMEM培养;复方丹参高剂量组:150μg/m l复方丹参 100 ml/L胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达。结果:复方丹参高低剂量组VEGFmRNA表达较对照组均明显降低(P<0.05)。结论:复方丹参注射液可以下调RA患者滑膜下细胞VEGF mRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。     

缺血预适应通过抑制Smad 3蛋白表达减少心肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨Smad3蛋白（smallmother against decapentaplegic）在心肌细胞缺血再灌注损伤中与心肌细胞凋亡之间的关系。方法新生SD大鼠心肌细胞随机分为3组：①正常对照组（A组）：在不含处理因素的含10％胎牛血清DMEM培养基在有氧培养箱（37℃、5％CO2和95％空气）中培养48h；②缺血再灌注（IR）诱导凋亡模型组（B组）：不含血清的低糖DMEM培养基在缺氧培养箱（95％N2和5％CO2）中培养48h后，再用10％胎牛血清DMEM培养基在有氧培养箱中培养3h；③缺血预适应（IPC）组（C组）：不含血清的低糖DMEM培养基在缺氧培养箱中培养6h后，再用10％胎牛血清DMEM培养基在有氧培养箱中培养3h，再进行缺血再灌注（步骤同B组）。结果A组、B组和C组心肌细胞凋亡率分别为（5．89±1．28）％、（26．68±6．17）％、（12．45±1．52）％，具有显著统计学差异。三组细胞Smad 3表达量分别为（21．77±2．32）％、（35．7±2．43）％、（29．47±1．36）％，具有显著统计学差异。结论Smad 3可以诱导心肌细胞缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡，而缺血预适应可抑制Smad 3的表达，从而保护心肌细胞。     

白藜芦醇对高糖高脂处理的原代人脐静脉血管内皮细胞E-选择素表达及NO分泌的影响

目的：探讨白藜芦醇对高糖、高脂培养人原代脐静脉血管内皮细胞E-选择素mRNA表达及胰岛素刺激的一氧化氮（NO）分泌的影响。方法：原代培养人脐静脉内皮细胞,以0．1μmol／L白藜芦醇预处理4h后,以高糖（33．3mmol／L葡萄糖）＋高脂（棕榈酸0．5mmol／L）DMEM培养基培养24h,以RT—PCR法检测培养细胞E-选择素的表达。部分细胞经100nmol／L胰岛素刺激25min后,以硝酸还原酶法检测培养上清NO的含量。结果：与正常对照组相比．高糖高脂培养使内皮细胞E-选择素的表达升高,同时胰岛素刺激的NO分泌降低。而白藜芦醇预处理可以明显降低E-选择素的表达,并明显促进胰岛素对内皮细胞NO分泌的刺激作用。结论：白藜芦醇可以改善高糖、高脂诱导的血管内皮细胞胰岛素刺激的NO分泌作用,并可降低E-选择素表达,保护内皮细胞的功能,从而可能在糖尿病动脉粥样硬化的防治中具有广阔的前景。     

胎盘来源间充质干细胞诱导分化为成骨细胞的实验研究

目的：掌握体外分离、培养扩增胎盘间充质干细胞的方法,探讨其成骨细胞定向诱导分化的能力。方法：用IV型胶原酶消化人胎盘组织,获得单个核细胞,接种于10%新生牛血清（FBS）低糖培养基中（DMEM）,贴壁后常规换液、传代,流式细胞仪检测其表面标志,用β 甘油磷酸钠,维生素C,地塞米松联合诱导,使胎盘贴壁细胞分化为成骨细胞,诱导后10?d检测碱性磷酸酶（ALP）活性,并行茜素红染色。结果：培养7～14?d后有少量贴壁细胞生长,逐渐呈成纤维细胞状,表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34、CD45、CD19;在成骨诱导10?d后细胞ALP活性明显增强,茜素红染色可见钙盐沉积。结论：胎盘组织可能是新的间充质干细胞来源。     

尼美舒利对氯化钴诱导的BGC-823细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利对低氧模拟剂氯化钴诱导的胃癌细胞株BGC-823 HIF-1α、VEGF表达的影响。方法：分别应用150μmol／L氯化钴单独或联合10μmol／L、40μmol／L、80μmol／L的尼美舒利作用于BGC-823细胞24h，收集细胞，应用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1α及VEGF的表达。以胎牛血清加RPMI1640培养基培养细胞作正常对照。结果：与正常对照组比较，150μmol／L氯化钴刺激24h，可显著提高细胞HIF-1α蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），但对HIF-1α mRNA表达无影响。与氯化钴单独作用比较，尼美舒利和氯化钴联合作用24h，细胞HIF-1α蛋白、VEGF mRNA和蛋白表达降低（P〈0．01），并呈剂量依赖性，但对HIF-1α mRNA表达无影响。结论：COX-2抑制剂尼美舒利可抑制氯化钴诱导的HIF-1α、VEGF表达，这可能是其抗肿瘤血管生成的机制之一。     

槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用

目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。     

VLDL对人尿酸盐转运蛋白hOAT1基因表达的影响

目的观察不同浓度极低密度脂蛋白(VLDL)对肾小管上皮细胞（HK-2 细胞）人尿酸盐转运蛋白（hOAT1）mRNA表达的影响。方法根据培养液中所含VLDL浓度的不同，将HK-2 细胞分为：① 单纯采用DMEM培养基组（对照组）；② DMEM培养基+50μmol/L VLDL组（V1组）；③ DMEM培养基+400μmol/L VLDL组（V2组）。每组培养6瓶细胞，在不同培养液中分别培养48h。采用实时荧光定量PCR检测HK 2细胞中hOAT1mRNA 的相对表达量（2^-ΔΔCt 法）。结果所有标本均能检测到hOAT1的表达，且V1组hOAT1 mRNA表达量为对照组的41.6%，V2组为对照组的34.5%。两组与对照组间差异有统计学意义（P＜0.05），但两组间差异无统计学意义（P=0.927）。结论VLDL可下调hOAT1mRNA的表达，可能与脂代谢紊乱易合并高尿酸血症有关。     

DMEM培养基体外培养阴道毛滴虫效果的实验观察

目的研究阴道毛滴虫在不同浓度胎牛血清DMEM培养基中的生长效果,比较阴道毛滴虫在DMEM培养基与15%肝浸汤培养基中的生长情况。方法调节DMEM培养基中胎牛血清终浓度分别为10%、20%、50%,接种密度为15×104/ml的阴道毛滴虫,置37℃恒温箱培养,每24小时取样一次,光镜观察虫体形态,利用血球计数板计数阴道毛滴虫增殖密度并计算增殖倍数。接种密度为1. 8×104/ml的阴道毛滴虫分别至DMEM、15%肝浸汤培养基中,比较阴道毛滴虫生长时间、增殖倍数及形态。结果接种密度为15×104/ml的阴道毛滴虫在终浓度为10%、20%、50%胎牛血清的DMEM培养基内分别培养48 h、24 h、72 h达增殖高峰。接种密度为1. 8×104/ml的阴道毛滴虫在DMEM培养基中120 h增殖倍数达高峰,为32. 63倍,虫体形态大而圆;在15%肝浸汤培养基中96 h增殖倍数达高峰,为59. 40倍,虫体形态多呈梨形;虫体在DMEM培养、肝浸汤培养基中生存时间最长分别为14 d、5 d。结论阴道毛滴虫在DMEM培养基中增殖率低于在肝浸汤培养基中,但虫体在DMEM培养基中存活时间更长,其形态大而圆,因此DMEM培养基适合阴道毛滴虫的体外生长,保种,染色,及形态观察。     

醛固酮及其拮抗剂安体舒通对高糖刺激下 肾小管上皮细胞转分化的影响

目的：通过观察高糖环境下,醛固酮（aldosterone, Aldo）及其拮抗剂安体舒通(spironolactone,SP)对大鼠肾小管上皮细胞（normal rat kidney epithelial cell,NRK-52E）转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,探讨Aldo及SP在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）肾保护作用中的机制。方法：用无血清DMEM(Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco)同步化培养NRK-52E细胞系12 h后分为6组。LG组：采用低糖（1 000 mg/L） DMEM;HG组：采用高糖（4 500 mg/L）DMEM培养;10 nmol/L Aldo组、50 nmol/L Aldo组、100 nmol/L Aldo组：分别采用高糖DMEM加10,50,100 nmol/L Aldo培养;SP组采用高糖（4 500 mg/L）DMEM加10-7 mol/L SP培养。采用细胞免疫化学、RT-PCR和Western免疫印迹方法检测各组细胞E-cadherin和α-SMA mRNA的表达情况。结果：RT-PCR结果表明,与LG组比较,HG组E-cadherin mRNA表达明显降低(P＜0.01),α-SMA mRNA表达明显升高(P＜0.05);50 nmol/L Aldo组、100 nmol/L Aldo组E-cadherin mRNA表达明显低于高糖组,而α-SMA mRNA表达明显高于高糖组(P＜0.05),两者与Aldo呈浓度依赖关系（r=-0.70,P＜0.05;r=0.67, P＜0.05）;SP组E-cadherin mRNA明显高于HG组,而α-SMA mRNA表达低于HG组(P＜0.01)。细胞免疫化学和Western免疫印迹检测表明,与低糖组比较,HG组E-cadherin蛋白表达明显减低,而α-SMA表达明显升高(P＜0.01);10 nmol/L Aldo组、50 nmol/L Aldo组、100 nmol/L Aldo组E-cadherin蛋白表达明显低于HG组,而α-SMA蛋白表达明显高于HG组(P＜0.05),与Aldo呈浓度依赖关系（r=-0.83,P＜0.05;r=0.81, P＜0.05）;而SP组E-cadherin蛋白表达明显高于高糖组,α-SMA蛋白则明显低于HG组(P＜0.05)。结论：Aldo能促进高糖环境下肾小管上皮细胞EMT的发生,致DN肾间质纤维化,而使用SP可抑制高糖诱导肾小管上皮细胞的EMT,这可能是其阻遏肾间质纤维化的重要机制。     

糖基化终末产物对肠道L细胞株胰高血糖素肽－1分泌水平及L细胞凋亡的影响

目的：探讨糖尿病糖基化终末产物（ AGEs）对肠道L细胞株GLUTag细胞凋亡及胰高血糖素肽－1（ GLP－1）分泌水平的影响。方法200μg／mL AGEs分别作用GLUTag细胞0、12、24、48 h,采用AnnexinⅤ－FITC／PI染色检测细胞凋亡率。利用ELISA检测GLUTag细胞GLP－1分泌水平。实验分5组：空白对照组不加入干预因素,仅培养于DMEM低糖培养基中;BSA对照组培养于加入BSA的DMEM低糖培养基中;AGEs 100μg／mL组培养于100μg／mL AGEs浓度的DMEM低糖培养基中;AGEs 200μg／mL组培养于200μg／mL AGEs浓度的DMEM低糖培养基中;AGEs 300μg／mL组培养于300μg／mL AGEs浓度的DMEM低糖培养基中,分别作用细胞24 h。采用AnnexinⅤ－FITC／PI染色检测细胞凋亡率。利用ELISA检测GLUTag细胞GLP－1分泌水平。结果各组细胞经药物干预24 h后,100、200、300μg／mL AGEs组的细胞凋亡率均显著高于空白对照组和BSA对照组（ P＝0.000）;且300μg／mL AGEs组的细胞凋亡率最高（P＜0.05）,100、200、300μg／mL AGEs组的细胞分泌GLP－1浓度显著低于空白对照组和BSA对照组（P＝0.000）,且300μg／mL AGEs组最低（P＜0.05）。200μg／mL AGEs作用12、24、48 h后的细胞凋亡率显著高于BSA对照组（P＝0.000）,且作用48 h组凋亡率最高（P＝0．000）;200μg／mL AGEs作用12、24、48 h后的细胞分泌GLP－1浓度均显著低于BSA对照组（P＝0．000）;且作用48 h最低（P＜0.05）。结论肠道L细胞株GLUTag细胞的凋亡在相同作用时间下随着AGEs的浓度升高而增多,且在相同剂量下随着AGEs的作用时间延长而增多。 AGEs可呈剂量、时间依赖性诱导肠道L细胞凋亡,并显著降低L细胞分泌GLP－1的能力。     

肿瘤坏死因子-α对NIH3T3细胞成熟化作用的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α (TNF-α)对NIH3T3细胞成熟化所起的作用.方法 体外培养NIH3T3成纤维细胞,将细胞分为空白对照组(A组)、TNF-α组(B组)及TNF-α+Anti-TNFRSF1B组(C组).细胞制成 2×108/L的细胞悬液后,接种于25 cm2培养瓶中,待细胞呈汇合状态时,换用无血清DMEM高糖培养基培养12～16 h.然后A组换用含体积分数0.02胎牛血清的DMEM高糖培养基继续培养;B组换用含100 μg/L TNF-α的培养基培养;C组先加入浓度为50 μg/L的Anti-TNFRSF1B作用1 h后,倒出培养基后再加入含100 μg/L TNF-α的培养基继续培养.然后采用RT-PCR方法测定各组Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶3(MMP3)mRNA的表达,Western Blot方法测定各组Ⅰ型胶原蛋白和MMP3蛋白的表达.结果 B、C组 MMP3 mRNA及蛋白的表达较A组升高,差异均有显著意义(t=-13.413～5.076,P<0.05);B组较C组升高,差异也具有显著意义(t=4.441～5.076,P<0.01);B、C组Ⅰ型胶原的表达较A组降低,差异也均有显著性(t=-4.950～5.808,P<0.05),B组较C组降低,差异也均有显著性(t=-4.950～-3.823,P<0.05).结论 TNF-α可促进NIH3T3细胞活化.