微囊藻毒素-LR致小鼠蛋白质氧化损伤的作用

目的：探讨微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织蛋白质的氧化损伤程度。方法：用3.0、6.0和12.0μg/kg3种不同浓度的微囊藻毒素-LR对小鼠进行腹腔注射染毒（n=5）,染毒时间为7d,每天1次,并设阴性对照组。用2,4-二硝基苯肼比色法测定3种组织的蛋白质羰基含量。结果：随着微囊藻毒素-LR剂量的升高,小鼠肝、肾和睾丸的蛋白质羰基含量升高（F分别为44.631、21.975和23.962,P均〈0.001）。3.0μg/kg染毒组肝、肾蛋白质羰基含量[（3.72±0.23）和（3.99±0.48）mmol/kg]高于阴性对照组[（2.90±0.22）和（3.27±0.23）mmol/kg]（P均〈0.05）。3.0μg/kg染毒组睾丸蛋白质羰基含量[（1.91±0.25）mmol/kg]与阴性对照组[（1.69±0.27）mmol/kg]相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。6.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[（4.55±0.45）、（4.44±0.53）和（2.53±0.24）mmol/kg]和12.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[（5.62±0.55）、（5.67±0.60）和（3.15±0.41）mmol/kg]均高于阴性对照组（P均〈0.01）。结论：微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织的蛋白质有氧化损伤作用。     

不同方法检测微囊藻毒素-LR致DNA氧化损伤

目的 观察微囊藻毒素-LR(MCLR)对人肝癌细胞HepG2的DNA氧化损伤效应.方法 应用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)和免疫酶染色法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平.结果 用HPLC-ECD法分析,低、中剂量组8-OHdG水平显略有增高趋势,高剂量组(100μmol/L)8-OHdG水平显著高于空白对照组;用免疫酶染色法分析,各剂量组8-OHdG染色强度明显高于空白对照组,处理剂量与8-OHdG水平之间呈现剂量-反应关系.结论 MCLR引起人肝癌细胞DNA氧化损伤,HPLC-ECD法与免疫酶染色法所测损伤的趋势一致.免疫酶染色法能够更灵敏地检测DNA氧化损伤,可应用于人类疾病研究与环境监测.     

还原型谷胱甘肽对微囊藻毒素-LR染毒小鼠肝脏抗氧化功能的影响

目的：探讨抗氧化剂还原型谷胱甘肽（GSH）对微囊藻毒素‐LR（MC‐LR）染毒小鼠肝脏抗氧化功能的影响。方法选择健康清洁级5周龄昆明种小鼠40只,通过随机抽样的方法分为5组,生理盐水对照组、GSH对照组、MC‐LR染毒组、MC‐LR染毒＋ GSH低剂量组（GSH低剂量干预组）、MC‐LR染毒＋GSH高剂量组（GSH高剂量干预组）,每组8只,雌雄各半,经腹腔注射持续染毒15 d ,检测肝脏组织病理变化情况及肝脏组织 GSH水平、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH‐Px）活力和丙二醛（MDA）水平。结果与生理盐水对照组比较,MC‐LR染毒组肝细胞GSH水平及SOD、GSH‐Px活力明显降低（P＜0．05）,MDA水平明显增高（P＜0．05）。与MC‐LR染毒组比较,GSH低、高剂量干预组GSH水平及SOD、GSH‐Px活力均增高（P＜0．05）,MDA水平均降低（P＜0．05）。结论 GSH干预后可减轻MC‐LR所致小鼠肝脏氧化毒性,对肝脏具有一定的保护作用。     

活性氧在微囊藻毒素-LR致细胞毒性中的作用

目的:探讨活性氧在微囊藻毒素-LR(MCLR)致细胞毒性中的作用.方法:不同剂量的MCLR作用HepG2细胞后,测定乳酸脱氢酶漏出率来反映细胞毒性,用荧光法和电子自旋共振技术分别检测细胞内总活性氧和羟自由基水平.结果:HepG2细胞经MCLR处理后,LDH漏出率呈剂量-反应式增加.抗氧化剂过氧化氢酶明显减轻MCLR诱导的细胞毒性.MCLR引起细胞内总活性氧及羟自由基水平升高.结论:MCLR增加了细胞内ROS的形成,羟自由基可能在MCLR引起的细胞毒性方面起着重要作用.     

微囊藻毒素LR对胎鼠的致畸和损伤作用

目的：研究和探讨微囊藻毒素LR（MCLR）对SD孕鼠及胎鼠的致畸和损伤作用,方法64只雌性SD大鼠分为3个实验组和1个对照组,每组16只大鼠,实验组分别腹腔注射MCLR4、16．62μg/kg,对照组注射等量生理盐水,共10d。20d后处死孕鼠,观察脏器的畸形及组织学变化。结果：不同剂量的MCLR均可通过胎盘屏障进入胎鼠体内影响胚胎的形成和发育,导致胎鼠发育畸形或脏器发育不良及损伤,当给孕鼠剂量为62μg/kg的MCLR时,畸胎率为11．70‰（2／172）;同时胎鼠肝脏呈点状出血及重度水样变性;肾脏皮质和髓质发育不良,肾小球未发育,呈肾芽胚状结构,当MCLR剂量为16μg/kg时,仍可出现胚胎外形畸形,畸胎率为6．76‰（1／155）;肝脏呈重度水样变性,且肾小球发育欠佳。结论：MCLR可透过胎盘屏障造成肝、肾等脏器损伤,可能胚胎期就已形成肝癌高发基础。     

微囊藻毒素-LR长期低剂量暴露诱导小鼠肾脏结构和功能损伤：基于激活PI3K/AKT信号通路

目的 探讨微囊藻毒素-LR（MC-LR）长期低剂量暴露对肾脏的毒性作用及其潜在的分子机制。方法 构建MC-LR慢性染毒体内模型,将20只C57BL/6小鼠随机分成4组,分别给予含0、1、60、120 μg/L MC-LR的饮用水染毒12月。构建MC-LR染毒体外模型,将HEK293细胞分为对照组,MC-LR染毒组,PI3K抑制剂LY294002组,LY294002+MC-LR组。在体内模型中监测小鼠体质量和肾脏质量,观察小鼠肾脏组织损伤。在体内外模型中检测小鼠肾脏和HEK293细胞的肾功能指标,炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA表达水平以及PI3K/AKT通路蛋白的相对表达水平。结果 体内模型中：各组小鼠体质量变化的总体趋势一致,肾脏绝对质量和肾脏指数也无明显改变。与对照组相比,60和120 μg/L染毒组小鼠出现肾结构损伤,BUN和SCr水平显著上升,且差异有统计学意义（P<0.05）。促炎因子IL-6和TNF-α水平在60和120 μg/L染毒组中上调,抗炎因子IL-10在所有染毒组中下降,且差异有统计学意义（P<0.05）。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相对表达量均在60和120 μg/L染毒组上升,且差异有统计学意义（P<0.05）。体外模型中：在HEK293细胞中,BUN和Cr水平在MC-LR组呈升高趋势而在MC-LR+LY294002组中显著下降,且差异有统计学意义（P<0.05）。促炎因子IL-6和TNF-α 的mRNA表达水平在MC-LR组呈升高趋势而在MC-LR+LY294002组中显著下降,抗炎因子IL-10的mRNA表达水平在MC-LR组呈下降趋势而在MC-LR+LY294002组中显著升高,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的表达水平也同样在MC-LR组上调而在MC-LR+LY294002组中显著下调,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 MC-LR可通过调控PI3K/AKT信号通路,激活炎症反应,诱导小鼠肾脏结构和功能损伤。     

微囊藻毒素-LR对HL60细胞遗传毒作用的研究

目的探讨微囊藻毒素-LR对HL60细胞的遗传毒性效应。方法不同剂量的MCLR作用HL60细胞24h或48h后，应用彗星实验及微核实验分别检测DNA链断裂和染色体损伤情况。结果10-100μg／ml剂量的MCLR引起HL60细胞明显的DNA链断裂，染毒量与DNA链断裂之间呈现剂量-反应关系。相同剂量的MCLR还引起HL60细胞微核率升高，随着染毒剂量的增加，微核率呈增高趋势。结论MCLR可引起HL60细胞DNA和染色体损伤，具有细胞遗传毒性。     

微囊藻毒素-LR对大鼠行为认知能力及血脑屏障通透性的影响

目的:通过研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对大鼠认知能力及血脑屏障通透性的影响,探讨MC-LR对大鼠神经系统的影响.方法:40只SD大鼠随机分为对照(生理盐水)组和MC-LR 0.13、0.5、20 μg·kg-1组(每天灌胃染毒经口注射MC-LR),染毒3个月后进行水迷宫实验和旷场实验,观察MC-LR对大鼠学习记忆能力和行为的影响,并检测大鼠伊文思蓝(EB)渗出量以探讨MC-LR对大鼠血脑屏障通透性的影响.结果:与对照组相比,MC-LR染毒3个月后大鼠的学习记忆能力未见显著性差异.旷场实验中,和对照组相比,20 μg·kg-1染毒组大鼠运动距离和自发活动持续时间两个指标差异具有统计学意义(P＜0.05).脑组织EB含量20 μg·kg-1染毒组明显高于对照组(P＜0.05).结论:MC-LR能够增加大鼠血脑屏障的通透性,并可以造成大鼠自发活动行为的改变.     

褪黑素对氧化损伤培养心肌细胞的保护作用

目的　建立心肌细胞氧化损伤模型 ,探讨褪黑素(MT)的保护作用 .方法　 1采用两种荧光探针 DCFH- DA和 Fluo- 3- AM分别标记细胞 ,用激光共聚焦显微镜观察低浓度 H2 O2 对心肌细胞内活性氧 (ROS)和游离钙 ([Ca2 + ]i)的影响 . 2 TBA法检测不同时间细胞丙二醛 (MDA)含量 . 3生化法检测细胞内乳酸脱氢酶 (L DH)的漏出量 . 4台盼拒染法观察心肌细胞存活率 .结果　与对照组相比 ,低浓度 H2 O2(10 0 mol· L- 1 )可使细胞内 ROS、[Ca2 + ]i、MDA、L DH明显升高 (P<0 .0 1)和细胞存活率明显下降 (P<0 .0 1) ;MT预处理后细胞内 ROS、[Ca2 + ]i、MDA、L DH升高明显减弱 ,细胞存活率明显升高 ,两组相比差异显著 (P<0 .0 1) .结论　 MT从多个方面都表现出良好的抗过氧化损伤效果 ,具有明显保护损伤心肌细胞的作用     

二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠肾脏氧化损伤的保护作用

[摘要]目的 研究二氢杨梅素(dihydromyricetin ,DMY)对糖耐量异常大鼠肾脏氧化损伤的保护作用。方法 以D-半乳糖为诱导剂,采用剂量递增全程腹腔注射法建立糖耐量异常动物模型,用DMY作为受试物,实验8周后,测定各实验组大鼠空腹及餐后2h血糖、血清胰岛素含量;肾脏超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量和肾脏细胞DNA拖尾率;尿微量白蛋白（mAlb）和血清尿素氮(BUN)含量。结果 与糖耐量异常模型组相比,DMY餐后2h血糖和胰岛素水平及抗性显著降低(P<0.05);肾脏SOD活性明显增高（P<0.05）,但GSH-Px活性增高不明显(P>0.05);MDA含量、尿微量白蛋白（mAlb）水平、肾脏细胞DNA拖尾率均明显降低（P<0.05）。结论 DMY可明显改善大鼠糖耐量异常状态,对肾脏早期损伤具有一定保护作用,其作用机制主要与DMY增强大鼠肾脏组织抗氧化能力有关。     

白藜芦醇对小鼠辐射氧化损伤的保护性研究

目的:研究白藜芦醇(Rev)对辐射所致的小鼠氧化损伤的防护作用,探讨其可能作用机制。方法:使小鼠接受亚致死剂量(6Gy)的全身照射(TBI),制备辐射损伤模型。检测辐射损伤小鼠血浆中SOD,Mn-SOD和CAT的活性和骨髓单个核细胞中CAT的活性。结果:①在血浆中,单独给药组Mn-SOD水平低于对照组(P<0.05),总SOD变化不明显;照射给药组与照射组相比,总SOD水平显著上升(P<0.05),说明单独给予白藜芦醇后可以降低Mn-SOD水平,但对总SOD无影响。②骨髓单个核细胞和血浆中,单独给予白藜芦醇后可以显著提高CAT活性(P<0.05);照射给药组与照射组相比CAT活性明显提高(P<0.05)。结论:白藜芦醇对由辐射引起的氧化应激损伤有保护作用,其机制可能与提高相应组织过氧化物酶活性有关。     

重组腺病毒介导hCGPx转染致血管内皮细胞产生抗氧化损伤作用的研究

目的 研究重组腺病毒介导的人胞浆型谷胱甘肽过氧化物酶（hCGPx）转染对血管内皮细胞ECV304氧化损伤保护作用。方法 将含hCGPx cDNA的质粒pGEM-T-hCGPx和重组腺病毒载体pACCMV-pLpA穿梭质粒进行基因重组,构建成pACCMV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建成重组腺病毒AdCMV-hCGPx。用AdCMV—hCGPx转染体外培养的ECV304细胞并分为转染24、48和72h组,以转染空载体的细胞为对照组,检测转染细胞的基因表达水平。各组ECV304细胞经H2O2氧化损伤处理后,分别对细胞的活力和凋亡进行检测分析。结果 各转染组细胞转染基因表达率均显著高于对照组（P〈0．01）。经H2O2氧化损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞活力较对照组明显增强,凋亡受到抑制。结论 重组腺病毒介导的hCGPx转染可保护ECV304细胞抵抗氧化损伤,具有明确的细胞保护作用,其具体保护机制可能与抗氧化和抑制细胞凋亡有关。     

GSH对砷氧化损伤保护作用的研究

[目的]研究细胞内谷胱甘肽（GSH）对砷致人角质形成细胞系（HacaT）氧化损伤的保护作用。[方法]用流式细胞仪检测细胞内二氯荧光素（DCF）的荧光强度;用改良硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内丙二醛（MDA）含量。[结果]单独用NaAsO2作用后,DCF荧光强度和MDA含量与对照组比较差异有显著性意义（P〈0．05）,用N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后,细胞内DCF荧光强度和MDA含量与砷作用组相比差异有显著性意义（P〈0．05）,其中MDA达到对照组水平。用丁硫氨酸亚矾胺（BSO）预处理细胞后,DCF荧光强度和MDA含量与NaAsO2单独作用组相比明显增高（P〈0．05）。[结论]NAC可减轻砷对细胞的氧化损伤,而BSO则可加重其氧化损伤,说明细胞内的GSH可对砷引起的氧化损伤起一定的保护作用。     

锰对大鼠肝脏线粒体氧化损伤的作用机制

目的:观察不同剂量的锰对大鼠肝脏线粒体的氧化损伤作用,探讨其相关机制。方法:将24只雄性SD大鼠随机均分为对照组和MnCl₂低、中、高剂量组,分别腹腔注射生理盐水和2、8、32 g/kg MnCl₂溶液,每天1次,连续30 d后取大鼠肝组织测定线粒体PT孔、线粒体膜肿胀度、线粒体膜电位、琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C、羟自由基(OH·)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)。结果:各组间肝线粒体PT孔差异均有统计学意义(P<0.01);MnCl₂高剂量组线粒体膜肿胀度小于对照组和MnCl₂低剂量组(P<0.05);MnCl₂高剂量组线粒体膜电位光密度均低于其他3组(P<0.05~P<0.01)。与对照组和MnCl₂低剂量组相比,MnCl₂中、高剂量组肝线粒体SDH均下降(P<0.01),且MnCl₂中、高剂量组间差异亦有统计学意义(P<;与对照组和MnCl₂低剂量组相比,MnCl₂高剂量组肝线粒体细胞色素C上升(P<0.05)。MnCl₂高剂量组肝线粒体OH·显著高于其他3组(P<0.01);与对照组比较,MnCl₂低、中、高剂量组大鼠肝线粒体GSH-PX显著降低(P<0.05)。结论:锰可导致线粒体氧化损伤,引起大鼠肝线粒体PT孔开放、膜电位下降,SDH、GSH-PX降低,细胞色素C、OH·显著升高,对机体产生毒性作用。     

保肾通络方含药血清调节线粒体自噬对高糖诱导下足细胞氧化损伤的影响

目的 观察保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞氧化损伤的影响,并对保肾通络方的作用机制进行探讨。方法 以体外培养的肾小球足细胞为研究对象,给予高浓度葡萄糖刺激,采用CCK-8法分析足细胞活力以确定最佳模型及给药浓度,分为正常对照组、高糖组、保肾通络方组,采用鬼笔环肽进行细胞骨架染色,Western blotting法检测足细胞裂孔膜蛋白nephrin,自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、ATG7、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达,流式细胞术检测足细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位,免疫荧光共标LC3B及线粒体,观察各组足细胞内线粒体自噬泡的生成情况。结果 30 mmol/L高糖干预48 h可显著降低足细胞活力(P＜0.05),保肾通络方含药血清可使高糖诱导的足细胞活力明显提升(P＜0.01);与正常对照组相比,高糖组足细胞骨架褶皱呈多边形,应力纤维束被破坏,ROS生成显著增多(P＜0.01),足细胞nephrin、ATG5、ATG7表达显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P＜0.05),LC3B与线粒体共标减少,线粒体膜电位下降(P＜0.01);与高糖组相比,保肾通络方组足细胞骨架改善,ROS生成减少(P＜0.01),nephrin、ATG5、ATG7表达显著增加(P＜0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升(P＜0.05),LC3B与线粒体荧光共标增多,线粒体膜电位升高(P＜0.01)。结论 保肾通络方含药血清能够减轻高糖诱导的足细胞氧化损伤,其作用可能与改善足细胞线粒体自噬有关。     

丹酚酸B对成骨细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨丹酚酸B（Sal B）对成骨细胞氧化损伤的保护作用。方法：构建叔丁基过氧化氢诱导成骨细胞氧化损伤模型,通过MTT实验检测细胞活性,DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧水平,qPCR检测相关成骨分化基因表达水平,并通过茜素红染色检测成骨细胞的矿化水平,从而评价Sal B对成骨细胞氧化损伤的保护作用。结果：MTT检测结果显示叔丁基过氧化氢对成骨细胞活性的抑制呈时间和浓度依赖性,250 μmol/L浓度作用6 h达到半数抑制。Sal B的应用可恢复成骨细胞活性至84.6%,降低了活性氧水平（P＜0.001）,恢复了分化相关基因表达水平及细胞外基质矿化水平（P＜0.001）。结论：Sal B可有效抑制成骨细胞的氧化损伤,恢复成骨细胞活性和功能。     

氯氰菊酯对雄性小鼠肝脏组织的氧化损伤

目的:研究氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)对雄性小鼠肝脏组织的氧化损伤。方法:将40只昆明种雄性小鼠随机均分为双蒸水灌胃(阴性对照组)和CYP 5、10和20 mg/kg染毒组,连续3周经口灌胃染毒。观察小鼠肝脏脏器系数,同时检测小鼠肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。结果:随着CYP染毒剂量的升高,CYP 5 mg/kg和10 mg/kg组小鼠肝脏脏器系数均高于阴性对照组(P<0.01和P<0.05);CYP 10 mg/kg和20 mg/kg染毒组小鼠肝脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶与CYP 20 mg/kg组过氧化氢酶活性均低于阴性对照组(P<0.01),CYP 5 mg/kg和10 mg/kg组总超氧化物歧化酶活性均高于阴性对照组(P<0.01),CYP 20 mg/kg组小鼠丙二醛含量亦显著高于阴性对照组(P<0.01)。结论:CYP可以引起雄性小鼠肝脏组织的氧化损伤,且损伤程度与CYP剂量有关。