2010年至2011年上海地区儿童手足口病肠道病毒71感染的流行病学

目的 了解2010年至2011年上海地区手足口病患儿肠道病毒71型(EV71)的临床流行特征.方法 回顾性分析因手足口病住院儿童的临床及病原学资料.患儿粪便EV71采用一步法荧光定量RT-PCR检测.数据处理采用卡方检验.结果 2010年和2011年接受病原学检测的住院患儿中,EV71检出率分别为54.45％ (820/1506)和59.84％(924/1544).在重症和无并发症患儿中EV71检出率2010年分别为86.31％(372/431)和46.67％(448/1075),差异有统计学意义(x2=247.146,P＜0.01);2011年分别为88.78％(380/428)和48.75％(544/1116),差异有统计学意义(x2=201.664,P＜0.01).上海地区手足口病流行高峰期的5至6月份EV71检出率可达60％～67％.1744例检出EV71的手足口病患儿中,男∶女为1.78∶1;6个月以下婴儿最少占0.46％(8/1744),1岁儿童最多占34.92％(609/1744),病例集中分布于1～3岁幼儿,占76.78％(1339/1744));外来流动儿童占72.76％(1269/1744).重症病例年龄及人群分布与EV71感染患儿相平行.9例合并肺水肿或肺出血的危重症手足口病患儿均为EV71感染所致.结论 EV71为近两年上海地区儿童手足口病流行的优势病原,绝大部分重症手足口病以及所有危重症病例均与EV71感染有关.     

山东省EV71和CoxA16所致手足口病重症病例流行病学及临床特征分析

目的比较EV71和CoxA16所致手足口病重症病例临床症状和体征,为手足口病的诊疗和防控提供依据。方法采用实时荧光定量RT-PCR对重症病例进行病原学分型;收集病例基本信息和临床资料,对2010年确诊的EV71和CoxA16所致手足口病重症病例的临床特征进行比较分析。结果 EV71与CoxA16所致手足口病重症患者主要为3岁以下儿童(占81.61%),患者平均年龄为2.30岁(0.20～16.39岁)。EV71所致重症患者最高体温为(38.75±0.04)℃,CoxA16所致重症患者为(38.60±0.07)℃,差异无统计学意义(t=-1.61,P>0.05);两种病毒所致重症患者口腔部位皮疹、咳嗽、流涕和心率加快发生率差异均有统计学意义(P<0.05),其他症状和体征均一致。结论 CoxA16与EV71所致重症手足口病患者临床特征基本一致,均引起严重并发症。应加强对CoxA16感染的监测和防控。     

介质表面的肠道病毒71型在不同气候条件下存活情况调查

目的 了解介质表面污染的肠道病毒71型(EV71)在不同温、湿度条件下的存活能力.方法 将滴度为1×105半数组织培养感染剂量(TCID50)的EV71株均匀滴加在灭菌的塑料、橡胶、木块和布片介质表面,置入不同温、湿度气候条件的人工气候箱中,一定时间后回收介质表面病毒,回收液接种Vero细胞,观察致细胞病变效应(CPE);每日监测不同气候条件下介质表面病毒存活情况.结果 病毒在4种介质表面回收率为89％～93％;暴露在不同温、湿度条件下介质表面的EV71存活时间不同,在20℃、湿度80％的气候条件下病毒存活时间最长;塑料表面的病毒滴度在24 h后下降lgTCID50值约为4,布片和木块表面的病毒滴度在72 h后下降lgTCID50值约为4.5,72h后至少下降lgTCID50值为3.89.结论 介质表面污染EV71存活时间受温、湿度气候条件影响,模拟的4种气候条件中,温度低、湿度高的条件病毒存活时间长;EV71在布片、木块表面的存活能力强于合成材质塑料表面.     

手足口病患者家庭密切接触者肠道病毒感染及环境污染状况调查

目的 了解手足口病患者家庭密切接触者肠道病毒感染情况及其家庭环境物品肠道病毒污染情况.方法 选取广东省2010年7-8月疾病监测报告信息系统报告的41例手足口病实验室确诊的普通患者,人户调查患者家庭全部成员人口学信息、家庭卫生习惯及卫生状况,采集患者家庭全部成员粪便标本及16户家庭物品表面涂抹标本,进行人肠道病毒实时荧光定量PCR检测,数据采用卡方检验和t检验.结果 完成调查41户手足口病患者家庭及135名家庭密切接触者,密切接触者肠道病毒阳性53名,阳性率为39.2％;24户患者家庭的密切接触者肠道病毒检测阳性,占58.5％;4户家庭全部成员肠道病毒检测均为阳性,占9.8％.按父母、(外)祖父母及叔婶姨舅、亲(表、堂)兄弟姐妹区分的肠道病毒阳性率分别为32.5％(25/77)、43.3％(13/30)和53.6％(15/28),差异无统计学意义(χ2=4.07,P=0.131);家庭人数≥5名的患者家庭的密切接触者肠道病毒阳性率高于≤4名者(OR=1.4,95％CI:1.1～1.9).135名家庭密切接触者中,有37名与家庭内患者感染病毒型别一致,占27.4％;16名与家庭内患者感染病毒型别不一致,占11.9％.采集16户家庭玩具等表面涂抹标本共33份,其中2份玩具检出肠道病毒,阳性率为6.1％.密切接触者肠道病毒检测阴性和阳性的手足口病患者家庭分别有17户和23户,其看护儿童前洗手、餐饮具消毒、共用面巾、晾晒床上用品及玩具清洗等卫生习惯差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 手足口病患者家庭密切接触者肠道病毒阳性率较高,居家环境存在肠道病毒污染;应做好患者家庭密切接触者的管理和居家环境的消毒.     

山东省部分地区肠道病毒71型的RT-PCR检测及基因特征分析

目的采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测2008年山东省部分地区手足口病（HFMD）患者肠道病毒71型（EV71）,对毒株进行诊断及基因特征初步分析。方法以肠道病毒特异引物对EV71进行RT-PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性标本,纯化后与pGEM-T载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,筛选后测序,所得序列与我国阜阳、深圳、台湾株及美国EV71标准流行株的核苷酸序列在线进行BLAST比对,分析其同源性。结果42份标本中检出EV71 33例（78.57%）,所得序列经种系进化分析,与阜阳2008年HFMD暴发分离株同源性为98.7%99.1%,与深圳1998年HFMD散发分离的EV71毒株同源性为93.4%93.8%,与台湾1998年HFMD病例分离毒株同源性为91.2%91.6%,与美国EV71毒株同源性为79.2%79.7%。有9株EV71的563位苏氨酸（T）替代了EU703813的异亮氨酸（I）。结论EV71 C4亚型是2008年山东省部分地区HFMD暴发流行的病原,同源性分析表明山东省部分地区EV71分离株与阜阳、深圳及台湾地区分离株有较高的同源性,提示该病毒在中国大陆有较广泛的传播。     

检测肠道病毒71型RT-LAMP技术的建立及其应用

目的为肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染的快速诊断建立一种简捷、敏感、特异的基因检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT LAMP)。方法针对EV71 VP1基因的8个区域设计6条特异性引物,建立检测该靶序列的RT LAMP方法,对其特异性及敏感性进行了验证;并对手足口病患者标本进行检测,并与RT PCR及Real time PCR方法进行了比较。结果利用RT LAMP方法能成功检测到EV71 VP1基因区,等温条件下60min内即可完成检测,该方法简便快捷、敏感性高、特异性好;其阳性率高于RT PCR方法（P<0.05）,与Real time PCR结果呈现很好的一致性（P>0.05）。结论RT LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作过程简捷快速,无需特复杂仪器等优点。适用于EV71感染的快速检测及分子流行病学的监测,具有很好的开发应用前景。     

手足口病轻症与重症患者临床特征比较

目的 比较2008年安徽省阜阳市手足口病流行中轻症与重症患儿的差异,探讨早期鉴别重症患儿的预警因子.方法 收集2008年3月7日至5月3日在安徽省阜阳市第一人民医院收治的41例临床诊断为手足口病患儿的完整资料,其中轻症组11例, 脑炎组15例,肺水肿组15例,比较3组患儿症状、体征、实验室检查、淋巴细胞表型特点及临床转归情况.结果 肺水肿组病死率为66.7%,较脑炎组显著升高.肺水肿组及脑炎组中年龄小于3岁者达93.3%,与轻症组比较差异有统计学意义.肺水肿组WBC及中性粒细胞数较轻症组显著升高(P<0.05).肺水肿组呼吸频率、心率、血糖水平显著高于脑炎组(P<0.05).脑炎组和肺水肿组患儿T细胞、NK细胞比例较轻症组均显著降低.结论 手足口病患儿出现肺水肿提示预后不良.年龄小于3岁患儿易出现重症,外周血WBC及中性粒细胞增高、呼吸增快、心率增快、血糖升高可能是病情进展的预测因素.T细胞亚群的检测有利于手足口病轻、重症的鉴别.     

Development of Novel Vaccines against Enterovirus-71

The hand, foot and mouth disease is caused by a group of Enteroviruses such as Enterovirus 71 (EV-A71) and Coxsackievirus CV-A5, CV-A8, and CV-A16. Mild symptoms of EV-A71 infection in children range from high fever, vomiting, rashes and ulcers in mouth but can produce more severe symptoms such as brainstem and cerebellar encephalitis, leading up to cardiopulmonary failure and death. The lack of vaccines and antiviral drugs against EV-A71 highlights the urgency of developing preventive and treatment agents against EV-A71 to prevent further fatalities. Research groups have developed experimental inactivated vaccines, recombinant Viral Protein 1 (VP1) vaccine and virus-like particles (VLPs). The inactivated EV-A71 vaccine is considered the safest viral vaccine, as there will be no reversion to the infectious wild type strain. The recombinant VP1 vaccine is a cost-effective immunogen, while VLPs contain an arrangement of epitopes that can elicit neutralizing antibodies against the virus. As each type of vaccine has its advantages and disadvantages, increased studies are required in the development of such vaccines, whereby high efficacy, long-lasting immunity, minimal risk to those vaccinated, safe and easy production, low cost, dispensing the need for refrigeration and convenient delivery are the major goals in their design.     

2010年上海地区肠道病毒71型分离株VP1区基因特征分析

目的 了解2010年上海地区手足口病患者中肠道病毒71型(EV71)分离株VP1区基因特征.方法 选取2010年不同时间的轻症与重症病例EV71分离株18株,对其抗原决定簇部位VP1区进行核苷酸序列测定、比对,并与美国国立生物技术信息中心公布的EV71 A、B、C各基因型分离株序列进行比对,构建系统发生树.结果 上...     

手足口病患儿外周血T淋巴细胞亚群的临床研究

目的 研究于足口病患儿T淋巴细胞亚群的变化趋势,为临床治疗及预后评估提供依据.方法 采用流式细胞仪检测2008年5月1日至8月31日在北京地坛医院住院的346例手足口病患儿急性期的T淋巴细胞亚群,同时测定其中67例患儿恢复期的T淋巴细胞哑群;对其中99例患儿咽拭子标本进行RT-PCR以确定病原.埘不同样本行独立样本t检验、配对t检验或方差分析.结果 手足口病患儿T淋巴细胞业群均数低于相应年龄段正常参考值水平.重症患儿各年龄组中的T淋巴细胞(TL)/淋巴细胞(L)比值、＞1岁组T辅助细胞(Th)/L比值,以及1～2岁患儿的TL、Th及Th/抑制性T淋巴细胞(Ts)值低于普通病例(P＜0.05).患儿T淋巴细胞亚群随病程进展有逐渐上升趋势,普通患儿的TL/L及Th/L在恢复期增高(TL/L:56.3±8.6比61.1±9.1,t=2.56,P＜0.05;Th/L:30.2±7.2比34.9±7.9,t=2.90,P＜0.05),重症患儿除Ts/L和Th/Ts外,所有指标均在恢复期明显增高(P＜0.01);急性期重症与普通崽儿的TL为(1.738±0.976)×10~6/L比(2.696±1.946)×10~6/L(t=2.17,P＜0.05),Th/L为25.9±7.0比30.2±7.2(t=2.34,P＜0.05),Th为(0.864±0.550)×10~6/L比(1.459±0.879)×10~6/L(t=2.90,P＜0.01),L为(3.352±1.458)×10~6/L比(4.664±2.435)×10~6/L(t=2.32,P＜0.05),恢复期两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肠道病毒(EV)71阳性患儿T淋巴细胞亚群各值均低于阴性患儿,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 T淋巴细胞免疫功能可能与手足口病发病及病情发展有关.     

2011年上海地区轻、重症手足口病患者肠道病毒71型分离株VP1、VP4区的基因特征分析

目的 了解2011年上海地区手足口病重症和轻症患儿中肠道病毒71型(EV71)分离株VP1、VP4区的基因特征.方法 对来自2011年重症与轻症手足口病患儿的各5株EV71分离株进行VP1、VP4全序列的RT-PCR扩增测序,并与美国国立生物技术信息中心公布的EV71 A、B、C基因型代表株进行核苷酸、氨基酸比对分析和系统进化分析.结果 轻、重症患儿的EV71分离株之间VP1基因的核苷酸同源性为96.0％～98.1％;VP4基因的核苷酸同源性为93.7％～99.5％.轻、重症患儿的EV71分离株与C基因型代表株比较接近,VP1区核苷酸同源性分别为86.9％～98.2％、87.4％o～98.5％,VP4区核苷酸同源性分别为85.5％～100.0％、84.5％～99.5％,其中与2008年安徽省阜阳市的EV71流行株(C4亚型)VP1区核苷酸同源性分别可达97.0％～98.2％、97.9％～98.5％,VP4区核苷酸同源性分别可达96.1％～100.0％、97.1％～99.5％.3例重症患儿分离株在VP1和VP4的天冬酰胺(N)282丝氨酸(S)、苏氨酸(T)7丙氨酸(A)同时发生变异.结论 2011年上海地区10例轻、重症手足口病患儿中分离的EV71流行株均属C基因型的C4亚型;3例重症患儿分离株在VP1和VP4的N282S、T7A同时发生变异.     

1323例手足口病流行病学特征及EV71检测结果分析

目的 研究2011年深圳市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的流行病学特征和肠道病毒(enterovirus,EV)71的季节分布规律。方法 以2011年我院1323例HFMD住院患者为研究对象,对该病发生的地区、时间、人群分布进行统计。运用反转录聚合酶链反应方法对所有HFMD患者粪便标本进行EV71和柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16,CoxA16)检测。结果 HFMD患者多来自原特区外,除2月有零星发病外,全年均有散在流行,1~4岁年龄段多发;1323例患者中EV71阳性175例(13.2%),CoxA16阳性20例(1.5%);EV71阳性患者主要分布在5、6、7月,占总阳性患者的62.9%。结论 HFMD仍然是深圳市重要的公共卫生问题,应对其保持高度警惕。在2011年HFMD高发季节,EV71仍是实验室诊断的主要病原。     

2008年上海及周边地区婴幼儿手足口病病原学研究

目的 了解2008年上海及周边地区婴幼儿手足IZl病病原体分布情况及其基因特征.方法 采集2008年5月至6月手足口病流行期间复旦大学附属儿科医院及浙江省德清市住院患儿咽拭标本,部分患儿同时采集脑脊液标本,分别接种于Vem、MRC-5及RD细胞进行病原体分离,RTPCR检测肠道病毒属、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)、肠道病毒71型(EV71),并对扩增产物测序鉴定.结果 100例患儿的107份咽拭和22份脑脊液标本中,共计50例患儿的咽拭标本致细胞病变,经鉴定肠道病毒感染37例,占74.0%,其中EV71为26例,占52.0%(26/50例),CoxAl6为10例,占20.0%(10/50例),其他肠道病毒(CoxB3)1例,占2.O%(1/50例);肠道病毒属外的其他病原体13例,占26.0%,且其中1例患儿的脑脊液标本致Vero细胞病变.所有26例EV71病毒株与2008年中国浙江省及安徽省阜阳市EV71病毒株相似,同属于C基因型;10例CoxA16病毒株均属于C遗传世系.结论 手足口病病原复杂,2008年上海及周边地区婴幼儿手足口病的主要病原体仍是EV71和CoxA16,但尚存在一定比例的其他未知病原体.     

肠道病毒71型研究进展

肠道病毒71型是手足口病的主要病原体,在世界范围内广泛流行。本文综述了近年来肠道病毒71型感染的病原学、流行病学、致病机制、预防与治疗等方面的研究进展。     

2015年湖南省手足口病流行特征分析

【摘要】 目的  分析2015年湖南省手足口病流行特征,探讨手足口病流行规律,为制订防控策略和控制措施提供科学依据。 方法  收集2015年湖南省疾病监测报告系统报告的手足口病病例资料、病原学监测资料和突发公共卫生事件报告管理系统报告的聚集性疫情资料进行描述性流行病学分析。 结果  2015年湖南省共报告手足口病病例135 628例,其中重症病例710例,死亡14例,发病率为201.32/10万;发病率较高的地区主要为湘中、湘东北和湘西地区;男女性别比为1.56∶1,5岁及以下年龄组病例占发病总数的97.01%;病原学监测阳性率为54.02%,普通病例、重症病例、死亡病例的EV71检出率分别为9.62%、29.48%和88.89%。 结论  湖南省手足口病发病有明显的季节性,高发人群是低龄儿童、散居儿童,不同血清型的毒株交替占主导地位,加强监测和风险评估、有效处置疫情和开展针对重点人群的健康教育是有效控制手足口病的关键。     

山东省肠道病毒71型分离株SDLY11全基因组序列分析

目的了解2009年山东省临沂市分离的肠道病毒71型(EV71)分离株SDLY11的基因组序列特征,探讨病毒的神经毒力候选位点。[HTH]方法自手足口病患者的粪便标本中分离EV71,采用一步法RT PCR对病毒株基因组进行全序列扩增,运用DNAstar 和MEGA 4软件进行序列分析。[HTH]结果SDLY 11基因组全长为7 405 nt,其中5′非编码区（UTR） 742 nt,3′UTR 84nt,中间为6 579 nt的开放阅读框架（ORF）,编码2 193个氨基酸的多聚蛋白。VP1区及全基因组序列系统进化分析表明SDLY 11位于EV71病毒C4亚型的分支,同源性分析显示SDLY 11与安徽阜阳株同源性最高。序列比对结果发现,CNS累及HFMD患者病毒株在5[WTBX]′[WTBZ]UTR区出现了两处核苷酸位点的突变（T40C、C575T）,在VP2区第144位出现了氨基酸的突变（T144S）。[HTH]结论SDLY 11分离株属EV71病毒C4亚型。5′UTR区的两处突变（T40C、C575T）及VP2区的一处突变（T144S）可能与病毒的致神经毒力作用有关。     

成人手足口病四例患者肠道病毒71型的检测及核苷酸序列分析

目的 了解成人手足口病的病原体,并分析肠道病毒71型(EV71)核苷酸序列特征.方法 RT-PCR技术对4例成人手足口病患者标本进行肠道病毒基因检测,并测定EV71核苷酸序列,所得序列通过BLAST程序作EV71序列的进一步确认,与基因库中不同基因型EV71核苷酸序列进行比对分析、同源性分析,并构建种系进化树.结果 4例患者肠道病毒通用引物和EV71特异性引物RT-PCR检测均阳性.经BLAST分析,测序所得4条核苷酸序列(分别命名为GZl9610、GZ99310、GZ99355和GZ46477)与EV71毒株序列同源.序列分析表明,4条核苷酸序列之间的同源性为96.O%～99.1%,与2008年初我国安徽省阜阳市暴发的手足口病疫情所分离的EV71毒株同源性最高.EV71序列遗传进化分析确定其均为EV71基因亚型C4,与阜阳、深圳、重庆、上海地区及2004年我国台湾地区流行毒株基因型一致,且距离最近.结论 成人也可感染EV71引起手足口病,与我国现在及既往流行病毒株相比,此次4例成人手足几病患者感染的EV71未发生大的变异;应加强对成人手足口病患者的隔离治疗,以免其传播病毒引起疾病更大的流行.     

上海地区2009年上半年手足口病患儿肠道病毒71病毒壳体蛋白VP1基因的检测与亚型分析

目的 了解2009年4月至5月肠道病毒(EV)71在上海地区儿童手足口病(HFMD)中的分子流行病学特点.方法 收集2009年4月至5月在复旦大学附属儿科医院临床诊断为HFMD的95例住院患儿咽拭子标本73份与粪便标本38份,采用TaqMan实时RT-PCR及套式RT-PCR进行EV71病毒壳体蛋白VP1基因检测,并进行基因测序分析.结果 73份咽拭子标本中,EV71阳性6份,检出率为8.2%;38份粪便标本中,EV71阳性24份,检出率为63.2%.28份套式RT-PCR阳性标本基因测序分析结果显示,27株为C4亚型,为绝对优势流行株,另有一株为C2亚型株;1例死亡患儿分离株为C4亚型,其VP1基因序列未见明显变异.结论 EV71是上海地区2009年4月至5月儿童HFMD的重要病原体,C4亚型株占绝对优势地位,同时伴有C2亚型株的流行.     

健康青年肠道病毒71型感染血清流行病学调查

目的 了解入伍新兵人群肠道病毒71型(EV71) IgG抗体的流行分布情况,为今后预防EV71感染提供科学依据.方法 采用血清流行病学调查方法,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术,随机抽取北京军区空军2001至2008年8年期间入伍的来自16个省市的364名新兵血清进行了EV71VPI-IgG抗体检测并进行统计分析.结果364名新兵中,陕西省(100％)、湖南省(100％)、福建省(95.46％)和云南省(95.46％)阳性率较高,其余各省阳性检出率相对较低;阳性率63.64％～100.00％,平均阳性率为87.64％,各省间和沿海与内陆地区间阳性检出比较,显著性检验差异有统计学意义.入伍前工作与否,抗体阳性检出率无显著性差异.结论 目前,健康青年对EV71获得稳固免疫力,不易发生暴发流行.     

人源抗EV71病毒中和表位SP70 的Fab抗体研制

目的构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,筛选具有中和活性的人源单克隆抗体,为EV71感染引起的手足口病临床诊断及治疗奠定基础。方法从成人志愿者抗凝血中分离外周淋巴细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA。以cDNA为模板,用人源IgG Fab段基因引物扩增轻链及重链Fd区基因,分步克隆至pComb3载体,构建Fab噬菌体抗体库。以SP70为抗原对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,将获得的重组噬菌体感染XL1-Blue菌并诱导表达,用SP70对诱导表达的菌上清进行筛选。结果共获得3株轻、重链基因组合序列不同的克隆,且这3株Fab抗体可特异性结合SP70多肽。结论成功构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,并从中筛选出3株针对EV71病毒结构蛋白VP1上中和线性表位SP70的特异性人源Fab抗体,为研发新的手足口病诊断和治疗工具奠定基础。