高通量基因测序技术检测40例早期自然流产组织的染色体异常分析

目的应用高通量基因测序技术检测早期自然流产组织,探讨早期自然流产组织染色体异常及全基因组拷贝数变异(copy number variation,CNV)。方法选择早期自然流产的患者40例,对其流产组织绒毛行高通量基因测序技术。结果 40例早期自然流产组织绒毛样本均培养成功,成功率为100%,检测出染色体正常标本14例,异常标本26例;染色体数目异常18例,CNV9例。结论胚胎染色体异常是早孕期自然流产的主要原因,高通量基因测序技术提高了染色体异常的检出率,可以作为流产组织的检测手段。     

染色体拷贝数变异测序联合STR分型在流产物遗传学分析中的应用

目的对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料。方法选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例自然流产病人,运用拷贝数变异测序（copy number variation sequencing,CNV-Seq）联合短串联重复序列（Short tandem repeats,STR）分型对流产物进行遗传学检测。结果150例流产物均成功检测,染色体正常71例（47.33%）,染色体异常79例（52.67%）,其中染色体数目异常56例,占染色体异常总数的70.89%,染色体微重复/微缺失4例（2.67%）,嵌合体14例（9.33%）,染色体数目合并结构异常3例（2.00%）,单亲二倍体2例（1.33%）。导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常（37.33%）,包括染色体非整倍体（32.67%）、三倍体（4.67%）;其次为嵌合体（9.33%）。与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X、16-三体;69,XNN、21-三体;18-三体;16-三体嵌合体。结论CNV-Seq联合STR技术适用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更多范围的染色体异常,能实现更加准确、全面的诊断,对明确自然流产的遗传因素,指导孕妇再次备孕,实现优生优育具有重要的意义。     

二代测序技术在流产物染色体拷贝数改变检测中的应用

目的探讨二代测序技术（NGS）在流产物染色体拷贝数改变检测中的应用价值。方法选取不明原因流产和死胎的孕妇639例,应用NGS对绒毛或胎儿样本进行全基因组测序,并作染色体拷贝数改变分析。结果630例孕妇完成NGS检测,其中315例检出整条染色体改变和（或）拷贝数改变,检出率为50.00%。250例涉及整条染色体增减或改变,包括单体64例,三体169例,三倍体1例,复合三体9例,性染色体单体和（或）三体嵌合体7例;65例为染色体片段的拷贝数改变,其中明确致病性30例,可能致病性5例,临床意义不明确的23例,可能良性4例,良性3例。≥35岁组和＜35岁组孕妇整条染色体增减或改变检出率分别为44.87%和38.95%,致病性染色体片段拷贝数异常检出率分别为5.13%和5.62%,两组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论NGS在流产物临床遗传学诊断中有较好的应用价值。     

淮北地区2 932例孕妇无创DNA产前筛查的调查分析

目的分析淮北地区2 932例孕妇无创DNA产前筛查（NIPT）结果及其相关影响因素。方法利用高通量测序法对胎儿游离DNA进行染色体分析,结果阳性者行羊水穿刺进行染色体核型分析确认;拷贝数变异（copy number variation,CNV）者进行染色体微陈列分析。结果2 932例孕妇的NIPT总高风险检出率为1.43%（42/2 932）。不同年龄孕妇的三体综合征、性染色体异常和总高风险检出率差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,CNV差异无统计学意义（P>0.05）。农村与城市地区孕妇的三体综合征和性染色体异常检出差异均无统计学意义（P>0.05）,农村地区孕妇的CNV和总高风险检出率均高于城市地区孕妇（P < 0.05和P < 0.01）。结论淮北地区NIPT以三体综合征检出为主,性染色体异常和CNV风险相对较高。     

CNV-seq联合核型分析在NIPT及NIPT-plus高风险孕妇产前诊断中的应用

目的 探讨在NIPT及NIPT-plus高风险孕妇的产前诊断中，基于下一代测序技术的基因组拷贝数变异（copy number variation sequencing,CNV-seq）联合核型分析对胎儿染色体异常的诊断效能。方法 选取282例NIPT及NIPT-plus检测结果为高风险的孕妇，行羊水穿刺，做G显带胎儿染色体核型分析和羊水CNV-seq检测，对比检测结果，评估G显带胎儿染色体核型分析和羊水CNV-seq检测对胎儿染色体异常的检出率。结果 与G显带胎儿染色体核型分析相比，CNVseq多检测出2例性染色体数目异常、4例其他染色体非整倍体（除2L、18、13、性染色体外的染色体数目异常）异常和24例染色体微缺失微重复。CNV-seq对NIPT及NIPT-plus高风险孕妇染色体异常的总检出率为53.90%，与染色体G显带核型分析比较，异常检出率提高了10.64%。结论 CNV-seq和G显带染色体核型分析两者联合在NIPT及NIPT-plus高风险孕妇的产前诊断中能有效提高染色体异常检出率，尤其是针对染色体微缺失微重复和低比例嵌合体的检测，两者结合可降低漏诊率。     

基因组拷贝数变异测序联合核型分析在产前诊断中的临床应用

目的 探讨基因组拷贝数变异测序（copy number variation sequencing, CNV-seq）联合核型分析在产前诊断中的临床应用价值。方法 选取2019年1月至2021年12月赤峰市妇产医院产前诊断中心就诊的884例孕妇，根据产前诊断指征分为高龄组（n=148）、血清学筛查高风险组（n=95）、无创产前检测高风险组（n=116）、超声结构异常组（n=174）、混合组（n=351）。孕妇羊水样本采用CNV-seq检测和核型分析，比较不同方法染色体异常检出情况。结果 884例孕妇年龄23～43岁，平均（32.6±4.5）岁，孕16～32周。无创产前检测高风险组染色体异常检出率最高（30.17%），其次为混合组（11.40%）、血清学筛查高风险组（6.32%）和超声结构异常组（5.75%），高龄组最低（2.03%）。二者联合检出染色体异常98例，检出率为11.09%，其中CNV-seq检出率为10.63%(94/884)，核型分析检出率为8.48%(75/884)，两者比较差异无统计学意义（P> 0.05）。CNV-seq染色体非整倍体异常检出率为7.35%(65...     

5例1p36微缺失流产胎儿的遗传学诊断及文献回顾

目的：对5例稽留流产绒毛进行遗传学检测,明确其病因和发生机制,为夫妇再次生育时复发风险评估及产前诊断提供依据。方法：应用Affymetrix CytoScan 750K染色体微阵列芯片（chromosomal microarray analysis,CMA）对5例稽留流产绒毛进行全基因组拷贝数变异（copy number variation,CNV）分析,同时根据检出CNV片段大小及家属意愿,对5对夫妇设计合理的家系验证方案,以明确1p36微缺失的来源。结果：CMA检测结果显示胎儿1在1p36.32p36.31存在1.75 Mb微缺失,胎儿父母常规核型分析和CMA检测均未见异常,但仍不排除父母一方是否为该片段插入易位携带者;胎儿2和3的CMA结果分别为1p36.13p36.12区带存在5.10 Mb微缺失和1p36.33p36.22区带存在9.21 Mb片段缺失,两者父母高分辨核型分析均未见异常,定制荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）探针检测也未发现该位点的缺失、重复或易位重排等异常,应为新发异常。CMA提示胎儿4和5分别在1p36.33p36.22和1p36.33p36.23区带存在9.28 Mb和7.64 Mb微缺失,胎儿4父母高分辨核型正常,胎儿5父母拒绝进一步行家系验证。结论：本文在国内外首次报道了5例1p36缺失综合征引起的早孕期复发及偶发性流产,包括2例中间缺失和3例单纯末端缺失。CMA可发现流产胎儿隐匿性染色体亚显微结构变异,结合常规/高分辨核型分析、FISH、CMA等技术的优缺点,制定合理的家系验证方案,有助于明确染色体变异发生机制,对夫妻再孕时产前诊断和再发风险评估有重要价值。     

拷贝数变异测序在稽留流产遗传学检测中的应用

目的 探讨拷贝数变异测序(CNV-seq)技术在研究早期稽留流产原因中的应用价值。方法 选取2020年1月至2021年12月在贵港市人民医院就诊的220例稽留流产患者，对其绒毛/胎儿组织进行拷贝数变异测序(CNV-Seq)，分析稽留流产与染色体异常的相关性。结果 220例稽留流产标本中，成功检测215例，成功率为97.73%。结果检出染色体异常140例(65.28%)，染色体正常75例(34.72%)。染色体异常中，数目异常型113例(80.71%)，最为常见，其中三体型82例(58.57%),X单体型13例(9.29%)，三倍体18例(12.86%)。嵌合体13例(6.05%)，染色体片段缺失/重复14例(6.51%)。孕妇年龄≥35岁组发生染色体异常率为72.58%，略高于孕妇年龄<35岁组的62.09%，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CNV-seq对流产物的遗传学诊断具有明确的应用价值，染色体数目异常是导致早期流产最常见的原因之一，对再生育指导具有重要意义。     

420例流产物染色体核型分析

目的探究流产物染色体异常核型。方法选择420例首次流产（早期流产）患者的宫腔搔刮或负压抽吸的流产物进行染色体核型分析。结果420例样本染色体核型分析结果正常145例（34.5%）,异常230例（54.8%）,体外培养未见细胞生长45例（10.7%）。230例染色体异常样本中以染色体数目异常最为常见,主要有16-三体42例（18.2%）、三倍体28例（12.2%）、X单体25例（10.8%）、四倍体12例（5.2%）、15-三体12例（5.2%）,其他类型染色体异常包括染色体片段缺失、重复、插入、易位等。结论染色体异常是早期流产的重要原因,其中16-三体是最常见的染色体异常核型。     

自然流产绒毛染色体畸变率与复发性流产次数的关系探讨

目的：分析自然流产患者流产组织染色体数目和拷贝数异常的发生率与流产次数之间的关系,为临床医师提供咨询指导意见。方法：选择2014年7月—2016年12月本院就诊的孕14周内自然流产患者共173例,根据流产次数分4组：A组（偶发流产组,仅发生1次自然流产者）45例,B组（自然流产2次）86例,C组（自然流产3次）32例,D组（自然流产≥4次）10例,对绒毛组织采用细胞培养G显带分析技术、多重拷贝数变异检测技术、高通量基因测序技术等3种方法进行染色体检查。结果：173例自然流产患者绒毛染色体培养成功137例（79.2%）,结合3种技术的检查结果,偶发流产组染色体数目异常率55.56%（25/45）,复发性流产组（连续发生2次或2次以上的自然流产）染色体数目异常率39.06%（50/128）,两者比较无统计学差异（P > 0.05）。随着自然流产次数增加,胚胎染色体数目异常率呈下降趋势,但各组间无统计学差异（P > 0.05）。在82例行NGS检测的病例中,染色体拷贝数变异（CNV）率在自然流产1、2、3、4次及4次以上组中分别为38.09%（8/21）、36.67%（11/30）、31.82%（7/22）,11.1%（1/9）,各组变异率均无统计学差异（P > 0.05）。复发性流产组的致病性CNV率高于偶发流产组（P > 0.05）。结论：染色体数目异常和拷贝数变异在自然流产患者中的发生率均高于正常人群,但与自然流产次数无关     

全基因组染色体芯片在流产绒毛及死胎遗传学诊断中的应用

目的：探讨全基因组染色体微阵列芯片（chromosomal microarray analysis,CMA）在自然流产及死胎组织遗传学诊断中的临床应用价值,分析临床流产与染色体异常的相关性,为流产夫妇的遗传咨询和临床诊治提供指导。方法：利用Affymetrix Cytoscan 750K芯片对91例流产样本进行遗传学检测,利用ChAS 3.0软件进行判读分析,并参考DGV、DECIPHER、OMIM、ISCA、UCSC、ClinVar等国际公共病理性数据库,同时与既往文献进行比对,分析拷贝数变异的病理性。结果：91例流产绒毛和死胎样本均获得芯片结果,检测成功率为100%,共检出61例（67.03%）异常样本,除40例（65.57%）染色体非整倍体异常（30例三体、10例单体）外,CMA还检测出了10例（16.39%）染色体结构异常、2例（3.28%）多倍体、5例（8.20%）嵌合体、4例（6.56%）杂合性缺失/单亲二倍体。10例染色体结构异常涉及1p36.33p31.1、4p16.3、7q36.2q36.3、22q11.21等区带,其中4例为两条染色体间长短臂末端同时出现缺失和（或）重复,高度提示父母一方为相互易位携带者。结论：全基因组染色体微阵列芯片无需细胞培养,具有高通量、高分辨率、准确率高、报告周期短等优点,可为流产遗传学检测提供更全面的信息,为患者的病因诊断和再生育风险评估提供科学理论指导,可作为流产物遗传学诊断的主要检测技术。     

基于千人基因组谱系数据的拷贝数变异识别与分析

拷贝数变异（copy number variation, CNV）是基因组结构变异中的一个重要类型,它在人类很多复杂疾病的发生和发展过
程中扮演着重要角色。当前CNV的识别研究,主要集中在单一样本相对于参考序列的CNV识别,以及针对成对样本的CNV识
别。然而,这种单纯基于个体水平的CNV分析,只能局限于个体之间而无法进行亲本到子代的遗传学分析。本文基于千人基
因组计划中三样本父-母-子代的家系数据,寻找子代相对于父、母的变异区域,不仅识别出子女继承自父母的CNV,并通过分层
聚类分析推断出这些CNV的生成方式,同时还检测出少量疑似子代相对于父母的纯合CNV变异。
     

五例1p36微缺失流产胎儿的遗传学诊断及文献回顾

【】目的：对5例稽留流产绒毛进行遗传学检测,明确其病因和发生机制,为夫妇再次生育时复发风险评估及产前诊断提供依据。方法：应用Affymetrix Cytoscan 750K染色体微阵列芯片(chromosomal microarray analysis,CMA)对5例稽留流产绒毛进行全基因组拷贝数变异(copy number variation,CNV)分析,同时根据检出CNV片段大小及家属意愿,对5对夫妇设计合理的家系验证方案,以明确1p36微缺失的来源。结果：CMA检测结果显示胎儿1在1p36.32p36.31存在1.75Mb微缺失,胎儿父母常规核型分析和CMA检测均未见异常,但仍不排除父母一方是否为该片段插入易位携带者;胎儿2和3的CMA结果分别为1p36.13p36.12区段存在5.10 Mb微缺失和1p36.33p36.22区带存在9.21 Mb片段缺失,两者父母高分辨核型分析均未见异常,定制FISH探针检测也未发现该位点的缺失,重复或易位重排等异常,应为新发异常。CMA提示胎儿4和5分别在1p36.33p36.22和1p36.33p36.23区带存在9.28 Mb和7.64 Mb微缺失,胎儿4父母高分辨核型正常,胎儿5父母拒绝进一步行家系验证。结论：本文在国内外首次报道了5例1p36微缺失综合征引起的早孕期复发及偶发性流产,包括2例中间缺失和3例单纯末端缺失。CMA可发现流产胎儿隐匿性染色体亚显微结构变异,结合常规/高分辨核型分析、FISH、CMA等技术的优缺点,制定合理的家系验证方案,有助于明确染色体变异发生机制,对夫妻再孕时产前诊断和再发风险评估有重要价值。     

高通量测序在孕早期自然流产中的应用

目的探讨高通量测序技术在孕早期自然流产绒毛染色体检测中的应用。方法运用高通量测序技术对520例孕早期自然流产绒毛进行分析。结果检出异常绒毛染色体319例,包括295例染色体非整倍体和24例致病性染色体拷贝数变异,异常率为61.3%。常见的异常类型为常染色体三体(包括嵌合型)(64.6%),三倍体(10.7%),X单体(8.8%),致病性染色体拷贝数变异(7.5%)。结论绒毛染色体异常是导致孕早期自然流产的主要原因,异常率高达61.3%。高通量测序法检出率高,可检出染色体拷贝数变异,是检测孕早期自然流产绒毛染色体的有效方法。应重视流产绒毛染色体检测,以明确流产原因,指导下次妊娠。     

CNVplex联合STR技术在复发性流产遗传学查因中的应用

目的 运用快速检测绒毛染色体拷贝数变化的方法探讨复发性流产查因途径.方法 对60例反复自然流产病例的绒毛样本(孕13周前)分别进行多重DNA拷贝数(CNVplex)和荧光原位杂交(FISH)技术检测,所有样本同时行绒毛培养核型分析验证.结果 48例培养成功的复发性流产病例,染色体异常率为60.42％.其中48例CNVplex检测结果与核型分析相一致:包括20例染色体正常者、23例常染色体三体,3例三倍体和2例45,XO(Turner综合征);而FISH检测结果中与核型分析结果相符的只有38例.对于非嵌合体和非结构异常样本,两种方法与细胞遗传学核型分析结果符合率分别为100％ (CNVplex)和79.17％ (FISH).结论 应用CNVplex联合短串联重复序列(STR)技术可检测绒毛染色体拷贝数及检测5 Mbp以上的重复和缺失异常,利于分析流产病因.     

比较基因组杂交微阵列技术在高龄孕妇产前诊断胎儿染色体异常中的应用

  目的  探讨比较基因组杂交微阵列（array-based comparative genomic hybridization,a-CGH）技术在高龄孕妇产前诊断胎儿染色体异常中的临床意义。  方法  选取因单纯高龄因素孕期行羊膜腔穿刺采集羊水标本进行产前检查诊断的孕妇3 677例为研究对象,采用CGXTM（8X60K）芯片对采集的羊水标本进行a-CGH检测,并采用Genoglyphix?软件进行分析。  结果  3 677例孕妇羊水标本中,a-CGH分析共检出染色体异常75例,异常率为2.04%,其中非整倍体40例（21-三体22例,18-三体5例,XXY 8例,XYY 3例,X/XX 2例）,占53.33%;致病性拷贝数变异（copy number variations,CNVs）24例（19例为微缺失,5例为微重复,片段大小为323～26 780 kb）,占32.00%;可能致病CNVs 11例（4例为微缺失,7例为微重复,片段大小为358～16 873 kb）,占14.67%。此外,检出不明意义CNVs 31例,占总数的0.84%。高龄孕妇年龄每增长一岁,染色体非整倍体检出率明显增高（P<0.05）,但致病性CNVs检出率在各年龄段差异无统计学意义（P>0.05）。  结论  a-CGH不仅可以检测非整倍体异常,还可以检出微缺失/微重复综合征等染色体拷贝数变异。胎儿染色体非整倍体的发生率与年龄密切相关,但染色体拷贝数变异发生率与年龄无显著相关性。     

染色体微阵列分析技术在超声筛查心室强光点胎儿产前诊断中的应用

【摘要】 目的 探讨染色体微阵列分析技术（chromosomal microarry analysis, CMA）在超声筛查心室强光点胎儿产前诊断中的临床应用价值。方法 采用美国Affymetrix公司CytoScan 750K芯片对医院183例超声筛查提示心室强光点的胎儿羊水标本进行检测,并用Chas v31软件对结果进行分析。结果 183例心室强光点胎儿羊水标本中,CMA共检出染色体异常胎儿9例,异常检出率为492%,其中非整倍体3例（21三体1例、XXY 1例、XYY 1例）,占总例数的164%;具有临床意义拷贝数变异（pathogenic copy number variation, pCNV）6例（其中1例为16p1311复发性微缺失）,占总例数的328%。 结论 与传统染色体核型分析及其他快速产前诊断方法相比,CMA针对全染色体,可有效地额外检出具有临床意义的微缺失/微重复,从而显著提高心室强光点胎儿染色体异常的检出率,可有效降低胎儿出生缺陷的发生。     

青海地区高龄孕妇胎儿染色体基因拷贝数异常分析

目的：探讨染色体核型分析联合基因组拷贝数变异测序（CNV-seq）检测青海地区高龄孕妇胎儿染色异常发生率。方法：收集2016年1月—2020年12月在我院因高龄行羊水穿刺术的孕妇624例,对胎儿羊水均行染色体核型分析及CNV-seq检测,对高龄孕妇染色体拷贝数异常的发生率及类型进行回顾性分析。结果：在624例羊水标本中,检测出染色体核型异常133例,其中21-三体21例,13-三体1例,18-三体2例,性染色体异常9例（其中2例为嵌合型）。检测出拷贝数变异71例,其中致病性变异24例,良性或临床意义不明47例。染色体核型异常的检出率为5.29%(33/624),致病性微缺失微重复检出率3.8%(24/624),两者结合检查致病性染色体异常为9.1%。结论：通过对高龄孕妇进行介入性产前诊断可以减少出生缺陷的发生。降低了出生缺陷率。     

构建基于荧光多重cPCR的小鼠基因拷贝数检测方法

目的： 建立基于竞争性聚合酶链式反应(competitive polymerase chain reaction, cPCR)小鼠基因拷贝数变异（copy number variaitons, CNVs）的检测方法，用于检测“野生来源小家鼠一号染色体替换系”群体（Population of specific chromosome 1 substitution strains, PCSSs）的CNVs。 方法：选取小鼠一号染色体上11个CNVs位点，及7、9和X染色体上各1个内对照位点，分别构建克隆质粒为竞争性粒模板，应用cPCR技术，建立荧光通用引物多重cPCR 检测方法。结果：多重cPCR 方案适用于小鼠一号染色体上11个CNV位点的拷贝数检测，且能准确检测X染色体的拷贝数。结论：实现小鼠快速、高通量的CNVs检测，可准确检测小鼠1号染色体中11个CNV位点的拷贝数变异。     

CNV-Seq联合核型分析在羊水穿刺胎儿染色体嵌合体诊断中的应用

目的 探讨低深度基因组拷贝数变异测序（CNV-Seq）联合染色体核型分析在胎儿嵌合体诊断中的应用。方法 选取2018年1月至2019年9月在中国科学技术大学附属第一医院妇产科产前诊断中心行常规产前诊断的孕妇为研究对象，B超引导下行羊膜腔穿刺术获取羊水标本3 320份，所有标本均同时进行染色体核型分析（双线独立操作）及CNV-Seq，将诊断为胎儿染色体嵌合体的病例纳入回顾性分析。结果 3 320例穿刺羊水标本中，共检测出胎儿染色体嵌合体19例（阳性检出率为0.57%），其中，羊水核型检测出16例（阳性检出率为0.48%），CNV-Seq检测出12例（阳性检出率为0.36%）。无创产前检查提示异常的标本检出嵌合体8例，超声、胎儿颈项透明层厚度提示异常的标本检出嵌合体5例，孕妇高龄检出嵌合体2例，唐氏筛查结果提示高风险孕妇检出嵌合体4例。在2种方法联合检出的19例嵌合体中，性染色体嵌合9例，常染色体嵌合10例。3例核型分析无明显异常嵌合的病例，CNV-Seq技术检测出嵌合，后经荧光原位杂交证实其为真性嵌合。结论 CNV-Seq联合染色体核型分析，可以弥补单一检测方法诊断羊水穿刺胎儿染色体嵌合体出现误诊的不足，有望为产前遗传咨询提供更加可靠的实验室诊断结果。