ROCK蛋白在肝癌中的表达及临床意义

目的了解肝癌组织中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）表达水平,探讨其在肝癌组织中表达的临床意义。方法在60例肝癌标本中,采用ROCK蛋白特异标记物抗体进行免疫组化染色,了解肝癌组织中ROCK的表达及分布情况,结合病例的年龄、性别、分期、转移情况,了解ROCK蛋白表达情况与不同临床病例参数之间的关系。结果肝癌组织中ROCK蛋白表达明显高于正常肝组织,ROCK蛋白的表达在分期较晚及有转移的病例中较高,并具有统计学意义（P〈0.05）。结论肝癌组织中,ROCK蛋白的高表达对肿瘤的浸润和转移起到一定作用。     

TRPV1修饰BMSCs治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的研究

目的 探讨SPIO标记3.0T磁共振成像辅助示踪技术在TRPV1基因修饰BMSCs治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的相关影响.方法 提取并培养鼠源骨髓间充质干细胞(BMSCs),利用流式细胞仪进行鉴定.通过Cas-9技术构建TRPV1的过表达载体,利用慢病毒转染BMSCs,根据病毒转染情况将BMSCs分成3组,即空白对照组、阴...     

骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠中枢α-氨基羟甲基恶唑丙酸受体蛋白表达的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠海马和杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体蛋白谷氨酸受体(GluR)1,2表达的影响,探讨BMSCs移植治疗大鼠脊髓损伤的潜在抗慢性应激作用.方法 选择成年雄性SD大鼠48只,按随机数字表法分为对照组、模型组、治疗组,每组16只.模型组、治疗组采用改良Allen法建立大鼠下胸段(T10)脊髓损伤模型.造模后7d,于L4～L5间隙蛛网膜下腔向对照组及治疗组注射100μl含1.0×106BMSCs的Hank缓冲液混悬液,模型组注射同体积Hank缓冲液.术前、术后评估大鼠后肢运动功能.每组于移植后第14,28天处死一半动物,灌注后取脑,冰冻切片后行GluR1、GluR2免疫组织化学染色.结果 BMSCs移植后,治疗组动物后肢运动功能持续恢复.移植术后14 d,GluR1阳性细胞数,模型组和治疗组在海马CA1区均高于对照组(P ＜0.05,0.01);GluR2阳性细胞数有类似趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).移植术后28 d,GluR1阳性细胞数,模型组在CA1、CA3、DG区均高于对照组,在CA1、CA3区亦高于治疗组(P＜0.05,0.01),模型组和治疗组在DG区均高于各自移植后14 d阳性细胞数(P＜0.05,0.01);GluR2阳性细胞数,治疗组在基底外侧杏仁核(BLA)高于对照组(P＜0.05),在其他区各组表现出与GluR1表达类似的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs移植可改善大鼠下胸段脊髓损伤模型的后肢运动功能,并对其中枢AMPA受体GluR1/2表达有调节作用,表现出潜在的抗慢性应激作用.     

骨形态发生蛋白9介导的成骨及其调控研究进展

骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins,BMPs）属于转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族成员之一,在骨骼发育、骨形成和干细胞分化中起着至关重要的作用。目前研究表明,BMP9具有特殊的蝴蝶样构型的半胱氨酸支架结构;在BMP家族中,BMP9是体内和体外诱导间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs））成骨分化能力最强的蛋白;较传统BMP而言,BMP9具有更特殊的调控因子和更复杂的串扰机制;在修复骨缺损、促进脊柱融合方面,BMP9也显示出良好的骨再生能力。本文就BMP9结构特点、成骨作用、调控机制及其临床应用前景作一综述。     

低氧环境中几种中药注射液对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨在低氧环境下雪莲、红花和红景天注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)增殖的影响.分离、纯化、培养大鼠rMSCs细胞,选择雪莲、红花和红景天注射液,通过四甲基偶氮唑法检测法(MTT) 和 Brdu 标记的方法检测这些中药注射液在低氧条件对大鼠rMSCs增殖的促进作用.结果:在低氧条件下红景天注射液对 rMSCs 的增殖效率与对照组比较差别有显著性,有明显的增殖作用.而红花注射液对 rMSCs 的增殖无显著作用.雪莲注射液对 rMSCs 的增殖率有明显的抑制作用.结论:红景天注射液在低氧条件下具有促进 rMSCs 增殖的作用.雪莲注射液在低氧条件下具有抑制 rMSCs 增殖的作用.     

鸢尾素对兔骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

 目的 探讨鸢尾素对兔骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成脂分化的影响及其信号机制。方法 分离、培养兔BMSCs,检测鸢尾素对BMSCs增殖的影响。BMSCs成脂诱导后,实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction,PCR)检测成脂相关基因PPARγ和C/EBPα的转录表达,油红O染色检测细胞内脂质形成情况,Western blot检测Wnt10a信号蛋白的表达。结果 鸢尾素不影响BMSCs的增殖活性;显著下调PPARγ[成脂诱导第7天,(0.20±0.06)vs(1.00±0.10);成脂诱导第14天,(0.61±0.06)vs(1.00±0.15)]和C/EBPα[成脂诱导第7天,(0.40±0.06)vs(1.00±0.12);成脂诱导第14天,(0.70±0.09)vs(1.00±0.18)]的表达,明显抑制BMSCs成脂分化[(0.45±0.05)vs(0.95±0.10);P<0.05];同时,鸢尾素明显促进Wnt10a表达[(5.01±0.78)vs(1.00±0.25);P<0.05]。结论 鸢尾素可抑制BMSCs脂向分化,其作用与激活Wnt信号通路有关。     

实时定量PCR检测GDNF基因转染大鼠BMSCs后的转录水平

目的 了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和空质粒重组腺病毒感染BMSCs,并按感染后培养时间的不同(3、6、9和12天)又分为4个亚组.采用实时定量PCR技术检测GDNF基因在BMSCs中的转录水平.结果 空质粒转染组和未转染组无GDNF mRNA的表达,GDNF基因转染组在转染后3～12天的GDNF mRNA相对表达量为0.007 51±0.000 67.结论 腺病毒介导的基因转染技术将GDNF基因转染至骨髓间充质干细胞中,有外源性基因GDNF mRNA的表达,这为进一步研究以GDNF基因转染的BMSCs治疗中枢神经系统疾病奠定了基础.     

重组人sCR1蛋白对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨可溶性补体受体1型（sCR1）蛋白对大鼠肢体缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法制作大鼠肢体I/R模型;采用解放军153中心医院检验中心制备的重组人sCR1蛋白对大鼠模型进行早期干预,观察0、4、8 h时间点sCR1蛋白干预组与生理氯化钠溶液对照组I/R损伤肌组织细胞形态学、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）表达水平变化。结果 sCR1蛋白干预组的MDA、MPO、LDH表达水平明显低于对照组,以I/R 4 h组相差最为显著（P〈0.01）。组织细胞形态学变化：sCR1蛋白干预组在相同时间点均较对照组肌组织结构变性明显减轻。结论对大鼠肢体I/R模型进行sCR1蛋白早期干预可明显减轻大鼠后肢骨骼肌I/R损伤。     

牵张刺激对大鼠骨髓间充质干细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究机械刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesehchymal stem cells,BMSCs)分化的影响.方法 对大鼠BMSCs施以10%形变,1 Hz的周期性单向牵张刺激,并检测牵张不同时段后,其Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的表达和这2种蛋白的分泌.结果 牵张12 h后,BMSCs Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达与对照组相比增高有显著差异,24 h后,种胶原蛋白的合成与对照组相比有统计学差别.结论 说明机械刺激可以促进BMSCs合成Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白.     

骨髓间充质干细胞及其外泌体干预自发性高血压大鼠降低脑卒中风险研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）及其外泌体（BMSCs-exosomes,BMSCs-exo）对自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rats,SHR）脑卒中的干预作用。方法 体外分离法获取大鼠BMSCs诱导形成BMSCs-exo,然后尾静脉注射干预SHR,观察大鼠脑卒中发生率及患病时间。实验动物选取雄性12周龄SHR,随机分为BMSCs组、BMSCs-exo组和NaCl组,分别通过尾静脉注射BMSCs、BMSCs-exo和生理盐水干预SHR,Nor组为尾静脉注射生理盐水进行干预SD大鼠,测量各组大鼠体重、血压并观察大鼠生活习性,进行脑卒中临床评分;第6周,采用多普勒血流测量仪检测大鼠脑血流灌注量记录图像及数值;左心室穿刺法Medlab生理测量仪测定各组大鼠左心室压力,收集图像并记录。结果 SHR经过6周干预处理,大鼠的尾动脉压和左心室压力BMSCs-exo组和BMSCs组较NaCl组大鼠明显降低,仍高于Nor组水平（P<0.05）。NaCl组大鼠脑血流灌注量显著低于Nor组（P<0.001）,BMSCs-exo组和BMSCs组干预后大鼠脑血流灌注量增加（P<0.05）,但2组间差异比较无统计学意义（P>0.05）。结论 BMSCs和BMSCs-exo干预SHR,均可一定程度上降低大鼠外周血压及左心室压力,改善大鼠脑血流灌注量,减少SHR脑卒中发生率。     

苦瓜提取物联合脂肪干细胞移植对顺铂所致大鼠肾损伤的影响

目的探讨苦瓜提取物联合脂肪干细胞移植对顺铂所致大鼠肾脏损伤的保护机制。方法复苏培养脂肪干细胞后行PKH-26标记。制备顺铂肾损伤大鼠模型,随机分为模型组、脂肪干细胞组、苦瓜提取物组、联合治疗组,15只/组,随机选取15只大鼠作为对照组。造模成功后24 h脂肪干细胞组大鼠经尾静脉注射0.5 mL 1×108/L脂肪干细胞悬液,苦瓜提取物组大鼠灌胃80 mg/kg苦瓜提取物,联合治疗组大鼠同时给予脂肪干细胞悬液和苦瓜提取物,对照组和模型组尾静脉注射0.5 mL DMEM/F12培养液,1/d,连续进7 d。7 d后检测大鼠血肌酐、血尿素氮水平和尿N-乙酰-β-D-葡萄（N-acetyl-b-D-glucosaminidase,NAG）、尿γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)、尿蛋白含量,取大鼠肾组织行苏木精-伊红染色、TUNEL染色、RT-PCR及Western Blot检测。结果与对照组比较,模型组血肌酐、血尿素氮含量及尿NAG、γ-GT、尿蛋白升高(P<0.05),苦瓜提取物组、脂肪干细胞组以上指标含量较模型组降低(P<0.05),联合治疗组明显降低(P<0.05)。联合治疗组的病理改善情况优于脂肪干细胞组和苦瓜提取物组,脂肪干细胞组和苦瓜提取物组较模型组改善,但不及联合治疗组。PKH-26标记的脂肪干细胞,联合治疗组多于脂肪干细胞组,模型组及苦瓜提取物组未见PKH-26阳性细胞。TUNEL细胞凋亡数结果显示模型组最多,而对照组最少,且联合治疗组低于苦瓜提取物组和脂肪干细胞组(P<0.05)。与对照组比较,模型组RAGE、ROS、Bax的mRNA和蛋白表达水平上调（P<0.05）,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平下调（P<0.05）。与模型组比较,苦瓜提取物组、脂肪干细胞组RAGE、ROS、Bax的mRNA和蛋白表达水平下调（P<0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调（P<0.05）。联合治疗组RAGE、ROS、Bax的mRNA和蛋白表达水平下调较苦瓜提取物组、脂肪干细胞组明显（P<0.05）,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平上调亦明显（P<0.05）。结论苦瓜提取物联合脂肪干细胞移植可能通过调控RAGE-ROS信号通路减少肾细胞凋亡发挥对顺铂致大鼠肾损伤的保护作用。