糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠Nrf2/ARE通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠Nrf2/ARE通路相关蛋白的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为空白对照组和链脲佐菌素(STZ)组,STZ组大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ,造模1周后,将空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L的大鼠稳定1个月后,随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,并给予相应药物12周。麻醉取大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学方法检测大鼠坐骨神经Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、及谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱,脱髓鞘严重,坐骨神经中Keap1、Nrf2、HO-1和γ-GCS的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,糖络宁低、高剂量组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱和脱髓鞘现象得到改善,其中糖络宁低剂量组Keap1、Nrf2表达增加,糖络宁高剂量组HO-1、γ-GCS表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论糖络宁能够改善DPN大鼠坐骨神经的病理状态,上调Nrf2/ARE信号通路中Keap1、Nrf2、HO-1及γ-GCS的表达,增强机体抗氧化应激的能力。     

天香丹对冠脉微循环障碍大鼠Nrf2/ARE信号通路表达的影响

目的探究天香丹对冠脉微循环障碍大鼠核转录因子 NF-E2 相关因子 2 /抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路相关因子mRNA及蛋白表达的影响。方法36只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、尼可地尔组、天香丹组，每组9只。除空白对照组外，其余大鼠开胸后左心室内注射月桂酸钠建立冠脉微循环障碍大鼠模型。各组大鼠分别给予天香丹［0.9408 （大鼠体重）2/3g/d］、尼可地尔［0.7840 （大鼠体重）2/3mg/d］、生理盐水灌胃28天，每只大鼠给药体积均为2 mL/d。HE染色观察大鼠心肌形态学变化，RT-PCR及Western Blot 法观察各组大鼠心肌中Nrf2/ARE信号通路核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、氧化氢酶（CAT）、血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA及蛋白的表达变化。结果HE染色显示天香丹可减轻冠脉微循环障碍大鼠微血栓程度。与空白对照组比较，模型组大鼠 Nrf2、NQO1、CAT mRNA 表达降低（P<0.05），Keap1 mRNA及蛋白表达均降低（P<0.05）；与模型组比较，尼可地尔组Nrf2 mRNA及蛋白表达量明显升高（P<0.05），CAT mRNA表达升高（P<0.05），HO-1 mRNA表达降低（P<0.05）；天香丹组Nrf2、NQO1、CAT、HO-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05），Keap1 mRNA表达升高（P<0.05）；与尼可地尔组比较，天香丹组Nrf2、Keap1、NQO1、CAT、HO-1 mRNA表达升高（P<0.05），CAT蛋白表达升高（P<0.05）。结论天香丹改善冠脉微循环障碍机制可能与调控Nrf2/ARE信号通路有关。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。     

基于 Keap1-Nrf2-ARE 通路探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制

目的基于Kelch样相关蛋白1-核因子E2相关因子-抗氧化反应元件信号通路(Keap1-Nrf2-ARE)及下游Maf、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、血红素加氧酶(HO-1)蛋白表达探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制。方法清洁级SD雄性大鼠60只随机分为对照组、模型组、安慰剂组、治疗组,每组15只。采用腺嘌呤[100 mg/(100 g·d)]灌胃10天造模,对照组灌胃等量生理盐水。造模结束后治疗组予以加味天雄散中药灌服,安慰剂组给予等量生理盐水,连续灌胃30天。RT-PCR检测附睾组织Keap1、Nrf2 m RNA表达;Western Blot检测附睾组织Keap1、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达;检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果与对照组比较,模型组Keap1 m RNA及蛋白表达、MDA水平升高(P<0.01),Nrf2m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平降低(P<0.01)。与模型组和安慰剂组比较,治疗组Keap1m RNA及蛋白表达、MDA水平降低(P<0.01),Nrf2 m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平升高(P<0.01)。结论加味天雄散能够通过调节弱精子症大鼠精子Keap1-Nrf2-ARE通路及下游Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达,调控氧化应激反应,从而改善精子活力。     

基于Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路探讨泰山磐石散对流产大鼠子宫蜕膜的影响

目的 探讨泰山磐石散对流产大鼠子宫蜕膜组织Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将18只SPF级受孕后的SD大鼠分成空白对照组、模型组和治疗组，每组各6只。模型组和治疗组于妊娠第6～8天予皮下注射溴隐亭溶液建立流产模型；妊娠第1～11天，治疗组予泰山磐石散药液灌胃，空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。于妊娠第12天取子宫。观察3组大鼠死胎个数及胚胎总数，并计算出胚胎吸收率；HE染色法观察大鼠母胎界面蜕膜组织形态学变化，RT-PCR和免疫组化法分别检测各组大鼠母胎界面蜕膜组织中Keap1、Nrf2和HO-1基因水平和蛋白表达。结果 与空白对照组比较，模型组大鼠胚胎吸收率明显提高（P<0.01），蜕膜组织中Keap1基因水平及蛋白表达明显提高（P<0.05,P<0.01）,Nrf2和HO-1基因水平及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠蜕膜组织中Keap1基因水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1基因水平明显提高（P<0.01）,HO-1蛋白表达明显提高（P<...     

天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。     

天麻钩藤饮对脑缺血模型大鼠皮层组织中Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的研究天麻钩藤饮对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层组织中氧化应激损伤的影响及作用机制。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、天麻钩藤饮组和阻断剂组,每组10只。除假手术组大鼠行假手术外,其余各组大鼠均采用线栓法复制大鼠中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型。造模成功后3 h内开始予相应药液灌胃给药,每日灌胃1次,连续给药3 d。末次给药2 h后获取脑组织样本;苏木精-伊红(HE)染色后观察脑组织病理学变化;RT-PCR及Western blot法检测大脑皮层组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组Nrf2、HO-1 mRNA表达、HO-1蛋白表达及神经功能评分均明显提高(P<0.05);与模型组比较,天麻钩藤饮组Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均明显提高(P<0.05),神经功能评分均明显降低(P<0.05);与天麻钩藤饮组比较,阻断剂组Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),神经功能评分均明显提高(P<0.05)。结论天麻钩藤饮对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路被激活有关。     

黄芪葛根汤对高脂血症大鼠脂质代谢和氧化应激的影响北大核心CSCD

目的观察黄芪葛根汤对高脂饲料(HFD)诱导的高脂血症模型大鼠的影响。方法将50只大鼠随机分为正常组、模型组、阿托伐他汀钙组(阿托伐他汀钙片5 mg/kg)、黄芪葛根汤低剂量组(5 g/kg)、黄芪葛根汤中剂量组(10 g/kg),每组10只;采用HFD喂养制备高脂血症模型大鼠,造模同时灌胃给药,正常组和模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃20天。采用全自动生化分析仪检测血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平,HE染色及油红染色观察大鼠肝脏病理变化,ELISA法测定肝组织活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平,RT-PCR及Western Blot法检测核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA及蛋白的表达水平。结果与正常组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C和肝脏ROS、MDA水平升高(P<0.01),血清HDL-C、肝脏Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白和肝脏GSH、SOD水平下降(P<0.01,P<0.05),肝脏脂肪、脂滴显著堆积。与模型组比较,黄芪葛根汤低剂量组血清TC、TG、LDL-C和肝脏ROS、MDA水平降低(P<0.01,P<0.05),Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白水平及肝脏GSH、SOD水平升高(P<0.01,P<0.05),模型大鼠肝脏脂肪堆积和脂滴积聚改善。结论黄芪葛根汤对HFD诱导的高脂血症大鼠具有降血脂作用,并通过激活Nrf2/HO-1通路改善高脂血症大鼠的氧化应激状态。     

基于Nrf2通路探讨溃结宁膏穴位敷贴治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的? 基于Nrf2信号通路探讨溃结宁膏穴位敷贴在脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠黏膜抗氧化应激的作用机制。方法?将65只雄性SD大鼠，随机分为空白组（10只）、造模组（55只），造模组采用腺嘌呤、冰番泻叶分阶段灌胃结合外因干预，并予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠制备UC病证结合动物模型，模型评价后将造模组大鼠按照体重随机分为模型组（8只）、穴位组（7只）、非穴位组（7只）、柳氮磺胺吡啶（SASP）组（8只）、SASP合穴位组（8只）。病证结合模型大鼠分别予溃结宁膏穴位敷贴“中脘”“气海”“足三里”“天枢”，溃结宁膏非穴位敷贴于双臀部肌肉丰厚处，SASP组予SASP灌胃，SASP合穴位组予穴位敷贴合SASP灌胃同步处理，每日1次，共28天。观察大鼠疾病活动指数（DAI）评分、结肠组织病理改变、结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分、结肠组织学损伤指数（TDI）评分，同时运用免疫组化法检测结肠组织中Nrf2和HO-1蛋白表达，PCR检测Nrf2、Keap1 mRNA表达。结果?与空白组比较，模型组CMDI、TDI评分、Nrf2和HO-1蛋白含量及Nrf2和Keap1mRNA表达升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，穴位组、SASP组、SASP合穴位组CMDI、TDI评分降低（P<0.01），Nrf2、HO-1蛋白含量及Nrf2 mRNA表达升高（P<0.01）而Keap1 mRNA表达降低（P<0.05，P<0.01）；与SASP组比较，穴位组、SASP合穴位组各项指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论?溃结宁膏穴位敷贴通过调控氧化应激反应中的Nrf2信号通路，上调Nrf2、HO-1蛋白和Nrf2 mRNA的表达，并下调Keap1 mRNA的表达，抵御结肠氧化应激反应，减轻肠黏膜炎症，促进结肠黏膜愈合，进而发挥治疗UC的作用。     

温经汤对寒凝血瘀模型大鼠卵巢血红素氧合酶表达的影响

目的观察温经汤对寒凝血瘀模型大鼠卵巢血红素氧合酶1(HO-1)、血红素氧合酶2(HO-2)的影响,探讨温经汤治疗寒凝血瘀型妇科疾病的作用机制。方法按随机数字表法将40只SD雌性大鼠分为正常组、模型组、温经汤低剂量组(低剂量组)、温经汤高剂量组(高剂量组),每组10只。低剂量组、高剂量组于造模的第1天开始,分别按14.66、29.32g/(kg.d)-1给予温经汤灌胃,每日1次,连用2周。其余两组给予同体积的蒸馏水。采用血红蛋白结合及联二亚硫酸盐还原法测定血浆一氧化碳(CO)活性;采用免疫组织化学SP法检测卵巢颗粒细胞和黄体细胞HO-1、HO-2蛋白表达;采用原位杂交法检测卵巢颗粒细胞和黄体细胞HO-1、HO-2 mRNA的表达。结果高剂量组、低剂量组大鼠血浆碳氧血红蛋白(COHb)活性较模型组明显增强(P<0.05或P<0.01);卵巢颗粒细胞、黄体细胞HO-1、HO-2蛋白表达,HO-1 mRNA、HO-2 mRNA表达加强(P<0.05或P<0.01)。结论温经汤治疗寒凝血瘀型妇科疾病的作用可能与调节HO-1、HO-2水平有关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的影响

目的:以氧化应激损伤为切入点探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为模型组,假手术组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),益气活血方高、中、低剂量组(2. 916,1. 458,0. 729 g·kg~(-1)),连续灌胃14 d后,采用结扎双侧颈总动脉法建立急性脑缺血损伤模型,透射电镜观察突触超微结构,生化法检测脑匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠缺血区脑皮层血红素氧化酶-1(HO-1),核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白和m RNA表达。结果:透射电镜观察结果显示益气活血方对脑缺血损伤程度有明显改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠脑匀浆MDA水平显著上升,T-SOD,GSH-Px水平显著降低(P 0. 01),LDH,Na+-K~+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶及ATP酶的活性均明显降低(P 0. 05,P 0. 01),脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量以及HO-1,Nrf2 m RNA表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,益气活血方中、高剂量组可明显降低脑组织中MDA含量,升高T-SOD,GSH-Px的水平(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方高剂量组可显著增加LDH,Na+-K+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和总ATP酶活性(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方中、高剂量组大鼠脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方高剂量组HO-1,Nrf2 m RNA表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血方可能通过Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激水平实现对脑缺血损伤的保护作用。     

丹酚酸B对大鼠缺血心肌血管再生的促进作用

目的研究丹酚酸B促进缺血心肌血管生成的分子作用机制。方法制备心肌梗死大鼠模型,50只大鼠随机分为假手术组、模型组及丹酚酸B低、中、高(20、40、60mg/kg)剂量组,尾iv给药1周后,测定大鼠心肌梗死面积;免疫组化法检测大鼠心肌梗死边缘区微血管密度;试剂盒检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnI)和乳酸脱氢酶(LDH)的量;Western blotting法检测大鼠心肌梗死边缘区核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平。结果与模型组比较,丹酚酸B中、高剂量组大鼠心肌梗死面积显著减少(P0.05);丹酚酸B低、中、高剂量组大鼠微血管密度显著增加(P0.05);丹酚酸B中、高剂量组大鼠血清CK-MB、LDH和cTnI水平显著下降(P0.05);丹酚酸B低、中、高剂量均可增加大鼠心肌梗死边缘区VEGF、Nrf2和HO-1蛋白水平的表达(P0.05),其中以丹酚酸B高剂量组效果最佳。结论丹酚酸B可促进大鼠缺血心肌血管再生,该作用与其增加心肌组织VEGF、Nrf2和HO-1的表达有关。     

帕病2号方对帕金森病模型大鼠中脑黑质Nrf2，HO-1表达的影响

目的：观察帕病2号方对6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致帕金森病（PD）大鼠中脑黑质组织内核因子E2相关性因子2（Nrf2）以及下游靶基因血红加氧酶1（HO-1）的表达。方法：采用6-OHDA左侧纹状体两点注射法建立PD大鼠模型,经阿卟吗啡（APO）诱导表现为恒定右侧旋转且旋转圈数大于210 r·30 min^-1视为成功PD大鼠模型。24只造模成功大鼠随机分为模型组,帕病2号方低、中、高剂量组（8.0,16.0,32.0 g·kg^-1）,同时设立正常组,假手术组。正常组,假手术组,模型组给予等容积蒸馏水,连续灌胃给药4周。Western blot 法检测中脑黑质Nrf2细胞核蛋白及HO-1蛋白表达。RT-PCR法检测中脑黑质Nrf2,HO-1mRNA表达。结果：与假手术组比较,模型组Nrf2细胞核蛋白,HO-1蛋白表达上调（P<0.01）,Nrf2,HO-1mRNA水平上调（P<0.01）;与模型组比较,帕病2号方低、中、高剂量组大鼠中脑黑质组织Nrf2细胞核蛋白,HO-1蛋白表达明显上调（P<0.01）,Nrf2,HO-1mRNA水平上调（P<0.01）,帕病2号方高剂量组与中、低剂量组比较有明显差异（P<0.01）。结论：6-OHDA造模后可以激活Nrf2/HO-1信号通路;帕病2号方治疗后进一步提高Nrf2细胞核蛋白和Nrf2mRNA表达,进而上调下游靶基因HO-1蛋白及HO-1mRNA的表达,且帕病2号方高剂量组作用更为明显。     

基于津液理论探讨改良枳术方对便秘大鼠AQP3/AQP9、MUC2的影响＊

目的 在津液理论指导下探讨改良枳术方对于便秘大鼠AQP3/AQP9、MUC2的影响。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组、改良枳术方低、中、高剂量组，每组8只。除空白组外，其他各组均采用洛哌丁胺灌胃制备慢传输便秘大鼠模型。改良枳术方低、中、高剂量组大鼠分别给予4.725、7.875、11.024 g/（kg·d）灌胃，莫沙必利组以1.56 mg/（kg·d）莫沙必利混悬液灌胃，空白组和模型组灌胃等剂量的蒸馏水。每天一次，共持续7天。检测各小组大鼠24 h粪便颗粒数，粪便含水量、肠道转运时间、肠道推进率、免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot， WB）测定结肠水通道蛋白3（Aquaporin3， AQP3）、水通道蛋白9（Aquaporin9， AQP9）、黏蛋白2（Mucin 2， MUC2）蛋白表达。结果 与空白组比，模型组大鼠24 h粪便颗粒数及粪便含水量明显减少、肠道转运时间延长、肠道推进率降低，结肠AQP3蛋白表达升高、MUC2蛋白表达降低（P<0.05）；与模型组比，改良枳术方各组大鼠24 h粪便颗粒数及粪便含水量明显增加、肠道推进率增加，改良枳术方各组结肠AQP3表达下降、MUC2蛋白表达增加（P<0.05）；与模型组比，改良枳术方高剂量组结肠AQP9蛋白表达明显下降（P<0.05）。结论 AQP3/AQP9、MUC2介导的结肠“津”“液”代谢在便秘发生发展中发挥重要作用，改良枳术方用于便秘疗效确切，其中以中、高剂量效果更佳，可能的作用机制为通过AQP3/AQP9、MUC2从而调控结肠的“津”“液”代谢。     

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P 0. 05,P 0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。     

红景天苷改善糖尿病大鼠肝脏糖脂水平的作用机制

目的:探讨红景天苷对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢作用机制。方法:6~7周龄雄性Zucker糖尿病(ZDF)(fa/fa)大鼠24只,按照血糖随机分为模型组,红景天苷低剂量组(0. 05 g·kg~(-1)),红景天苷高剂量组(0. 1 g·kg~(-1)),8只/组,另选同周龄ZDF (fa/+)大鼠8只为正常组,连续给药干预6周。实验结束后,检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),甘油三酯(triglyceride,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),超氧化物酶歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialdehyde,MDA),过氧化氢酶(catalase,CAT),血清胰岛素水平(fasting insulin,Fins),胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment insulin resistance,HOMA-IR);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏蛋白激酶样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK),核转录因子2相关因子2(NF-E2-relatedfactor2,Nrf2),血红素氧化酶~(-1)(heme oxidase-1,HO-1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,Fins,HOMA-IR,TC,TG,FFA,MDA明显升高(P 0. 05,P 0. 01); SOD,CAT明显降低(P 0. 05,P 0. 01);肝脏p-PERK,Nrf2,HO-1蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,红景天苷高、低剂量组大鼠FBG,Fins,HOMA-IR,TC,TG,FFA,MDA明显降低(P 0. 05,P 0. 01); SOD,CAT明显升高(P 0. 05,P 0. 01);肝脏p-PERK,Nrf2,HO-1蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:红景天苷能够改善糖尿病大鼠糖脂水平、胰岛素抵抗,可能是通过上调p-PERK,Nrf2,HO-1蛋白表达,抑制氧化应激实现的。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠oatp4a1、代谢紊乱与肠道菌群的影响

[目的]探究苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠oatp4a1、代谢紊乱与肠道菌群的影响。[方法]选取40只SPF级SD雌性大鼠,随机分为正常（N）组、模型（M）组、低剂量苍附导痰汤（D）组、高剂量苍附导痰汤（H）组,每组10只,对M组、D组、H组采用脱氢表雄酮（DHEA）及高脂饲料建立多囊卵巢综合征模型,N组不建立该模型,建模后对D组灌胃1.42 g/kg苍附导痰汤,对H组灌胃5.68 g/kg苍附导痰汤,N组、M组同期给予同体积生理盐水灌胃,苏木精-伊红（HE）染色法检测卵巢组织病理形态,免疫组化法检测卵巢组织中有机阴离子转运多肽4a1(oatp4a1)蛋白表达,血糖仪、酶联免疫吸附测定（ELISA）法及放射免疫法检测大鼠血清中代谢相关水平,肠道菌群选择性培养基检测大鼠肠道菌群数量变化。[结果]与N组比较,M组大鼠动情前期、卵巢指数明显升高（P<0.05）,动情期明显降低（P<0.05）;与M组比较,D组、H组大鼠动情前期、卵巢指数显著降低（P<0.05）,动情期显著升高（P<0.05）,且H组比D组变化明显（P<0.05）。N组大鼠卵巢组织及卵泡生长正常,...     

栝楼桂枝颗粒激活Nrf2信号通路减轻脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激损伤作用

目的:探讨栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激的保护作用及分子机制。方法:建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,栝楼桂枝颗粒灌胃给药后,核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测大鼠脑梗死面积,化学荧光法测定脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,水溶性四唑蓝法(WST)测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,紫外法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)和比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)分别检测脑组织中核转录因子-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2),细胞质中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]及Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-like ECHassociated protein1,Keap1)的蛋白表达和mRNA相对含量。结果:栝楼桂枝颗粒能够明显减小大鼠脑梗死面积,减少ROS和MDA的产生(P0.01),增加SOD,CAT和GSH-Px活力(P0.01)。此外,栝楼桂枝颗粒能够上调脑组织中Nrf2,HO-1,NQO1及Keap1的表达。结论:栝楼桂枝颗粒可能通过上调Nrf2信号通路,从而抑制脑缺血再灌注损伤引起的氧化应激反应。