miR-328-5p靶向SPON2介导FAK/Src信号调控胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-328-5p对胃癌细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法将30只小鼠按照随机数字表法分为胃癌组和正常组,每组15只,采用N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）化学诱导法构建小鼠胃癌模型,采用RT-PCR法检测两组小鼠胃组织中miR-328-5p、脊椎蛋白2（SPON2）相对表达量;Westernblot法检测两组小鼠胃组织中酪氨酸蛋白激酶（Src）、磷酸化Src（p-Src）、局部黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK（p-FAK）蛋白表达水平。将胃癌细胞系SGC7901分为miR-328-5p组、miR-con组、NC组共3组,采用RT-PCR法检测3组细胞miR-328-5p、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）相对表达量;采用Transwell小室实验检测3组细胞迁移和侵袭数。采用荧光素酶报告基因实验检测胃癌细胞miR-328-5p、miR-con+SPON2基因野生型（WT）和突变型（MUT）的荧光素酶相对活力值。结果与正常组比较,胃癌组胃组织中miR-328-5p相对表达量明显降低,SPON2相对表达量明显升高（均P＜0.05）;与正常组比较,胃癌组胃组织中p-FAK、p-Src蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组miR-328-5p相对表达量明显升高,同时Vimentin、MMP-9相对表达量均明显降低（均P＜0.05）;与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组细胞迁移数和侵袭数均明显降低（均P＜0.05）。与miR-328-5p+SPON2WT组比较,miR-con+SPON2WT组、miR-con+SPON2MUT组、miR-328-5p+SPON2MUT组荧光素酶相对活力值均明显为高（均P＜0.05）。结论miR-328-5p在胃癌组织中呈低表达,过表达miR-328-5p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-328-5p直接靶向SPON2基因3''UTR序列,调控其转录表达,并抑制其下游FAK/Src信号活化及其下游Vimentin、MMP-9的表达。     

lncRNA TTN-AS1通过靶向miR-204-3p调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化

目的：探讨长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA 1（lncRNA TTN-AS1）是否可通过靶向微小RNA-204-3p（miR-204-3p）调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）。方法：采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,分别将si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、si-TTN-AS1与anti-miR-NC、si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p转染至AGS细胞;采用qRTPCR法检测AGS细胞中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;采用Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测TTN-AS1、miR-204-3p的靶向关系。结果：胃癌组织中TTN-AS1的表达水平比癌旁组织增加约2.90倍（P ＜0.05）,miR-204-3p的表达水平比癌旁组织减少约0.57倍（P ＜0.05）;转染si-TTN-AS1或转染miR-204-3p mimics可明显减少迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实TTN-AS1可靶向结合miR-204-3p;共转染si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p可明显增加迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）。结论：抑制TTN-AS1表达可通过上调miR-204-3p的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。     

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNAAC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的检测长链非编码RNAAC003973.4在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测20例乳腺癌组织及配对的癌旁组织,以及检测乳腺癌细胞株（BT-549、MDA-MB-231、MCF-7、T47D）和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AC003973.4的表达。取AC003973.4表达水平最低的乳腺癌细胞株转染过表达质粒以上调AC003973.4的表达,分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测AC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学法预测AC003973.4互补结合的miRNA及下游靶基因,qRT-PCR法检测miRNA和下游靶基因mRNA的表达,Westernblot检测相关蛋白的表达。结果乳腺癌组织AC003973.4表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.01）。乳腺癌细胞株AC003973.4表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞（均P＜0.05）,MCF-7细胞中AC003973.4的表达水平最低（P＜0.01）。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）。AC003973.4可互补结合miR-224-5p,miR-224-5p可互补结合PTEN。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,miR-224-5p的表达均下调（P＜0.01）,PTENmRNA和蛋白的表达均上调（均P＜0.01）,细胞增殖相关蛋白CDK4、CyclinD1与细胞迁移相关蛋白Zeb-1、N-cadherin表达均下调（均P＜0.01）。结论乳腺癌组织和细胞株中AC003973.4表达水平降低,上调AC003973.4表达可减弱乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与调节miR-224-5p与PTEN基因的表达有关。     

miR-149-5p通过靶向AEBP1调控胃癌细胞的迁移侵袭

目的：探讨miR-149-5p对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响及分子机制。方法：qRT-PCR检测胃癌细胞株和组织标本中miR-149-5p的表达,分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征参数及预后的相关性,建立过表达和干扰miR-149-5p的胃癌细胞株,Transwell实验检测miR-149-5p表达水平对胃癌癌细胞迁移侵袭能力的影响;生物信息学网站预测miR-149-5p的靶基因,采用荧光素酶报告基因实验加以验证。结果：miR-149-5p在胃癌组织和细胞株中均低表达（均P<0.05）。miR-149-5p的表达水平与胃癌患者的浸润深度（P=0.016）、淋巴结转移（P=0.001）和TNM分期（P=0.023）相关。miR-149-5p低表达是胃癌患者总生存期的独立危险因素。与对照组相比,miR-149-5p mimics明显抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力（均P<0.01）,而转染miR-149-5p inhibitors后得到了相反的结果（均P<0.05）。miR-149-5p靶向调控脂肪细胞增强结合蛋白1(Adipocyte enhancer binding pro...     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移

【摘要】 目的 探讨丙泊酚通过调控微小RNA-574-5P(miRNA-574-5P）/性别决定区Y框蛋白（SOX2）对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响和分子机制。 方法 以0、5、10和20 μg/mL丙泊酚处理AGS细胞48 h。筛选丙泊酚最佳使用浓度。将转染后的AGS细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miR-NC组、丙泊酚+miR-574-5p组、丙泊酚+si-con组、丙泊酚+si-SOX2组、丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组、丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组。采用细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞中微小RNA（miR）-574-5p的表达水平;免疫印迹法检测细胞中SOX2蛋白的表达水平。采用上述方法检测AGS细胞增殖、侵袭、迁移能力。双荧光素酶报告基因实验检测miR-574-5p与SOX2的靶向关系。 结果 选择20 μg/mL丙泊酚浓度进行实验。与0μg/mL比较,5、10、20 μg/mL丙泊酚处理组细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,miR-574-5P表达水平呈浓度依赖性降低,SOX2呈浓度依赖性升高（P＜0.05）。与对照组比较,丙泊酚组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-NC组比较,丙泊酚+miR-574-5p组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+si-con组比较,丙泊酚+si-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组比较,丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。miR-574-5p直接与SOX2结合。 结论 丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移。     

circCDYL靶向miR-552-5p抑制胃癌AGS细胞的增殖和转移

目的探讨环状RNA Y染色域样(circCDYL)对微小RNA-552-5p(miR-552-5p)及胃癌AGS细胞增殖和转移的影响。方法实时荧光定量PCR分析胃癌组织、癌旁正常组织样本中circCDYL和miR-552-5p表达水平。运用CCK-8法、集落形成、划痕愈合实验和Transwell实验分析circCDYL和miR-552-5p表达对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。Western blotting分析E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。双荧光素酶报告实验分析circCDYL和miR-552-5p靶向关系。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织中circCDYL表达显著降低(P＜0.05),而miR-552-5p表达显著升高(P＜0.05)。过表达circCDYL或干扰miR-552-5p后AGS细胞增殖、集落形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数均显著降低(P＜0.05)。circCDYL直接与miR-552-5p结合,上调miR-552-5p能够逆转过表达circCDYL对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05)。结论circCDYL通过靶向miR-552-5p抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭。     

沉默circ_0000745通过靶向 miR-296-5p对结直肠癌细胞增殖及转移的影响

摘要:目的 探讨circ_0000745对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能的作用机制。方法 收集2013年3月 ~2016年7月在四川省人民医院确诊的结直肠癌及癌旁组织65例,采用实时定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌组 织、癌旁组织中circ_0000745与 miR-296-5p表达,分析circ_0000745与 miR-296-5p表达与结直肠癌患者预后的关系。 将人结直肠癌细胞 HCT-116分为si-NC组、si-circ_0000745组、miR-NC组、miR-296-5p过表达组、si-circ_0000745+anti-miR-NC组、si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组;采用 CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测各组细 胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0000745与 miR-296-5p的靶向关系;采用 Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果 与癌旁组织比较,结直肠癌组 织中circ_0000745的表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05);随访5年,65例患者中死亡9例,存活56 例,与存活患者相比,死亡患者的circ_0000745明显增高(P<0.05),miR-296-5p明显降低(P<0.05)。与 HT-29细胞 相比,HCT-116细胞的circ_0000745mRNA 表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05),选择 HCT-116细 胞进行下一步研究。与si-NC组比较,si-circ_0000745组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵 袭细胞数减少(均P<0.05);circ_0000745可靶向调控 miR-296-5p的表达;与 miR-NC组比较,miR-296-5p过表达组细 胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均 P<0.05);与si-circ_0000745+anti-miRNC组比较,si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成数、迁移及侵袭 细胞数增多(均P<0.05)。结论 结直肠癌组织中circ_0000745呈高表达,miR-296-5p呈低表达,高表达circ_0000745 及低表达 miR-296-5p可用于评估结直肠癌患者预后,circ_0000745通过靶向 miR-296-5p促进结直肠癌细胞增殖及转 移,沉默circ_0000745可为结直肠癌治疗提供新思路。     

Circ_DOCK1调节miR-122-5p/PPIB轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状核糖核苷酸_胞质分裂作用因子1（Circ_DOCK1）通过调节微小核糖核苷酸-122-5p（miR-122-5p）/肽酰脯氨基顺反异构酶B（PPIB）轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织中的circ_DOCK1、miR-122-5p、PPIB表达水平。取人结直肠细胞SW480,脂质体转染法转染circ_DOCK1干扰质粒（sh-circ_DOCK1）、miR-122-5p抑制物（anti-miR-122-5p）和模拟物（miR-122-5p mimics）,以CCK-8法、划痕试验和Transwell实验检测结直肠癌细胞的增殖、迁移和凋亡情况。以生物信息学和荧光素酶报告基因实验分析circ_DOCK1与miR-122-5p的靶向关系。结果 结直肠癌组织的circ_DOCK1、PPIB mRNA表达水平高于癌旁组织,miR-122-5p表达水平低于癌旁组织。与挽救组和NC-circ_DOCK1组比较,sh-circ_DOCK1组的circ_DOCK1和PPIB mRNA表达量下降,miR-122-5p表达量升高,且细胞转染48 h和72 h的A值及细胞迁移率和穿膜细胞数均降低（P＜0.05）;挽救组和NC-circ_DOCK1组的数据比较差异无统计学意义（P＞0.05）。生物信息学软件预测circ_DOCK1含有与miR-122-5p互补的核苷酸序列。转染miR-122-5p mimics后,circ_DOCK1的野生型荧光素酶报告质粒相对活性降低,转染anti-miR-122-5p后,circ_DOCK1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加（P＜0.05）,circ_DOCK1突变型荧光素酶报告质粒相对活性值变化无统计学意义（P＞0.05）。结论 circ_DOCK1在结肠癌组织中的表达上调,且能通过调节miR-122-5p/PPIB轴影响结直肠癌的增殖、迁移和侵袭,可考虑经circ_DOCK1作为结直肠癌的分子靶向治疗研究方向。     

miR-23c对滋养层细胞增殖、侵袭及迁移的影响及作用机制研究

目的探讨miR-23c对滋养层细胞HTR8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法选取2019年4月至2020年8月在北海市人民医院行产前检查的子痫前期（PE）及正常妊娠孕妇各35例,收集血清及胎盘组织,采用qRT-PCR法检测miR-23c表达。将HTR8/SVneo细胞分为Blankcontrol组、mimic-NC组、miR-23cmimic组、inhibitor-NC组和miR-23cinhibitor组,采用qRT-PCR法及Westernblot法分别检测miR-23c及磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、蛋白激酶B（Akt）mRNA和蛋白及p-Akt表达;CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、侵袭及迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-23c对PTEN的靶向作用。结果与正常孕妇相比,PE患者血清及胎盘组织中miR-23c表达水平均显著降低（均P＜0.05）。与Blankcontrol组相比,miR-23cmimic组miR-23c、p-Akt/Akt表达水平均显著升高（均P＜0.05）,PTEN表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞增殖、侵袭及迁移能力均显著增强（均P＜0.05）;miR-23cinhibitor组miR-23c、p-Akt/Akt表达水平均显著降低（均P＜0.05）,PTEN表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞增殖、侵袭及迁移能力显著减弱（均P＜0.05）。Blankcontrol组、mimic-NC组和inhibitor-NC组以上各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。双荧光素酶报告实验显示miR-23c可靶向抑制PTEN的表达。结论miR-23c通过靶向抑制PTEN的表达来促进Akt活化,进而促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移。     

沉默circPVT1对5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的:研究circPVT1对胃癌细胞5-氟尿嘧啶（FU）敏感性的作用及分子机制。方法:采用RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞 BGC823/5-FU 中circPVT1的相对表达水平。沉默circPVT1,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用TUNEL试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用RT-PCR和Western 印迹检测Bcl-2、Bax 和caspase-3基因mRNA和蛋白的表达水平。沉默circPVT1观察裸鼠皮下移植瘤生长。结果:在5-FU抵抗患者胃癌组织中circPVT1的表达水平明显高于5-FU敏感患者（P＜0.01）。与BGC823细胞相比,circPVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显升高（P＜0.001）。下调circPVT1表达可增强5-FU的细胞毒性（P＜0.05）。与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的克隆形成能力明显降低（P＜0.05）。5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的凋亡数目明显高于5-FU+si-NC组（P＜0.01）。沉默circPVT1,与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,5-FU+si-circPVT1组移植瘤体积和重量明显低于5-FU+si-NC组（P＜0.05）。结论:沉默circPVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达,增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。     

miR-219a-5p在胃癌中的甲基化调控及生物学功能研究

目的 检测miR-219a-5p在胃癌及其癌旁组织中的表达并分析其启动子区域甲基化水平,探讨其对胃癌细胞系生物学功能的影响。方法 利用实时荧光定量PCR (Real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)方法检测胃癌及其癌旁组织中miR-219a-5p的表达及甲基化水平,通过细胞增殖实验和流式细胞仪检测过表达miR-219a-5p后对胃癌细胞增殖和凋亡的影响;体外细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-219a-5p的表达水平在胃癌患者的癌组织中呈现普遍下调,miR-219a-5p在癌组织中的相对表达量(0.769±0.95)明显低于癌旁组织表达(2.114±5.10),差异具有统计学意义(P<0.05);且miR-219a-5p表达下调组的DNA甲基化水平比表达上调组明显升高;过表达miR-219a-5p的胃癌细胞系MGC-803细胞增殖能力和迁移侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),过表达组凋亡比例明显...     

circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的探讨circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制。方法选取33例胃癌组织及癌旁组织标本,实时荧光定量PCR检测circ_0001178和miR-1179的表达水平;将胃癌细胞株AGS随机分为si-NC组、si-circ_0001178组、miR-NC组、miR-1179组、si-circ_0001178+anti-miR-NC组、si-circ_0001178+anti-miR-1179组;采用克隆形成实验检测克隆形成数,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0001178和miR-1179的靶向关系。结果胃癌组织中circ_0001178表达水平明显高于癌旁组织,而miR-1179表达水平明显低于癌旁组织（P < 0.01）。抑制circ_0001178表达或过表达miR-1179,AGS细胞克隆形成数减少,细胞活性降低,AGS细胞凋亡率升高,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平均升高（P < 0.05）。结论抑制circ_0001178表达可能通过靶向上调miR-1179抑制胃癌AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

lncRNANEAT1与miR-342-3p对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）核富集转录本1（NEAT1）在肝细胞癌（HCC）组织和细胞株中的表达及临床意义，并验证NEAT1与miR-342-3p对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响。方法收集2013年6月至2014年10月南京医科大学附属淮安第一医院接受手术的90例患者HCC组织和癌旁组织。采用qRT-PCR检测组织中NEAT1和miR-342-3p的表达，分析HCC组织中NEAT1的相对表达水平与患者临床病理参数、生存率以及预后的相关性。qRT-PCR检测HCC细胞株Hep3B、Huh7、HepG2和HCCLM3以及正常肝细胞株（LO2）中NEAT1的表达，Transwell实验检测HCC细胞迁移和侵袭能力，双荧光素酶报告实验验证NEAT1与miR-342-3p之间的调控关系。生存率差异比较采用log-rank检验，不良预后的危险因素分析采用Cox比例风险模型。结果NEAT1在HCC组织中的相对表达水平升高，并与肿瘤淋巴结转移及TNM分期密切相关，miR-342-3p在HCC组织中的表达较癌旁组织下调（P＜0.05）；根据NEAT1中位水平分为高表达NEAT1和低表达NEAT1，在TNMⅠ期、TNMⅡ期以及TNMⅠ～Ⅳ期HCC患者中，高表达NEAT1患者总体生存率较低表达NEAT1患者显著降低，NEAT1的表达水平是HCC患者预后较差的独立危险因素。NEAT1在HCC细胞株中较LO2细胞株表达升高（P＜0.05），下调NEAT1的表达能够抑制HepG2细胞的迁移和侵袭能力（均P＜0.05）。双荧光素酶报告实验表明NEAT1能够通过竞争性内源RNA机制调控miR-342-3p。Transwell实验表明下调miR-342-3p能够逆转NEAT1沉默介导的HCC细胞迁移和侵袭的抑制作用（均P＜0.05）。结论NEAT1的高表达与HCC患者的恶性程度以及不良预后密切相关，其能够调控miR-342-3p诱导HCC细胞的迁移和侵袭。     

IRF5对低分化胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制研究

目的探讨干扰素调节因子5（IRF5）对低分化胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取2019年12月至2020年7月杭州师范大学附属医院行胃镜活检及手术且经病理学检查证实为低分化胃癌石蜡标本5例以及正常胃黏膜组织石蜡标本5例,采用免疫组化法检测两组IRF5和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）相对表达水平。选取人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞作为正常对照,慢病毒转染低分化胃癌细胞系BGC-823,构建IRF5敲低的胃癌细胞BGC-IRF5组和作为对照的BGC-NC组。在BGC-IRF5中过表达MMP-9,构建BGC-MMP-9Over组。RT-PCR和Westernblot法检测IRF5和MMP-9相对表达水平;划痕实验和Transwell小室实验检测敲低IRF5对BGC-823迁移与侵袭能力的影响;Transwell小室实验检测MMP-9过表达对BGC-IRF5组侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因实验检测IRF5对MMP-9相对表达水平的调控。结果低分化胃癌组织中IRF5与MMP-9相对表达水平均明显高于正常胃黏膜组织（均P＜0.05）。BGC-NC组IRF5mRNA及蛋白相对表达水平均明显高于BGC-IRF5组和GES-1组（均P＜0.05）。BGC-IRF5组及BGC-NC组相对迁移水平分别为0.59±0.12和1.08±0.14,比较差异有统计学意义（P＜0.05）。BGC-IRF5组较BGC-MMP-9Over组和BGC-NC组MMP-9mRNA及蛋白相对表达水平均明显下降,穿基底膜细胞数量均明显减少（均P＜0.05）。IRF5过表达质粒+pGL3-MMP-9质粒较IRF5空载质粒+pGL3-空载质粒、IRF5空载质粒+pGL3-MMP-9质粒和IRF5过表达质粒+pGL3-空载质粒相对荧光素酶活性均明显升高（均P＜0.01）。结论IRF5可促进低分化胃癌细胞的侵袭和转移,可能通过调节MMP-9的相对表达水平发挥作用。     

miR-629-5p对胃癌细胞生物学行为的影响及其靶基因MTRF1L的鉴定

目的：研究miR-629-5p对胃癌细胞生物学行为的影响并鉴定其靶基因。方法：通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测miR-629-5p在16例胃癌组织和3种胃癌细胞中的表达水平;将细胞实验分为2个组：实验组（IN）和对照组（NC）;转染miR-629-5p抑制剂下调胃癌细胞MKN-45中miR-629-5p的表达;CCK-8实验和平板克隆实验检测MKN-45增殖;Transwell小室实验和划痕实验检测MKN-45迁移和侵袭;细胞流式技术检测MKN-45凋亡;通过miRWalk2.0工具预测miR-629-5p的靶基因,Western blot检测MKN-45中线粒体样转录释放因子1（mitochondrial translational release factor 1 like,MTRF1L）蛋白表达。结果：与癌旁组织[1.574（0.197,4.503）]相比,胃癌组织中miR-629-5p相对表达量[2.081（0.231,7.216）]明显增加（P=0.003）;与正常胃黏膜细胞（1.017±0.226）相比,胃癌细胞中miR-629-5p相对表达量（MKN-28：3.040±0.506;MKN-45：5.924±0.403;SCG-7901：3.377±0.372）均明显增加（P=0.000）。下调miR-629-5p表达后,胃癌细胞MKN-45的增殖减慢（IN：64±12;NC：102±12;P=0.018）,迁移（IN：106±9;NC：194±29;P=0.008）和侵袭（IN：25±7;NC：60±9;P=0.007）能力减弱,凋亡细胞数增加[IN：（19.257±2.440）%;NC：11.687±2.237;P=0.017]。miR-629-5p预测的靶基因共有46个,下调miR-629-5p的表达后,MTRF1L表达量明显增加（IN：0.923±0.101;NC：0.556±0.026;P=0.004）。结论：miR-629-5p在胃癌中表达上调,可促进MKN-45的增殖,增强MKN-45迁移和侵袭能力,抑制MKN-45凋亡;MTRF1L可能是miR-629-5p的靶基因之一。     

miR-601在胃癌中的表达及其对胃癌细胞凋亡、侵袭的影响

目的探讨miR-601在胃癌中的表达及其对胃癌细胞凋亡、侵袭的影响。方法选取2018年8月至2019年8月台州市立医院收治的经病理学检查确诊为胃癌的30例患者的癌组织及相应癌旁正常组织标本;用转染试剂Lipofectamine3000将miR-601抑制物（miR-601inhibitor）和阴性对照序列（inhibitorNC）转染人胃癌细胞株AGS,并分为miR-601inhibitor组和inhibitorNC组。采用qRT-PCR法检测miR-601在胃癌组织、癌旁正常组织、人胃癌细胞株AGS、HGC-27、MGC-803、正常胃细胞株GES-1以及miR-601inhibitor组和inhibitorNC组中的相对表达量;采用MTT法检测两组细胞抑制率;采用流式细胞术检测两组细胞凋亡率;采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测两组细胞迁移率和细胞侵袭数;采用Westernbolt法检测两组细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白相对表达量。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织中miR-601相对表达量明显升高（P＜0.01）;与GES-1比较,其余3株胃癌细胞miR-601相对表达量均明显升高（均P＜0.05）;与inhibitorNC组比较,miR-601inhibitor组miR-601相对表达量明显升高,转染miR-601inhibitor后24、48、72h时细胞抑制率均较低,细胞凋亡率明显增加,细胞迁移率明显降低,细胞侵袭数明显减少,MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量均明显降低（均P＜0.05）。结论miR-601在胃癌组织及细胞系中表达升高,下调其表达水平后可促进胃癌细胞凋亡。     

乳腺癌组织miR-23a、miR-1247-5p表达与临床病理特征及预后的关系

目的检测微小RNA（miR）-23a、miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达情况,并分析miR-23a、miR-1247-5p表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法收集2012年1月至2013年12月在昆山市第二人民医院行手术切除的150例乳腺癌患者术后的乳腺癌组织及癌旁正常组织样本,采用RT-PCR法检测组织样本中miR-23a、miR-1247-5p表达水平。单因素分析miR-23a、miR-1247-5p表达水平与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析不同miR-23a、miR-1247-5p表达水平患者的术后生存情况;ROC曲线分析miR-23a、miR-1247-5p对患者预后的预测价值。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织miR-23a表达水平较高、miR-1247-5p表达水平较低（均P＜0.05）。乳腺癌组织miR-23a表达水平与肿瘤直径、分子分型、淋巴结转移、TNM分期有关（均P＜0.05）,miR-1247-5p表达水平与组织病理分级、分子分型、淋巴结转移、TNM分期有关（均P＜0.05）。miR-23a高表达、miR-1247-5p低表达患者的术后5年总生存率及中位生存时间均分别低于miR-23a低表达、miR-1247-5p高表达患者（均P＜0.05）。检测乳腺癌组织miR-23a、miR-1247-5p表达水平对患者预后预测的AUC分别为0.709（95%CI：0.625~0.793）、0.690（95%CI：0.606~0.775）,灵敏度分别为0.812、0.749,特异度分别为0.637、0.622。结论乳腺癌组织miR-23a表达上调,miR-1247-5p表达下调,且与患者预后有关。检测乳腺癌患者术后癌组织miR-23a、miR-1247-5p表达水平对患者预后预测有一定的临床价值。     

circFARSA与miR-671-5p在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学功能的影响

摘要:目的 探讨circFARSA 与 miR-671-5p在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学功能的影响。方法 采用 qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁组织中circFARSA、miR-671-5p的表达量;采用 Pearson法分析胃癌组织中circFARSA 与 miR-671-5p表达量的相关性;体外培养人胃癌细胞 AGS,随机分为si-NC组、si-circFARSA 组、si-circFARSA+anti-miR-NC组、si-circFARSA+anti-miR-671-5p组;采用 MTT实验检测细胞活力;用流式细胞仪检测细胞周期;采用划 痕实验检测细胞迁移距离;采用 Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circFARSA 与 miR-671-5p的靶向关系。结果 circFARSA 在胃癌组织中呈高表达,且明显高于癌旁组织(P<0.05),癌组织中的 miR671-5p呈低表达,且明显低于癌旁组织(P<0.05);circFARSA 与 miR-671-5p表达呈负相关(r=-0.6374,P<0.01); 与si-NC组比较,si-circFARSA 组细胞活力与S期细胞比例降低(均P<0.05),迁移距离减小(P<0.05),侵袭细胞数减 少(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高(P<0.05);circFARSA 可靶向调控 miR-671-5p;转染si-circFARSA 对细胞产生的 生物学作用在anti-miR-671-5p、si-circFARSA 共转染后被逆转。结论 干扰circFARSA 可通过调节 miR-671-5p对胃 癌的细胞增殖、迁移、侵袭过程发挥一定的抑制作用,同时诱导细胞周期阻滞。