长链非编码 RNA GAS5、微小 RNA-21在多囊卵巢综合征中的表达及生物学意义

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)GAS5与微小RNA-21(miR-21)在多囊卵巢综合征(PCOS)中的表达及其对卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的影响.方法 收集2017年4月至2018年10月于南阳市中心医院就诊的50例PCOS病人为观察组,选取同时期于南阳市中心医院就诊的45例非PCOS病人为对照组,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测对照组与观察组病人血清中GAS5与miR-21的表达水平.采用Pearson法分析PCOS病人中GAS5与miR-21表达的相关性.原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,分别将pcDNA、pcDNA-GAS5转染至卵泡颗粒细胞.CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证GAS5与miR-21的靶向关系.结果 观察组病人血清中GAS5的表达水平明显低于对照组[(0.52±0.11)比(1.00±0.12),P<0.05],miR-21的表达水平明显高于对照组[(2.36±0.57)比(1.01±0.10),P<0.05],GAS5与miR-21呈负相关(r=?0.310,P=0.028);TT、IL-18与RGAS5呈负相关(P<0.05),而与miR-21呈正相关(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA-GAS5组细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高[(36.49±5.21)比(8.52±1.20),P<0.05];双荧光素酶报告实验证实GAS5可靶向结合miR-21,并可负向调控miR-21的表达.结论 GAS5过表达可能通过靶向调控miR-21表达从而抑制卵巢颗粒细胞增殖,促进细胞凋亡.     

老年重症肺炎病人血清微小 RNA-146a、微小 RNA-223、微小 RNA-21、微小 RNA-124水平及其与预后的关系

目的探究老年重症肺炎病人血清微小 RNA(miR)-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及其与预后的关系。方法选取 2018年 2月至 2020年 3月郑州大学第二附属医院诊治的 128例老年重症肺炎病人、 130例普通肺炎病人分别为重症肺炎组、普通肺炎组,并纳入同期 128例体检健康者为健康组。比较三组血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;分析老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平与 TNF-α的相关性;比较不同预后老年重症肺炎病人临床资料和血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124水平;分析老年重症肺炎病人死亡的影响因素;分析血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α对老年重症肺炎病人预后的预测价值。结果普通肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 1.67±0.56、1.64±0.55、1.71±0.57、(12.78±4.30)ng/L,重症肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 2.32±0.78、2.27±0.76、2.39±0.80、(23.64±7.92)ng/L,高于健康组的 1.03±0.35、1.01±0.34、0.99±0.33、(5.43±1.84)ng/L、(P<0.05)普通肺炎组、重症肺炎组血清 miR-124表达水平分别为 0.71±0.24、0.37±0.13,低于健康组的 1.07±0.37(P<0.05);重症肺炎人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水组病,平高于普通肺炎组( P<0.05)血清 miR-124表达水平低于普通肺炎组( P<0.05);老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、 miR-21表达水平与 TNF-α呈正,相关( P<0.05)血清 miR-124表达水平与 TNF-α呈负相关( P<0.05);死亡组老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α水平及有,呼吸系统疾病史、吸烟史、机械通气占比高于生存组( P<0.05),血清 miR-124表达水平、氧分压水平低于生存组( P<0.05); miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α、机械通气是老年重症肺炎病人死亡的危险因素( P<0.05);血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α预测老年重症肺炎病人预后的曲线下面积( AUC)分别为 0.84、0.88、0.82、0.66、0.68,其灵敏度分别为 72.5%、80.4%、82.4%、60.8%、60.8%,特异度分别为 85.7%、81.8%、79.2%、67.5%、72.4%。结论老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平较高,与 TNF-α水平呈正相关; miR-124表达水平较低,与 TNF-α水平呈负相关。且测定血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平有助于临床预测老年重症肺炎病人的预后情况。     

长链非编码 RNA母系表达基因 3、微小 RNA-21表达与冠状动脉钙化的相关性分析

目的探究长链非编码 RNA母系表达基因 3(LncRNA MEG3)、微小 RNA-21(miR-21)与冠状动脉钙化的相关性。方法选取 2018年 6月至 2019年 6月在邯郸市中心医院行冠状动脉造影及 CT检查确诊为冠状动脉钙化病人 189例作为钙化组,另选取同期在该院行冠状动脉造影及 CT检查显示无冠状动脉钙化者 183例作为未钙化组。采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测血清 LncRNA MEG3、miR-21表达水平,采用 Pearson法分析病人血清 LncRNA MEG3、miR-21水平及与糖化血红蛋白(HbA1c)、高敏 C反应蛋白( hs-CRP)、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白细胞介素 -1β(IL-1β)水平相关性,采用 logistic回归模型分析冠状动脉钙化发生的影响因素,采用 ROC曲线评估血清 LncRNA MEG3、miR-21表达水平对冠状动脉钙化的预测价值。结     

基于外泌体多miRNA表达水平构建的子痫前期风险预测模型效能分析

目的 探讨基于多个外泌体微小RNA(miRNA)表达水平构建子痫前期(PE)风险模型的可行性,并验证其对PE的预测效能。方法 选择2019年6月—2021年12月建档且孕周≤20周的孕妇1 037例作为研究对象,入组后收集所有患者首次建档的一般资料及实验室检查资料。通过qRT-PCR分析所有样本中外泌体miRNA表达情况(包括miR-155-5p、miR-215-5p、miR-203a-3p、miR-199a-5p及miR-125a-3p)。而后对所有患者随访至妊娠结束,统计随访期间PE发生情况并根据结果将患者分为PE组及对照组。使用Cox回归分析PE的影响因素,以ggrisk包构建多miRNA风险模型,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估所构建模型对PE的预测效果。结果 截至2022年10月31日随访结束,最终完成随访974例(93.92%)。PE组65例和对照组909例。PE组年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕12周腰围均大于对照组,吸烟史及饮酒史占比高于对照组(P<0.05)。PE组三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、血小板分布宽度、平均...     

老年原发性肝癌病人血清微小RNA-200a、微小RNA-221表达与介入术后感染的相关性分析

目的 探究老年原发性肝癌病人血清微小RNA(miR)-200a、miR-221表达与介入术后感染的相关性。方法 选取2017年5月至2020年4月武汉市汉口医院45例老年原发性肝癌介入术后感染病人作为观察组,另自同期住院的老年原发性肝癌介入术后未出现感染病人中通过SPSS 21.0统计软件采取随机数字表法抽取45例作为对照组。比较两组临床资料、血清miR-200a、miR-221表达,分析老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素及血清miR-200a、miR-221表达与影响因素的关系,绘制受试者操作曲线（ROC曲线）,评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,并绘制卡普兰-迈耶曲线（KM）,对比不同血清miR-200a、miR-221表达病人死亡情况。结果 观察组腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞比例高于对照组（P<0.05）;术后,观察组血清miR-200a表达（2.84±0.74）低于对照组（4.69±1.14）,miR-221表达（12.37±3.02）高于对照组（9.05±2.43）(P<0.05)...     

生长抑制特异性转录本 5和微小 RNA-142-3p在重症急性胰腺炎并急性呼吸窘迫综合征病人血清中的表达及临床意义

目的 探讨生长抑制特异性转录本5(GAS5)和微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在重症急性胰腺炎(SAP)合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病人血清中的表达及临床意义.方法 选取2017年2月至2018年12月平顶山市第一人民医院SAP病人83例,采用随机数字表法抽样41例并发ARDS者为ARDS组,42例非ARDS组.另选取同时期40例健康体检者作为健康对照组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病人血清GAS5和miR-142-3p表达水平,Pearson相关性分析SAP合并ARDS病人血清GAS5与miR-142-3p表达相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GAS5和miR-142-3p对SAP合并ARDS的诊断价值,lo-gistic回归分析SAP合并ARDS及其预后的影响因素.结果 与健康对照组比较,非ARDS组和ARDS组病人血清GAS5表达升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05).与非ARDS组比较,ARDS组病人血清GAS5表达升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05).Pearson相关性分析结果显示,SAP合并ARDS病人血清GAS5与miR-142-3p呈负相关(P<0.05).GAS5与miR-142-3p联合检测诊断SAP合并ARDS的灵敏度、特异度及曲线下面积(AUC)均高于GAS5、miR-142-3p单独诊断(P<0.05).与SAP合并ARDS存活病人比较,死亡病人血清GAS5表达水平升高(P<0.05),miR-142-3p表达水平降低(P<0.05).GAS5和miR-142-3p是SAP病人合并ARDS的显著影响因素(P<0.05),也是SAP合并ARDS病人预后的显著影响因素(P<0.05).结论 SAP合并ARDS病人血清中GAS5表达升高,miR-142-3p表达降低,可能为SAP合并ARDS的诊断和预后判断提供了新的生物学指标.     

miR-93介导转化生长因子 -β1调节 Ⅲ型胶原蛋白在压力性尿失禁中的意义

目的 探讨微RNA-93(miR-93)介导转化生长因子-β1(TGF-β1)调节Ⅲ型胶原蛋白在压力型尿失禁(SUI)中的表达意义.方法 2014年1月至2018年1月,选取无锡市妇幼保健院收治的SUI病人(SUI组53例)以及同期行妇科良性肿瘤治疗且术前检查无SUI及其他盆腔器官脱垂临床症状的病人(无SUI组53例)为研究对象.取受试者阴道壁组织,以RT-PCR测定miR-93的表达,以蛋白印迹法测定TGF-β1及Ⅲ型胶原蛋白的表达,结合荧光素酶报告分析测定miR-93与TGF-β1的相关性.结果 miR-93在SUI病人阴道壁组织中的表达低于无SUI组(0.63±0.18)比(1.12±0.23),TFG-β1及CollagenⅢ在SUI病人阴道壁组织中的表达亦低于无SUI组[TFG-β1(0.49±0.12)比(0.67±0.15),CollagenⅢ(0.22±0.05)比(0.31±0.09)].SUI组与无SUI组相比,miR-93表达降低[(0.26±0.04)比(1.05±0.12)],TFG-β1及CollagenⅢ在SUI原代成纤维细胞中的表达均降低[TFG-β1(0.92±0.20)比(1.15±0.07);CollagenⅢ(0.32±0.05)比(1.02±0.13)].miR-93基因可与TFG-β1基因结合,并且通过结合提高了TFG-β1的表达.进一步研究证实miR-93过表达的情况下可以提高TFG-β1的表达,而当miR-93的表达被抑制时,TFG-β1的表达亦下调(t=6.590,P=0.007).结论 SUI病人中,miR-93表达降低,介导TGF-β1表达下调,最终导致胶原Ⅲ含量降低.     

结直肠癌病人外周血微 RNA-4435、微 RNA-762的表达及其与临床特征的相关性

目的观察结直肠癌病人外周血微 RNA(miR)-4435、miR-762的表达情况,并分析其与临床特征、预后情况的相关性。方法选取 2017年 6月至 2019年 6月于郑州大学附属郑州中心医院就诊的 100例疑似结直肠癌病人,经手术治疗后按照病理学检查结果分为结直肠癌组( 64例)及非结直肠癌组( 36例)。比较两组外周血 miR-4435、miR-762表达水平;比较不同临床病理特征病人外周血 miR-4435、miR-762表达水平;随访统计结直肠癌病人预后,将生存病人设为生存组,病死病人设为死亡组。比较两组外周血 miR-4435、miR-762表达水平,采用 Cox风险比例回归模型分析结直肠癌病人外周血 miR-4435、miR-762表达水平与结直肠癌预后的相关性。结果与非结直肠癌组( 0.61±0.08、0.89±0.12)比较,结直肠癌组外周血 miR-4435、miR-762(0.96±0.12、1.35±0.24)表达水平升高( P<0.05)。与临床分期 Ⅰ~Ⅱ期( 0.84±0.11)、(0.71±0.09)、浸润深度 T1~T2无淋巴结转移(0.79±0.11)病人比较,临床分期 Ⅲ~Ⅳ期( 1.03±0.15)、浸润深度 T3~T4(1.25±0.15)、淋巴结转移( 1.26±0.21)病人外周血 miR-4435、miR-762表达水平升高(P<0.05)。随访至 2022年 6月,其中生存病人 38例,病死病人 26例,分别设置为生存组、死亡组。与生存组( 0.87±0.09、1.12±0.14)比较,死亡组外周血 miR-4435、miR-762(1.09±0.21、1.69±0.31)表达水平升高( P<0.05)。 Cox风险比例回归分析显示,临床分期、浸润深度、淋巴结转移、 miR-4435表达水平、 miR-762表达水平均是结直肠癌预后不佳的危险因素( P<0.05)。结论结直肠癌病人外周血 miR-4435、miR-762表达水平异常升高,与临床分期、浸润深度、淋巴结转移相关,且均为病人预后不佳的危险因素。     

微小 RNA-520g、微小 RNA-532在 80例多发性骨髓瘤骨髓组织中的表达

目的 观察多发性骨髓瘤病人骨髓组织中微小RNA-520g(miR-520g)和微小RNA-532(miR-532)的表达,并探讨其临床意义.方法 选取2015年7月至2019年7月西安市中心医院收治的多发性骨髓瘤病人80例为观察组,同时选取同期进行骨髓穿刺并明确骨髓功能无异常的非血液病病人80例为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组骨髓组织中miR-520g、miR-532的表达水平;分析两者与多发性骨髓瘤临床病理特征的关系;采用Pearson法分析miR-520g、miR-532表达的相关性;通过受试者工作特征曲线(ROC)检测miR-520g、miR-532的表达对多发性骨髓瘤的诊断价值.结果 观察组病人骨髓组织中miR-520g表达水平(3.70±0.70)均显著高于对照组(2.79±0.65),观察组miR-532表达水平(0.90±0.24)显著低于对照组(1.32±0.31)(P<0.05).观察组病人骨髓组织中miR-520g、miR-532表达水平与病人临床分期、分化程度、是否发生淋巴结转移相关(P<0.05).ROC结果显示miR-520g诊断多发性骨髓瘤曲线下面积(AUC)为0.827,敏感度为73.8％,特异性为80.0％,miR-532诊断多发性骨髓瘤的AUC为0.855,敏感度为82.5％,特异性为75.0％,二者联合诊断多发性骨髓瘤的AUC为0.922,敏感度为81.3％,特异性为91.2％.结论 多发性骨髓瘤病人骨髓组织中miR-520g呈高表达,miR-532呈低表达,两者呈负相关,且与临床分期、分化程度、是否发生淋巴结转移相关,骨髓组织miR-520g、miR-532表达对多发性骨髓瘤具有一定的诊断价值.     

重症肺炎 64例外周血微 RNA-34a、沉默信息调节因子 1的表达

目的研究重症肺炎病人外周血微 RNA-34a(miR-34a)、沉默信息调节因子 1(Sirt1)的表达变化及临床意义。方法选取 2017年 10月至 2020年 4月武警重庆总队医院收治的 64例重症肺炎病人为重症肺炎组,同期收治的 80例普通肺炎病人为普通肺炎组,进行健康体检的 70例健康志愿者为对照组。采用实时荧光定量 PCR法( qRT-PCR)检测外周血 miR-34a表达水平,采用酶联免疫吸附法检测血清 Sirt1、炎症细胞因子表达水平; Kaplan-Meier生存分析研究 miR-34a与 Sirt1表达水平与重症肺炎组病人预后的关系; Cox回归分析影响重症肺炎病人预后的因素。结果重症肺炎组 miR-34a的表达水平高于普通肺炎组和对照组( 1.65±0.28比 1.32±0.33、1.00±0.25)Sirt1表达水平低于普通肺炎组和对照组［( 6.83±1.59)μg/L比( 8.94±1.62)μg/L、(12.11±1.77)μg/L］(P<0.05); miR-34a表达与 Sirt1表达水平存在明显负相关( P<0.05)。高危、中危病人 miR-34a表达水平高于低危病人, Sirt1表达水平低于低危病人( P<0.05),高危病人 miR-34a表达水平高于中危病人, Sirt1表达水平低于中危病人(P<0.05)。 miR-34a高表达病人血清肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、细胞间黏附分子 -1(ICAM-1)、白细胞介素( IL)-6和高迁移率族蛋白 B-1(HMGB1)水平高于 miR-34a低表达病人, 30 d累积生存率低于 miR-34a低表达病人( P<0.05); Sirt1高表达病人血清 TNF-α、ICAM-1、IL-6、HMGB1水平低于 Sirt1低表达病人, 30 d累积生存率高于 Sirt1低表达病人( P<0.05)。ICAM-1、miR-34a及 Sirt1均是影响重症肺炎病人预后的独立危险因素( P<0.05)。结论重症肺炎病人外周血中 miR-34a表达增加与血清 Sirt1表达降低具有相关性,且 miR-34a、Sirt1的变化与病情加重、炎症反应激活、预后不良有关。     

PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨 #br#

目的 探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法 体外培养人绒毛膜滋 养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组（阴性对照组）、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同 源物基因（PTEN）-siRNA 组（抑制 PTEN 表达组）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路抑制剂（GDC-0349）组。 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋 亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制 率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PTEN蛋白表 达水平均显著升高（P＜0.05）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）/PI3K、磷酸化蛋白激酶B （p-AKT）/AKT、磷酸化 mTOR（p-mTOR）/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与高糖组、NC 组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与 PTEN-siRNA 组比较,GDC-0349 组 HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/ SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。     

miR-34a靶向MMP2对TNF-α诱导人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA（miR）-34a靶向基质金属蛋白酶（MMP）2对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导人绒毛膜滋 养层细胞 HTR-8/SVneo 迁移和侵袭的影响。方法 体外培养人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo,利用 0.5 μg/L TNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱导组、NC组、miR-34a mimics组、iNC组、miR-34a inhibitor组;实时荧 光定量PCR（qPCR）检测各组细胞中miR-34a、MMP2 mRNA的表达;CCK-8法、Transwell法和划痕实验分别检测各组 细胞增殖、侵袭和迁移情况;蛋白免疫印迹法检测MMP2蛋白的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-34a和MMP2的 靶向关系。结果 与对照组比较,TNF-α 诱导组细胞 miR-34a 表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）, MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和NC组比较,miR- 34a mimics组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭 数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和iNC组比较,miR-34a inhibitor组细胞miR-34a表达水平、 细胞增殖抑制率显著降低（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著升高（P＜0.05）; miR-34a与MMP2具有靶向关系。结论 miR-34a可能通过负调控MMP2的表达抑制TNF-α诱导的人绒毛膜滋养 层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭。     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

miR-34a靶向调控Akt/Bcl-2对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响

目的：探讨miR-34a通过下调AKT/BCL2信号通路对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其分子机制?方法：通过实时定量PCR法检测miR-34a-3p在乳腺癌细胞（MCF-7）和乳腺耐药细胞株（MCF-7/ADR）中的表达,并成功构建miR-34a mimics/inhibitor调控其表达水平;通过CCK8法分别筛选多柔比星处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50值并处理细胞;使用CCK8,流式细胞技术以及免疫印迹实验验证在miR-34a过表达及干扰组中,乳腺癌细胞存活率,凋亡细胞百分比以及AKT/BCL2信号通路的改变。结果：miR-34a在MCF-7/ADR中的表达显著低MCF-7细胞,同时成功构建miR-34a过表达及敲减模型;多柔比星处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50分别为0.89 μg/mL、13.61 μg/mL。当MCF-7及MCF-7/ADR细胞中miR-34a表达水平降低时,经多柔比星处理后,细胞存活率显著升高（P<0.05）,凋亡细胞比例显著减少（P<0.01）,同时下游AKT/BCL2信号表达上调（P<0.01）。而当MCF-7/ADR细胞中miR-34a表达升高时相应的观察到相反的细胞表型。结论：miR-34a在乳腺癌细胞中的表达下调,可能通过减少对AKT/BCL2信号的负向调控,减少细胞凋亡,进而增强细胞对多柔比星的耐药性。     

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应（qPCR）检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒（anti-miR-132-3p）、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）过表达质粒（pcDNA3.1-PTEN）或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒（si-PTEN）,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量（0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08）明显升高（P<...     

微小 RNA-425-5p靶向调控 PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-425-5p对宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年10月,利用Lipofectamine TM 2000将miR-425-5p模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照转染至海拉细胞中,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-425-5p的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达.采用生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和PTEN的靶向关系.将PTEN过表达质粒pcDNA3.1-PTEN和PTEN干扰序列siRNA-PTEN转染至海拉细胞后,观察PTEN对海拉细胞增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力和迁移能力的影响.结果 与各自阴性对照比较,miR-425-5p过表达可促进海拉细胞增殖[(142.25±11.32)％比(100.00±6.67)％]、克隆形成、侵袭[(133.28±9.86)个比(77.46±5.32)个]和迁移[(187.56±15.12)个比(115.35±10.26)个]并下调PTEN蛋白表达,而miR-425-5p低表达则抑制海拉细胞增殖[(58.38±3.45)比(100.00±5.74)]、克隆形成、侵袭[(43.32±3.62)个比(75.65±6.15)个]和迁移[(62.28±4.05)个比(109.72±9.84)个]并上调PTEN蛋白表达(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,PTEN是miR-425-5p的靶基因;PTEN过表达可促进海拉细胞增殖[(66.52±4.36)％比(100.00±6.18)％]、克隆形成、侵袭[(46.23±3.13)个比(71.65±5.24)个]和迁移[(62.65±4.26)个比(108.42±8.57)个],而PTEN低表达则抑制海拉细胞增殖[(136.52±9.85)个比(100.00±7.05)个]、克隆形成、侵袭[(110.27±9.85)个比(70.52±6.18)个]和迁移[(168.78±16.96)个比(113.26±10.13)个].结论 miR-425-5p可通过靶向调控PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移.     

HOTAIR上调miR-152靶向调控HLA-G的 生物信息作用预测与验证

摘要：目的 预测并验证HOX转录反义RNA（HOTAIR）通过上调miR-152-3p对人类白细胞抗原-G（HLA-G）靶 向调控作用。方法 利用生物信息学网站及软件预测miR-152-3p与HOTAIR和HLA-G基因3′非翻译区（UTR）的 结合位点,设计合成含有与 miR-152-3p 结合位点的 HOTAIR 和 HLA-G 基因 3′-UTR 序列及其突变序列,并构建 HOTAIR和HLA-G野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体。经双酶切电泳和测序鉴定后,HOTAIR和HLA-G野 生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别与 miR-152-3p 模拟物（mimics）和 miRNA 无义序列阴性对照（mimics NC）共转染HTR-8/SVneo细胞,检测荧光素酶活性,观察miR-152-3p对HOTAIR和HLA-G表达的影响。结果 双 酶切电泳和测序结果显示,野生型和突变型的HOTAIR和HLA-G基因载体片段大小、序列与实验预期一致,载体构 建成功。转染 miR-152-3p mimics 后的 HOTAIR 及 HLA-G 野生型荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）,而对突变型 HOTAIR和HLA-G载体的荧光素酶表达无明显抑制作用（P＞0.05）。结论 HOTAIR通过上调miRNA-152-3p靶向调控HLA-G。     

miR-301b在调节脂肪细胞分化中的作用

摘要： 目的 研究 miR-301b 在调节间充质干细胞向脂肪细胞分化过程中的作用。方法 对小鼠骨髓基质细胞 ST2 进行脂肪细胞诱导分化, 并利用 qRT-PCR 检测细胞分化过程中成脂分化诱导组相对于阴性对照组的 miR-301b 表达变化。对 ST2 细胞转染 miR-301b mimics 并进行成脂诱导分化, 利用 qRT-PCR 和 Western blot 技术检测 miR- 301b mimics 转染组和阴性对照片段 （NC） 转染组细胞的脂肪特异性基因和蛋白表达水平的变化。结果 成脂分化诱导组 miR-301b 相对表达水平 （0.219±0.021） 较对照组 （1.000±0.425） 减少 （P＜0.05）。miR-301b mimics 转染组的脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体 （PPARγ）、 CCAAT 增强子结合蛋白 （C/EBPα） 和脂肪型脂肪酸结合蛋白 （aP2） 的相对表达量均较 NC 转染组降低 （P＜0.05）。miR-310b mimics 转染组与 NC 转染组相比, 标志基因aP2、 转录因子PPARγ 和C/EBPα 蛋白的表达量均减少 （P＜0.05）。结论 miR-301b可抑制脂肪细胞分化。     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。