METH1在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

目的通过观察血管生成抑制因子METH1的cDNA片段在酵母双杂交中的表达及检测其对报告基因有无激活作用,为进一步明确METH1抑制增生性瘢痕的分子机制奠定基础。方法采用酵母双杂交Gal4系统3,经PCR扩增子METH1的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再分别亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用。结果成功获得METH1的cDNA片段,该片段所表达的蛋白对酵母菌AH109无毒性,且对报告基因无激活作用。结论血管生成抑制因子METH1蛋白活性区在酵母双杂交系统中的表达产物,可作为诱饵蛋白进行相互作用蛋白的筛选研究。     

TMEM33 mRNA 3′-UTR报告基因载体的构建及功能验证

目的:根据microRNA-146a(miR-146a)预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒并进行功能验证,为研究吸入性损伤中miR-146a通过靶向跨膜蛋白33(TMEM33)对Toll样受体/核因子-κB(TLRs/NF-κB)信号通路的调控作用提供前期的工作基础。方法:通过生物学软件预测TMEM33mRNA 3′端非翻译区(TMEM33mRNA 3′-UTR)可能是miR-146a的作用靶点,将设计合成的TMEM33及其突变序列TMEM33-mu序列分别克隆至荧光素酶报告质粒,采用脂质体法将这两种重组荧光素酶报告质粒pMIR-TMEM33和pMIR-TMEM33-mu分别与miR146amimics共转染HEK-293T细胞,以pMIR-TMEM33+miR-control转染HEK-293细胞作对照,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果:TargetScan和miRanda软件预测显示,miR-146a与TMEM33mRNA 3′-UTR存在互补结合位点,构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测系统显示,miR-146a对TMEM33mRNA 3′-UTR具有靶向作用,pMIR-TMEM33+miR146amimics组较pMIR-TMEM33+miR-control组荧光素酶活性降低62%左右,差异具有统计学意义(P<0.01);而miR-146a对TMEM33-mu 3′-UTR无靶向作用,pMIR-TMEM33-mu+miR-146a组与pMIR-TMEM33+miR-control组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建TMEM33mRNA 3′-UTR荧光素酶报告载体,证实miR-146a对TMEM33mRNA 3′-UTR具有靶向调控作用,为从基因水平深入揭示吸入性肺损伤发病机制提供实验室数据和方法。     

METH1在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

目的通过观察血管生成抑制因子METH1的cDNA片段在酵母双杂交中的表达及检测其对报告基因有无激活作用，为进一步明确METHI抑制增生性瘢痕的分子机制奠定基础。方法采用酵母双杂交Ga14系统3，经PCR扩增子METH1的cDNA片段，分别克隆入pUC19质粒，经测序正确后。再分别亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。将重组质粒导入酵母菌AH109，检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用。结果成功获得METH1的cDNA片段，该片段所表达的蛋白对酵母菌AH109无毒性，且对报告基因无激活作用。结论血管生成抑制因子METH1蛋白活性区在酵母双杂交系统中的表达产物。可作为诱饵蛋白进行相互作用蛋白的筛选研究。     

桃红四物汤对泼尼松诱导斑马鱼骨质疏松的治疗作用

目的利用泼尼松诱导的斑马鱼骨质疏松模型评价中药复方桃红四物汤的抗骨质疏松的作用。方法选择发育正常的3 dpf斑马鱼胚胎,用10μg/m L泼尼松处理建立斑马鱼骨质疏松症模型,加入不同浓度(50、150和450μg/m L)的中药复方桃红四物汤。同时设置正常对照组、模型对照组和阳性对照药依替膦酸二钠组。4 d后,用0.2%钙黄绿素进行染色,在体视荧光显微镜下观察,拍照并计算斑马鱼脊椎骨的荧光强度。结果与正常对照组相比,泼尼松处理的模型对照组的斑马鱼脊椎骨荧光强度显著减少;与模型对照组比较,依替膦酸二钠能增加斑马鱼脊椎骨矿化量并有效防止泼尼松龙诱导斑马鱼产生的骨质疏松;与模型对照组比较,450μg/m L浓度的桃红四物汤能显著提高斑马鱼脊椎骨骨骼的荧光强度,而50μg/m L和150μg/m L浓度的桃红四物汤溶液组效果均不明显。结论桃红四物汤对斑马鱼的最大耐药浓度MTC为450μg/m L,并对泼尼松诱导的斑马鱼骨质疏松模型有明显的改善治疗作用。     

低氧对钾-氯协同转运子1启动子的调控作用

目的通过观察低氧对钾-氯协同转运子1(KCC1)启动子的作用及对KCC1基因表达的影响，探索低氧诱导因子1α(HIF-1α)结合位点是否为真正的低氧诱导因子结合位点、在低氧环境中该位点的作用以及KCC与低氧间的关系。方法用KCC1野生型启动子和HIF-1α位点变异的KCC1启动子转染人胚胎肾上皮(HEK)293细胞。转染细胞分别在低氧条件下和正常培养条件下培养，用荧光素酶功能分析的方法观测低氧对KCC1启动子荧光素酶活性的影响；用RT—PCR方法比较两种培养条件下KCC1 mRNA表达水平的差异。结果低氧条件下野生型KCC1启动子荧光素酶活性为正常培养条件下的KCCl启动子荧光素酶活性的1．8倍，而变异的HIF-1α位点的KCCl启动子荧光素酶活性则在两种条件下差异无统计学意义。低氧条件下HEK293细胞的KCC1 mRNA表达水平是正常氧条件下表达量的2．65倍．差异有统计学意义。结论本研究发现了KCC1启动子中有HIF-1α结合位点，低氧可增强KCC1启动子的活性。该位点的变异与否决定了启动子活性是否受低氧的影响。该结果证实了KCC与低氧间的关系，为建立低氧-KCC1．肾小管间质损害之间的链接提供了实验依据。     

核结合因子a1的调控机制

Cbfa1是骨发育过程中调节骨髓基质干细胞向成骨细胞分化和成熟的重要转录因子。Cbfa1的表达水平异常与骨骼系统疾病有关。体内体外实验证实多种通路(如Wnt/LRP5/-catenin,BMP/Smads,1,25-(OH)2-vitaminD3/VDR/VDRE途径)和调节蛋白(Msx2,Dlx5,Twists)在Cbfa1基因表达、活性和随后的骨形成过程中起关键作用。这些发现对调控成骨细胞分化和治疗骨质疏松以及其他伴有骨量改变的疾病治疗提供了新的思路,这些疾病有可能用控制Cbfa1表达来进行治疗。     

二苯乙烯苷调控miR-34a/SIRT1对骨质疏松大鼠的作用及机制研究

目的 探讨二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG)调控微小RNA-34a(miR-34a)/沉默信息调节因子1(SIRT1)对骨质疏松症(osteoporosis,OP)大鼠的作用及机制.方法 将60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG组(80 mg/kg)、miR...     

GLP-1及其类似物对减缓骨质疏松作用的研究进展

骨质疏松是糖尿病的并发症之一,故降低血糖的同时也不能忽视对骨质疏松的防治。近年来的一些研究发现,胰高血糖素样肽-1（glucagon like peptide 1,GLP-1）不仅在控制血糖方面发挥重要作用,而且在减缓糖尿病合并骨质疏松方面也有疗效。GLP-1及其类似物可改善机体高血糖状态,抑制骨质吸收;并通过破骨细胞核因子κ B受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κ B ligand,RANKL）通路,阻止破骨细胞的成熟,减缓破骨作用;还可调节成骨细胞Wnt通路,影响Wnt／β-catenin比例,促进成骨细胞的分化与成熟,有利于骨质沉积;在间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSC）的分化亦起到调节作用,促使其向成骨细胞分化,减少向脂肪细胞分化;GLP-1及其类似物可以减少晚期糖基化终末产物（advanced glycationend products,AGEs）在骨胶原中沉积,避免破骨细胞的过度增值与分化,此外GLP-1及其类似物还通过其他途径保护骨代谢,减缓骨质疏松的进展。     

斑马鱼骨质疏松模型的研究应用

骨质疏松症是由骨合成代谢和分解代谢之间的平衡改变引起的代谢性骨病,随着我国人口老龄化社会的到来以及不健康生活方式等因素的影响,骨质疏松症患病率呈增加趋势。导致骨质疏松症的病因多种多样,涉及到多种关键的生物学途径等。常用的几种骨质疏松症动物模型,都需要很长的时间来评估药物效果,耗时这一特征成为新药研发的主要障碍。斑马鱼是一种脊椎动物,非常适合于骨相关药物的研发实验,因为它具有许多特殊的优点,例如胚胎透明、骨骼发育快、鳞片再生快、与人类相关基因和信号通路高度同源等,这些是哺乳动物模型所没有的特征,近年来已被成功应用于骨质疏松的模型建立中。在实验中斑马鱼具有样品用量少、筛选快、准确率高、实验耗时短等优势,在药物活性成分或天然产物化合物的筛选等方面都具有显著优势,在骨质疏松防治新药研发中有良好的应用前景。本文将对骨质疏松症的研究现状、斑马鱼骨质疏松模型的建立及其应用进行综述,以便为骨质疏松症发病机制及抗骨质疏松症药物研究提供新的思路和方法。     

Arthroscopic treatment of a large lateral femoral notch in acute anterior cruciate ligament tear

A 24-year-old professional soccer player suffered an acute anterior cruciate ligament tear associated with a radiologically evident impression fracture of the lateral femoral condyle, the so-called “lateral femoral notch sign”. Following MRI validation of the injury with detection of an additional lateral meniscus tear, arthroscopy was carried out 3 days after the injury. Due to the extended impression of about 5 mm, arthroscopically assisted closed reduction of the depression fracture was performed. A 3.2 mm tunnel was drilled at the lateral femoral condyle in a supero-inferior direction using an ACL tibial guide and the depressed area could be restored using an elevator. The resulting subchondral bone defect in the femoral condyle was filled with freeze–dried human cancellous bone allograft. As a one-stage procedure ACL reconstruction was carried out using a hamstring tendon technique. At 1-year follow up the patient has returned to full sporting function, including playing soccer with a radiographically reduced lateral femoral notch sign. No benefits in any form have been received or will be received from a commercial party related directly or indirectly to the subject of this article. No funds were received in support of this study.     

Notch通路在骨肉瘤发病机制中的研究现状

骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤之一,很多报道均已证明Notch信号通路与肿瘤细胞的增殖、分化及转移等有着内在的联系。最新研究表明Notch通路与骨肉瘤的增殖、分化及耐药性等也有一定的相关性。了解Notch通路与骨肉瘤及其血管形成的关系可为临床预防及诊治骨肉瘤提供可靠的理论依据,有利于拓展预防和治疗骨肉瘤的新途径。     

Homer1a的研究进展

Homer1a是一种短型Homer蛋白,为突触后密度(postsynapie density,PSD)蛋白家族成员,即早基因(immediately early gene,IEG)表达产物,神经活动可诱导其快速而短暂的增加表达.组成型表达的长Homer与Shank蛋白一起将代谢型和离子型谷氨酸受体及其他受体连接成复合体,各受体的结构和功能通过长Homer发生联系,Homerla拮抗长Homer的这种功能.因此,活性诱导的Homerla表达增加具有重要的生理意义,在信号转导、受体在细胞的定位和突触形成、功能及可塑性方面起重要作用.其中Homerla对疼痛信号传递过程的影响及其对疼痛的治疗作用日益受到重视.     

机械敏感离子通道蛋白Piezo1响应机械力刺激调节骨代谢的研究进展

随着人们生活方式的改变和人口老龄化,骨质疏松症的发生率逐年增加,已经渐渐成为重大的公共卫生问题。骨骼是一种相对动态的器官,可以为身体结构提供刚度、形状、支撑和运动。骨骼强度直接与死亡率和受伤风险相关,身体活动通常被认为是影响一生骨密度的环境因素,可是骨对于机械负荷的应答过程及其分子机制在很大程度上仍然未知。机械敏感阳离子通道蛋白Piezo1作为机械力刺激间充质干细胞、成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞等产生变化的响应靶点,为机械负荷刺激（运动）改善骨质疏松等骨代谢疾病提供了新的思路和方向。     

全内镜下可视化经椎弓根上切迹入路手术治疗腰椎侧隐窝狭窄症的疗效分析

目的:分析全内镜(full-endoscopic,FE)下可视化经椎弓根上切迹入路手术治疗腰椎侧隐窝狭窄症的临床疗效。方法:收集2016年6月～2017年12月在我院采用FE下可视化经椎弓根上切迹入路手术治疗的96例腰椎侧隐窝狭窄症患者的临床资料,其中男性62例,女性34例,年龄38～68岁(51.4±13.3岁);L3/4 8例,L4/562例,L5/S1 26例。术前腰、腿痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)分别为0～5(3.8±1.6)、3～7 (5.2±1.0);腰椎Oswestry功能障碍指数(ODI)为38%～65%[(53.0±9.1)%];手术节段侧隐窝角和前后径分别为17.6°±1.4°和2.3±0.2mm。术后完成至少2年随访。记录患者手术时间、术中透视次数、住院时间和围手术期并发症,在术后1周的CT/MRI横断面上测量手术节段侧隐窝角和前后径;术后1周、3个月、1年和末次随访时行下肢痛和腰痛VAS评分、ODI评定,并进行统计学分析;末次随访时参照改良MacNab标准评价临床疗效。结果:患者均顺利完成手术,手术时间55.8±14.6m...