T淋巴细胞与胶原诱导性关节炎

胶原诱导性关节炎是应用较广泛的人类风湿性关节炎动物模型 ,二者在发病机制及病理学改变上极为相似。近年来研究证实激活的某些T细胞在胶原诱导性关节炎的发病过程中起着重要作用 ,尤其在疾病的起始阶段 ,提示胶原诱导性关节炎可能是以T淋巴细胞介导为主的自身免疫性疾病     

半枝莲提取物对小鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎的治疗作用

目的探讨半枝莲提取物对Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎动物模型(CIA)的治疗作用。方法取100只DBA/1小鼠随机分为5组(每组20只):完全对照组、0.9%氯化钠注射液对照组及半枝莲低、中、高剂量治疗组(建立CIA模型,分别给予30 mg/次、60 mg/次、90 mg/次剂量的半枝莲提取物治疗)。CIA模型构建成功后即开始给予灌胃治疗,每天1次,连续21 d。分别于造模第28、49天进行各组小鼠关节炎症状况评价;于第49天处死小鼠取血清,检测各组小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-33(IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的水平;同时取各组小鼠左、右后肢关节组织进行HE染色处理,进行病理分析。结果半枝莲提取物可剂量依赖性地减轻CIA小鼠关节的肿胀程度及关节炎评分。与0.9%氯化钠注射液对照组相比,半枝莲中、高剂量治疗组小鼠血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-33、TNF-α表达水平降低(均P<0.01);半枝莲低、中、高剂量治疗组小鼠血清中抑炎因子IL-1Ra的水平有不同程度上调(均P<0.01)。0.9%氯化钠注射液对照组小鼠关节病理评分高于半枝莲中、高剂量组(均P<0.05);而半枝莲低剂量治疗组病理评分与0.9%氯化钠注射液对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论半枝莲提取物可有效地抑制IL-1β、IL-6、IL-33、TNF-α表达水平,并上调IL-1Ra的表达水平,最终减轻CIA小鼠关节炎症,改善CIA小鼠关节病理情况,提示半枝莲提取物对类风湿关节炎小鼠具有一定的治疗作用。     

化痰通络方对大鼠胶原诱导性关节炎作用的实验研究

目的观察化痰通络方对胶原诱导性关节炎(CIA)的治疗作用。方法选择牛Ⅱ型胶原为免疫原,建立CIA模型,选取40只造模成功的大鼠随机分为4组:生理盐水组(A组)、化痰通络方组(B组)、甲胺喋呤组(C组)、化痰通络方+甲胺喋呤组(D组),每组各10只,疗程30 d。采用关节炎指数评分(AI)对大鼠关节炎程度进行评分;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、血管内皮生长因子(VEGF),根据滑膜病理评估滑膜炎指数积分。结果 AI评分:A组治疗前后AI明显升高(P<0.01),C组与D组治疗前后AI明显降低(P<0.01);B组、C组、D组AI均低于A组(P<0.05,P<0.01,P<0.01),D组AI低于B组(P<0.05)。血清VEGF、MMP-3检测结果显示:B、C、D组均显著低于A组(P<0.01);D组显著低于B组(P<0.05),而B组与C组、C组与D组差异不显著(P>0.05)。滑膜炎指数积分(SMII)评估结果:B、C、D组SMII均低于A组(P<0.01);D组SMII低于B组(P<0.05);D组SMII低于C组,C组SMII低于B组,但差异不显著(P>0.05)。结论化痰通络方能减轻CIA关节炎症;化痰通络方能明显降低血清VEGF、MMP-3水平;化痰通络方与甲胺喋呤(MTX)联合使用可进一步增强疗效。     

草乌甲素对大鼠胶原诱导性关节炎的作用

探究草乌甲素对大鼠胶原诱导性关节炎的作用。方法 20只雄性SPF级SD大鼠随机选取5只作为对照组,剩下的15只SD大鼠用来建立胶原诱导性关节炎（CIA）模型,根据关节炎评分表评估CIA模型,建模成功后再随机分成模型组、低剂量草乌甲素治疗组（50 μg/kg）、高剂量草乌甲素治疗组（100 μg/kg）,此后每组大鼠连续给药干预30 d,第31天后处死大鼠。酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠TNF-α、IL-6、IL-17、MMP-3水平,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定关节滑膜组织中MMP-3 mRNA表达水平,蛋白印迹法（Western Blot）检测关节滑膜组织中MMP-3蛋白水平,HE染色观察滑膜组织病理变化。结果 与对照组比较,模型组及草乌甲素治疗组TNF-α、IL-6、IL-17、MMP-3水平明显升高（P＜0.05）;同时,与模型组比较,草乌甲素治疗组TNF-α、IL-6、IL-17、MMP-3水平明显降低（P＜0.05）。与对照组相比,模型组MMP-3 mRNA、MMP-3蛋白表达水平明显升高;同时,与模型组比较,草乌甲素治疗组MMP-3 mRNA、MMP-3蛋白表达水平降低（P＜0.05）。组织病理结果显示草乌甲素治疗组的关节滑膜处的炎症细胞浸润及滑膜增生情况均减轻。结论 草乌甲素可以抑制炎症因子分泌和降低MMP-3的表达,对大鼠胶原诱导性关节炎具有一定的治疗作用     

滑膜细胞凋亡在胶原诱导性关节炎大鼠发病机制中的意义

目的研究滑膜细胞凋亡在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠发病机制中的作用。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为造模组（20只）、正常对照组（10只,简称正常组）;造模组采用牛Ⅱ型胶原诱导建立CIA模型,造模成功后随机选取10只作为模型组。观察4周后,取各组滑膜标本,采用苏木素-伊红（HE）染色评价滑膜炎性细胞浸润及增生情况,并运用透射电镜、流式细胞术及细胞凋亡原位检测试剂（TUNEL）法检测滑膜细胞凋亡。结果HE病理结果显示：模型组的滑膜炎性细胞浸润和增生程度积分均较正常组显著增加（P〈0．01）。透射电镜检测结果显示：正常组可见滑膜细胞核膜皱缩,核染色质分布不均匀;模型组可见滑膜细胞呈梭形,细胞膜皱缩,细胞体积变小与邻近细胞分离,核内见染色质浓缩。流式细胞术、TUNEL法检测结果显示：模型组大鼠滑膜细胞凋亡率和凋亡指数均较正常组明显降低（P〈0．05或0．01）。结论CIA大鼠滑膜细胞增殖、滑膜细胞凋亡减少可能是导致CIA的发病机制之一。     

羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标的检测

目的检测羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标,分析此模型的相关指标与牛Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎模型的异同。方法分别用牛、羊Ⅱ型胶原蛋白免疫动物,比较两组免疫大鼠足趾容积、关节炎肿胀评分、血清细胞因子的榆测和关节滑膜病理改变。结果羊Ⅱ型胶原蛋白成功诱导出关节炎模型,与牛Ⅱ型胶原白诱导关节炎模型在造模成功率上差别无统计学意义,其中羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组大鼠关节发病时间、关节肿胀达高峰时间及肿胀程度均早于和重于牛Ⅱ型胶原蛋白诱导组。羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组血清细胞因子IL-1β、TNF—α升高较牛胶原蛋白诱导组更为显著（P〈0．01）。病理切片显示两模型组关节滑膜均有炎细胞浸润,滑膜细胞层次增多,排列紊乱,但牛组重于羊组。结论羊Ⅱ型胶原蛋白可诱导大鼠关节炎。     

羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标的检测

目的检测羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标,分析此模型的相关指标与牛Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎模型的异同。方法分别用牛、羊Ⅱ型胶原蛋白免疫动物,比较两组免疫大鼠足趾容积、关节炎肿胀评分、血清细胞因子的检测和关节滑膜病理改变。结果羊Ⅱ型胶原蛋白成功诱导出关节炎模型,与牛Ⅱ型胶原白诱导关节炎模型在造模成功率上差别无统计学意义,其中羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组大鼠关节发病时间、关节肿胀达高峰时间及肿胀程度均早于和重于牛Ⅱ型胶原蛋白诱导组。羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组血清细胞因子IL-1β、TNF-α升高较牛胶原蛋白诱导组更为显著(P<0.01)。病理切片显示两模型组关节滑膜均有炎细胞浸润,滑膜细胞层次增多,排列紊乱,但牛组重于羊组。结论羊Ⅱ型胶原蛋白可诱导大鼠关节炎。     

桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠IFN-γ及IL-4水平的影响

目的研究桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法采用牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型(Collagen-induced arthritis,CIA),灌胃给药21 d后观察大鼠体重变化、足肿胀度;采用ELISA法测定大鼠滑膜和血清中的白细胞介素4(IL-4)水平,小鼠巨噬细胞NO2-释放法测定大鼠滑膜和血清中干扰素γ(IFN-γ)活性。结果桂枝芍药知母汤能改善CIA大鼠体重变化,降低原发性和继发性足肿胀度,下调CIA大鼠滑膜和血清IFN-γ、IL-4水平。结论CIA大鼠滑膜中IFN-γ、IL-4水平均升高,血清中以IFN-γ升高为主。桂枝芍药知母汤抗风湿作用,可能通过下调CIA大鼠滑膜和血清IFN-γ、IL-4水平,从而调节Th1/Th2平衡。     

Ⅱ型胶原变构肽鼻黏膜给药治疗胶原诱导性关节炎的实验研究

目的:研究以丙氨酸替换Ⅱ型胶原(collagen Ⅱ,CⅡ)263-272序列中的267、270、271位氨基酸的变构肽鼻黏膜给药对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)的抑制作用及其作用机制.方法:以牛CⅡ免疫Lewis大鼠诱发CIA.于发病的当天开始给予CⅡ变构肽和原型肽鼻滴入治疗,连续每天给药,5 d后,改为隔天给药,空白对照组给予磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS).观察关节肿胀情况,记录关节炎评分以及体重的改变.治疗结束后处死大鼠,行后踝关节病理切片,观察关节病理改变.ELISA方法检测血清巾抗C Ⅱ抗体亚型以及细胞因子的变化,流式细胞仪检测外周血 CD4+CD25+T细胞的变化,荧光定量PCR检测脾和淋巴结中Foxp3和TGF-β mRNA的表达水平.结果:(1)CⅡ变构肽可以抑制CIA的发展.实验结束时CⅡ变构肽、原型肽以及PBS组大鼠关节炎评分分别为2.50±2.43、4.50±2.23和6.33±2.73(变构肽治疗组与PBS对照组比较,P<0.05),各组大鼠后踝关节病理学评分分别为1.33±1.07、2.17±0.94和2.83±0.58,与PBS对照组相比,CⅡ变构肽可以明显抑制CIA关节病变的发展(P<0.05).(2)与PBS对照组相比,CⅡ变构肽可以降低CIA大鼠体内抗CⅡ抗体IgG2a亚型的滴度(0.56±0.19和0.95±0.29,P<0.05).C Ⅱ变构肽、原型肽及PBS对照组大鼠血清中γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平分别为(185.33±29.77)、(231.62±41.82)和(220.64±83.61)ng/L,与原型肽组相比,CⅡ变构肽可以降低大鼠血清中IFN-γ水平.(3)CⅡ变构肽治疗对调节性T细胞的影响:3组大鼠外周血CIM+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例差异无统计学意义,CⅡ变构肽治疗组大鼠脾和淋巴结中Foxp3和转化生长因子B(transforming growth factors β,TGF-β)mRNA的表达水平较对照组有升高趋势,但差异无统计学意义.结论:C Ⅱ变构肽鼻黏膜给药治疗可以抑制CIA的发展,CⅡ变构肽可能主要通过抑制CIA大鼠体内IgG2a型抗CⅡ抗体的产生,并降低血清中IFN-Ⅱ,从而抑制Th1型免疫反应而发挥治疗作用.     

口服Ⅱ型胶原及抑肽酶对佐剂型关节炎大鼠治疗作用研究

目的研究口服Ⅱ型胶原（CⅡ）及抑肽酶对大鼠佐剂型关节炎的治疗作用。方法将50只大鼠随机分为5组,采用完全佐剂制备大鼠佐剂型关节炎模型。按不同方案口服给与CⅡ及抑肽酶后考察对踝关节肿胀的影响。采用免疫荧光技术,用流式细胞仪检测大鼠外周血T细胞亚群的变化,并且用大鼠TNFa检测试剂盒检测大鼠外周血TNFa水平的变化。结果建立了大鼠佐剂型关节炎实验动物模型,Ⅱ型胶原组及Ⅱ型胶原和抑肽酶组与生理盐水组比较均可显著减轻踝关节肿胀的程度,且两组大鼠外周血CD3 T细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞及外周血TNFa水平与生理盐水组比较也均有显著性差异;Ⅱ型胶原组与Ⅱ型胶原和抑肽酶组组间作用比较,后者作用好于前者,部分结果有显著性差异;抑肽酶组与生理盐水组比较,治疗作用差异不显著。结论Ⅱ型胶原中加入抑肽酶后能更有效地治疗大鼠佐剂型关节炎。     

Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较

目的对Ⅱ型胶原蛋白（ＣⅡ－Ａ）和弗氏完全佐剂（Ａ－Ａ）大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。方法分别采用Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型，利用排水法对大鼠足部体积进行测定，并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。结果从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变，但ＣⅡ－Ａ大鼠与Ａ－Ａ大鼠比较，滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显，关节炎持续时间也较长，更接近于人的类风湿性关节炎。结论ＣⅡ－Ａ大鼠模型与Ａ－Ａ相比是研究ＲＡ较为理想的动物模型。     

二氢青蒿素对大鼠牛Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型作用的初步研究

【摘要】 目的 建立牛Ⅱ型胶原蛋白(BCⅡ)诱导的大鼠关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)动物模型,研究二氢青蒿素对大鼠关节炎的影响。方法 选用雄性Wistar大鼠,在模型组(n=19)大鼠尾根及脊背部皮内注射用弗氏完全佐剂乳化的BCⅡ 0.3 mg,第15 d以同样的剂量在同样的部位加强免疫1次;正常对照组(n=5)以生理盐水按同样的方法和剂量注射。第52 d,将模型组分为单纯模型组（模型空白组,n=7）、二氢青蒿素组〔二氢青蒿素1.5 mL/（kg·d),1 mL含20 mg二氢青蒿素,灌胃;n=12〕。治疗28 d后观察大鼠的关节炎表现。结果 模型组大鼠关节肿胀明显,而正常对照组关节无炎性红肿。二氢青蒿素组:关节肿胀减轻,组织病理检查见只有少量炎性细胞浸润,少量纤维结缔组织和毛细血管增生,关节腔较干净,没有明显的骨质破坏。治疗28 d后,模型空白组关节炎指数较治疗前和正常对照组增加（P<0.05）;二氢青蒿素组与治疗前比较差异无统计学意义（P>0.05）,仍高于正常对照组（P<0.05）。治疗28 d后,模型空白组病理分级高于正常对照组（P<0.05),二氢青蒿素组低于模型空白组（P<0.05）。结论 初步实验表明二氢青蒿素有减轻Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎病变作用。     

甲氨蝶呤对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用及其机制

目的： 研究甲氨蝶呤关节周围注射后对小鼠胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis,CIA）的治疗作用及其机制。方法： 从初次免疫后第22天开始至50天止,每周3次关节周围注射甲氨蝶呤,PBS作阴性对照,对CIA小鼠关节炎严重程度进行评分并比较各组关节炎发生率,石蜡切片观察组织病理学变化,流式细胞术检测腹股沟淋巴结细胞中Th17细胞与Treg细胞的比例变化情况。结果： 甲氨蝶呤可以有效降低小鼠关节炎的发病率及平均关节炎指数(P＜0.001);石蜡切片显示甲氨蝶呤对炎症细胞浸润、血管翳的形成、软骨以及骨的破坏具有较好的抑制作用;流式细胞术检测显示甲氨蝶呤组Th17细胞比例降低,Treg细胞比例增加(P＜0.05)。结论： 甲氨蝶呤关节周围注射可以有效抑制类风湿关节炎的发展,其机制可能与下调Th17/Treg细胞的比率有关。     

口服Ⅱ型胶原治疗大鼠佐剂性关节炎的研究

目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)诱导免疫耐受对大鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗作用,研究外周淋巴器官及关节液中肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的变化.方法:应用免疫组化法检测口服和未口服CⅡ的大鼠外周淋巴器官中TNF-α水平的变化,应用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠关节液中TNF-α水平的变化.结果:口服耐受的AA大鼠的外周淋巴器官和关节液中TNF-α的水平明显低于未口服CⅡ的AA大鼠.结论:口服CⅡ诱导免疫耐受可以有效降低TNF-α水平,从而治疗佐剂性关节炎.     

三叶青对小鼠Ⅱ型胶原关节炎的影响

目的观察三叶青对Ⅱ型胶原所致关节炎小鼠的影响;方法通过皮内注射Ⅱ型胶原造成小鼠关节炎模型,观察三叶青对模型动物关节肿胀度、关节评分、关节病理组织学变化等指标的影响。结果三叶青可抑制造模小鼠关节肿胀、降低关节肿胀度评分,改善关节病理组织学。结论三叶青对实验性关节炎小鼠有一定的治疗作用。      

益气活血解毒中药对胶原诱导性关节炎大鼠NF-κB信号通路相关因子表达的影响

目的探讨益气活血解毒中药对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症细胞因子及NF-κB信号通路关键因子表达的影响。方法以牛Ⅱ型胶原尾根及背部多点注射制作CIA大鼠模型,以免疫抑制剂来氟米特为阳性对照药物,益气活血解毒中药干预,病理切片HE染色,观察大鼠足跖关节的病理改变,细胞因子芯片检测CIA大鼠血清中炎症细胞因子的含量,real-time PCR检测NF-κB信号通路中关键因子的基因表达改变。结果益气活血解毒中药可以明显抑制关节滑膜组织增生,缓解炎性渗出,缩小纤维素样坏死区范围,并显著降低CIA大鼠外周血血清中肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-5、IL-6、IL-10的含量,NF-κB mRNA表达与模型组相比均显著下降(P0.01或P0.05),NF-k B抑制蛋白激酶mRNA表达有下降趋势,统计学分析差异无显著性。结论益气活血解毒中药可以通过干预与类风湿关节炎(RA)相关的炎症细胞因子和NF-κB信号通路相关因子的表达,抑制病变组织的炎症反应,修复炎症所导致的关节损伤,达到治疗RA的目的,这是益气活血解毒中药干预RA免疫炎症反应的关键作用机制之一。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察青藤碱对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型大鼠（CIA）低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）及基质金属蛋白9（MMP-9）的影响,探讨青藤碱对类风湿关节炎（RA）滑膜血管新生的作用机制。方法40 只远交群大鼠,随机选取10 只作为对照组,余30 只大鼠采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂的方法复制关节炎模型。15 d 后造模大鼠随机分为模型组、雷公藤组、青藤碱组,每组10 只。雷公藤组：雷公藤多甙片9.68 mg/（kg·d）灌胃给药;青藤碱组：青藤碱片100 mg/（kg·d）灌胃给药;模型组灌服等体积0.9%氯化钠注射液。1 次/d,共28 d。期间测量大鼠踝关节肿胀度。灌药28 d 后处死大鼠,免疫组织化学法检测关节滑膜组织HIF-1α水平,酶联免疫吸附试验测定血清中VEGF、MMP-9 水平。结果与模型组比较,青藤碱组和雷公藤组大鼠关节肿胀度减轻（p <0.05）;青藤碱组和雷公藤组滑膜组织中HIF-1α 表达降低（p <0.05）;青藤碱组和雷公藤组血清中VEGF、MMP-9 表达降低（p <0.05）。结论青藤碱可降低CIA 踝关节肿胀,疗效与雷公藤多甙相当。其机制可能是通过下调HIF-1α的表达及VEGF、MMP-9水平,从而减少滑膜新生血管生成。     

青藤碱配伍芍药苷协同增效抗胶原诱导性关节炎作用机制研究

目的 探讨青藤碱配伍芍药苷抗胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis, CIA）药效作用及其机制。方法 将60只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组（1 mg/kg）、青藤碱组（50 mg/kg）、芍药苷组（120 mg/kg）和青藤碱（50 mg/kg）配伍芍药苷（120 mg/kg）组（青芍配伍组）,每组10只。除正常组外,其余大鼠尾根部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原/非完全弗氏佐剂乳剂建立CIA模型。正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,用药组灌胃相应药物,连续30 d。造模后,每3天检测大鼠后足肿胀容积、关节炎指数评分及体质量;治疗结束后,CT检测大鼠关节骨破坏情况;HE染色观察踝关节病理变化;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)含量;Western blot法检测关节骨组织基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallopr...