JAR细胞靶向微泡造影剂的体外研究

目的探讨体外靶向SonoVue微泡与人绒毛膜癌细胞（JAR细胞）的结合特性、结合率及靶向微泡的稳定性,为在体研究肿瘤细胞抗原的超声定位显像奠定基础。 方法用SonoVue微泡与兔抗人HCG抗体作用制成靶向造影剂、然后分别与JAR细胞及子宫内膜间质细胞（ESC）作用,比较各自的结合率及冲洗前后的结合率。 结果SonoVue微泡与兔抗人HCG抗体的结合率为67.6%;JAR细胞与靶向SonoVue微泡的花环形成率为（84.3±5.5）%,明显高于ESC的花环形成率（11.4±1.5）%（P〈0.05）;靶向SonoVue微泡与贴壁生长的JAR细胞结合率为（85.8±3.3）%,冲洗后结合率为（82.4±3.7）%（P〉0.05）;流式细胞仪检测JAR细胞与靶向SonoVue微泡的结合率为81.0%。 结论在体外靶向SonoVue微泡与JAR细胞特异性结合力具有一定的强度,可望实现靶向显影。     

低频超声辐照联合微泡对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的观察低频超声辐照联合微泡对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法联合不同浓度的SonoVue(0、0.5×106、1.0×106、1.5×106、2.0×106/mL),使用42.6kHz超声分别辐照大鼠主动脉平滑肌细胞10s、20s、30s,空白对照组不作任何处理。台盼蓝染色分析辐照后即刻细胞存活率,流氏细胞仪观察辐照后24h细胞凋亡率。结果细胞的死亡和凋亡与微泡浓度及辐照时间相关。当超声波在微泡浓度达到或超过0.5×106/mL,联合辐照30s,以及微泡浓度达到2.0×106/mL,联合辐照10s、20s时,细胞大量死亡。在超声辐照10s时,辐照后24h细胞凋亡率随微泡浓度的增加而增加,但在微泡浓度低于1.0×106/mL时,细胞即刻存活率并无显著减少。在超声辐照20s时,细胞即刻存活率随微泡浓度的增加而减少,辐照后24h细胞凋亡率在微泡浓度为0.5×106/mL、1.0×106/mL、1.5×106/mL时差异无统计学意义。结论在一定空化强度范围内,低频超声辐照后24h细胞凋亡率随强度增加而增加,但超过一定程度,则无法增加细胞凋亡率,只会导致细胞死亡。低频超声辐照联合微泡的空化作用可在短时间内诱导体外培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

超声微泡靶向增强RNA干扰质粒转染对移植瘤微血管形成和细胞凋亡的影响

目的 通过超声微泡靶向破坏的方法,选择Survivin作为靶点对短发夹状RNA干扰质粒(pSIREN/S3)进行转染,探讨其对裸鼠移植瘤微血管形成和细胞凋亡的影响.方法 将荷瘤裸鼠分为对照组、超声辐照诱导质粒组及超声微泡靶向破坏诱导质粒组,对组织样本行组织学检查,测定微血管密度(MVD),以末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)定量检测分析荷瘤裸鼠模型肿瘤组织的凋亡指数(AI).结果 超声微泡靶向破坏诱导质粒组的MVD明显减少,AI明显升高,与对照组及超声辐照诱导质粒组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 超声微泡靶向破坏联合pSIREN/S3质粒敲除Survivin,能使肿瘤组织中血管生成减少,明显诱导细胞凋亡,为恶性肿瘤基因治疗领域的一个新方法.     

载基因壳聚糖纳米超声微泡转染miRNA诱导Hela细胞凋亡的研究

目的:探讨载Survivin-miRNA的壳聚糖纳米超声微泡对癌细胞凋亡、增殖的影响.方法:实验分为5组,空白对照组、壳聚糖纳米超声微泡组和低、中、高浓度载Survivin-miRNA的壳聚糖纳米超声微泡转染组(分别给予50、100和200 nmol/L miRNA转染).流式细胞术检测各组Hela细胞凋亡指数(AI)和增殖指数(PI),RT-PCR检测靶向Survivin和caspase-3的mRNA表达,荧光分光光度法分析caspase-3活性变化.结果:各浓度转染组细胞AI明显高于对照组(P＜0.05),高浓度转染率最明显(P＜0.05);各浓度miRNA转染组PI明显低于对照组(P＜0.05),高浓度转染组最明显(P＜0.05);各浓度miRNA转染组Survivin mRNA转录水平有不同程度减弱.Caspase-3 mRNA的表达在各组细胞间差异无显著性(P＞ 0.05);各转染组细胞caspase-3活化水平较对照组明显提高(P＜0.01).结论:不同浓度靶向Survivin基因的miRNA能下调Survivin的mRNA表达水平,对caspase-3 mRNA的表达无明显作用,能激活caspase-3无活性前体,从而诱导Hela细胞凋亡,抑制细胞增殖.     

正交设计法优化超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞凋亡的研究

目的采用正交实验设计,探讨超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞的凋亡的最优参数组合。方法选定超声功率、辐照时间、微泡/细胞悬液体积比三个因素,又分别按超声功率15、20、25、30 mW/cm2,辐照时间30、60、90、120 s和微泡/细胞悬液体积比10%、20%、30%、40%,每因素四个水平设定正交设计表,按正交设计表进行超声辐照,辐照后细胞继续培养24 h,用流式细胞仪进行细胞凋亡检测。结果对细胞凋亡的影响因素,超声功率>微泡/细胞悬液体积>辐照时间;各因素水平影响:超声功率:15 mW/cm2>25 mW/cm2>20 mW/cm2>30 mW/cm2,辐照时间:30 s>60 s>120 s>90 s,微泡/细胞悬液体积:20%>10%>30%>40%。结论超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞凋亡最佳组合为超声功率15 mW/cm2,辐照时间30 s,微泡/细胞悬液体积比20%。     

超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺介导凋亡素基因诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因(VP3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:体外培养HepG2细胞,随机分为4组:(1)对照组;(2)PEI-Gal组;(3)PEI-Gal+超声组;(4)PEI-Gal+超声+微泡组。转染24h后荧光显微镜观察pEGFP-VP3在HepG2细胞中的表达,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot分别检测VP3 mRNA和蛋白表达水平,AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率。结果:流式细胞仪、RT-PCR和Western blot分析表明,PEI-Gal+超声+微泡组的转染效率为(28.83±2.07)%、VP3 mRNA水平为0.92±0.02,蛋白水平为1.65±0.06,HepG2凋亡率为(37.40±2.12)%,均显著高于其他各组(均P<0.01)。结论:UTMD联合PEI-Gal可明显提高VP3基因转染HepG2细胞的效率及在HepG2细胞内的表达,增加HepG2细胞的凋亡率。     

超声微泡靶向转染MicroRNA-21对猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的冠状动脉微栓塞（coronary microembolization,CME）后导致的心肌凋亡是引起心功能损伤的主要原因之一,第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten,PTEN）在CME后心肌凋亡中起到重要的作用,MicroRNA-21对心肌有保护作用,主要是通过调控其靶基因PTEN实现,因此本研究探讨超声微泡靶向转染MicroRNA-21对CME小猪心肌细胞凋亡的影响及意义。方法20头巴马小猪随机（随机数字法）分为假手术组、微栓塞组（CME组）、CME＋单纯基因组、CME＋超声介导基因组,每组小猪均为5只。经微导管左前降支注入微栓塞球构建CME模型组,注射等量生理盐水构建假手术组。CME＋超声介导基因组于CME前4天经耳缘静脉注入质粒一微泡混合液,同时予超声基因转染治疗仪经猪胸壁辐照心肌。CME＋单纯基因组于CME前4天经耳缘静脉注入质粒礅泡混合液,不予超声辐照。应用心脏超声检测心功能指标;组织病理切片HE及HBFP染色进行梗死区域测量;冰冻切片荧光显微镜评估绿色荧光蛋白（GFP）标记基因表达量;切口末端标记法检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测心肌组织PTENmRNA表达;Westernblot检测心肌组织PTEN与Caspase-3蛋白表达。结果（1）与单纯基因组比较,超声介导基因组可使心肌内外源基因表达水平提高8倍以上（P〈0．05）。（2）超声心动图参数显示,与假手术组[（67．87±2．36）％]比较,CME组[（50．94±3．52）％]和CME＋单纯基因组[（52．47±3．71）％]的左室射血分数（LVEF）显著降低（P〈0．05）;与CME组比较,CME＋超声介导基因组[（64．79±2．95）％]可改善CME导致的心功能损伤（P〈0．05）。（3）与假手术组比较,CME组PTEN的mRNA和蛋白表达量均显著增加,Caspase-3的蛋白表达量增加（均P〈0．05）;与CME组比较,CME＋超声介导基因组中PTEN的mRNA和蛋白表达量明显较低,Caspase-3的蛋白表达量较低（均P〈0．05）。结论超声微泡靶向转染MicmRNA-21可以有效地改善CME致心功能损伤,其可能机制是通过下调其靶基因PTEN在心肌细胞的表达,进而减少心肌细胞凋亡起效。     

膜联蛋白V与碘化丙啶用于细胞周期特异性凋亡的检测

目的 建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法。方法 将急性早幼粒细胞白血病细胞株（HL－60）分别经喜树碱（CAM）、紫外线诱导、及喜树碱和N－甲苯磺酰基－L－苯基丙氨酸氯甲基酮（TPCK）共同诱导后，用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V（Annexin V）进行标记，经1％不含甲醇的甲醛溶液冰浴固定，再用含洋地黄皂苷的碘化丙啶染色液染色后，流式细胞术分析凋亡细胞的周期特异性和细胞凋亡率，并与DNA链缺口标记法（TdT）和常规Annexin V法检测结果进行比较。结果 细胞凋亡的周期特异性分析：膜联蛋白V／碘化丙啶法（PA法）和TdT法结果一致，CAM和紫外线诱导的细胞凋亡分别发生在S期和G1期；GAM和TPCK共同诱导试验显示，PA法对早期凋亡具有较高的检测灵敏度，TdT法则不能有效检测；而常规Annexin V法无法进行凋亡细胞的周期特异性分析。凋亡率的检测：HL－60经CAM、紫外线、CAM与TPCK三种方法诱导后，PA法检测凋亡率的结果（17.3%、34.7%、35.9%）与常规Annexin V法的检测结果（18.1%、35.6%、37.0%）一致（P＞0.05），而TdT法（10.7%、19.5%、－）则明显偏低（P＜0.01）。结论 PA法可以用于凋亡细胞周期特异性检测，其稳定、可靠、灵敏度高。     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

超声联合微泡诱导血管平滑肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨低频超声联合脂质微泡诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的可能机制.方法 以低频连续波超声(频率1 MHz、声强0.3 W/cm2)联合脂质微泡(1 μl/ml)辐照VSMCs 120 s.分别用流式细胞仪Annexin V/PI染色、免疫细胞化学技术、荧光探针Fura-4/Am负载后激光共聚焦法检测细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达和细胞内游离Ca2 浓度的变化情况.结果 与对照组和血小板衍生生长因子-BB刺激组(PDGF)比较,两组超声辐照联合微泡[(US MB)组和(PDGF US MB)组]的VSMCs凋亡率显著增加、Bax蛋白表达明显上调、而Bcl-2蛋白表达则显著减少(P<0.01);而且PDGF US MB组的细胞凋亡率明显高于US MB组,Bax蛋白表达上调和Bcl-2蛋白表达下调的程度较US MB组更为显著(P<0.01).各实验干预组VSMCs内Ca2 浓度均较对照组显著增高(P<0.01);PDGF US MB组和US MB组细胞内Ca2 浓度均明显低于PDGF组(P<0.01).结论 超声联合微泡诱导VSMCs凋亡的机制可能与细胞内游离Ca2 浓度增加、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达降低有关.     

携尿激酶靶向微泡造影剂的体外溶栓实验研究

目的 制备携尿激酶及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(RGDS)的靶向溶栓造影剂,并研究其对体外血栓的溶解作用.方法 通过直接连接法将尿激酶、RGDS连接到造影剂声诺维上.制备血块,分为4组,分别注入生理盐水、声诺维、尿激酶及所制备的造影剂,计算处理前后的血块质量差,算出溶栓率,进行统计学分析.结果 荧光显微镜及流式细胞仪检测结果均显示,声诺维成功携带了尿激酶及RGDS,携带率分别为(72.3±9.4)%、(64.6±10.2)%.加入所制备的携药造影剂组溶栓前后血块质量改变显著,差异具有统计学意义,血栓溶解率(18.4±3.2)%.结论 携尿激酶及RGDS的靶向溶栓造影剂成功制备.所制备的造影剂在体外具有血栓溶解作用.     

膜联蛋白A2基因对多发性骨髓瘤细胞的诱导凋亡作用及相关机制研究

本研究探讨膜联蛋白A2（AnxA2）基因诱导骨髓瘤U266、RPMl8226细胞凋亡的作用及相关机制。采用AnxA2siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMl8226细胞,应用实时PCR和Westernblot检测AnxA2基因和蛋白的表达。应用流式细胞术检测细胞凋亡,应用实时PCR检测凋亡相关基因的表达水平。结果表明,AnxA2siRNA转染U266和RPMl8226后,AnxA2基因和蛋白表达水平均明显下调;细胞凋亡率增高（P〈0．05）,同时降低凋亡相关基因p65NF-κB、儿_2、IL-6的表达（P〈0．05）,增强P53基因的表达（P〈0．05）。结论：AnxA2基因沉默在骨髓瘤细胞U266和RPMl8226凋亡中起促进作用。     

超声破坏载紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的探讨超声破坏载紫杉醇微泡后对卵巢癌细胞株SKOV3生长抑制及凋亡诱导作用。 方法体外培养卵巢癌细胞,将细胞分为5组,即紫杉醇组,紫杉醇联合超声辐照组,载紫杉醇微泡联合超声辐照组,单纯载紫杉醇微泡组及空白对照组。用MTT法观察超声破坏载紫杉醇微泡后在不同时间对细胞的生长抑制情况,用透射电镜观察细胞的凋亡诱导情况。 结果在紫杉醇浓度为1×10^-6mol/L时,载紫杉醇微泡联合超声组的细胞在微泡辐照击破后生长明显受到抑制,并且随培养时间延长,抑制效应越明显,透射电镜观察到载紫杉醇微泡联合超声组的细胞有凋亡小体,比其它各组对卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡诱导作用强。 结论载紫杉醇微泡被超声辐照破坏后对卵巢癌细胞株SHKOV3生长有明显抑制作用,并且能诱导其凋亡。     

超声靶向辐照微泡造影剂介导重组腺相关病毒转染肾癌细胞

目的 以肾癌细胞为研究对象,探索超声靶向破坏微泡(UTMD)技术对重组腺相关病毒(rAAV)转染率的影响。方法 应用不同感染复数(MOI)的rAAV2转染786-0细胞观察转染率。用不同条件UTMD预辐照rAAV2,观察病毒活性。以不同条件UTMD联合rAAV2转染人肾透明细胞癌(786-0)细胞,测定转染率及细胞生存率,RT-PCR检测细胞内病毒载体基因拷贝数。结果 1×10⁴~1×10⁶ MOI的rAAV2在786-0细胞的转染率为(17.28±2.44)%。UTMD声强≤2.0 W/cm²,时间≤120 s,微泡体积比≤40％,频率1 MHz,占空比(DC)50%,脉冲重复频率(PRF)100 Hz时,UTMD辐照不影响rAAV2的转染活性。在不影响细胞生存率及rAAV2活性的参数下(声强1 W/cm²,时间60 s,微泡体积比20％,频率1 MHz,DC 50%,PRF 100 Hz),UTMD介导rAAV2组细胞的转染率较单纯rAAV组提高2~3倍,并在5天内稳定维持提高效应;实时PCR显示,UTMD介导rAAV2组细胞内病毒载体量较单纯rAAV组提高近9倍。结论 UTMD可安全、有效且稳定地提高rAAV2在肾癌细胞的转染率。     

低频超声联合微泡促进多发性大动脉炎血管平滑肌细胞凋亡的生物学效应

目的:探讨超声联合微泡技术影响多发性大动脉炎(Takayasu arteritis, TA)血管平滑肌细胞的变化,为该类疾病的预防和治疗提供依据。方法:通过手术获取TA增生进展期、炎症硬化期及经皮血管腔内成形术(percutaneous transluminal angioplasty, PTA)后再狭窄期血管平滑肌细胞进行体外培养,建立偶联抗体的靶向超声微泡剂,采用20 kHz低频超声辐照150 s后培育24 h进行研究观察。结果:通过超声微泡处理后3组细胞存活率有明显差异(P0.01);相较其他两组,PTA后再狭窄期血管平滑肌细胞反应更敏感(P0.05),其培养基活性氧(ROS)明显上升(P0.01),而超氧化物歧化酶(SOD)活性明显降低(P0.01),细胞凋亡水平明显增加(P0.01)。结论:超声微泡联合处理可能对PTA后再狭窄期的治疗更有效果,超声微泡对TA血管平滑肌细胞具有明显的抑制与促凋亡的生物学效应。     

超声联合载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠C6细胞凋亡

目的 探讨低频超声介导载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法 采用MTT法检测各实验组不同时间点的细胞抑制率,确定实验参数;流式细胞仪分析C6细胞的凋亡率及细胞周期;透射及扫描电镜观察C6细胞超微结构的变化.结果 超声+10%载卡莫司汀微泡组在6 h时段细胞抑制率、细胞凋亡率均最高,与其他实验组及对照组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01).超声破坏载药微泡使增殖期(S期)细胞比例减少,电镜观察超声联合载药微泡可使C6细胞出现凋亡.结论 低频超声介导载卡莫司汀脂质超声微泡能诱导C6细胞凋亡,可能成为胶质瘤治疗的一种新方法.     

超声联合微泡对卡铂化疗A549细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨超声联合微泡是否协同卡铂诱导人肺癌A549细胞凋亡。方法 设置对照组、US组、USMB组、CBP组、CBP+US组、CBP+USMB组,其中卡铂采用最适宜剂量50μg/ml,超声辐照参数采用最适宜声强0.6W/cm_²,辐照时间60s。处理后培养24小时,每组分别消化、离心、收集3个独立样本,加入FITC标记的Annexin-V室温避光30 min,再加入PI避光反应5 min,应用流式细胞仪检测各组A549细胞凋亡率。应用SPSS 26.0分析各组凋亡率。结果 A549细胞总凋亡率由高到低依次为CBP+USMB组、CBP+US组、CBP组、USMB组、US组。CBP+US组与CBP组比较,早期凋亡率差异无统计学意义(P=0.964)。CBP+USMB组与CBP组、CBP+US组比较,早期凋亡率差异均有统计学意义(均P<0.01)。CBP+US组、CBP+USMB组与CBP组两两比较,晚期、总凋亡率差异均有统计学意义(均P<0.01)。 结论 US、USMB联合卡铂化疗可以协同诱导A549细胞凋亡。     

膜联蛋白在肿瘤凋亡显像中的研究进展

目前的影像学检查方法尚不能在肿瘤治疗早期即对疗效进行有效判断,而活体凋亡显像能在细胞水平对肿瘤组织的改变进行早期、无创、动态监测,从而准确判断肿瘤细胞对化疗药物的反应。磷脂酰丝氨酸(PS)由细胞膜内侧翻转到细胞膜表面是细胞凋亡早期最具特征性的改变之一,这使得PS成为细胞凋亡显像的有效靶点。放射性核素标记的膜联蛋白可选择性与翻转到细胞膜表面的PS结合,从而可在体内对早期疗效进行判断。由于在有效的抗肿瘤治疗开始24 h后即可观察到大量的肿瘤细胞发生凋亡,因此活体凋亡显像有助于为临床个体化治疗方案的制订提供指导性意见。本文在临床前研究和临床试验两方面对膜联蛋白凋亡显像在抗肿瘤治疗早期疗效评价中的机制、应用、局限性及未来发展前景作一综述。     

载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2增殖影响及诱导凋亡作用研究

目的 探讨超声辐照紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制的影响和诱导凋亡作用.方法 体外培养肝癌细胞,将细胞分4组,即空白对照组,紫杉醇组,超声空白微泡组,超声载紫杉醇微泡组.MTT法观察不同处理组不同时间点对细胞生长的影响,Annexin V-FITC荧光染色检测其对诱导细胞凋亡作用.结果 超声载紫杉醇微泡组对细胞的增殖抑制作用强于其他处理组及对照组;超声载紫杉醇微泡组能够诱导肿瘤细胞发生凋亡.结论 超声辐照紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2生长有明显抑制作用,并诱导细胞凋亡.     

应用免疫荧光双标记染色技术检测乙型肝炎病毒感染胎盘膜联蛋白Ⅴ的表达

背景:膜联蛋白Ⅴ是近年来被作为肝细胞膜上存在的与乙型肝炎病毒感染相关受体研究的热点之一,并在胎盘组织中也有表达.目的:探讨膜联蛋白Ⅴ在HBV宫内感染中的作用;揭示HBV进入胎盘组织细胞的方式,为HBV的宫内感染的机理提供理论依据.设计:随机对照实验.单位:泰山医学院.对象:选择2003-01/2004-12济南市妇幼保健院、泰安市中心医院、泰安市妇幼保健院收集的30例HBsAg阳性孕妇足月分娩的胎盘组织,同时收集母血分离血清.实验经过孕妇知情同意及医院伦理委员会批准.兔抗人膜联蛋白Ⅴ亲和纯化抗体(第一抗体)、鼠抗人HBs mAb(第一抗体)、生物素化羊抗小鼠IgG(第二抗体)均购自武汉博士德生物工程有限公司.方法:用即用型SABC免疫组织化学染色试剂,检测30例HBsAg阳性的足月胎盘组织中,有18例检测到HBsAg,随机选取10例进行荧光双标染色,其染色主要过程为将待测石蜡切片标本常规脱蜡至水;抗原微波热修复;加入第一种一抗(兔抗人AnV亲和纯化抗体1:60,为单克隆抗体)置湿盒中,4 ℃冰箱过夜;第二种一抗(鼠抗人HBs mAb1:50),置湿盒中,4 ℃冰箱过夜;加入与第二种一抗相应的二抗(如生物素化的羊抗鼠IgG1:100);加入以PBS作适当稀释的第一种荧光抗体(如FITC-羊抗兔IgG1:50);加入第二种荧光抗体(Avidin-Cy3);缓冲甘油封固;激光共聚焦显微镜下观察并进行图像分析.用IPP4.5图像分析法,先进入IPP4.5系统的Image Analysis程序,然后调入分析文件进行分析.主要观察指标:乙型肝炎病毒感染的胎盘组织中HBsAg/膜联蛋白:Ⅴ的存在与分布情况.结果:选取10例进行荧光双标染色结合激光共聚焦显微镜检测胎盘组织上滋养层细胞乙型肝炎病毒/膜联蛋白Ⅴ的存在与分布模式.胎盘组织中存在着丰富的膜联蛋白Ⅴ,位于绒毛合体滋养层细胞,在基质细胞和血管内皮细胞都有膜联蛋白Ⅴ的表达.并发现在同一细胞中存在着乙型肝炎病毒和膜联蛋白Ⅴ的共存现象.结论:乙型肝炎病毒感染胎盘细胞可能是通过与细胞上的受体膜联蛋白Ⅴ结合,促使病毒进入胎盘细胞,导致宫内感染.